CN103222957B - 一种马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体及其制备方法、应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体按以下重量比含有：马钱子碱0.5～2份、马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物10～20份、卵磷脂40～200份、胆固醇5～20份、卡波姆0.5～2份。本发明还公开了上述马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体的制备方法，先将马钱子碱经β-环糊精聚合物包合制备成包合物再制备脂质体。本发明将马钱子碱包封在β-环糊精聚合物的空腔及脂质体的双分子层中，可提高药物载药量，延长马钱子碱的消除半衰期，提高稳定性，实现包合物在淋巴系统的靶向性，减轻其对心脏及中枢的毒副作用，提高生物利用度。

Description

一种马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体及其制备方法、应用

技术领域

本发明涉及抗炎镇痛药物制备技术，特别涉及一种马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体及其制备方法、应用。

背景技术

马钱子碱为马钱科植物马钱子(Srtychnos nux-vomica L)或云南马钱(SPierriana A.W.Hill)的有效成分，具有免疫抑制、抗炎、镇痛、关节修复等作用，能对风湿性关节炎各病理环节作针对性治疗，是治疗类风湿性关节炎的有效药物。马钱子碱口服易致腹痛、腹泻，长期用药可损害肾小管上皮细胞，造成肾功能损害，并可兴奋中枢产生心脏及中枢副作用，同时其在体内代谢快，生物利用度低影响了马钱子碱在临床的应用推广。

β-环糊精聚合物是β-环糊精聚合而得的高分子聚合物，既保留β-环糊精包结、缓释、催化和识别的能力，又兼具高聚物良好的机械强度、稳定性和化学可调性，可弥补β-环糊精性能的不足。但是，由于β-环糊精聚合物与药物以物理方式结合，是动态平衡过程，其结合不牢靠，易在体内转移过程中提前解离释放而影响疗效，引起心脏、中枢副作用。而脂质体将药物包封于磷脂双分子层中可延长药物的消除半衰期，同时脂质体对淋巴系统具有被动靶向作用，可将药物靶向输送至淋巴治疗淋巴系统疾病。

发明内容

为了克服现有技术中马钱子碱在体内代谢快、血药浓度低、生物利用度低等缺点，本发明的目的在于提供一种马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体，提高了药物载药量，延长马钱子碱的消除半衰期，提高稳定性，减少包合物在体内转移过程的解离，并实现包合物在淋巴系统的靶向性，减轻其对心脏及中枢的毒副作用，提高生物利用度。

本发明的另一目的在于提供上述马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体的制备方法。

本发明的再一目的在于提供上述马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体的应用。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体，按以下重量比含有：马钱子碱0.5～2份、马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物10～20份、卵磷脂40～200份、胆固醇5～20份、卡波姆0.5～2份。

优选的，所述的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体，按以下重量比含有：马钱子碱1份、马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物10份、卵磷脂48份、胆固醇6份、卡波姆0.5份。

所述马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物由马钱子碱和β-环糊精聚合物制备而成，其质量比为1:2～1:5。

优选的，所述马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物中，马钱子碱与β-环糊精聚合物的质量比为1：3。

上述马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体的制备方法，包括以下步骤：

（1）制备马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物；

（2）取马钱子碱、磷脂与胆固醇溶解于三氯甲烷中制成溶液Ⅰ，将步骤（1）所制马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物溶解于水中制成溶液Ⅱ；

（3）将溶液Ⅰ加入到恒温磁力搅拌的溶液Ⅱ中混匀，于30～50℃恒温水浴上减压蒸发除去有机溶剂，形成均匀透明的薄膜，加入磷酸盐缓冲液水化薄膜，震荡摇匀，形成乳白色脂质体混悬液Ⅲ；

（4）将卡波姆用水溶胀，加至脂质体混悬液Ⅲ中，高压均质匀化，即得马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体。

步骤（1）所述制备马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物，具体为：

称取β-环糊精聚合物溶于蒸馏水中，得到溶液Ⅳ；将马钱子碱溶于无水乙醇，得到溶液Ⅴ，在不断搅拌的条件下将溶液Ⅴ滴加到溶液Ⅳ中，在30～50℃恒温水浴下进行包合，滴加完后继续搅拌，使充分包合后，冷藏预冻，在冷冻干燥机里冷冻干燥，即得白色粉末状马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物。

