CN103520210A - 一种熊胆粉纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种熊胆粉纯化方法,包括如下顺序进行的步骤:在新鲜提取的熊胆汁中加入聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和无菌蒸馏水,静置澄清,获得的上清液中加入2倍体积的无水乙醇,制得熊胆醇提物并加入大孔硅胶柱子;利用2倍体积75%无水乙醇分3次对硅胶柱子进行洗涤,收集洗涤液并加入到纤维素粉CF11柱子中,涡旋振荡混匀,进行熊胆汁分离,所得上清液,加入1/10体积的3mol/LNaAc和等体积的异丙醇,-20℃沉淀数小时后离心30min,收集沉淀并洗涤,所得沉淀溶于蒸馏水中,制成熊胆溶液,加热至50℃,加入复合蛋白酶进行脱色除腥,超滤膜过滤后,上清液经喷雾干燥后即可获得熊胆粉成品。本发明技术所得熊胆粉,有效含量高,色素含量低,无腥味,药用价值提升。
Description
技术领域
本发明涉及熊体内提取物纯化技术领域,特别涉及一种熊胆粉纯化方法。
背景技术
熊胆,是熊科动物黑熊、东北马熊或棕熊胆囊内的干燥胆汁。在中国,云南、黑龙江、吉林、贵州、四川、青海、西藏、新疆、甘肃、湖北、湖南、陕西、福建等地均为熊胆产地。基于现代生物学技术加工熊胆,对其成份分析发现,熊胆中含有约20%的牛磺熊脱氧胆酸,为熊胆的主要成分,水解后产生磺酸和熊脱氧胆酸,除此之外,熊胆还含少量鹅脱氧胆酸及胆酸。
熊胆能清热解毒,明目,具有解痉、抗惊厥、利胆作用,对流感嗜血杆菌、大肠杆菌、肺炎球菌、甲型链球菌、绿脓假单胞菌、卡他奈瑟菌等均有抑制作用。在治疗胆结石、急性黄疽烈肝炎和慢性乙型肝炎、急性结膜炎和白内障、抗脑血栓和脑缺血、抗肿瘤、抗溃疡、抗病毒、解热镇痛、降血脂及抗衰老等方面均发挥着药理作用及保健功效。
基于现有提取工艺,生产的熊胆粉含有大量的无机元素杂质及干扰色素,熊胆提取物中牛磺熊脱氧胆酸含量一般小于25%,牛磺鹅脱氧胆酸含量一般小于65%,含水量高,易吸潮,难以储存和运输,难以形成高纯度、高质量的熊胆粉,限制了熊胆粉的药用价值。
发明内容
基于现有熊胆粉的提取及纯化技术问题,本发明提供一种熊胆粉纯化方法,利用本发明技术纯化处理后的熊胆粉,有效含量高,色素含量低,无腥味,水分含量低,不吸潮,适于储存、存放和运输,提升了熊胆粉的药用价值。
本发明通过以下技术方案实现:
一种熊胆粉纯化方法,其特征在于,包括如下顺序进行的步骤:
(1)在新鲜提取的熊胆汁中加入聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和无菌蒸馏水,震荡混匀,静置澄清,获得上清液;
(2)在步骤(1)中所得上清液中加入2倍体积的无水乙醇,制得熊胆醇提物;
(3)将步骤(2)所得熊胆提纯物加入大孔硅胶柱子,利用2倍体积75%无水乙醇分3次对硅胶柱子进行洗涤,收集洗涤液;
(4)用无菌蒸馏水对步骤(3)中所得洗涤液进行稀释,使得无水乙醇的浓度为16.5%;
(5)将步骤(4)中所得含有16.5%无水乙醇的熊胆汁上清液加入到纤维素粉CF11柱子中,涡旋振荡混匀,进行熊胆汁分离,5000rpm条件下,离心5min,离心结束后,在纤维素粉CF11柱子中加入等体积的无菌蒸馏水,5000rpm条件下,离心5min;
(6)收集步骤(5)中所得上清液,加入1/10体积的3mol/L NaAc和等体积的异丙醇,混匀,-20℃沉淀,沉淀完成后,4℃条件下,12000rpm离心30min,弃上清,收集沉淀;
(7)加入75%无水乙醇对步骤(6)中收集的沉淀进行洗涤,洗涤结束后,在4℃环境下,12000rpm离心30min,弃上清,收集沉淀;
(8)将步骤(7)中所得沉淀,溶于蒸馏水中,搅拌1至3小时,制成熊胆溶液,调节pH为2至8,加热至50℃并保持该温度,加入复合蛋白酶,酶解结束后,灭酶,进行超滤膜过滤,获得的上清液经喷雾干燥后即可获得熊胆粉成品。
进一步,所述步骤(1)中熊胆汁、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)及无菌水蒸馏水的重量比为100:0.1~0.8:300~600,静置时间为2~3h;
进一步,所述步骤(5)中利用纤维素粉CF11柱子对熊胆汁进行分离包括以下步骤:
A)按照重量比为1:3.5:3.6:2.2:2.8的比例,将纤维素粉CF11粉末与氯化钠、三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸钠、蒸馏水在搅拌作用下混合,制得纤维素粉CF11柱子;
