CN103055305B - 一种注射用含细胞色素c药物组合物的冻干制剂、制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种注射用含细胞色素C药物组合物的冻干制剂，包括如下重量份的组分：细胞色素C75~300份；L-精氨酸30~60份；依地酸二钠2~5份；甘露醇150份。该冻干制剂选用依地酸二钠和L-精氨酸作为辅料，有利于提高细胞色素C的稳定性，药液配制过程选用甘露醇作为冻干赋形剂，选用磷酸或磷酸钠溶液作为pH值调节剂，可使产品质量更稳定；在甘露醇溶液中经活性炭处理后再加入细胞色素C，避免了细胞色素C因活性炭吸附而引起的含量降低的问题；本发明采用的制备方法，将冻干时间由23小时缩短至14~16小时，降低能耗30%，同时在不增加硬件投入的情况下，可提高产能30%左右，显著降低了生产成本。

Description

一种注射用含细胞色素C药物组合物的冻干制剂、制备方法

技术领域

本发明涉及一种注射用含细胞色素C药物组合物的冻干制剂及其制备方法，属于医药领域。

背景技术

细胞色素C药物组合物的冻干制剂，通用名称：注射用细胞色素C；英文名称：Cytochrome C for Injection。

本品是存在于细胞线粒体中的一种以铁卟啉为辅基的蛋白质，目前已能提纯分离。药用制剂是从动物心脏或酵母中分离出来的，细胞色素是呼吸链的一环。各种细胞色素按一定顺序排列组成细胞色素体系，其分子中的Fe³⁺在有关酶的作用下，能进行可逆的氧化还原反应，担负传递电子的作用，是细胞呼吸所不可少的。细胞色素C不能透过细胞膜，因此对正常人无作用，但当组织缺氧时，细胞膜通透性增高，外源性制剂即能进入细胞内，从而发挥其纠正细胞呼吸和物质代谢作用。

用于各种组织缺氧急救的辅助治疗，如一氧化碳中毒、催眠药中毒、氰化物中毒、新生儿窒息、严重休克期缺氧、脑血管意外、脑震荡后遗症、麻醉及肺部疾病引起的呼吸困难和各种心脏疾患引起的心肌缺氧的治疗。

细胞色素C药物组合物的冻干制剂为细胞色素C加适宜稳定剂和冻干保护剂的无菌冻干品,为粉红色冻干块状物。

细胞色素C冻干制剂现有生产流程为：药液配制-灌装半加塞-冷冻干燥、压塞-轧盖-目检包装。现有的生产工艺有：

（1）处方：主药细胞色素C；辅料包括葡萄糖、亚硫酸氢钠、无水亚硫酸钠、注射用水。

（2）溶液配制：称取处方量辅料溶解于总配制量50%的注射用水中，加处方量细胞色素C搅拌溶解,调节pH值过滤至澄明,用除菌滤器过滤后备用。

（3）冷冻干燥：23小时完成药液预冻、升华干燥、二次干燥、压塞过程。

但是上述工艺均存在下述问题：

（1）细胞色素C是一种以铁卟啉为辅基的蛋白质，为辅酶类生化药物，稳定性较差，处方中的辅料虽然对细胞色素C有一定的保护作用，但按照现有处方工艺细胞色素C在经历整个生产过程后，产品质量出现不稳定性，常出现澄清度、可见异物不合格问题。

（2）在冷冻干燥过程中冻干时间达到23小时，冻干时间越长细胞色素C处于非干燥状态时间越长，产品质量越不稳定，能耗越大，生产成本越高。改进冻干工艺、缩短冻干时间有利于提高产品质量和节能降耗。

（3）产品在贮存过程中，细胞色素C不稳定易引起含量、活力明显降低。

发明内容

本发明的目的是提供一种注射用含细胞色素C药物组合物的冻干制剂。

本发明另一目的是提供注射用含细胞色素C药物组合物的冻干制剂的制备方法。

为了实现本发明的目的，本发明提供一种注射用含细胞色素C药物组合物的冻干制剂，所述冻干制剂包括如下重量份的组分：细胞色素C75~300份；L-精氨酸30~60份；依地酸二钠2~5份；甘露醇150份。

优选组分为细胞色素C150份；L-精氨酸45份；依地酸二钠3份；甘露醇150份。

上述冻干制剂的制备方法，包括如下步骤：1）配制药液；2）冷冻干燥；所述冷冻干燥包括以下步骤：预冻、一次干燥、二次干燥。

所述预冻步骤包括：将冷凝器温度预降至-40℃以下，药液进箱后在0.5～1.5小时内将板层温度降至-35℃以下，保持低温状态2～3小时。

所述一次干燥步骤包括：开启真空泵，保持真空度20Pa以下，1小时升温至4～5℃，保温3～4小时，进行一次干燥。

所述二次干燥步骤包括：一次干燥后，1小时内将板层升温至14～16℃，真空度控制在10～20Pa，保温2小时，再升温1小时至37～39℃，保温3～4小时；在冻干过程中，检查板层温度、制品温度、冷凝器温度，冻干结束后，进行液压加塞。

