CN103271826B - 一种他克莫司软膏的工业化生产方法 - Google Patents
一种他克莫司软膏的工业化生产方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种他克莫司软膏的工业化生产方法，将在线均质分散机与真空均质乳化罐进行联用，并配合低温冷却循环系统，采用分步均质分散的方法生产出均一、稳定的他克莫司软膏。与市售软膏相比，采用本发明方法生产的他克莫司软膏在皮肤上的吸收是一致的，且药效学试验证明该产品疗效可靠。同时，本发明采用高效液相色谱法进行质量控制，通过对样品处理方法、溶剂和工艺参数进行改进，提高了检测方法的准确度和精密度，可对他克莫司软膏质量进行更有效的监控，保证药品质量。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，特别涉及一种他克莫司软膏的工业化生产方法。
背景技术
特应性皮炎(atopic dermatitis，AD，也称为特应性湿疹)是一种与免疫功能异常有关的、以剧烈瘙痒为特征的慢性、复发性、炎症性皮肤病，其发病率日益上升。近40年来，外用皮质类固醇已成为AD的主要治疗方法，但这类药物治疗AD存在明显的局限性，长期应用易导致皮肤萎缩变薄、毛细血管扩张等不良反应，因而仅限于短期治疗，并且激素制剂不能用于颜面和颈部。因此迫切需要一种非皮质类固醇类且安全有效的治疗药物。
他克莫司软膏(tacrolimus ointment，商品名普特彼，FK-506)是全球首个获批准的非皮质类固醇类外用免疫调节剂，属于大环内酯类，具有独特的免疫调节性。2000年12月美国FDA批准0.03％和0.1％他克莫司软膏剂在美国上市，2005年4月在中国上市。他克莫司软膏的适应证是因潜在危险而不宜使用激素治疗、或对激素治疗疗效欠佳、或无法耐受的中至重度特应性皮炎患者，作为短期或间歇性长期治疗。其中，0.03％他克莫司软膏被批准用于≥2岁的儿童及成人AD患者，0.1％他克莫司软膏被批准用于成人AD患者。
专利申请文件“外用的他克莫司制剂（200980140109.2）”公开了他克莫司软膏的处方和制备方法，其中提及到采用搅拌器搅拌使药物在软膏基质中分散均匀，由于含他克莫司的溶液与其它软膏基质不互溶，且两相比例相差较大（约为1：20），该制备方法只适用于极少量软膏的制备，难以达到工业化生产的要求或者即便采用也无法保证产品质量。因此需要开发一种工业上可操作且能高效率生产出质量稳定，疗效可靠的他克莫司软膏方法。
对于他克莫司软膏的含量和杂质的检测方法，虽然已有一些文献报道（许明哲等，HPLC法测定他克莫司软膏剂含量及含量均匀度，中国抗生素杂志，2005年第12期；周明昊等，反相高效液相色谱法测定他克莫司软膏含量，中国抗生素杂志，2007年第10期），但实际上参照文献方法进行分析均存在方法准确度和精密度不够理想的问题。他克莫司软膏检测方法难度在于其在波长200～400nm处紫外吸收较弱，检测灵敏度较低，他克莫司本身化学性质特殊，在含水溶剂中容易发生互变异构，此外用于制备软膏的辅料对分析方法干扰较大，因此在样品的处理方法和溶剂的选择上存在很大难度。针对以上存在问题，需要开发一种准确和灵敏的检测方法来控制他克莫司软膏的质量。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种他克莫司软膏的工业化生产方法。
本发明所采取的技术方案是：
一种他克莫司软膏的工业化生产方法，其特征在于：将真空均质乳化罐与在线均质分散机联用，并使用冷却循环系统控制物料的温度，采用分步均质分散的方法生产他克莫司软膏，工艺步骤如下：
1)取处方量的软膏基质，加热并搅拌至完全熔化，得溶液Ⅰ；
2)取处方量的他克莫司和溶媒，加热并振摇至完全溶解，得溶液Ⅱ；
3)将10%～80%的溶液I和全部溶液Ⅱ加入真空均质乳化罐，开启真空均质乳化罐；
4)打开在线均质分散机的进料口，运行在线均质和冷却循环系统；
5)完成一次在线均质后，关闭在线均质分散机的进料口，将10%～80%的溶液I加入真空均质乳化罐，开启真空均质乳化罐；
6)重复步骤4)和5)，至溶液I完全加入，完成在线均质；
7)整个在线均质操作完成后，关闭在线均质分散机的进料口和冷却循环系统，当物料温度降至50℃～55℃时关闭乳化罐的均质机，制得他克莫司软膏。
优选的，工艺步骤如下：
1)取处方量的软膏基质，加热至70℃～80℃并搅拌使其完全熔化，得溶液Ⅰ；
2)取处方量的他克莫司和溶媒，加热至70℃～80℃并振摇使其完全溶解，得溶液Ⅱ；
3)取10%～80%的溶液I和全部溶液Ⅱ倒入真空均质乳化罐中，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，50～100rpm搅拌10～20分钟；
4)打开在线均质分散机的进料口，运行在线均质和冷却循环系统，7000～15000rpm循环均质20～60分钟；
5)完成一次在线均质后，关闭在线均质分散机的进料口，将剩余的溶液I加入真空均质乳化罐，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，1000～3000rpm均质10～20分钟；
6)打开在线均质分散机的进料口，运行在线均质和冷却循环系统，7000rpm～15000rpm均质15～40分钟；
7)整个在线均质操作完成后，关闭在线均质分散机的进料口和冷却循环系统，当物料温度降至50℃～55℃时关闭乳化罐的均质机，制得他克莫司软膏。
优选的，工艺步骤如下：
1)取处方量的软膏基质，加热至70℃～80℃并搅拌使其完全熔化，得溶液Ⅰ；
2)取处方量的他克莫司和溶媒，加热至70℃～80℃并振摇使其完全溶解，得溶液Ⅱ；
3)取10%～50%的溶液I和全部溶液Ⅱ倒入真空均质乳化罐中，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，50～100rpm搅拌10～20分钟；
4)打开在线均质分散机的进料口，运行在线均质和冷却循环系统，7000～15000rpm循环均质20～60分钟；
5)完成一次在线均质后，关闭在线均质分散机的进料口，将10%～50%的溶液I加入真空均质乳化罐，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，1000～3000rpm均质10～20分钟；
6)打开在线均质分散机的进料口，开启在线均质和冷却循环系统，7000rpm～15000rpm均质15～30分钟；