上述的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体的应用，用于制备注射剂、微球、外用凝胶剂、乳膏剂型的抗炎镇痛药物。

与现有技术相比，本发明具有以下优点和有益效果：

（1）本发明所制马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体能兼具环糊精聚合物和脂质体的优点，药物包裹在β-环糊精聚合物的空腔及脂质双分子层中，可提高药物包载量，增加药物在局部的药物浓度，马钱子碱经β-环糊精聚合物包合再形成脂质体，既可延长马钱子碱在局部的作用时间达到缓释目的，又弥补了环糊精与药物呈物理结合状态在体内易解离等缺点，使马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体具有淋巴靶向特征，可更好地作用于淋巴免疫系统发挥免疫抑制作用，提高药效。

（2）本发明的制备方法简单，包封率高，载药量大，工艺稳定、可行，易于工业化生产。所制备的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体可制备成其他各种剂型，有利于马钱子碱在临床的推广应用。

具体实施方式

下面结合实施例，对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1

本实施例的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体配方按以下重量比含有：马钱子碱4份、β-环糊精聚合物9份、卵磷脂48份、胆固醇6份、卡波姆0.5份。

本实施例的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体的制备包括以下步骤：

（1）马钱子碱β-环糊精聚合物包合物的制备：称取β-环糊精聚合物9份，溶于蒸馏水中，得到溶液Ⅳ；将3份马钱子碱以1：1的质量比溶于无水乙醇中，得到溶液Ⅴ；磁力搅拌器不断搅拌下将溶液Ⅴ滴加到溶液Ⅳ中，在45℃恒温水浴下进行包合，滴加完后继续搅拌2小时，使充分包合后，冷藏预冻，在冷冻干燥机里冷冻干燥，即得白色粉末状马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物，所述马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物中，马钱子碱与β-环糊精聚合物的重量比为1:3；

（2）取1份马钱子碱、48份卵磷脂与6份的胆固醇溶解于三氯甲烷中制成溶液Ⅰ，将步骤（1）所制马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物10份溶解于水中制成溶液Ⅱ；

（3）将溶液Ⅰ加入到恒温磁力搅拌的溶液Ⅱ中混匀，置于500mL茄形瓶中,于45℃恒温水浴上减压蒸发除去有机溶剂,瓶壁上形成均匀透明的薄膜，取pH7.0磷酸盐缓冲液10mL加入烧瓶水化薄膜，震荡摇匀，形成乳白色脂质体混悬液Ⅲ；

（4）将0.5g卡波姆用水溶胀，加至脂质体混悬液Ⅲ中高压均质匀化，即得马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体。

下面对本实施例的马钱子碱-β-环糊精脂质体进行以下测试：

1、释放度试验：分别精密称取2mg马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物及马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体放于透析袋中，两边扎紧，将透析袋置于预先加热至37℃的含30％的乙醇生理盐水，开动恒温（37±2）℃水浴循环和磁力搅拌器（100rpm·min^-1），在1、2、3、4、6、8、10、12h内从取出7mL接受液，同时补加相同体积释放液，测定马钱子碱含量，以马钱子碱累积释放量与时间进行线性回归。由释放结果可知，马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物脂质体能维持24h释药，在2、4、8h取样点的累积释放量分别达到(16.4±0.32)%、(42.3±0.15)%、(65.5±0.66)%，24h释药可达(98.35±0.88)%，而马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物在2、4、8h取样点的累积释放量则分别为(29.1±1.01)%、(56.7±0.92)%、(89.4±0.14)%，24h释药即达(99.15±0.01)%，马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体体外缓释作用优于马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物，说明本发明提供的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体可实现缓释、长效作用。

2、溶血性试验：取马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体用0.9%氯化钠溶液溶解，加入50%兔红细胞悬液，轻轻摇匀，放置于37℃生化培养箱保湿1h,观察有无溶血反应。结果表明，马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体没有溶血作用，未出现红细胞凝集，可用于静脉注射给药。