B) 将含有16.5%无水乙醇的熊胆汁上清液加入到纤维素粉CF11柱子中,涡旋振荡混匀,进行熊胆汁分离,5000rpm离心5min,离心结束后,在纤维素粉CF11柱子中加入等体积的无菌蒸馏水,5000rpm条件下,离心5min;
C)收集步骤B)中所得上清液。
进一步,所述步骤(8)中复合蛋白酶为中性蛋白酶、酸性蛋白酶、胰蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶及动物蛋白水解酶中的两种或两种以上的复合酶。
进一步,所述步骤(8)中酶浓度与熊胆溶液之比为800U/g~6000U/g,酶解时间1~6h,上清液喷雾干燥过程中,控制过筛目数为120~160目,进风温度为160℃~220℃,出风温度为40℃~70℃,最大水分蒸发量为5Kg/h~2000Kg/h,雾化盘最大转速为10000r/min~50000r/min。
本发明涉及的熊胆粉纯化方法,有益效果体现在:
(1)本发明涉及的熊胆粉纯化工艺容易控制,易操作性强。
(2)本发明涉及的熊胆粉纯化工艺,在新采集熊胆汁中加入聚乙烯吡咯烷酮(PVP),有效阻止了胆汁中还原组分被外源氧化剂氧化产生难溶性物质,最大限度保证了熊胆汁的天然性。
(3)本发明采用大孔硅胶和纤维素粉CF11柱子,进行双重纯化,提升了产品的纯度。
(4)本发明采用复合蛋白酶对熊胆粉进行脱色除腥,有效降低了熊胆粉中有害色素的含量,同时除去了熊胆粉中的腥味,提升了产品的口感。
(5)经过本发明技术纯化的熊胆粉中,有效含量高,牛磺熊去氧胆酸含量≥35%,远高于国家标准的23%,大大提升了熊胆粉的药用价值。
具体实施方式
本发明提供一种熊胆粉纯化方法,通过以下技术方案实现:
一种熊胆粉纯化方法,其特征在于,包括如下顺序进行的步骤:
(1)在新鲜提取的熊胆汁中加入聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和无菌蒸馏水,震荡混匀,静置澄清,获得上清液;
(2)在步骤(1)中所得上清液中加入2倍体积的无水乙醇,制得熊胆醇提物;
(3)将步骤(2)所得熊胆提纯物加入大孔硅胶柱子,利用2倍体积75%无水乙醇分3次对硅胶柱子进行洗涤,收集洗涤液;
(4)用无菌蒸馏水对步骤(3)中所得洗涤液进行稀释,使得无水乙醇的浓度为16.5%;
(5)将步骤(4)中所得含有16.5%无水乙醇的熊胆汁上清液加入到纤维素粉CF11柱子中,涡旋振荡混匀,进行熊胆汁分离,5000rpm条件下,离心5min,离心结束后,在纤维素粉CF11柱子中加入等体积的无菌蒸馏水,5000rpm条件下,离心5min;
(6)收集步骤(5)中所得上清液,加入1/10体积的3mol/L NaAc和等体积的异丙醇,混匀,-20℃沉淀,沉淀完成后,4℃条件下,12000rpm离心30min,弃上清,收集沉淀;
(7)加入75%无水乙醇对步骤(6)中收集的沉淀进行洗涤,洗涤结束后,在4℃环境下,12000rpm离心30min,弃上清,收集沉淀;
(8)将步骤(7)中所得沉淀,溶于蒸馏水中,搅拌1至3小时,制成熊胆溶液,调节pH为2至8,加热至50℃并保持该温度,加入复合蛋白酶,酶解结束后,灭酶,进行超滤膜过滤,获得的上清液经喷雾干燥后即可获得熊胆粉成品。
所述步骤(1)中熊胆汁、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)及无菌水蒸馏水的重量比为100:0.1~0.8:300~600,静置时间为2~3h。
所述步骤(5)中利用纤维素粉CF11柱子对熊胆汁进行分离包括以下步骤:
A)按照重量比为1:3.5:3.6:2.2:2.8的比例,将纤维素粉CF11粉末与氯化钠、三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸钠、蒸馏水在搅拌作用下混合,制得纤维素粉CF11柱子;
B) 将含有16.5%无水乙醇的熊胆汁上清液加入到纤维素粉CF11柱子中,涡旋振荡混匀,进行熊胆汁分离,5000rpm离心5min,离心结束后,在纤维素粉CF11柱子中加入等体积的无菌蒸馏水,5000rpm条件下,离心5min;
C) 收集步骤B)中所得上清液。
所述步骤(8)中复合蛋白酶为中性蛋白酶、酸性蛋白酶、胰蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶及动物蛋白水解酶中的两种或两种以上的复合酶。
所述步骤(8)中酶浓度与熊胆溶液之比为800U/g~6000U/g,酶解时间1~6h,上清液喷雾干燥过程中,控制过筛目数为120~160目,进风温度为160℃~220℃,出风温度为40℃~70℃,最大水分蒸发量为5Kg/h~2000Kg/h,雾化盘最大转速为10000r/min~50000r/min。