7)完成步骤6）在线均质后，关闭在线均质分散机的进料口，将剩余的溶液I加入真空均质乳化罐，重复步骤5）；
8)整个在线均质操作完成后，关闭在线均质分散机的进料口和冷却循环系统，当物料温度降至50℃～55℃时关闭乳化罐的均质机，制得他克莫司软膏。
优选的，进行在线均质时，调节冷却循环系统，控制物料温度为55℃～85℃。
优选的，整个在线均质操作完成后，关闭在线均质分散机的进料口和冷却循环系统，将真空均质乳化罐夹层的热水放出，将冷却循环系统中的冷却介质通入乳化罐夹层，使物料降温。
优选的，制备他克莫司软膏的原料包括他克莫司，辅料包括软膏基质和溶媒；其中，他克莫司为0.01～0.2重量份，软膏基质为70～95重量份的白凡士林、1～5重量份的石蜡、1～5重量份的白蜂蜡和5～15重量份的液状石蜡，溶媒为2～8重量份的丙二醇。
优选的，该生产方法还包括通过检测他克莫司软膏中的杂质和他克莫司的含量进行质量控制，方法如下：
1)采用高效液相色谱法检测含量：
a、供试品溶液的制备：精密称取他克莫司软膏1g，精密加入10ml四氢呋喃和2.0ml含50～200μg/ml尼泊金庚酯的四氢呋喃溶液，密封，50～80℃水浴加热同时振摇至溶解软膏，加入4.0ml水，振摇至形成混悬液，置冰浴中冷却10分钟以上，取出平衡至室温，加入4.0ml无水乙醇，摇匀，过滤，取续滤液，室温放置4小时以上，为供试品溶液；
b、对照品溶液的制备：称取他克莫司对照品和尼泊金庚酯适量，分别用四氢呋喃-水-无水乙醇（5∶2∶1体积比）溶解并稀释制成每1ml中含他克莫司15～50μg及尼泊金庚酯5～20μg的溶液，摇匀，置室温4小时以上，为对照品溶液；
c、色谱条件与系统适用性试验如下：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-四氢呋喃-磷酸水溶液（1∶1∶2.1体积比）为流动相，其中磷酸水溶液pH为2.5～3.5；检测波长为210～220nm；柱温为40～60℃；理论塔板数按他克莫司峰计算不低于2000；他克莫司峰与相邻杂质峰的分离度应不少于1.5；进样量为20μl；
d、按内标法以峰面积计算供试品中他克莫司的含量，其含量检测值应为标示量的90.0%～110.0%；
2)采用高效液相色谱法检测杂质：
a、供试品溶液的制备：精密称取他克莫司软膏1g，置于带有封盖的离心管中，加入5ml的正己烷-乙酸乙酯（5～10∶1体积比）混合溶液，振荡至混悬完全，离心，将上清液转移至已预处理的固相萃取柱中；向离心管中再加入5ml的正己烷-乙酸乙酯（5～10∶1体积比）混合溶液，振荡使沉淀形成混悬液，离心，将上清液转移至上述同一固相萃取柱中，弃沉淀；用正己烷-乙酸乙酯（5～10∶1体积比）混合溶液洗涤吸附上清液的固相萃取柱4～6次；吸取5.0ml乙酸乙酯加入固相萃取柱中进行洗脱，然后再加入5.0ml乙腈洗脱，收集洗脱液；将收集到的洗脱液蒸发至干，向蒸发后的残余物中加入1.0ml流动相，溶解，过滤，取续滤液，为供试品溶液；
b、色谱条件与系统适应性试验如下：以二醇基硅烷键合硅胶为填充剂，两根相同的色谱柱串联使用，以正己烷-正丁基氯-乙腈（7∶2∶1体积比）为流动相，柱温为25～45℃，流速为1.0～2.0ml/min，检测波长为220～225nm和290nm，理论塔板数按他克莫司峰计算不低于15000，拖尾因子按他克莫司峰计算不大于1.5，他克莫司峰与相邻杂质峰的分离度应不少于1.5；进样量为20～50μl；
c、记录色谱图至主峰保留时间的2～3倍，弃去保留时间小于主峰保留时间0.5倍的色谱峰和空白辅料中出现的色谱峰，除他克莫司峰外，将220～225nm和290nm检测波长下均有吸收的峰定性为辅料峰；220～225nm检测波长下，按归一化法以峰面积计算供试品中杂质的含量，供试品中任意单个杂质不得超过1.0%，总杂质不得超过5.0%；其中，空白辅料为由不含他克莫司的辅料制成的软膏。
优选的，1）中，检测波长为220nm，柱温为50℃。
优选的，2）中，检测波长为225nm和290nm，柱温为28～35℃，流速为1.5～2.0ml/min。
优选的，2）中，柱温为30℃，流速为1.5ml/min，进样量为50μl。
本发明的有益效果是：
本发明将在线均质分散机与真空均质乳化罐进行联用，并配合低温冷却循环系统，采用分步均质分散的方法批量生产出均一、稳定的他克莫司软膏。与市售软膏相比，采用本发明方法生产的他克莫司软膏在皮肤上的吸收是一致的，且药效学试验证明该产品疗效可靠。
同时，本发明采用高效液相色谱法进行质量控制，通过对样品处理方法、溶剂和工艺参数进行改进，提高了检测方法的准确度和精密度，可对工业化生产他克莫司软膏的质量进行更有效的监控，保证药品质量。
附图说明
图1为实施例6检测软膏杂质的高效液相色谱图，检测波长为225nm；
图2为实施例6检测软膏杂质的高效液相色谱图，检测波长为290nm；
图3为实施例6检测软膏中他克莫司含量的对照品的高效液相色谱图；
图4为实施例6检测软膏中他克莫司含量的供试品的高效液相色谱图。
具体实施方式
本发明所采取的技术方案是：
一种他克莫司软膏的工业化生产方法，其特征在于：将真空均质乳化罐与在线均质分散机联用，并使用冷却循环系统控制物料的温度，采用分步均质分散的方法生产他克莫司软膏，工艺步骤如下：
1)取处方量的软膏基质，加热并搅拌至完全熔化，得溶液Ⅰ；
2)取处方量的他克莫司和溶媒，加热并振摇至完全溶解，得溶液Ⅱ；
3)将10%～80%的溶液I和全部溶液Ⅱ加入真空均质乳化罐，开启真空均质乳化罐；
4)打开在线均质分散机的进料口，运行在线均质和冷却循环系统；
5)完成一次在线均质后，关闭在线均质分散机的进料口，将10%～80%的溶液I加入真空均质乳化罐，开启真空均质乳化罐；
6)重复步骤4)和5)，至溶液I完全加入，完成在线均质；
7)整个在线均质操作完成后，关闭在线均质分散机的进料口和冷却循环系统，当物料温度降至50℃～55℃时关闭乳化罐的均质机，制得他克莫司软膏。
优选的，工艺步骤如下：
1)取处方量的软膏基质，加热至70℃～80℃并搅拌使其完全熔化，得溶液Ⅰ；
2)取处方量的他克莫司和溶媒，加热至70℃～80℃并振摇使其完全溶解，得溶液Ⅱ；
3)取10%～80%的溶液I和全部溶液Ⅱ倒入真空均质乳化罐中，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，50～100rpm搅拌10～20分钟；
4)打开在线均质分散机的进料口，运行在线均质和冷却循环系统，7000～15000rpm循环均质20～60分钟；
