CN102659897B - 一种七叶皂苷钠的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种七叶皂苷钠的制备方法，其能解决传统方法存在的制备七叶皂苷钠收率低、纯度低、纯化周期长的问题，并能有效减少有机溶剂残留，提高七叶皂苷钠A和七叶皂苷钠B的含量，从而减少环境污染，提高七叶皂苷钠的临床应用药效。其首先进行提取，然后进行纯化，最后进行烘包干燥，其特征在于：提取是将娑罗子粉与乙醇溶液按料液比1：（3～12）千克/升的比例混合浸泡后再提取，料液比优选1：9千克/升。

Description

一种七叶皂苷钠的制备方法

技术领域

本发明涉及一种皂苷盐的制备方法,具体地说是一种七叶皂苷钠的制备方法。

背景技术

娑罗子在我国分布广泛，是目前所知疗效稳定确切而副作用较少的少数纯天然植物药之一，应用前景很好。以娑罗子为原料制备的七叶皂苷钠具有很好的药理活性：（1）具有很强的抗炎症、抗渗出作用；（2）减轻和消除水肿或血肿的形成；（3）抗氧自由基而具有神经保护作用。随着临床研究的不断深入，七叶皂苷钠的应用范围也不断扩大，不仅用于脑水肿、创伤或手术所致肿胀、静脉回流障碍性疾病，而且对肺心病、Hunt’s综合征、肿瘤、肛管水肿、面神经炎和肾病综合征Ⅰ型等多种疾病也具有很好的疗效。

国内多数厂家均采用有机溶剂法进行提取、再采用非极性溶剂进行萃取分离来制备七叶皂苷钠，此传统方法的产品收率低、纯度低，且生产周期长，并且易造成有机溶剂残留，同时在操作过程中对操作者有一定的刺激性且会对环境造成一定的污染；而且采用传统方法生产的七叶皂苷钠A和七叶皂苷钠B的含量较低，临床应用药效较差且刺激性大。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种七叶皂苷钠的制备方法，其能解决传统方法存在的提取七叶皂苷钠收率低、纯度低、生产周期长的问题，并能有效减少有机溶剂残留，提高七叶皂苷钠A和七叶皂苷钠B的含量，从而减少环境污染，提高七叶皂苷钠的临床应用药效。

本发明采用以下技术方案：其首先进行提取，然后进行纯化，最后进行烘包干燥，其特征在于：所述提取是将娑罗子粉与体积百分比为10%的乙醇溶液按料液比1：（3～12）千克/升的比例混合浸泡后再提取，所述料液比优选1：9千克/升。

其进一步特征在于：

所述提取，首先按每千克娑罗子粉加3L～12L体积百分比为 10%的乙醇溶液浸泡1小时、提取2小时，然后过滤，得到的滤渣再加入到1L～4L体积百分比为5%的乙醇溶液再次提取2小时后再过滤，两次过滤的滤液应澄清，然后合并两次滤液，再对合并后的滤液采用平板离心机进行离心操作，收集上清液，其中离心速度为1000转/分钟～1500转/分钟，离心时间为1小时；

所述提取的温度控制在25℃～50℃；

所述纯化包括层析、浓缩、精制、结晶，所述纯化的总时间控制在72小时以内；

所述层析的时间控制在11小时～18小时，其包括以下步骤：（1）装柱：将洗涤干净的树脂装入层析柱内，达4/5柱高；（2）吸附：将所述提取后并经离心操作的滤液加入层析柱吸附，流速为200 ml/min～300ml/min，用醋酐鉴别，当流出液近红色时停止吸附；（3）洗涤：用纯化水洗涤树脂，直至流出液澄清为止；（4）洗脱：用体积百分比为95%的乙醇溶液洗脱，流速80 ml/min～100ml/min；（5）收集：流出液用醋酐鉴别显红色时，开始收集，当醋酐鉴别近黄色时停止收集，合并收集液，即得到层析液；（6）处理：继续用体积百分比为95%的乙醇溶液将树脂洗涤至流出液色泽至无色，再用纯化水洗涤至水清并无醇味为止；

