CN103222956A - 一种马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体，按以下重量比含有：马钱子碱0.5～2份、马钱子碱-HP-β-环糊精包合物2～20份、豆磷脂20～200份、胆固醇5～20份。本发明还公开了上述马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体的制备方法，将马钱子碱经羟丙基-β-环糊精包合后再制备成脂质体。本发明提高了药物载药量，延长马钱子碱的消除半衰期，提高稳定性，并实现淋巴靶向性，减轻其对心脏及中枢的毒副作用，提高生物利用度。

Description

一种马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及抗炎镇痛药物制备技术，特别涉及一种马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体及其制备方法和应用。

背景技术

马钱子碱为马钱科植物马钱子(Srtychnos nux-vomica L)或云南马钱(SPierriana A.W.Hill)的有效成分，具有免疫抑制、抗炎、镇痛、关节修复等作用，能对风湿性关节炎各病理环节作针对性治疗，是治疗类风湿性关节炎的有效药物。马钱子碱口服易致腹痛、腹泻，长期用药可损害肾小管上皮细胞，造成肾功能损害，并可兴奋中枢产生心脏及中枢副作用，同时其在体内代谢快，生物利用度低影响了马钱子碱在临床的应用推广。

羟丙基-β-环糊精（HP-β-CD）是β-环糊精（β-CD）的一种羟烷基衍生物。它对许多化合物有优良的包络作用,可提高被包络物质的稳定性，而且水溶性高、能提高被包络药物的释放速度和生物利用度，能弥补β-CD溶解性能的不足。但由于HP-β-CD与药物以物理方式结合，其结合不牢靠，易在体内转移过程中提前解离释放而影响疗效，引起心脏、中枢副作用，同时HP-β-CD有一定的溶血性而较少运用于静脉注射途径。脂质体采用将药物包封于磷脂双分子层中可延长药物的消除半衰期，脂质体对淋巴系统具有被动靶向作用，可将药物靶向输送至淋巴治疗淋巴系统疾病，同时脂质体具有良好生物相溶性，可减轻HP-β-CD的溶血作用，提高药物安全性。

发明内容

为了克服现有技术的上述缺点与不足，本发明的目的在于解决马钱子碱在体内代谢快、血药浓度低、生物利用度低等缺点，提供一种马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体，可提高药物载药量，延长马钱子碱的消除半衰期，减少包合物在体内转移过程的解离，提高稳定性，并实现包合物在淋巴系统的靶向性，减轻其对心脏及中枢的毒副作用，降低包合物的溶血作用，提高生物利用度。

本发明的另一目的在于提供上述钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体的应用。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体，按以下重量比含有：马钱子碱0.5～2份、马钱子碱-HP-β-环糊精包合物2～20份、豆磷脂20～200份、胆固醇5～20份。

所述的马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体，按以下重量比含有：马钱子碱2份、马钱子碱-HP-β-环糊精包合物4份、豆磷脂80份、胆固醇10份。

所述马钱子碱-HP-β-环糊精包合物中，马钱子碱与羟丙基-β-环糊精的重量比为1:2～1:5。

所述马钱子碱-HP-β-环糊精包合物中，所述马钱子碱与羟丙基-β-环糊精的重量比为1:4。

上述马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体的制备方法，包括以下步骤：

（1）制备马钱子碱-羟丙基-β-环糊精包合物；

（2）取马钱子碱、豆磷脂与胆固醇溶解于无水乙醇中制成溶液Ⅰ，将步骤（1）所制马钱子碱-HP-β-环糊精包合物溶解于水中制成溶液Ⅱ；

（3）将溶液Ⅰ加入溶液Ⅱ中搅拌混匀，50～70℃恒温水浴上减压蒸发除去有机溶剂，形成均匀透明的薄膜,加入磷酸盐缓冲液水化薄膜，震荡摇匀，形成乳白色脂质体混悬液Ⅲ；将乳白色脂质体混悬液Ⅲ高压均质匀化，即得马钱子碱-HP-β-环糊精包合物脂质体。

步骤（1）所述制备马钱子碱-羟丙基-β-环糊精包合物，具体为：

将羟丙基-β-环糊精溶于蒸馏水中，得到溶液Ⅲ，将马钱子碱溶于无水乙醇中，得到溶液Ⅳ；在不断搅拌的条件下将溶液Ⅳ滴加到溶液Ⅲ中，在60～80℃恒温水浴下进行包合，滴加完后继续搅拌，使充分包合后，冷藏预冻，在冷冻干燥机里冷冻干燥，即得白色粉末状马钱子碱-羟丙基-β-环糊精包合物。