5)完成一次在线均质后，关闭在线均质分散机的进料口，将剩余的溶液I加入真空均质乳化罐，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，1000～3000rpm均质10～20分钟；
6)打开在线均质分散机的进料口，运行在线均质和冷却循环系统，7000rpm～15000rpm均质15～40分钟；
7)整个在线均质操作完成后，关闭在线均质分散机的进料口和冷却循环系统，当物料温度降至50℃～55℃时关闭乳化罐的均质机，制得他克莫司软膏。
优选的，工艺步骤如下：
1)取处方量的软膏基质，加热至70℃～80℃并搅拌使其完全熔化，得溶液Ⅰ；
2)取处方量的他克莫司和溶媒，加热至70℃～80℃并振摇使其完全溶解，得溶液Ⅱ；
3)取10%～50%的溶液I和全部溶液Ⅱ倒入真空均质乳化罐中，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，50～100rpm搅拌10～20分钟；
4)打开在线均质分散机的进料口，运行在线均质和冷却循环系统，7000～15000rpm循环均质20～60分钟；
5)完成一次在线均质后，关闭在线均质分散机的进料口，将10%～50%的溶液I加入真空均质乳化罐，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，1000～3000rpm均质10～20分钟；
6)打开在线均质分散机的进料口，开启在线均质和冷却循环系统，7000rpm～15000rpm均质15～30分钟；
7)完成步骤6）在线均质后，关闭在线均质分散机的进料口，将剩余的溶液I加入真空均质乳化罐，重复步骤5）；
8)整个在线均质操作完成后，关闭在线均质分散机的进料口和冷却循环系统，当物料温度降至50℃～55℃时关闭乳化罐的均质机，制得他克莫司软膏。
本发明将真空均质乳化罐与在线均质分散机联用，均质分散物料制备他克莫司软膏，并使用冷却循环系统控制均质过程中物料的温度。优选的，通过串联的方式将在线均质分散机与真空均质乳化罐联合应用。
优选的，进行在线均质时，调节冷却循环系统，控制物料温度为55℃～85℃。
优选的，整个在线均质操作完成后，关闭在线均质分散机的进料口和冷却循环系统，将真空均质乳化罐夹层的热水放出，将冷却循环系统中的冷却介质通入乳化罐夹层，使物料降温。当物料温度降至50℃～55℃时关闭乳化罐的均质机，继续搅拌至物料温度冷却为38℃～40℃，制得他克莫司软膏。
优选的，制备他克莫司软膏的原料包括他克莫司，辅料包括软膏基质和溶媒；其中，他克莫司为0.01～0.2重量份，软膏基质为70～95重量份的白凡士林、1～5重量份的石蜡、1～5重量份的白蜂蜡和5～15重量份的液状石蜡，溶媒为2～8重量份的丙二醇。更优选的，他克莫司为0.03～0.1重量份，软膏基质为83～87重量份的白凡士林、1～3重量份的石蜡、2～4重量份的白蜂蜡和7～9重量份的液状石蜡，溶媒为3～5重量份的丙二醇。
优选的，该生产方法还包括通过检测他克莫司软膏中的杂质和他克莫司的含量进行质量控制，方法如下：
1)采用高效液相色谱法检测含量：
a、供试品溶液的制备：精密称取他克莫司软膏1g，精密加入10ml四氢呋喃和2.0ml含50～200μg/ml尼泊金庚酯的四氢呋喃溶液，密封，50～80℃水浴加热同时振摇至溶解软膏，加入4.0ml水，振摇至形成混悬液，置冰浴中冷却10分钟以上，取出平衡至室温，加入4.0ml无水乙醇，摇匀，过滤，取续滤液，室温放置4小时以上，为供试品溶液；
b、对照品溶液的制备：称取他克莫司对照品和尼泊金庚酯适量，分别用四氢呋喃-水-无水乙醇（5∶2∶1体积比）溶解并稀释制成每1ml中含他克莫司15～50μg及尼泊金庚酯5～20μg的溶液，摇匀，置室温4小时以上，为对照品溶液；
c、色谱条件与系统适用性试验如下：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-四氢呋喃-磷酸水溶液（1∶1∶2.1体积比）为流动相，其中磷酸水溶液pH为2.5～3.5；检测波长为210～220nm；柱温为40～60℃；理论塔板数按他克莫司峰计算不低于2000；他克莫司峰与相邻杂质峰的分离度应不少于1.5；进样量为20μl；
d、按内标法以峰面积计算供试品中他克莫司的含量，其含量检测值应为标示量的90.0%～110.0%；
2)采用高效液相色谱法检测杂质：
a、供试品溶液的制备：精密称取他克莫司软膏1g，置于带有封盖的离心管中，加入5ml的正己烷-乙酸乙酯（5～10∶1体积比）混合溶液，振荡至混悬完全，离心，将上清液转移至已预处理的固相萃取柱中；向离心管中再加入5ml的正己烷-乙酸乙酯（5～10∶1体积比）混合溶液，振荡使沉淀形成混悬液，离心，将上清液转移至上述同一固相萃取柱中，弃沉淀；用正己烷-乙酸乙酯（5～10∶1体积比）混合溶液洗涤吸附上清液的固相萃取柱4～6次；吸取5.0ml乙酸乙酯加入固相萃取柱中进行洗脱，然后再加入5.0ml乙腈洗脱，收集洗脱液；将收集到的洗脱液蒸发至干，向蒸发后的残余物中加入1.0ml流动相，溶解，过滤，取续滤液，为供试品溶液；
b、色谱条件与系统适应性试验如下：以二醇基硅烷键合硅胶为填充剂，两根相同的色谱柱串联使用，以正己烷-正丁基氯-乙腈（7∶2∶1体积比）为流动相，柱温为25～45℃，流速为1.0～2.0ml/min，检测波长为220～225nm和290nm，理论塔板数按他克莫司峰计算不低于15000，拖尾因子按他克莫司峰计算不大于1.5，他克莫司峰与相邻杂质峰的分离度应不少于1.5；进样量为20～50μl；
c、记录色谱图至主峰保留时间的2～3倍，弃去保留时间小于主峰保留时间0.5倍的色谱峰和空白辅料中出现的色谱峰，考虑到杂质在220～225nm检测波长下有最大吸收，在290nm检测波长下无吸收，而辅料在220～225nm和290nm检测波长下均有吸收，故本发明除他克莫司峰外，将220～225nm和290nm检测波长下均有吸收的峰定性为辅料峰，220～225nm检测波长下，按归一化法以峰面积计算供试品中杂质的含量，供试品中任意单个杂质不得超过1.0%，总杂质不得超过5.0%；其中，空白辅料为由不含他克莫司的辅料制成的软膏。
优选的，1）中，检测波长为220nm，柱温为50℃。
优选的，2）中，检测波长为225nm和290nm，柱温为28～35℃，流速为1.5～2.0ml/min。