所述浓缩的时间控制在：12小时～18小时，其包括以下步骤：（1）第一次浓缩：将所述层析液放入离心薄膜蒸发器，温度控制在50℃～80℃，浓缩至层析液体积的50％～70％，优选50%，停止浓缩；（2）第二次浓缩：水浴45℃～65℃并保持恒温，优选55℃，然后开启真空阀将第一次浓缩液吸入蒸馏瓶，进行真空浓缩，浓缩至所述层析液体积的20～40%，优选33%；（3）采用高速离心机进行离心操作，其中离心速率为10000转/分钟～15000转/分钟，离心时间为15分钟～20分钟，收集上清；

所述精制的时间控制在：12小时～18小时，其包括以下步骤：（1）装柱：将中性氧化铝装入精制柱内，每柱高度为25 cm～30cm，保持平整、紧实；（2）加液：将上工序的浓缩液加入精制柱，自然流速；（3）收集：收集流出液，当色素层距柱底1～2cm时，停止收集，合并收集液备用；

所述结晶的时间控制在13小时～18小时，其包括以下步骤：（1）醇沉：在收集液中边搅拌边加入体积百分比为95%的乙醇溶液，使得溶液中含乙醇浓度达80%～82%，密闭存放8小时；（2）抽滤：将沉淀物经抽滤至干；（3）脱水：沉淀物加入无水乙醇脱水三次，继续抽滤至干，沉淀物呈疏松状，色白；（4）装盘：脱水物分装于烘盘内，厚度不超过1.5cm；

所述烘包干燥是将烘盘由上至下放入真空干燥箱内，所述真空干燥箱内温度设置为48℃～52℃、真空度达0.090MPa以上，干燥13小时～18小时。

其更进一步特征在于：所述醋酐鉴别为取所述层析流出液1ml、加入醋酐0.5ml、硫酸2滴；所述树脂可采用AB-8、D101、D201、NKA-9等型号，其中优选AB-8型树脂。

采用本发明方法制备七叶皂苷钠，其有益效果在于：其在提取过程中控制娑罗子粉与体积百分比10%的乙醇溶液的总料液比在1：（3～12）千克/升之间，并优选1：9千克/升，其既能保证有效成分的充分提取又能尽可能减少杂质含量；同时，控制提取的时间为2小时，能够降低杂质转化率，进一步减少杂质含量；而控制提取的温度在25℃～50℃，能够保证提取到的有效成分的稳定性，更进一步保证七叶皂苷钠的纯度与收率；在提取以及浓缩后，对滤液、浓缩液分别进行离心，也可以起到有效的去除杂质的作用，保证了七叶皂苷钠的纯度与收率；而树脂优选AB-8型树脂，其对有效成分的吸附效果及除杂质效果最好，亦能起到提高产品收率的作用；另外，纯化的总时间控制在72小时以内，较传统的制备方法大大缩短了生产周期，降低了生产成本，提高了生产率；此外，本发明方法中提取后的纯化工艺采用过层析柱的方法来取代传统的非极性溶剂萃取分离方法，其能有效避免有机溶剂残留，减少有机溶剂对劳动者的刺激以及对环境污染，而本发明方法中的有机溶剂均能回收再利用，不仅能减少有机溶剂对环境污染，还能提高其利用率，降低生产成本；采用本发明方法制备七叶皂苷钠，其产品收率较传统方法提高了25%，产品中七叶皂苷钠A的含量提高了10%，七叶皂苷钠B含量提高了5%。

具体实施方式

实施例一：

（1）提取：提取温度为25℃，取50kg娑罗子粉加375L体积百分比为 10%的乙醇溶液浸泡1小时、提取2小时，然后过滤，分别得到滤渣和滤液，将滤渣再加入到50L体积百分比为5%的乙醇溶液再次提取2小时后再过滤，两次过滤的滤液应澄清，合并两次滤液，并对合并后的滤液采用平板离心机进行离心操作，收集上清液，其中离心速度为1000转/分钟，离心时间为1小时；