上述的马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体的应用，用于制备注射剂、微球、外用凝胶剂、乳膏剂型的抗炎镇痛药物。

与现有技术相比，本发明具有以下优点和有益效果：

（1）本发明制备的马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体，马钱子碱包裹在HP-β-CD的空腔及脂质双分子层中，可提高药物包载量，增加药物在局部的药物浓度，马钱子碱经HP-β-CD包合再形成脂质体，既可延长马钱子碱在局部的作用时间达到缓释目的，又弥补了环糊精与药物呈物理结合状态在体内易解离等缺点，使马钱子碱-HP-β-CD脂质体具有淋巴靶向特征，可更好地作用于淋巴免疫系统发挥免疫抑制作用，降低包合物的溶血作用，提高药效。

（2）本发明的制备方法简单，包封率高，载药量大，工艺稳定、可行，易于工业化生产。所制备的马钱子碱-HP-β-CD脂质体可制备成其他各种剂型，如制备注射剂、微球、外用凝胶剂、乳膏剂型，有利于马钱子碱在临床的推广应用。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1

本实施例的马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体的配方按以下重量比含有：马钱子碱1.5份、HP-β-环糊精2份、豆磷脂20份、胆固醇5份。

本实施例的马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体的制备方法包括以下步骤：

（1）马钱子碱-HP-β-CD包合物的制备：称取HP-β-CD2份，溶于蒸馏水中，得到溶液Ⅳ；将1份马钱子碱以质量比1：1的溶于无水乙醇中，得到溶液Ⅴ；磁力搅拌器不断搅拌下将溶液Ⅴ滴加到溶液Ⅳ中，在60℃恒温水浴下进行包合，滴加完后继续搅拌2小时，使充分包合后，冷藏预冻，在冷冻干燥机里冷冻干燥，即得白色粉末状马钱子碱-HP-β-CD包合物，所述马钱子碱-HP-β-环糊精包合物中，马钱子碱与羟丙基-β-环糊精的重量比为1:2。

（2）取0.5份马钱子碱、20份豆磷脂与5份胆固醇溶解于无水乙醇中制成溶液Ⅰ，将所制马钱子碱-HP-β-CD包合物2份溶解于水中制成溶液Ⅱ；

（3）将溶液Ⅰ加入到恒温磁力搅拌的溶液Ⅱ中混匀，置于500mL茄形瓶中,于50℃恒温水浴上减压蒸发除去有机溶剂，瓶壁上形成均匀透明的薄膜，取pH7.0磷酸盐缓冲液15mL加入烧瓶水化薄膜，震荡摇匀，形成乳白色脂质体混悬液Ⅲ，高压均质匀化，即得马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体。

下面对本实施例的马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体进行以下测试：

1、释放度试验：分别精密称取2mg马钱子碱-HP-β-CD包合物及马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体放于透析袋中，两边扎紧，将透析袋置于预先加热至37℃的含30％的乙醇生理盐水，开动恒温（37±2）℃水浴循环和磁力搅拌器（100rpm·min^-1），在1、2、3、4、6、8、10、12h内从取出7mL接受液，同时补加相同体积释放液，测定马钱子碱含量，以马钱子碱累积释放量与时间进行线性回归。由释放结果可知，马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体能维持24h释药，在2、4、8h取样点的累积释放量分别达到(10.6±0.34)%、(36.8±0.71)%、(51.9±0.47)%，24h释药可达(90.48±0.62)%，而马钱子碱-HP-β-CD包合物在2、4、8h取样点的累积释放量则分别为(20.4±0.11)%、(50.9±0.25)%、(83.6±0.60)%，24h释药即达(98.6±0.28)%，马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体体外缓释作用优于马钱子碱-HP-β-CD包合物，说明本实施例制备的马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体可实现缓释、长效作用。

2、溶血性试验：取马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体用0.9%氯化钠溶液溶解，加入50%兔红细胞悬液，轻轻摇匀，放置于37℃生化培养箱保湿1h,观察有无溶血反应。结果表明，马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体没有溶血作用，未出现红细胞凝集，可用于静脉注射给药。