优选的，2）中，柱温为30℃，流速为1.5ml/min，进样量为50μl。
下面结合实施例，进一步阐述本发明。若无特别说明，以下所述份数均为重量份。
实施例1
他克莫司软膏处方：
制备方法如下：
1)取处方量的软膏基质，加热至75℃并搅拌使其完全熔化，得溶液Ⅰ；
2)取处方量的他克莫司和丙二醇，加热至75℃并振摇使其完全溶解，得溶液Ⅱ；
3)取50%的溶液I和全部溶液Ⅱ倒入真空均质乳化罐中，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，100rpm搅拌15分钟；
4)打开在线均质分散机的进料口，运行在线均质和冷却循环系统，8000rpm循环均质30分钟，同时，调节冷却水的温度和循环速度，控制均质过程中物料温度在65～75℃；
5)完成一次在线均质后，关闭在线均质分散机的进料口，将50%的溶液I加入真空均质乳化罐，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，2000rpm均质10分钟；
6)打开在线均质分散机的进料口，运行在线均质和冷却循环系统，8000rpm均质20分钟，同时，调节冷却水的温度和循环速度，控制均质过程中物料温度在65～75℃；
7)整个在线均质操作完成后，关闭在线均质分散机的进料口和冷却循环系统，将真空均质乳化罐夹层的热水放出，将冷却介质通入乳化罐夹层，当物料温度降至50℃～55℃时关闭乳化罐的均质机，继续搅拌至基质温度冷却为38℃～40℃，制得他克莫司软膏。
实施例2
他克莫司软膏处方：
制备方法如下：
1)取处方量的软膏基质，加热至80℃并搅拌使其完全熔化，得溶液Ⅰ；
2)取处方量的他克莫司和丙二醇，加热至70℃并振摇使其完全溶解，得溶液Ⅱ；
3)取80%的溶液I和全部溶液Ⅱ倒入真空均质乳化罐中，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，100rpm搅拌10分钟；
4)打开在线均质分散机的进料口，运行在线均质和冷却循环系统，10000rpm循环均质20分钟，同时，调节冷却水的温度和循环速度，控制均质过程中物料温度在55～70℃；
5)完成一次在线均质后，关闭在线均质分散机的进料口，将20%的溶液I加入真空均质乳化罐，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，1000rpm均质20分钟；
6)打开在线均质分散机的进料口，运行在线均质和冷却循环系统，10000rpm均质15分钟，同时，调节冷却水的温度和循环速度，控制均质过程中物料温度在55～70℃；
7)整个在线均质操作完成后，关闭在线均质分散机的进料口和冷却循环系统，将真空均质乳化罐夹层的热水放出，将冷却介质通入乳化罐夹层，当物料温度降至50℃～55℃时关闭乳化罐的均质机，继续搅拌至基质温度冷却为38℃～40℃，制得他克莫司软膏。
实施例3
他克莫司软膏处方：
制备方法如下：
1)取处方量的软膏基质，加热至70℃并搅拌使其完全熔化，得溶液Ⅰ；
2)取处方量的他克莫司和丙二醇，加热至70℃并振摇使其完全溶解，得溶液Ⅱ；
3)取30%的溶液I和全部溶液Ⅱ倒入真空均质乳化罐中，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，50rpm搅拌20分钟；
4)打开在线均质分散机的进料口，运行在线均质和冷却循环系统，7000rpm循环均质60分钟，同时，调节冷却水的温度和循环速度，控制均质过程中物料温度在65～75℃；
5)完成一次在线均质后，关闭在线均质分散机的进料口，将30%的溶液I加入真空均质乳化罐，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，1000rpm均质15分钟；
6)打开在线均质分散机的进料口，开启在线均质和冷却循环系统，7000rpm均质40分钟，同时，调节冷却水的温度和循环速度，控制均质过程中物料温度在65～75℃；
7)第二次在线均质完成后，关闭在线均质分散机的进料口，将剩余的40%溶液I加入真空均质乳化罐，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，1000rpm均质15分钟；
8)打开在线均质分散机的进料口，开启在线均质和冷却循环系统，7000rpm均质40分钟，同时，调节冷却水的温度和循环速度，控制均质过程中物料温度在65～75℃；
9)整个在线均质操作完成后，关闭在线均质分散机的进料口和冷却循环系统，将真空均质乳化罐夹层的热水放出，将冷却介质通入乳化罐夹层，当物料温度降至50℃～55℃时关闭乳化罐的均质机，继续搅拌至基质温度冷却为38℃～40℃，制得他克莫司软膏。
实施例4
他克莫司软膏处方：
制备方法如下：
1)取处方量的软膏基质，加热至80℃并搅拌使其完全熔化，得溶液Ⅰ；
2)取处方量的他克莫司和丙二醇，加热至80℃并振摇使其完全溶解，得溶液Ⅱ；
3)取40%的溶液I和全部溶液Ⅱ倒入真空均质乳化罐中，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，100rpm搅拌10分钟；
4)打开在线均质分散机的进料口，运行在线均质和冷却循环系统，15000rpm循环均质20分钟，同时，调节冷却水的温度和循环速度，控制均质过程中物料温度在70～85℃；
5)完成一次在线均质后，关闭在线均质分散机的进料口，将30%的溶液I加入真空均质乳化罐，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，3000rpm均质10分钟；
6)打开在线均质分散机的进料口，开启在线均质和冷却循环系统，15000rpm均质15分钟，同时，调节冷却水的温度和循环速度，控制均质过程中物料温度在70～85℃；
7)第二次在线均质完成后，关闭在线均质分散机的进料口，将剩余的30%溶液I加入真空均质乳化罐，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，3000rpm均质10分钟；
8)打开在线均质分散机的进料口，开启在线均质和冷却循环系统，15000rpm均质15分钟，同时，调节冷却水的温度和循环速度，控制均质过程中物料温度在70～85℃；
9)整个在线均质操作完成后，关闭在线均质分散机的进料口和冷却循环系统，将真空均质乳化罐夹层的热水放出，将冷却介质通入乳化罐夹层，当物料温度降至50℃～55℃时关闭乳化罐的均质机，继续搅拌至基质温度冷却为38℃～40℃，制得他克莫司软膏。