（2）层析：将洗涤干净的D101型树脂装入层析柱内，达4/5柱高，再将提取并经离心操作的滤液加入层析柱吸附，流速为200 ml/min，用醋酐鉴别，当流出液近红色时停止吸附；然后用纯化水洗涤D101型树脂，直至流出液澄清为止；接着用体积百分比为95%的乙醇溶液洗脱，流速90ml/min；流出液用醋酐鉴别显红色时，开始收集，当醋酐鉴别近黄色时停止收集，合并收集液，即得到层析液；再继续用体积百分比为95%的乙醇溶液将D101型树脂洗涤至流出液色泽至无色，再用纯化水洗涤至水清并无醇味为止；其中醋酐鉴别是指取层析流出液1ml、加入醋酐0.5ml、硫酸2滴，层析的时间为18小时；

（3）浓缩：首先进行第一次浓缩，将层析液放入离心薄膜蒸发器，温度控制在65℃，当浓缩至层析液体积的50％时停止浓缩；接着进行第二次浓缩：水浴45℃并保持恒温，然后开启真空阀将第一次浓缩液吸入蒸馏瓶，进行真空浓缩，浓缩至原层析液体积的40%；采用高速离心机进行离心操作，其中离心速率为15000转/分钟，离心时间为15分钟，收集上清，浓缩的时间为12小时；

（4）精制：将中性氧化铝装入精制柱内，每柱高度为25 cm，保持平整、紧实；再将上道工序得到的浓缩液加入精制柱，自然流速；收集流出液，当色素层距柱底1.5cm时，停止收集，合并收集液备用，精制的时间为15小时；

（5）结晶：先进行醇沉，在收集液中边搅拌边加入体积百分比为95%的乙醇溶液，使得溶液中含乙醇浓度达80%，密闭存放8小时；再将沉淀物经抽滤至干；继续将沉淀物加入无水乙醇脱水三次，继续抽滤至干，沉淀物呈疏松状，色白；最后将脱水物分装于烘盘内，厚度1.5cm，结晶的时间为15.5小时；

（6）将烘盘由上至下放入真空干燥箱内，所述真空干燥箱内温度设置为48℃、真空度达0.090MPa以上，干燥13小时；

得到产品1.550kg，总收率为3.1%；根据国家药品监督管理局颁布的七叶皂苷钠国家药品标准（WS1-XG-003-99），采用滴定法测得总皂苷含量为102.5%，采用高效液相色谱法测得其中七叶皂苷钠A含量为43.8%，七叶皂苷钠B含量为34.7%，纯化周期60.5小时。

实施例二：

（1）提取：提取温度为37.5℃，取50kg娑罗子粉加150L体积百分比为 10%的乙醇溶液浸泡1小时、提取2小时，然后过滤，分别得到滤渣和滤液，将滤渣再加入到200L体积百分比为5%的乙醇溶液再次提取2小时后再过滤，两次过滤的滤液应澄清，合并两次滤液，并对合并后的滤液采用平板离心机进行离心操作，收集上清液，其中离心速度为1300转/分钟，离心时间为1小时；

（2）层析：将洗涤干净的D201型树脂装入层析柱内，达4/5柱高，再将提取并经离心操作的滤液加入层析柱吸附，流速为300ml/min，用醋酐鉴别，当流出液近红色时停止吸附；然后用纯化水洗涤D201型树脂，直至流出液澄清为止；接着用体积百分比为95%的乙醇溶液洗脱，流速80 ml/min；流出液用醋酐鉴别显红色时，开始收集，当醋酐鉴别近黄色时停止收集，合并收集液，即得到层析液；再继续用体积百分比为95%的乙醇溶液将D201型树脂洗涤至流出液色泽至无色，再用纯化水洗涤至水清并无醇味为止；其中醋酐鉴别是指取层析流出液1ml、加入醋酐0.5ml、硫酸2滴，层析的时间为11小时；