3、稳定性试验：取马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体，用台式离心机3000r/min离心15min后观察其外观，离心后未发现明显分层，其性质均匀稳定。另取样品置于4℃冰箱中冷藏24小时观察其外观，马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体无沉淀，无分层，外观均匀，表明所制的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体有较好的稳定性。

结论：通过以上实验证明本发明具有良好的体外释放性能，体外释药可维持24h，无溶血等不良反应，生物利用度高，安全性、稳定性好。

实施例2

本实施例的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体配方按以下重量比含有：马钱子碱4份、β-环糊精聚合物15份、卵磷脂120份、胆固醇10份、卡波姆1份。

本实施例的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体的制备包括以下步骤：

（1）马钱子碱β-环糊精聚合物包合物的制备：称取β-环糊精聚合物15份，溶于蒸馏水中，得到溶液Ⅳ；将3份马钱子碱以质量比1：1溶于无水乙醇中，得到溶液Ⅴ；磁力搅拌器不断搅拌下将溶液Ⅴ滴加到溶液Ⅳ中，在40℃恒温水浴下进行包合，滴加完后继续搅拌2小时，使充分包合后，冷藏预冻，在冷冻干燥机里冷冻干燥，即得白色粉末状马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物，所述马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物中，马钱子碱与β-环糊精聚合物的重量比为1:5。

（2）取1份马钱子碱、120份卵磷脂与10份的胆固醇溶解于三氯甲烷中制成溶液Ⅰ；将所制马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物12份溶解于水中制成溶液Ⅱ。

（3）将溶液Ⅰ加入到恒温磁力搅拌的溶液Ⅱ中混匀，置于500mL茄形瓶中,于30℃恒温水浴上减压蒸发除去有机溶剂,瓶壁上形成均匀透明的薄膜，取pH7.0磷酸盐缓冲液10mL加入烧瓶水化薄膜，震荡摇匀，形成乳白色脂质体混悬液Ⅲ；

（4）将1份卡波姆用水溶胀,加至脂质体混悬液Ⅲ中,高压均质匀化，即得马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体。

本实施例制备的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体检测结果为：

1、释放度试验：脂质体能维持24h释药，在2、4、8h取样点的累积释放量分别达到(13.4±0.16)%、(38.1±0.4)%、(71.7±0.36)%，24h释药达(99.1±0.14)%。

2、溶血性试验：未出现红细胞凝集，无溶血作用。

3、稳定性试验：外观均匀，无沉淀，无分层，稳定性良好。

实施例3

本实施例的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体配方按以下重量比含有：马钱子碱6份、β-环糊精聚合物16份、卵磷脂160份、胆固醇15份、卡波姆1.5份。

本实施例的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体的制备包括以下步骤：

（1）马钱子碱β-环糊精聚合物包合物的制备：称取β-环糊精聚合物16份，溶于蒸馏水中，得到溶液Ⅳ；将4份马钱子碱以质量比1：1溶于无水乙醇中，得到溶液Ⅴ；磁力搅拌器不断搅拌下将溶液Ⅴ滴加到溶液Ⅳ中，在35℃恒温水浴下进行包合，滴加完后继续搅拌2小时，使充分包合后，冷藏预冻，在冷冻干燥机里冷冻干燥，即得白色粉末状马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物，所述马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物中，马钱子碱与β-环糊精聚合物的重量比为1:4。

（2）取2份马钱子碱、160份卵磷脂与15份的胆固醇溶解于三氯甲烷中制成溶液Ⅰ；将所制马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物14份溶解于水中制成溶液Ⅱ。

（3）将溶液Ⅰ加入到恒温磁力搅拌的溶液Ⅱ中混匀，置于500mL茄形瓶中，于40℃恒温水浴上减压蒸发除去有机溶剂，瓶壁上形成均匀透明的薄膜，取pH7.0磷酸盐缓冲液10mL加入烧瓶水化薄膜，震荡摇匀，形成乳白色脂质体混悬液Ⅲ；

（4）将1.5份卡波姆用水溶胀,加至脂质体混悬液Ⅲ中，高压均质匀化，即得马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体。

本实施例制备的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体检测结果为：

1、释放度试验：脂质体能维持24h释药，在2、4、8h取样点的累积释放量分别达到(14.7±0.5)%、(40.5±0.24)%、(72.3±0.11)%，24h释药达(99.3±0.4)%。