实施例5
他克莫司软膏处方：
制备方法如下：
1)取处方量的软膏基质，加热至75℃并搅拌使其完全熔化，得溶液Ⅰ；
2)取处方量的他克莫司和丙二醇，加热至75℃并振摇使其完全溶解，得溶液Ⅱ；
3)取10%的溶液I和全部溶液Ⅱ倒入真空均质乳化罐中，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，100rpm搅拌10分钟；
4)打开在线均质分散机的进料口，运行在线均质和冷却循环系统，10000rpm循环均质15分钟，同时，调节冷却水的温度和循环速度，控制均质过程中物料温度在70～85℃；
5)完成一次在线均质后，关闭在线均质分散机的进料口，将80%的溶液I加入真空均质乳化罐，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，3000rpm均质10分钟；
6)打开在线均质分散机的进料口，开启在线均质和冷却循环系统，15000rpm均质15分钟，同时，调节冷却水的温度和循环速度，控制均质过程中物料温度在70～85℃；
7)第二次在线均质完成后，关闭在线均质分散机的进料口，将剩余的10%溶液I加入真空均质乳化罐，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，3000rpm均质10分钟；
8)打开在线均质分散机的进料口，开启在线均质和冷却循环系统，10000rpm均质15分钟，同时，调节冷却水的温度和循环速度，控制均质过程中物料温度在55～65℃；
9)整个在线均质操作完成后，关闭在线均质分散机的进料口和冷却循环系统，将真空均质乳化罐夹层的热水放出，将冷却介质通入乳化罐夹层，当物料温度降至50℃～55℃时关闭乳化罐的均质机，继续搅拌至基质温度冷却为38℃～40℃，制得他克莫司软膏。
实施例6
1、采用高效液相色谱法检测杂质：
1）供试品溶液的制备：
a)精密称取1g他克莫司软膏（实施例1制备），置于带有封盖的离心管中；
b)向离心管中加入5ml的正己烷-乙酸乙酯（5∶1体积比）混合溶液，剧烈振荡直至混悬完全；
c)以3000转/分钟的速度离心8分钟；
d)将上清液小心转移至已预处理的固相萃取柱中，转移时注意不要使沉淀悬浮；
e)向离心管中再加入5ml的正己烷-乙酸乙酯（5∶1体积比）混合溶液，剧烈振荡离心管，直至沉淀再形成混悬液；
f)以3000转/分钟的速度离心8分钟；
g)将上清液小心转移至4)步骤使用的同一固相萃取柱中，转移时注意不要使沉淀悬浮，除去沉淀；
h)用正己烷-乙酸乙酯（5：1体积比）混合溶液洗涤吸附上清液的固相萃取柱5次；
i)将固相萃取柱置于梨形瓶顶端，吸取5.0ml乙酸乙酯加入固相萃取柱中，待乙酸乙酯洗脱完后，再加入5.0ml乙腈洗脱，用梨形瓶收集洗脱液；
j)将收集到的洗脱液旋转蒸发至干；
k)向蒸发后的残余物中加入1.0ml流动相涡旋使所剩残余物溶解，过滤，取续滤液，为供试品溶液。
2）色谱条件与系统适应性试验：用二醇基硅烷键合硅胶为填充剂，两根相同的色谱柱串联使用，以正己烷-正丁基氯-乙腈（7∶2∶1体积比）为流动相，柱温28℃，流速为1.5ml/min，检测波长为225nm和290nm，理论塔板数按他克莫司峰计算应不低于15000，拖尾因子按他克莫司峰计算应不大于1.5，他克莫司与相邻杂质的峰的分离度应不少于1.5。
3）测定法：精密量取50μl的供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的2倍，弃去保留时间小于主峰保留时间0.5倍的色谱峰和空白辅料中出现的色谱峰（注：除他克莫司峰外，225nm和290nm检测波长下均有吸收的峰定性为辅料峰），按归一化法以峰面积（225nm）计算供试品中杂质的含量（异构体I和异构体II不记作杂质）。
检验结果见图1（检测波长225nm）、图2（检测波长290nm），经计算，单个最大杂质含量为0.3%，总杂质含量为1.0%。
2、采用高效液相色谱法检测含量：
1)精密称取混匀后的他克莫司软膏（实施例1制备）1g，置于具塞磨口锥形瓶中，精密加入10ml四氢呋喃和2.0ml含50μg/ml尼泊金庚酯的四氢呋喃溶液，密塞，50℃水浴加热，同时缓慢振摇至软膏溶解，精密加入4.0ml水，小心振摇至形成混悬液，置冰浴中冷却10分钟以上，平衡至室温，精密加入4.0ml无水乙醇，摇匀，过滤，取续滤液，室温放置4小时以上，为供试品溶液；
2)另精密称取他克莫司对照品和尼泊金庚酯适量，用四氢呋喃-水-无水乙醇（5∶2∶1体积比）溶解并稀释制成每1ml中含他克莫司15μg及尼泊金庚酯5μg的溶液,摇匀，置室温4小时以上，为对照品溶液；
3)色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-四氢呋喃-pH3.0磷酸水溶液（1∶1∶2.1体积比）为流动相；检测波长为220nm；柱温40℃；理论塔板数按他克莫司峰计算应不低于2000，他克莫司峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求不少于1.5；
4)分别精密量取供试品溶液和对照品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按内标法以峰面积计算供试品中他克莫司(C44H69NO12)的含量。检测结果见图3（对照品）、图4（供试品），其中，第一色谱峰为他克莫司峰，第二色谱峰为内标峰。经计算，他克莫司的含量为标示量的100.4%。
实施例7
1、采用高效液相色谱法检测含量：
1)精密称取混匀后的他克莫司软膏（实施例2制备）1g，置于具塞磨口锥形瓶中，精密加入10ml四氢呋喃和2.0ml含160μg/ml尼泊金庚酯的四氢呋喃溶液，密塞，60℃水浴加热，同时缓慢振摇至软膏溶解，精密加入4.0ml水，小心振摇至形成混悬液，置冰浴中冷却10分钟以上，平衡至室温，精密加入4.0ml无水乙醇，摇匀，过滤，取续滤液，室温放置4小时以上，为供试品溶液；
2)另精密称取他克莫司对照品和尼泊金庚酯适量，用四氢呋喃-水-无水乙醇（5∶2∶1体积比）溶解并稀释制成每1ml中含他克莫司50μg及尼泊金庚酯16μg,摇匀，置室温4小时以上，为对照品溶液；
3)色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-四氢呋喃-pH2.5磷酸水溶液（1∶1∶2.1体积比）为流动相；检测波长为220nm；柱温50℃；理论塔板数按他克莫司峰计算应不低于2000，他克莫司峰与相邻杂质峰的分离度应不少于1.5；