（3）浓缩：首先进行第一次浓缩，将层析液放入离心薄膜蒸发器，温度控制在50℃，当浓缩至层析液体积的70％时停止浓缩；接着进行第二次浓缩：水浴55℃并保持恒温，然后开启真空阀将第一次浓缩液吸入蒸馏瓶，进行真空浓缩，浓缩至原层析液体积的20%；采用高速离心机进行离心操作，其中离心速率为12000转/分钟，离心时间为17.5分钟，收集上清，浓缩的时间为15小时；

（4）精制：将中性氧化铝装入精制柱内，每柱高度为30cm，保持平整、紧实；再将上道工序得到的浓缩液加入精制柱，自然流速；收集流出液，当色素层距柱底1cm时，停止收集，合并收集液备用，精制的时间为18小时；

（5）结晶：先进行醇沉，在收集液中边搅拌边加入体积百分比为95%的乙醇溶液，使得溶液中含乙醇浓度达81%，密闭存放8小时；再将沉淀物经抽滤至干；继续将沉淀物加入无水乙醇脱水三次，继续抽滤至干，沉淀物呈疏松状，色白；最后将脱水物分装于烘盘内，厚度1cm，结晶的时间为13小时；

（6）将烘盘由上至下放入真空干燥箱内，所述真空干燥箱内温度设置为48℃、真空度达0.090MPa以上，干燥15.5小时；

得到产品1.600kg，总收率为3.2%；根据国家药品监督管理局颁布的七叶皂苷钠国家药品标准（WS1-XG-003-99），采用滴定法测得总皂苷含量为100.6%，采用高效液相色谱法测得其中七叶皂苷钠A含量为42.5%，七叶皂苷钠B含量为33.8%，纯化周期57小时。

实施例三：

（1）提取：提取温度为40℃，取50kg娑罗子粉加600L体积百分比为10%的乙醇溶液浸泡1小时、提取2小时，然后过滤，分别得到滤渣和滤液，将滤渣再加入到125L体积百分比为5%的乙醇溶液再次提取2小时后再过滤，两次过滤的滤液应澄清，合并两次滤液，并对合并后的滤液采用平板离心机进行离心操作，收集上清液，其中离心速度为1250转/分钟，离心时间为1小时；

（2）层析：，将洗涤干净的NKA-9型树脂装入层析柱内，达4/5柱高，再将提取并经离心操作的滤液加入层析柱吸附，流速为250ml/min，用醋酐鉴别，当流出液近红色时停止吸附；然后用纯化水洗涤NKA-9型树脂，直至流出液澄清为止；接着用体积百分比为95%的乙醇溶液洗脱，流速100ml/min；流出液用醋酐鉴别显红色时，开始收集，当醋酐鉴别近黄色时停止收集，合并收集液，即得到层析液；再继续用体积百分比为95%的乙醇溶液将NKA-9型树脂洗涤至流出液色泽至无色，再用纯化水洗涤至水清并无醇味为止；其中醋酐鉴别是指取层析流出液1ml、加入醋酐0.5ml、硫酸2滴，层析的时间为14.5小时；

（3）浓缩：首先进行第一次浓缩，将层析液放入离心薄膜蒸发器，温度控制在80℃，当浓缩至层析液体积的60％时，停止浓缩；接着进行第二次浓缩： 65℃并保持恒温，然后开启真空阀将第一次浓缩液吸入蒸馏瓶，进行真空浓缩，浓缩至原层析液体积的30%；采用高速离心机进行离心操作，其中离心速率为10000转/分钟，离心时间为20分钟，收集上清，浓缩的时间为18小时；

（4）精制：将中性氧化铝装入精制柱内，每柱高度为27.5cm，保持平整、紧实；再将上道工序得到的浓缩液加入精制柱，自然流速；收集流出液，当色素层距柱底2cm时，停止收集，合并收集液备用，精制的时间为12小时；

（5）结晶：先进行醇沉，在收集液中边搅拌边加入体积百分比为95%的乙醇溶液，使得溶液中含乙醇浓度达82%，密闭存放8小时；再将沉淀物经抽滤至干；继续将沉淀物加入无水乙醇脱水三次，继续抽滤至干，沉淀物呈疏松状，色白；最后将脱水物分装于烘盘内，厚度0.5cm，结晶的时间为18小时；