以下将通过实施例对本发明进行详细描述。
实施例1:
在1000g新鲜提取的熊胆汁中加入6g聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和5000ml无菌蒸馏水,震荡混匀,静置澄清,获得5500ml上清液;所得上清液中加入11000ml的无水乙醇,制得16500ml熊胆醇提物并加入大孔硅胶柱子中,利用33000ml 75%无水乙醇分3次对硅胶柱子进行洗涤,收集洗涤液48000ml,所得洗涤液中加入162103ml无菌蒸馏水,使得无水乙醇的浓度为16.5%;将含有16.5%无水乙醇的熊胆汁上清液加入到纤维素粉CF11柱子中,涡旋振荡混匀,进行熊胆汁分离,5000rpm条件下,离心5min,获得上清液200000ml,继续在纤维素粉CF11柱子中加入200000ml的无菌蒸馏水,5000rpm条件下,离心5min,获得上清液190000ml,将两部分上清液混合,加入39000ml的3mol/L NaAc和390000ml的异丙醇,混匀,-20℃沉淀,沉淀完成后,4℃条件下,12000rpm离心30min,弃上清,收集沉淀460g,加入75%无水乙醇对收集的沉淀进行洗涤,洗涤结束后,在4℃环境下,12000rpm离心30min,弃上清,收集沉淀400g并溶于蒸馏水中,搅拌1至3小时,制成熊胆溶液,调节pH为2至8,加热至50℃并保持该温度,加入胰蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶及动物蛋白水解酶,酶浓度与底物浓度之比为4000U/g,胰蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶及动物蛋白水解酶的活性比例为3:1:4,酶解时间3小时,酶解结束后,进行灭酶过滤,上清液进行喷雾干燥,进风温度为180℃,出风温度50℃,最大蒸发量为7Kg/h。最后得到240g熊胆粉干粉,经检测牛磺熊去氧胆酸含量85g,有效成分含量为35.42%。
虽然本发明已通过参考优选的实施例进行了描述,但是,本领域普通技术人员应当了解,可以不限于上述实施例的描述,在权利要求书的范围内,可作形式和细节上的各种变化。
Claims (5)
1.一种熊胆粉纯化方法,其特征在于,包括如下顺序进行的步骤:
(1)在新鲜提取的熊胆汁中加入聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和无菌水蒸馏水,震荡混匀,静置澄清,获得上清液;
(2)在步骤(1)中所得上清液中加入2倍体积的无水乙醇,制得熊胆醇提物;
(3)将步骤(2)所得熊胆提纯物加入大孔硅胶柱子,利用2倍体积75%无水乙醇分3次对硅胶柱子进行洗涤,收集洗涤液;
(4)用无菌蒸馏水对步骤(3)中所得洗涤液进行稀释,使得无水乙醇的浓度为16.5%;
(5)将步骤(4)中所得含有16.5%无水乙醇的熊胆汁上清液加入到纤维素粉CF11柱子中,涡旋振荡混匀,进行熊胆汁分离,5000rpm条件下,离心5min,离心结束后,在纤维素粉CF11柱子中加入等体积的无菌蒸馏水,5000rpm条件下,离心5min;
(6)收集步骤(5)中所得上清液,加入1/10体积的3mol/L NaAc和等体积的异丙醇,混匀,-20℃沉淀,沉淀完成后,4℃条件下,12000rpm离心30min,弃上清,收集沉淀;
(7)加入75%无水乙醇对步骤(6)中收集的沉淀进行洗涤,洗涤结束后,在4℃环境下,12000rpm离心30min,弃上清,收集沉淀;
(8)将步骤(7)中所得沉淀,溶于蒸馏水中,搅拌1至3小时,制成熊胆溶液,调节pH为2至8,加热至50℃并保持该温度,加入复合蛋白酶,酶解结束后,灭酶,进行超滤膜过滤,获得的上清液经喷雾干燥后即可获得熊胆粉成品。
2.根据权利要求1所述的一种熊胆粉纯化方法,其特征在于,所述步骤(1)中熊胆汁、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)及无菌水蒸馏水的重量比为100:0.1~0.8:300~600,静置时间为2~3h。
3.根据权利要求1所述的一种熊胆粉纯化方法,其特征在于,所述步骤(5)中利用纤维素粉CF11柱子对熊胆汁进行分离包括以下步骤:
A)按照重量比为1:3.5:3.6:2.2:2.8的比例,将纤维素粉CF11粉末与氯化钠、三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸钠、蒸馏水在搅拌作用下混合,制得纤维素粉CF11柱子;