4)分别精密量取供试品溶液和对照品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按内标法以峰面积计算供试品中他克莫司(C44H69NO12)的含量。检测结果：他克莫司(C44H69NO12)的含量为标示量的99.2%。
2、采用高效液相色谱法检测杂质：
1）供试品溶液的制备：
a)精密称取1g他克莫司软膏（实施例2制备），置于带有封盖的离心管中；
b)向离心管中加入5ml的正己烷-乙酸乙酯（10∶1体积比）混合溶液，剧烈振荡直至混悬完全；
c)以3000转/分钟的速度离心5分钟；
d)将上清液小心转移至已预处理的固相萃取柱中，转移时注意不要使沉淀悬浮；
e)向离心管中再加入5ml的正己烷-乙酸乙酯（10∶1体积比）混合溶液，剧烈振荡离心管，直至沉淀再形成混悬液；
f)以3000转/分钟的速度离心5分钟；
g)将上清液小心转移至d)步骤使用的同一固相萃取柱中，转移时注意不要使沉淀悬浮，除去沉淀；
h)用正己烷-乙酸乙酯（10：1体积比）混合溶液洗涤吸附上清液的固相萃取柱6次；
i)将固相萃取柱置于梨形瓶顶端，吸取5.0ml乙酸乙酯加入固相萃取柱中，待乙酸乙酯洗脱完后，再加入5.0ml乙腈洗脱，用梨形瓶收集洗脱液；
j)将收集到的洗脱液旋转蒸发至干；
k)向蒸发后的残余物中加入1.0ml流动相涡旋使所剩残余物溶解，以孔径0.45μm的聚四氟乙烯滤膜过滤，取续滤液，为供试品溶液。
2）色谱条件与系统适应性试验：用二醇基硅烷键合硅胶为填充剂，两根相同的色谱柱串联使用，以正己烷-正丁基氯-乙腈（7∶2∶1体积比）为流动相，柱温45℃，流速为1.5ml/min，检测波长为225nm和290nm，理论塔板数按他克莫司峰计算应不低于15000，拖尾因子按他克莫司峰计算应不大于1.5，他克莫司与相邻杂质的峰的分离度应不少于1.5。
3）测定法：精密量取20μl的供试品溶液注入液相色谱仪，弃去保留时间小于主峰保留时间0.5倍的色谱峰和空白辅料中出现的色谱峰（注：除他克莫司峰外，225nm和290nm检测波长下均有吸收的峰定性为辅料峰），按归一化法以峰面积（225nm）计算供试品中杂质的含量（异构体I和异构体II不记作杂质）。
检测结果：单个最大杂质为0.3%，总杂质为0.9%。
实施例8
1、采用高效液相色谱法检测含量：
1)精密称取混匀后的他克莫司软膏（实施例3制备）1g，置于具塞磨口锥形瓶中，精密加入10ml四氢呋喃和2.0ml含200μg/ml尼泊金庚酯的四氢呋喃溶液，密塞，80℃水浴加热，同时缓慢振摇至软膏溶解，精密加入4.0ml水，小心振摇至形成混悬液，置冰浴中冷却10分钟以上，平衡至室温，精密加入4.0ml无水乙醇，摇匀，过滤，取续滤液，室温放置4小时以上，为供试品溶液；
2)另精密称取他克莫司对照品和尼泊金庚酯适量，用四氢呋喃-水-无水乙醇（5∶2∶1体积比）溶解并稀释制成每1ml中含他克莫司25μg及尼泊金庚酯20μg,摇匀，置室温4小时以上，为对照品溶液；
3)色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-四氢呋喃-pH3.5磷酸水溶液（1∶1∶2.1体积比）为流动相；检测波长为210nm；柱温60℃；理论塔板数按他克莫司峰计算应不低于2000，他克莫司峰与相邻杂质峰的分离度应不少于1.5；
4)分别精密量取供试品溶液和对照品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按内标法以峰面积计算供试品中他克莫司(C44H69NO12)的含量。检测结果：他克莫司含量为标示量的100.2%。
2、采用高效液相色谱法检测杂质：
1）供试品溶液的制备：
a)精密称取1g他克莫司软膏（实施例3制备），置于带有封盖的离心管中；
b)向离心管中加入5ml的正己烷-乙酸乙酯（5∶1体积比）混合溶液，剧烈振荡直至混悬完全；
c)以3000转/分钟的速度离心10分钟；
d)将上清液小心转移至已预处理的固相萃取柱中，转移时注意不要使沉淀悬浮；
e)向离心管中再加入5ml的正己烷-乙酸乙酯（5∶1体积比）混合溶液，剧烈振荡离心管，直至沉淀再形成混悬液；
f)以3000转/分钟的速度离心10分钟；
g)将上清液小心转移至d)步骤使用的同一固相萃取柱中，转移时注意不要使沉淀悬浮，除去沉淀；
h)用正己烷-乙酸乙酯（5：1体积比）混合溶液洗涤吸附上清液的固相萃取柱5次；
i)将固相萃取柱置于梨形瓶顶端，吸取5.0ml乙酸乙酯加入固相萃取柱中，待乙酸乙酯洗脱完后，再加入5.0ml乙腈洗脱，用梨形瓶收集洗脱液；
j)将收集到的洗脱液旋转蒸发至干；
k)向蒸发后的残余物中加入1.0ml流动相涡旋使所剩残余物溶解，过滤，取续滤液，为供试品溶液。
2）色谱条件与系统适应性试验：用二醇基硅烷键合硅胶为填充剂，两根相同的色谱柱串联使用，以正己烷-正丁基氯-乙腈（7∶2∶1体积比）为流动相，柱温28℃，流速为1.7ml/min，检测波长为220nm（使检测波长在220～225范围）和290nm，理论塔板数按他克莫司峰计算应不低于15000，拖尾因子按他克莫司峰计算应不大于1.5，他克莫司与相邻杂质的峰的分离度应不少于1.5。
3）测定法：精密量取50μl的供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的2倍，弃去保留时间小于主峰保留时间0.5倍的色谱峰和空白辅料中出现的色谱峰（注：除他克莫司峰外，220nm和290nm检测波长下均有吸收的峰定性为辅料峰），按归一化法以峰面积（220nm）计算供试品中杂质的含量（异构体I和异构体II不记作杂质）。
检测结果：单个最大杂质为0.3%，总杂质为1.0%。
对比例1
他克莫司软膏处方：
制备方法如下：
1)取处方量的白凡士林、石蜡、白蜂蜡和液状石蜡75℃下不断搅拌至完全熔化，得溶液I；
2)取处方量的他克莫司和碳酸丙烯酯，70℃加热并振摇至完全溶解，得溶液Ⅱ；
3)将溶液I加入溶液Ⅱ，得到的溶液用搅匀器在70℃下，以7000rpm的速度搅拌10分钟，然后在室温下以5000rpm的速度搅拌30分钟，溶液冷至50℃，然后在室温下，缓慢搅拌至所得溶液冷却至约40℃，制得软膏。
对比例2
他克莫司软膏处方：
制备方法如下：
1)取处方量白凡士林、石蜡、白蜂蜡和液状石蜡75℃下不断搅拌至完全熔化，得溶液I；