（6）将烘盘由上至下放入真空干燥箱内，所述真空干燥箱内温度设置为50℃、真空度达0.090MPa以上，干燥18小时；

得到产品1.450kg，总收率为2.9%；根据国家药品监督管理局颁布的七叶皂苷钠国家药品标准（WS1-XG-003-99），采用滴定法测得总皂苷含量为101.8%，采用高效液相色谱法测得其中七叶皂苷钠A含量为44.9%，七叶皂苷钠B含量为34.1%，纯化周期62.5小时。

实施例四：

（1）提取：提取温度为30℃，取50kg娑罗子粉加450L体积百分比为10%的乙醇溶液浸泡1小时、提取2小时，然后过滤，分别得到滤渣和滤液，将滤渣再加入到100L体积百分比为5%的乙醇溶液再次提取2小时后再过滤，两次过滤的滤液应澄清，合并两次滤液，并对合并后的滤液采用平板离心机进行离心操作，收集上清液，其中离心速度为1500转/分钟，离心时间为1小时；

（2）层析：将洗涤干净的AB-8型树脂装入层析柱内，达4/5柱高，再将提取并经离心操作的滤液加入层析柱吸附，流速为270ml/min，用醋酐鉴别，当流出液近红色时停止吸附；然后用纯化水洗涤AB-8型树脂，直至流出液澄清为止；接着用体积百分比为95%的乙醇溶液洗脱，流速85ml/min；流出液用醋酐鉴别显红色时，开始收集，当醋酐鉴别近黄色时停止收集，合并收集液，即得到层析液；再继续用体积百分比为95%的乙醇溶液将AB-8型树脂洗涤至流出液色泽至无色，再用纯化水洗涤至水清并无醇味为止；其中醋酐鉴别是指取层析流出液1ml、加入醋酐0.5ml、硫酸2滴，层析的时间为13小时；

（3）浓缩：首先进行第一次浓缩，将层析液放入离心薄膜蒸发器，温度控制在70℃，当浓缩至层析液体积的50％时停止浓缩；接着进行第二次浓缩：水浴55℃并保持恒温，然后开启真空阀将第一次浓缩液吸入蒸馏瓶，进行真空浓缩，浓缩至层析液体积的33%；采用高速离心机进行离心操作，其中离心速率为14000转/分钟，离心时间为16分钟，收集上清，浓缩的时间为16小时；

（4）精制：将中性氧化铝装入精制柱内，每柱高度为28cm，保持平整、紧实；再将上道工序得到的浓缩液加入精制柱，自然流速；收集流出液，当色素层距柱底1.3cm时，停止收集，合并收集液备用，精制的时间为17小时；

（5）结晶：先进行醇沉，在收集液中边搅拌边加入体积百分比为95%的乙醇溶液，使得溶液中含乙醇浓度达80%，密闭存放8小时；再将沉淀物经抽滤至干；继续将沉淀物加入无水乙醇脱水三次，继续抽滤至干，沉淀物呈疏松状，色白；最后将脱水物分装于烘盘内，厚度1.2cm，结晶的时间为16小时；

（6）将烘盘由上至下放入真空干燥箱内，所述真空干燥箱内温度设置为51℃、真空度达0.090MPa以上，干燥15小时；

得到产品1.400kg，总收率为2.8%；根据国家药品监督管理局颁布的七叶皂苷钠国家药品标准（WS1-XG-003-99），采用滴定法测得总皂苷含量为102.9%，采用高效液相色谱法测得其中七叶皂苷钠A含量为41.6%，七叶皂苷钠B含量为32.9%，纯化周期62小时。

Claims (6)