2、溶血性试验：未出现红细胞凝集，无溶血作用。

3、稳定性试验：外观均匀，无沉淀，无分层，稳定性良好。

实施例4

本实施例的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体配方按以下重量比含有：马钱子碱7份、β-环糊精聚合物20份、卵磷脂80份、胆固醇8份、卡波姆2份。

本实施例的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体的制备包括以下步骤：

（1）马钱子碱β-环糊精聚合物包合物的制备：称取β-环糊精聚合物20份，溶于蒸馏水中，得到溶液Ⅳ；将5份马钱子碱以质量比1：1溶于无水乙醇中，得到溶液Ⅴ；磁力搅拌器不断搅拌下将溶液Ⅴ滴加到溶液Ⅳ中，在50℃恒温水浴下进行包合，滴加完后继续搅拌2小时，使充分包合后，冷藏预冻，在冷冻干燥机里冷冻干燥，即得白色粉末状马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物，所述马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物中，马钱子碱与β-环糊精聚合物的重量比为1:4。

（2）取2份马钱子碱、80份卵磷脂与8份的胆固醇溶解于三氯甲烷中制成溶液Ⅰ；将所制马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物20份溶解于水中制成溶液Ⅱ。

（3）将溶液Ⅰ加入到恒温磁力搅拌的溶液Ⅱ中混匀，置于500mL茄形瓶中,于50℃恒温水浴上减压蒸发除去有机溶剂，瓶壁上形成均匀透明的薄膜，取pH7.0磷酸盐缓冲液10mL加入烧瓶水化薄膜，震荡摇匀，形成乳白色脂质体混悬液Ⅲ；

（4）将2份卡波姆用水溶胀,加至脂质体混悬液Ⅲ中,高压均质匀化，即得马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体。

本实施例制备的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体检测结果为：

1、释放度试验：脂质体能维持24h释药，在2、4、8h取样点的累积释放量分别达到(16.9±0.87)%、(45.5±0.19)%、(73.5±0.72)%，24h释药达(99.6±0.04)%。

2、溶血性试验：未出现红细胞凝集，无溶血作用。

3、稳定性试验：外观均匀，无沉淀，无分层，稳定性良好。

实施例5

本实施例的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体配方按以下重量比含有：马钱子碱4.5份、β-环糊精聚合物8份、卵磷脂40份、胆固醇5份、卡波姆0.5份。

本实施例的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体的制备包括以下步骤：

（1）制备马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物：称取β-环糊精聚合物8份溶于蒸馏水中，得到溶液Ⅳ；将马钱子碱4份溶于无水乙醇，得到溶液Ⅴ，在不断搅拌的条件下将溶液Ⅴ滴加到溶液Ⅳ中，在30℃恒温水浴下进行包合，滴加完后继续搅拌，使充分包合后，冷藏预冻，在冷冻干燥机里冷冻干燥，即得白色粉末状马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物，所述马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物中，马钱子碱与β-环糊精聚合物的重量比为1:2。

（2）取马钱子碱0.5份、磷脂40份与胆固醇5份溶解于三氯甲烷中制成溶液Ⅰ，将步骤（1）所制马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物10份溶解于水中制成溶液Ⅱ；

（3）将溶液Ⅰ加入到恒温磁力搅拌的溶液Ⅱ中混匀，置于500mL茄形瓶中,于30℃恒温水浴上减压蒸发除去有机溶剂，瓶壁上形成均匀透明的薄膜，取pH7.0磷酸盐缓冲液10mL加入烧瓶水化薄膜，震荡摇匀，形成乳白色脂质体混悬液Ⅲ；

（4）将卡波姆0.5份用水溶胀,加至脂质体混悬液Ⅲ中，高压均质匀化，即得马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体。

本实施例制备的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体检测结果为：

1、释放度试验：脂质体能维持24h释药，在2、4、8h取样点的累积释放量分别达到(11.6±0.84)%、(36.5±0.41)%、(67.3±0.29)%，24h释药达(99.2±0.02)%。