所述冷冻干燥总时间为14~16小时。

所述步骤1)中，将L-精氨酸和依地酸二钠加入到经活性炭过滤的甘露醇溶液中，再与细胞色素C溶液混合，采用浓度为0.4～0.6mol/l的磷酸或磷酸钠溶液调节pH值6.0～7.5，过滤得到药液。

本发明具有如下技术效果：

（1）细胞色素C作为一种以铁卟啉为辅基的蛋白质，为辅酶类生化药物，稳定性较差，在本发明中，辅料选用依地酸二钠和L-精氨酸，有利于提高细胞色素C的稳定性，药液配制过程选用甘露醇作冻干赋形剂，既可使冻干成形，又可保证产品的质量。

（2）选用磷酸或磷酸钠溶液作为pH值调节剂，可使药液pH值与产品冻干后再复溶的药液pH值保持一致，从而使产品质量更稳定。

（3）在甘露醇溶液经活性炭处理后再加入细胞色素C，避免了细胞色素C因活性炭吸附而引起的含量降低问题。

（4）缩短冻干时间可使细胞色素C尽快脱离非干燥状态，在本发明中，将冻干时间由23小时缩短至14~16小时，从而使细胞色素C的稳定性进一步得到保证。

（5）由于缩短冻干时间，降低能耗达30%，同时在不增加硬件投入的情况下，可提高了生产产能30%左右，显著降低了生产成本。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

本发明的注射用含细胞色素C药物组合物的冻干制剂由如下成分制成：细胞色素C7.5g；L-精氨酸3g；依地酸二钠0.20g；甘露醇15g，注射用水加至1000ml。

其制备方法如下：

1）称取处方量的甘露醇，加入500ml的注射用水溶解，加2‰活性炭，煮沸，保温15分钟后，过滤脱炭，得溶液①。

2）将溶液①冷却至20℃以下，先后加入处方量的L-精氨酸和依地酸二钠，得溶液②。

3）取处方量的细胞色素C溶液，加注射用水补充至300毫升，得溶液③。

4）将溶液②、溶液③混合，再用冷注射用水补足体积至总量，调pH值6.7,经0.22μm孔径除菌滤器过滤,按每瓶1ml分装于2ml管制瓶中，管制瓶置冷冻干燥机制品室板层，待冷冻干燥。pH调节剂为5%磷酸溶液。

5）冷冻干燥工艺:

①预冻：首先将冷凝器温度预降至-42℃，产品进箱后在1小时内将板层温度快速降至-35℃以下，保持低温状态2小时。

②一次干燥：开启真空泵，保持真空度20Pa以下，1小时升温至5℃，保温3小时，进行一次干燥。

③二次干燥：制品一次干燥后，1小时将板层升温至15℃（真空度控制在10~20Pa）保温2小时，再升温1小时至38℃，保温3小时（冻干总时间14小时）。

④冻干过程中，检查板层温度、制品温度、冷凝器温度等，冻干结束后，进行液压加塞，轧盖。

包装：10瓶/盒×60盒/件

实施例2

本发明的注射用含细胞色素C药物组合物的冻干制剂由如下成分制成：细胞色素C15g；L-精氨酸4.5g；依地酸二钠0.3g；甘露醇15g，注射用水加至1000ml。

其制备方法如下：

1）称取处方量的甘露醇，加入500ml的注射用水溶解，加2‰活性炭，煮沸，保温15分钟后，过滤脱炭，得溶液①。

2）将溶液①冷却至20℃以下，先后加入处方量的L-精氨酸和依地酸二钠，得溶液②。

3）取处方量的细胞色素C溶液，加注射用水补充至300毫升，得溶液③。

4）将溶液②、溶液③混合，再用冷注射用水补足体积至总量，调pH值6.8,经0.22μm孔径除菌滤器过滤,按每瓶1ml分装于2ml管制瓶中，管制瓶置冷冻干燥机制品室板层，待冷冻干燥。pH调节剂为5%磷酸溶液。

5）冷冻干燥工艺:

①预冻：首先将冷凝器温度预降至-44℃，产品进箱后在1小时内将板层温度快速降至-35℃以下，保持低温状态2小时。

②一次干燥：开启真空泵，保持真空度20Pa以下，1小时升温至5℃，保温3小时，进行一次干燥。

③二次干燥：制品一次干燥后，1小时将板层升温至15℃（真空度控制在10~20Pa）保温2小时，再升温1小时至38℃，保温4小时（冻干总时间15小时）。

④冻干过程中，检查板层温度、制品温度、冷凝器温度等，冻干结束后，进行液压加塞，轧盖。

包装：10瓶/盒×60盒/件

实施例3

本发明的注射用含细胞色素C药物组合物的冻干制剂由如下成分制成：细胞色素C30g；L-精氨酸6g；依地酸二钠0.50g；甘露醇15g，注射用水加至1000ml。

其制备方法如下：

1）称取处方量的甘露醇，加入500ml的注射用水溶解，加2‰活性炭，煮沸，保温15分钟后，过滤脱炭，得溶液①。

2）将溶液①冷却至20℃以下，先后加入处方量的L-精氨酸和依地酸二钠，得溶液②。

3）取处方量的细胞色素C溶液，加注射用水补充至300毫升，得溶液③。

4）将溶液②、溶液③混合，再用冷注射用水补足体积至总量，调pH值6.9,经0.22μm孔径除菌滤器过滤,按每瓶1ml分装于2ml管制瓶中，管制瓶置冷冻干燥机制品室板层，待冷冻干燥。pH调节剂为5%磷酸钠溶液。