3、稳定性试验：取马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体，用台式离心机3000r/min离心15min后观察其外观，离心后未发现明显分层，其性质均匀稳定。另取样品置于4℃冰箱中冷藏24小时观察其外观，马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体无沉淀，无分层，外观均匀，表明所制的马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体有较好的稳定性。

结论：通过以上实验证明本发明具有良好的体外释放性能，体外释药可维持24h，无溶血等不良反应，生物利用度高，安全性、稳定性好。

实施例2

本实施例的马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体的配方按以下重量比含有：马钱子碱3份、HP-β-环糊精4份、豆磷脂80份、胆固醇10份。

本实施例的马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体的制备方法包括以下步骤：

（1）马钱子碱-HP-β-CD包合物的制备：称取HP-β-CD4份，溶于蒸馏水中，得到溶液Ⅳ；将1份马钱子碱以质量比1：1的溶于无水乙醇中，得到溶液Ⅴ；磁力搅拌器不断搅拌下将溶液Ⅴ滴加到溶液Ⅳ中，在70℃恒温水浴下进行包合，滴加完后继续搅拌2小时，使充分包合后，冷藏预冻，在冷冻干燥机里冷冻干燥，即得白色粉末状马钱子碱-HP-β-CD包合物，所述马钱子碱-HP-β-环糊精包合物中，马钱子碱与羟丙基-β-环糊精的重量比为1:4。

（2）取2份马钱子碱、80份豆磷脂与10份胆固醇溶解于无水乙醇中制成溶液Ⅰ，所制马钱子碱-HP-β-CD包合物取4份溶解于水中制成溶液Ⅱ。

（3）将溶液Ⅰ加入到恒温磁力搅拌的溶液Ⅱ中混匀，置于500mL茄形瓶中,于50℃恒温水浴上减压蒸发除去有机溶剂,瓶壁上形成均匀透明的薄膜，取pH7.0磷酸盐缓冲液15mL加入烧瓶水化薄膜，震荡摇匀，形成乳白色脂质体混悬液Ⅲ，高压均质匀化，即得马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体。

本实施例制备的马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体检测结果为：

1、释放度试验：脂质体能维持24h释药，在2、4、8h取样点的累积释放量分别达到(18.2±0.03)%、(40.5±0.22)%、(61.8±0.59)%，24h释药达(85.3±0.73)%。

2、溶血性试验：未出现红细胞凝集，无溶血作用。

3、稳定性试验：外观均匀，无沉淀，无分层，稳定性良好。

实施例3

本实施例的马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体的配方按以下重量比含有：马马钱子碱4份、HP-β-环糊精15份、豆磷脂180份、胆固醇20份。

本实施例的马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体的制备方法包括以下步骤：

（1）马钱子碱-HP-β-CD包合物的制备：称取HP-β-CD15份，溶于蒸馏水中，得到溶液Ⅳ；将3份马钱子碱以质量比1：1的溶于无水乙醇中，得到溶液Ⅴ；磁力搅拌器不断搅拌下将溶液Ⅴ滴加到溶液Ⅳ中，在70℃恒温水浴下进行包合，滴加完后继续搅拌2小时，使充分包合后，冷藏预冻，在冷冻干燥机里冷冻干燥，即得白色粉末状马钱子碱-HP-β-CD包合物，所述马钱子碱-HP-β-环糊精包合物中，马钱子碱与羟丙基-β-环糊精的重量比为1:5。

（2）取1份马钱子碱、180份豆磷脂与20份胆固醇溶解于无水乙醇中制成溶液Ⅰ，将所制马钱子碱-HP-β-CD包合物取14份溶解于水中制成溶液Ⅱ。

（3）将溶液Ⅰ加入到恒温磁力搅拌的溶液Ⅱ中混匀，置于500mL茄形瓶中,于60℃恒温水浴上减压蒸发除去有机溶剂,瓶壁上形成均匀透明的薄膜,取pH7.0磷酸盐缓冲液15mL加入烧瓶水化薄膜，震荡摇匀，形成乳白色脂质体混悬液Ⅲ，高压均质匀化，即得马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体。

本实施例制备的马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体检测结果为：

1、释放度试验：脂质体能维持24h释药，在2、4、8h取样点的累积释放量分别达到(12.9±0.35)%、(37.8±0.52)%、(53.5±0.61)%，24h释药可达(93.1±0.97)%。