B) 将含有16.5%无水乙醇的熊胆汁上清液加入到纤维素粉CF11柱子中,涡旋振荡混匀,进行熊胆汁分离,5000rpm离心5min,离心结束后,在纤维素粉CF11柱子中加入等体积的无菌蒸馏水,5000rpm条件下,离心5min;
C)收集步骤B)中所得上清液。
4.根据权利要求1所述的一种熊胆粉纯化方法,其特征在于,所述步骤(8)中复合蛋白酶为中性蛋白酶、酸性蛋白酶、胰蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶及动物蛋白水解酶中的两种或两种以上的复合酶。
5.根据权利要求1所述的一种熊胆粉纯化方法,其特征在于,所述步骤(8)中酶浓度与熊胆溶液之比为800U/g~6000U/g,酶解时间1~6h,上清液喷雾干燥过程中,控制过筛目数为120~160目,进风温度为160℃~220℃,出风温度为40℃~70℃,最大水分蒸发量为5Kg/h~2000Kg/h,雾化盘最大转速为10000r/min~50000r/min。
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---|---|
CN (1) | CN103520210A (zh) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104257691A (zh) * | 2014-09-01 | 2015-01-07 | 安徽科宝生物工程有限公司 | 一种牛胆粉的制备方法 |
CN109331040A (zh) * | 2018-11-08 | 2019-02-15 | 延边大学 | 一种熊胆粉的制备方法及熊胆粉 |
CN110354143A (zh) * | 2018-03-26 | 2019-10-22 | 长春长庆药业集团有限公司 | 一种熊胆粉滴眼液原液的提取方法 |
CN111789869A (zh) * | 2019-04-03 | 2020-10-20 | 上海凯宝药业股份有限公司 | 一种人工熊胆粉制剂的制备方法 |
CN114699431A (zh) * | 2021-10-14 | 2022-07-05 | 黑龙江野宝药业有限公司 | 一种纯化人造熊胆粉的精炼提取工艺 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101085801A (zh) * | 2006-06-06 | 2007-12-12 | 上海凯宝药业有限公司 | 一种从熊胆粉中提取纯化熊总胆酸的方法 |
CN102552325A (zh) * | 2010-12-27 | 2012-07-11 | 福建归真堂药业股份有限公司 | 一种熊胆提取物、制备方法及其在制备治疗脂肪肝药物中的应用 |
-
2013
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101085801A (zh) * | 2006-06-06 | 2007-12-12 | 上海凯宝药业有限公司 | 一种从熊胆粉中提取纯化熊总胆酸的方法 |
CN102552325A (zh) * | 2010-12-27 | 2012-07-11 | 福建归真堂药业股份有限公司 | 一种熊胆提取物、制备方法及其在制备治疗脂肪肝药物中的应用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
郭葆玉主编: "《基因工程药学》", 31 October 2000, 第二军医大学出版社 * |
韩永龙等: "聚乙烯吡咯烷酮在中药制剂中的应用", 《中医药学报》 * |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104257691A (zh) * | 2014-09-01 | 2015-01-07 | 安徽科宝生物工程有限公司 | 一种牛胆粉的制备方法 |
CN110354143A (zh) * | 2018-03-26 | 2019-10-22 | 长春长庆药业集团有限公司 | 一种熊胆粉滴眼液原液的提取方法 |
CN109331040A (zh) * | 2018-11-08 | 2019-02-15 | 延边大学 | 一种熊胆粉的制备方法及熊胆粉 |
CN111789869A (zh) * | 2019-04-03 | 2020-10-20 | 上海凯宝药业股份有限公司 | 一种人工熊胆粉制剂的制备方法 |
CN114699431A (zh) * | 2021-10-14 | 2022-07-05 | 黑龙江野宝药业有限公司 | 一种纯化人造熊胆粉的精炼提取工艺 |
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