5）冷冻干燥工艺:

①预冻：首先将冷凝器温度预降至-45℃，产品进箱后在1小时内将板层温度快速降至-35℃以下，保持低温状态2小时。

②一次干燥：开启真空泵，保持真空度20Pa以下，1小时升温至5℃，保温4小时，进行一次干燥。

③二次干燥：制品一次干燥后，1小时将板层升温至15℃（真空度控制在10~20Pa）保温2小时，再升温1小时至38℃，保温4小时（冻干总时间15小时）。

④冻干过程中，检查板层温度、制品温度、冷凝器温度等，冻干结束后，进行液压加塞，轧盖。

包装：10瓶/盒×60盒/件

实验例

1、稳定性加速试验

将实施例1～3制成的细胞色素C药物组合物的冻干制剂分别于0、1、3、6个月检查pH值、澄清度、可见异物、活力、含量五个考察项目(参见表1)。

表1稳定性加速试验结果

由表1可知，6个月加速试验后，pH值、澄清度、可见异物、活力、含量五个考察项目的指标无明显变化，均符合注射用细胞色素C的国家药品标准（《中国药典》2010年版二部）中的规定。结果显示本发明中注射用细胞色素C药物组合物的冻干制剂稳定性较好。

2、含量稳定性分析

六个月稳定性加速试验后检测留样样品，各项指标均符合国家药品标准，第6个月末样品的活力变化分别为2.22%、2.31%、2.18%，平均为（2.24±0.067）%，RSD=2.99；含量变化分别为3.09%、2.94%、2.86%，平均为（2.96±0.11）%，RSD=3.71。进一步验证了生产工艺条件的可靠性。

3、产品全项检测结果

实施例1所得产品全项检测结果见表2（0月）；实施例2所得产品全项检测结果见表3（0月）；实施例3所得产品全项检测结果见表4（0月），结果显示三批产品均符合国家药品标准。

表2实施例1所得产品全项检测结果(0月)

表3实施例2所得产品全项检测结果(0月)

表4实施例3所得产品全项检测结果(0月)

六个月稳定性加速试验后检测实施例1-3留样样品，结果见表5、表6、表7。

表5实施例1所得产品全项检测结果(6月)

表6实施例2所得产品全项检测结果(6月)

表7实施例3所得产品全项检测结果(6月)

实验结果：实施例1-3中辅料选用依地酸二钠和L-精氨酸，有利于提高细胞色素C的稳定性，药液配制过程选用甘露醇作冻干赋形剂，既可使冻干成形，又可保证产品的质量。配药过程中，选用5%磷酸或磷酸钠溶液作为pH值调节剂，可使药液pH值与产品冻干后再复溶的药液pH值保持一致，从而使产品质量更稳定。在甘露醇溶液经活性炭处理后再加入细胞色素C，避免了细胞色素C因活性炭吸附而引起的含量降低问题。缩短冻干时间可使细胞色素C尽快脱离非干燥状态，在本发明中，将冻干时间由23小时缩短至14~16小时，从而使细胞色素C的稳定性进一步得到保证。由于缩短冻干时间，降低能耗达30%，同时在不增加硬件投入的情况下，可提高了生产产能30%左右，显著降低了生产成本。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (2)

1.一种注射用含细胞色素C药物组合物的冻干制剂，其特征在于，包括如下重量份的组分：细胞色素C150份；L-精氨酸45份；依地酸二钠3份；甘露醇150份。

2.制备权利要求1所述冻干制剂的方法，其特征在于，包括如下步骤：1）配制药液；2）冷冻干燥；所述冷冻干燥包括以下步骤：预冻、一次干燥、二次干燥；

所述步骤1)中，将L-精氨酸和依地酸二钠加入到经活性炭过滤的甘露醇溶液中，再与细胞色素C溶液混合，调节pH值，过滤得到药液；

所述预冻步骤包括：将冷凝器温度预降至-40℃以下，药液进箱后在0.5～1.5小时内将板层温度降至-35℃以下，保持低温状态2～3小时；

所述一次干燥步骤包括：开启真空泵，保持真空度20Pa以下，1小时升温至4～5℃，保温3～4小时，进行一次干燥；

所述二次干燥步骤包括：一次干燥后，1小时内将板层升温至14～16℃，真空度控制在10～20Pa，保温2小时，再升温1小时至37～39℃，保温3～4小时；在冻干过程中，检查板层温度、制品温度、冷凝器温度，冻干结束后，进行液压加塞；

所述冷冻干燥总时间为14～16小时；

所述pH值为6.0～7.5；

采用浓度为0.4～0.6mol/l的磷酸或磷酸钠溶液作为pH值调节剂。