2)取处方量他克莫司和碳酸丙烯酯，70℃加热并振摇至完全溶解，得溶液Ⅱ；
3)将溶液I加入溶液，得到的溶液在真空均质乳化罐中70℃下，以3000rpm的速度均质30分钟，通入冷却介质继续均质至溶液冷至50℃，然后在室温下，100rpm的速度搅拌至所得溶液冷却至约40℃，制得软膏。
试验例1
稳定性测试：
将市售软膏（商品名：普特彼），实施例1和对比例1制得他克莫司软膏在30℃储存3个月，每隔一月取样检测含量均匀度和杂质，液相色谱检测方法同实施例7，稳定性考察结果见表1。
表1稳定性测试结果
可见，与对比例比较，采用本发明生产的他克莫司软膏更均匀且稳定性更好。与市售软膏相比，采用本发明生产的他克莫司软膏总杂质更低。
试验例2
在体皮肤吸收试验：
取SD大鼠（雄性，约250g）5只，试验前，用7%水合氯醛N.S溶液将大鼠麻醉，再用剪刀和脱毛膏将大鼠腹部两侧脱毛（大鼠休息24小时）。试验当天，用乙醚将大鼠略为麻醉，再将大鼠固定在木板上，待大鼠清醒后，左右两侧腹部分别涂上市售软膏（商品名：普特彼）和自制软膏（实施例1制备），10cm2用药量均为100mg。用药8小时后，刮去皮肤上软膏，收集到的材料放入5ml提取管中。测定剩余软膏中他克莫司的含量，即体外残留量。大鼠脱臼处死，剪下用药部位皮肤，剪碎，测定皮肤中他克莫司含量，即皮肤滞留量。结果见表2。
表2在体皮肤吸收试验结果（n=6）
其他实施例制备的软膏在体皮肤吸收试验结果与本试验相似。可见，与市售软膏相比，采用本发明生产的他克莫司软膏在皮肤上的吸收是一致的。
试验例3
药效学试验：
采用BALB/C小鼠进行他克莫司软膏对特异性皮炎药效试验，试验方法为：首周在去毛的小鼠背部涂以高浓度的二硝基氯苯溶液（1%）致敏，隔天一次；次周同样在小鼠背部涂以低浓度的二硝基氯苯溶液（0.2%）激发，隔天一次。单独观察每只小鼠造模完成后10min内抓痒次数和测量皮损面积，结果模型组与阴性对照组平均抓痒次数分别为4.40±1.8次和1.75±0.5次，模型组可见明显皮损，而阴性对照组无皮损，说明造模成功。将造模后老鼠随机分成3组，每组6只，分别涂抹自制软膏（实施例1制备）、市售软膏和空白基质，观察每只小鼠10min内抓痒次数和测定皮损恢复面积，结果见表3。
表3药效学试验结果
| 样品 | 抓痒次数 | 皮损恢复面积 |
| 自制软膏 | 1.67±0.58 | 79.3% |
| 市售软膏 | 1.73±0.66 | 81.0% |
| 空白基质 | 3.25±1.89 | 10.7% |
其他实施例制备的软膏药效试验结果与本次试验相似。可见，与市售软膏相比，采用本发明生产的他克莫司软膏对特异性皮炎小鼠具有同样的治疗效果。
Claims (9)
1.一种他克莫司软膏的工业化生产方法，其特征在于：将真空均质乳化罐与在线均质分散机联用，并使用冷却循环系统控制物料的温度，采用分步均质分散的方法生产他克莫司软膏，工艺步骤如下：
1）取处方量的软膏基质，加热并搅拌至完全熔化，得溶液Ⅰ；
2）取处方量的他克莫司和溶媒，加热并振摇至完全溶解，得溶液Ⅱ；
3）将10%～80%的溶液I和全部溶液Ⅱ加入真空均质乳化罐，开启真空均质乳化罐；
4）打开在线均质分散机的进料口，运行在线均质和冷却循环系统；
5）完成一次在线均质后，关闭在线均质分散机的进料口，将10%～80%的溶液I加入真空均质乳化罐，开启真空均质乳化罐；
6）重复步骤4)和5)，至溶液I完全加入，完成在线均质；
7）整个在线均质操作完成后，关闭在线均质分散机的进料口和冷却循环系统，当物料温度降至50℃～55℃时关闭乳化罐的均质机，制得他克莫司软膏；
进行在线均质时，调节冷却循环系统，控制物料温度为55℃～85℃。
2.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于：工艺步骤如下：
1）取处方量的软膏基质，加热至70℃～80℃并搅拌使其完全熔化，得溶液Ⅰ；
2）取处方量的他克莫司和溶媒，加热至70℃～80℃并振摇使其完全溶解，得溶液Ⅱ；
3）取10%～80%的溶液I和全部溶液Ⅱ倒入真空均质乳化罐中，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，50～100rpm搅拌10～20分钟；
4）打开在线均质分散机的进料口，运行在线均质和冷却循环系统，7000～15000rpm循环均质20～60分钟；
5）完成一次在线均质后，关闭在线均质分散机的进料口，将剩余的溶液I加入真空均质乳化罐，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，1000～3000rpm均质10～20分钟；
6）打开在线均质分散机的进料口，运行在线均质和冷却循环系统，7000rpm～15000rpm均质15～40分钟；
7）整个在线均质操作完成后，关闭在线均质分散机的进料口和冷却循环系统，当物料温度降至50℃～55℃时关闭乳化罐的均质机，制得他克莫司软膏。
3.根据权利要求1所述的生产方法，其特征在于：工艺步骤如下：
1）取处方量的软膏基质，加热至70℃～80℃并搅拌使其完全熔化，得溶液Ⅰ；
2）取处方量的他克莫司和溶媒，加热至70℃～80℃并振摇使其完全溶解，得溶液Ⅱ；
3）取10%～50%的溶液I和全部溶液Ⅱ倒入真空均质乳化罐中，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，50～100rpm搅拌10～20分钟；
4）打开在线均质分散机的进料口，运行在线均质和冷却循环系统，7000～15000rpm循环均质20～60分钟；
5）完成一次在线均质后，关闭在线均质分散机的进料口，将10%～50%的溶液I加入真空均质乳化罐，开启真空均质乳化罐，维持真空度为–0.06～–0.08Mpa，1000～3000rpm均质10～20分钟；
6）打开在线均质分散机的进料口，开启在线均质和冷却循环系统，7000rpm～15000rpm均质15～30分钟；
7）完成步骤6）在线均质后，关闭在线均质分散机的进料口，将剩余的溶液I加入真空均质乳化罐，重复步骤5）；
8）整个在线均质操作完成后，关闭在线均质分散机的进料口和冷却循环系统，当物料温度降至50℃～55℃时关闭乳化罐的均质机，制得他克莫司软膏。
4.根据权利要求1～3任意一项所述的生产方法，其特征在于：整个在线均质操作完成后，关闭在线均质分散机的进料口和冷却循环系统，将真空均质乳化罐夹层的热水放出，将冷却循环系统中的冷却介质通入乳化罐夹层，使物料降温。