2、溶血性试验：未出现红细胞凝集，无溶血作用。

3、稳定性试验：外观均匀，无沉淀，无分层，稳定性良好。

实施例4

本实施例的马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体的配方按以下重量比含有：马钱子碱2份、HP-β-环糊精3份、豆磷脂20份、胆固醇5份。

本实施例的马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体的制备方法包括以下步骤：

（1）制备马钱子碱-羟丙基-β-环糊精包合物：将羟丙基-β-环糊精3份溶于蒸馏水中，得到溶液Ⅳ，将1份马钱子碱以质量比1：1溶于无水乙醇中，得到溶液Ⅴ；在不断搅拌的条件下将溶液Ⅴ滴加到溶液Ⅳ中，在80℃恒温水浴下进行包合，滴加完后继续搅拌，使充分包合后，冷藏预冻，在冷冻干燥机里冷冻干燥，即得白色粉末状马钱子碱-羟丙基-β-环糊精包合物，所述马钱子碱-HP-β-环糊精包合物中，马钱子碱与羟丙基-β-环糊精的重量比为1:3。

（2）取1份马钱子碱、20份豆磷脂与5份胆固醇溶解于无水乙醇中制成溶液Ⅰ，取步骤（1）所制马钱子碱-HP-β-环糊精包合物取3份溶解于水中制成溶液Ⅱ；

（3）将溶液Ⅰ加入溶液Ⅱ中搅拌混匀，50℃恒温水浴上减压蒸发除去有机溶剂，形成均匀透明的薄膜,加入磷酸盐缓冲液水化薄膜，震荡摇匀，形成乳白色脂质体混悬液Ⅲ；将乳白色脂质体混悬液Ⅲ高压均质匀化，即得马钱子碱-HP-β-环糊精包合物脂质体。

本实施例制备的马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体检测结果为：

1、释放度试验：脂质体能维持24h释药，在2、4、8h取样点的累积释放量分别达到(11.5±0.2)%、(32.7±0.36)%、(58.1±0.01)%，24h释药可达(90.7±0.55)%。

2、溶血性试验：未出现红细胞凝集，无溶血作用。

3、稳定性试验：外观均匀，无沉淀，无分层，稳定性良好。

实施例5

本实施例的马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体的配方按以下重量比含有：马钱子碱6份、HP-β-环糊精20份、豆磷脂200份、胆固醇20份。

本实施例的马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体的制备方法包括以下步骤：

（1）制备马钱子碱-羟丙基-β-环糊精包合物：将羟丙基-β-环糊精20份溶于蒸馏水中，得到溶液Ⅳ，将4份马钱子碱以质量比1：1溶于无水乙醇中，得到溶液Ⅴ；在不断搅拌的条件下将溶液Ⅴ滴加到溶液Ⅳ中，在80℃恒温水浴下进行包合，滴加完后继续搅拌，使充分包合后，冷藏预冻，在冷冻干燥机里冷冻干燥，即得白色粉末状马钱子碱-羟丙基-β-环糊精包合物，所述马钱子碱-HP-β-环糊精包合物中，马钱子碱与羟丙基-β-环糊精的重量比为1:5。

（2）取马钱子碱2份、豆磷脂200份与胆固醇20份溶解于无水乙醇中制成溶液Ⅰ，取步骤（1）所制马钱子碱-HP-β-环糊精包合物取20份溶解于水中制成溶液Ⅱ；

（3）将溶液Ⅰ加入到恒温磁力搅拌的溶液Ⅱ中混匀，置于500mL茄形瓶中,于70℃恒温水浴上减压蒸发除去有机溶剂,瓶壁上形成均匀透明的薄膜,取pH7.0磷酸盐缓冲液15mL加入烧瓶水化薄膜，震荡摇匀，形成乳白色脂质体混悬液Ⅲ，高压均质匀化，即得马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体。

本实施例制备的马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体检测结果为：

1、释放度试验：脂质体能维持24h释药，在2、4、8h取样点的累积释放量分别达到(18.0±0.03)%、(38.5±0.54)%、(60.2±0.93)%，24h释药可达(93.4±0.77)%。

2、溶血性试验：未出现红细胞凝集，无溶血作用。

3、稳定性试验：外观均匀，无沉淀，无分层，稳定性良好。

实施例6

本实施例的马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体的配方按以下重量比含有：马钱子碱3份、HP-β-环糊精10份、豆磷脂100份、胆固醇10份。