1.一种七叶皂苷钠的制备方法，其首先进行提取，然后进行纯化，最后进行烘包干燥，其特征在于：所述提取是将娑罗子粉与体积百分比为10%的乙醇溶液按料液比1：（3～12）千克/升的比例混合浸泡后再提取或者所述提取，首先按每千克娑罗子粉加3L～12L体积百分比为10%的乙醇溶液浸泡1小时、提取2小时，过滤，得到的滤渣再加入到1L～4L体积百分比为5%的乙醇溶液再次提取2小时后再过滤，两次过滤的滤液应澄清，然后合并两次滤液，再对合并后的滤液进行离心操作，收集上清液，离心速度为1000转/分钟～1500转/分钟，离心时间为1小时；

所述纯化包括层析、浓缩、精制、结晶，所述纯化的总时间控制在72小时以内；

所述层析的时间控制在11小时～18小时，其包括以下步骤：（1）装柱：将洗涤干净的树脂装入层析柱内，达4/5柱高；（2）吸附：将所述提取后并经离心操作的滤液加入层析柱吸附，流速为200 ml/min～300ml/min，用醋酐鉴别，当流出液近红色时停止吸附；（3）洗涤：用纯化水洗涤树脂，直至流出液澄清为止；（4）洗脱：用体积百分比为95%的乙醇溶液洗脱，流速80 ml/min～100ml/min；（5）收集：流出液用醋酐鉴别显红色时，开始收集，当醋酐鉴别近黄色时停止收集，合并收集液；（6）处理：继续用体积百分比为95%的乙醇溶液将树脂洗涤至流出液色泽至无色，再用纯化水洗涤至水清并无醇味为止；

所述浓缩的时间控制在12小时～18小时，其包括以下步骤：（1）第一次浓缩：将所述层析得到的收集液放入离心薄膜蒸发器，温度控制在50℃～80℃，浓缩至原体积50％～70％，停止浓缩；（2）第二次浓缩：水浴45℃～65℃并保持恒温，然后开启真空阀将第一次浓缩液吸入蒸馏瓶，进行真空浓缩，浓缩至原层析液体积的20～40%；（3）采用高速离心机进行离心操作：离心速度为10000转/分钟～15000转/分钟，离心时间为15分钟～20分钟，收集上清；

所述精制的时间控制在：12小时～18小时，其包括以下步骤：（1）装柱：将中性氧化铝装入精制柱内，每柱高度为25 cm～30cm，保持平整、紧实；（2）加液：将上工序的浓缩液加入精制柱，自然流速；（3）收集：收集流出液，当色素层距柱底1～2cm时，停止收集，合并收集液备用；

所述结晶的时间控制在13小时～18小时，其包括以下步骤：（1）醇沉：在收集液中边搅拌边加入体积百分比为95%的乙醇溶液，使得溶液中含乙醇浓度达80%～82%，密闭存放8小时；（2）抽滤：将沉淀物经抽滤至干；（3）脱水：沉淀物加入无水乙醇脱水三次，继续抽滤至干，沉淀物呈疏松状，色白；（4）装盘：脱水物分装于烘盘内，其厚度不超过1.5cm。

2.根据权利要求1所述的一种七叶皂苷钠的制备方法，其特征在于：所述提取温度为25℃～50℃。

3.根据权利要求1中所述的一种七叶皂苷钠的制备方法，其特征在于：所述烘包干燥是将烘盘由上至下放入真空干燥箱内，所述真空干燥箱内温度设置为48℃～52℃、真空度达0.090MPa以上，干燥13小时～18小时。

4.根据权利要求1所述的一种七叶皂苷钠的制备方法，其特征在于：所述醋酐鉴别为取所述层析流出液1ml、加入醋酐0.5ml、硫酸2滴，所述树脂采用AB-8、D101、D201、NKA-9型树脂中任意一种。

5.根据权利要求1所述的一种七叶皂苷钠的制备方法，其特征在于：所述第一次浓缩操作为浓缩至原层析液体积的50%，所述第二次浓缩水浴温度为55℃，并且浓缩至原层析液体积的33%。

6.根据权利要求4所述的一种七叶皂苷钠的制备方法，其特征在于：所述树脂采用AB-8型树脂。