5.根据权利要求 1～3任意一项所述的生产方法，其特征在于：制备他克莫司软膏的原料包括他克莫司，辅料包括软膏基质和溶媒；其中，他克莫司为0.01～0.2重量份，软膏基质为70～95重量份的白凡士林、1～5重量份的石蜡、1～5重量份的白蜂蜡和5～15重量份的液状石蜡，溶媒为2～8重量份的丙二醇。
6.根据权利要求5所述的生产方法，其特征在于：该生产方法还包括检测他克莫司软膏中的杂质和他克莫司的含量，方法如下：
1）采用高效液相色谱法检测含量：
a、供试品溶液的制备：精密称取他克莫司软膏1g，精密加入10ml四氢呋喃和2.0ml 含50～200μg/ml尼泊金庚酯的四氢呋喃溶液，密封，50～80℃水浴加热同时振摇至溶解软膏，加入4.0ml水，振摇至形成混悬液，置冰浴中冷却10分钟以上，取出平衡至室温，加入4.0ml无水乙醇，摇匀，过滤，取续滤液，室温放置4小时以上，为供试品溶液；
b、对照品溶液的制备：称取他克莫司对照品和尼泊金庚酯适量，分别用5׃2׃1体积比的四氢呋喃-水-无水乙醇溶解并稀释制成每1ml中含他克莫司15～50μg及尼泊金庚酯5～20μg的溶液，摇匀，置室温4小时以上，为对照品溶液；
c、色谱条件与系统适用性试验如下：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以1׃1׃2.1体积比的乙腈-四氢呋喃-磷酸水溶液为流动相，其中磷酸水溶液pH为2.5～3.5；检测波长为210～220nm；柱温为40～60℃；理论塔板数按他克莫司峰计算不低于2000；他克莫司峰与相邻杂质峰的分离度应不少于1.5；进样量为20μl；
d、按内标法以峰面积计算供试品中他克莫司的含量；
2）采用高效液相色谱法检测杂质：
a、供试品溶液的制备：精密称取他克莫司软膏1g，置于带有封盖的离心管中，加入5ml的5～10׃1体积比的正己烷-乙酸乙酯混合溶液，振荡至混悬完全，离心，将上清液转移至已预处理的固相萃取柱中；向离心管中再加入5ml的5～10׃1体积比的正己烷-乙酸乙酯混合溶液，振荡使沉淀形成混悬液，离心，将上清液转移至上述同一固相萃取柱中，弃沉淀；用5～10׃1体积比的正己烷-乙酸乙酯混合溶液洗涤吸附上清液的固相萃取柱4～6次；吸取5.0ml乙酸乙酯加入固相萃取柱中进行洗脱，然后再加入5.0ml乙腈洗脱，收集洗脱液；将收集到的洗脱液蒸发至干，向蒸发后的残余物中加入1.0ml流动相，溶解，过滤，取续滤液，为供试品溶液；
b、色谱条件与系统适应性试验如下：以二醇基硅烷键合硅胶为填充剂，两根相同的色谱柱串联使用，以7׃2׃1体积比的正己烷-正丁基氯-乙腈为流动相，柱温为25～45℃，流速为1.0～2.0ml/min，检测波长为220～225nm和290nm，理论塔板数按他克莫司峰计算不低于15000，拖尾因子按他克莫司峰计算不大于1.5，他克莫司峰与相邻杂质峰的分离度应不少于1.5；进样量为20～50μl；
c、记录色谱图至主峰保留时间的2～3倍，弃去保留时间小于主峰保留时间0.5倍的色谱峰和空白辅料中出现的色谱峰，除他克莫司峰外，将220～225nm和290nm检测波长下均有吸收的峰定性为辅料峰；220～225nm检测波长下，按归一化法以峰面积计算供试品中杂质的含量；其中，空白辅料为由不含他克莫司的辅料制成的软膏。
7.根据权利要求6所述的生产方法，其特征在于：1）中，检测波长为220nm，柱温为50℃。
8.根据权利要求6所述的生产方法，其特征在于：2）中，检测波长为225nm和290nm，柱温为28～35℃，流速为1.5～2.0ml/min。
9.根据权利要求8所述的生产方法，其特征在于：2）中，柱温为30℃，流速为1.5ml/min，进样量为50μl。
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Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101518511A (zh) * | 2009-03-26 | 2009-09-02 | 中山大学中山眼科中心 | 一种含他克莫司的眼用制剂的制备方法 |
| JP2011102260A (ja) * | 2009-11-11 | 2011-05-26 | Takada Seiyaku Kk | タクロリムス外用剤 |
| CN102176913A (zh) * | 2008-10-08 | 2011-09-07 | 高田制药株式会社 | 外用的他克莫司制剂 |
| CN102579437A (zh) * | 2011-01-06 | 2012-07-18 | 中国医学科学院医药生物技术研究所 | 含醇的他克莫司组合物及其制备方法 |
| CN102885761A (zh) * | 2012-09-24 | 2013-01-23 | 浙江万马药业有限公司 | 一种制备他克莫司软膏的方法 |
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Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102176913A (zh) * | 2008-10-08 | 2011-09-07 | 高田制药株式会社 | 外用的他克莫司制剂 |
| CN101518511A (zh) * | 2009-03-26 | 2009-09-02 | 中山大学中山眼科中心 | 一种含他克莫司的眼用制剂的制备方法 |
| JP2011102260A (ja) * | 2009-11-11 | 2011-05-26 | Takada Seiyaku Kk | タクロリムス外用剤 |
| CN102579437A (zh) * | 2011-01-06 | 2012-07-18 | 中国医学科学院医药生物技术研究所 | 含醇的他克莫司组合物及其制备方法 |
| CN102885761A (zh) * | 2012-09-24 | 2013-01-23 | 浙江万马药业有限公司 | 一种制备他克莫司软膏的方法 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106074363A (zh) * | 2016-07-12 | 2016-11-09 | 华北制药秦皇岛有限公司 | 一种他克莫司软膏剂及其制备方法 |
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