2、溶血性试验：未出现红细胞凝集，无溶血作用

3、稳定性试验：外观均匀，无沉淀，无分层，稳定性良好。

实施例6

本实施例的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体配方按以下重量比含有：马钱子碱6份、β-环糊精聚合物20份、卵磷脂200份、胆固醇20份、卡波姆2份。

本实施例的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体的制备包括以下步骤：

（1）制备马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物：称取β-环糊精聚合物20份溶于蒸馏水中，得到溶液Ⅳ；将马钱子碱4份溶于无水乙醇，得到溶液Ⅴ，在不断搅拌的条件下将溶液Ⅴ滴加到溶液Ⅳ中，在45℃恒温水浴下进行包合，滴加完后继续搅拌，使充分包合后，冷藏预冻，在冷冻干燥机里冷冻干燥，即得白色粉末状马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物，所述马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物中，马钱子碱与β-环糊精聚合物的重量比为1:5。

（2）取马钱子碱2份、磷脂200份与胆固醇20份溶解于三氯甲烷中制成溶液Ⅰ，将步骤（1）所制马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物20份溶解于水中制成溶液Ⅱ；

（3）将溶液Ⅰ加入到恒温磁力搅拌的溶液Ⅱ中混匀，置于500mL茄形瓶中,于35℃恒温水浴上减压蒸发除去有机溶剂，瓶壁上形成均匀透明的薄膜，取pH7.0磷酸盐缓冲液10mL加入烧瓶水化薄膜，震荡摇匀，形成乳白色脂质体混悬液Ⅲ；

（4）将卡波姆2份用水溶胀，加至脂质体混悬液Ⅲ中,高压均质匀化，即得马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体。

本实施例制备的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体检测结果为：

1、释放度试验：脂质体能维持24h释药，在2、4、8h取样点的累积释放量分别达到(10.2±0.83)%、(37.1±0.29)%、(70.5±0.86)%，24h释药达(99.6±0.09)%。

2、溶血性试验：未出现红细胞凝集，无溶血作用

3、稳定性试验：外观均匀，无沉淀，无分层，稳定性良好。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受所述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体，其特征在于，按以下重量比含有：马钱子碱0.5～2份、马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物10～20份、卵磷脂40～200份、胆固醇5～20份、卡波姆0.5～2份。

2.根据权利要求1所述的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体，其特征在于，按以下重量比含有：马钱子碱1份、马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物10份、卵磷脂48份、胆固醇6份、卡波姆0.5份。

3.根据权利要求1所述的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体，其特征在于，所述马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物由马钱子碱和β-环糊精聚合物制备而成，其质量比为1:2～1:5。

4.根据权利要求1所述的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体，其特征在于，所述马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物中，马钱子碱与β-环糊精聚合物的质量比为1：3。

5.权利要求1～4任一项所述马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）制备马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物；

（2）取马钱子碱、磷脂与胆固醇溶解于三氯甲烷中制成溶液Ⅰ，将步骤（1）所制马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物溶解于水中制成溶液Ⅱ；

（3）将溶液Ⅰ加入到恒温磁力搅拌的溶液Ⅱ中混匀，于30～50℃恒温水浴上减压蒸发除去有机溶剂，形成均匀透明的薄膜，加入磷酸盐缓冲液水化薄膜，震荡摇匀，形成乳白色脂质体混悬液Ⅲ；

（4）将卡波姆用水溶胀，加至脂质体混悬液Ⅲ中，高压均质匀化，即得马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体。

6.根据权利要求5所述的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体的制备方法，步骤（1）所述制备马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物，具体为：

称取β-环糊精聚合物溶于蒸馏水中，得到溶液Ⅳ；将马钱子碱溶于无水乙醇，得到溶液Ⅴ，在不断搅拌的条件下将溶液Ⅴ滴加到溶液Ⅳ中，在30～50℃恒温水浴下进行包合，滴加完后继续搅拌，使充分包合后，冷藏预冻，在冷冻干燥机里冷冻干燥，即得白色粉末状马钱子碱-β-环糊精聚合物包合物。

7.权利要求1～4任一项所述的马钱子碱-β-环糊精聚合物脂质体的应用，其特征在于，用于制备注射剂、微球、外用凝胶剂、乳膏剂型的抗炎镇痛药物。