本实施例的马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体的制备方法包括以下步骤：

（1）制备马钱子碱-羟丙基-β-环糊精包合物：将羟丙基-β-环糊精10份溶于蒸馏水中，得到溶液Ⅳ，将2.5份马钱子碱以质量比1：1溶于无水乙醇中，得到溶液Ⅴ；在不断搅拌的条件下将溶液Ⅴ滴加到溶液Ⅳ中，在80℃恒温水浴下进行包合，滴加完后继续搅拌，使充分包合后，冷藏预冻，在冷冻干燥机里冷冻干燥，即得白色粉末状马钱子碱-羟丙基-β-环糊精包合物，所述马钱子碱-HP-β-环糊精包合物中，马钱子碱与羟丙基-β-环糊精的重量比为1:4。

（2）取马钱子碱0.5份、豆磷脂100份与胆固醇10份溶解于无水乙醇中制成溶液Ⅰ，取步骤（1）所制马钱子碱-HP-β-环糊精包合物取10份溶解于水中制成溶液Ⅱ；

（3）将溶液Ⅰ加入到恒温磁力搅拌的溶液Ⅱ中混匀，置于500mL茄形瓶中,于60℃恒温水浴上减压蒸发除去有机溶剂,瓶壁上形成均匀透明的薄膜，取pH7.0磷酸盐缓冲液15mL加入烧瓶水化薄膜，震荡摇匀，形成乳白色脂质体混悬液Ⅲ，高压均质匀化，即得马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体。

本实施例制备的马钱子碱-HP-β-CD包合物脂质体检测结果为：

1、释放度试验：脂质体能维持24h释药，在2、4、8h取样点的累积释放量分别达到(14.7±0.6)%、(36.9±0.12)%、(61.6±0.7)%，24h释药可达(91.3±0.41)%。

2、溶血性试验：未出现红细胞凝集，无溶血作用。

3、稳定性试验：外观均匀，无沉淀，无分层，稳定性良好。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受所述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体，其特征在于，按以下重量比含有：马钱子碱0.5～2份、马钱子碱-羟丙基-β-环糊精包合物2～20份、豆磷脂20～200份、胆固醇5～20份。

2.根据权利要求1所述的马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体，按以下重量比含有：马钱子碱2份、马钱子碱-羟丙基-β-环糊精包合物4份、豆磷脂80份、胆固醇10份。

3.根据权利要求1所述的马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体，其特征在于，所述马钱子碱-羟丙基-β-环糊精包合物中，马钱子碱与羟丙基-β-环糊精的重量比为1:2～1:5。

4.根据权利要求1所述的马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体，其特征在于，所述马钱子碱-羟丙基-β-环糊精包合物中，所述马钱子碱与羟丙基-β-环糊精的重量比为1:4。

5.权利要求1～4任一项所述马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）制备马钱子碱-羟丙基-β-环糊精包合物；

（2）取马钱子碱、豆磷脂与胆固醇溶解于无水乙醇中制成溶液Ⅰ，将步骤（1）所制马钱子碱-羟丙基-β-环糊精包合物溶解于水中制成溶液Ⅱ；

（3）将溶液Ⅰ加入溶液Ⅱ中搅拌混匀，50～70℃恒温水浴上减压蒸发除去有机溶剂，形成均匀透明的薄膜，加入磷酸盐缓冲液水化薄膜，震荡摇匀，形成乳白色脂质体混悬液Ⅲ；将乳白色脂质体混悬液Ⅲ高压均质匀化，即得马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体。

6.根据权利要求5所述的马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述制备马钱子碱-羟丙基-β-环糊精包合物，具体为：

将羟丙基-β-环糊精溶于蒸馏水中，得到溶液Ⅳ，将马钱子碱溶于无水乙醇中，得到溶Ⅴ；在不断搅拌的条件下将溶液Ⅴ滴加到溶液Ⅳ中，在60～80℃恒温水浴下进行包合，滴加完后继续搅拌，使充分包合后，冷藏预冻，在冷冻干燥机里冷冻干燥，即得白色粉末状马钱子碱-羟丙基-β-环糊精包合物。

7.权利要求1～4任一项所述的马钱子碱-羟丙基-β-环糊精脂质体的应用，其特征在于，用于制备注射剂、微球、外用凝胶剂、乳膏剂型的抗炎镇痛药物。