CN103180016A

CN103180016A - 包含泡桐素和/或泡桐属提取物的组合物及其用途

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Publication number: CN103180016A
Application number: CN2011800399444A
Authority: CN
Inventors: S·考尔; 黎忠仁; K·马哈茂迪; C·萨里奥; M·索斯霍
Original assignee: Johnson and Johnson Consumer Companies LLC
Current assignee: Johnson and Johnson Consumer Inc
Priority date: 2010-08-19
Filing date: 2011-08-17
Publication date: 2013-06-26
Anticipated expiration: 2031-08-17
Also published as: RU2571075C2; ES2573792T3; AU2011292069B2; KR20130100134A; WO2012024392A3; WO2012024392A2; WO2012024394A2; EP2605835A2; EP2605747A2; WO2012024403A2; EP2605835B1; AU2011292072A1; WO2012024399A2; RU2563996C2; WO2012024403A3; CA2808197A1; KR20130099060A; HK1186680A1; CA2808195A1; AU2011291988B2

Abstract

本发明提供了包含来自泡桐属某些物种的植物提取物的组合物、使用它们来增亮皮肤的方法、以及它们的其它用途。还提供了包含化合物泡桐素的组合物、使用它们来增亮皮肤的方法、以及它们的其它用途。

Description

包含泡桐素和/或泡桐属提取物的组合物及其用途

技术领域

本发明涉及包含用于皮肤的泡桐素和/或植物提取物的组合物。更具体地，本发明涉及包含用于皮肤上的多种用途的泡桐素的组合物和/或包含泡桐属的特定植物的提取物，所述泡桐素来自多种任意天然来源或合成来源。

背景技术

泡桐属(Paulownia)是亚洲原产的一个植物属，其已逐渐传播至欧洲和美国。来自泡桐属的物种通常视作观赏树木，其木材具有广泛的工艺和生态应用。例如，在日本、中国和韩国，此类树的木材普遍用于制作弦乐器的音板。其还普遍被木商用于制作家具。泡桐属树木具有生态用途并且被视为植物修复体(phyto-remediator)，即，它们可通过其脉管系统处理工业污染物以帮助清理和开垦土地。

在日本，泡桐属被称作日本泡桐（kiri），其特指一个物种，毛泡桐(Paulownia tomentosa)，又称作“公主树(Princess Tree)”。其它常用的名称有“皇后树(empress tree)”、“毛地黄树(Foxglove Tree)”、“皇家泡桐(Royal Paulownia)”、“泡桐(Pao Tong)”（在中国）和“Odong-Namoo”（在韩国）。所述学名为具有在不同的文献中报道的许多同义词即“锈毛泡桐”、“兴山桐”和“毛泡桐”的“泡桐Paulownia tomentosa”。泡桐属于“泡桐科”或有时指“玄参科”。美国农业部（plants.USDA.gov）植物数据库以唯一的符号“PATO2”确定毛泡桐，其中泡桐和锈毛泡桐作为同义词名称。

毛泡桐的花油受到很好的研究并且据发现其与其它物种相比更富芳香。毛泡桐多种部位的提取物与大量的生物活性相关联，例如来自花提取物的抗癌成分、来自非特定提取物的驱肠虫剂活性、来自果实和花提取物的抗菌活性、来自花提取物的抗氧化活性以及来自茎皮的抗病毒特性。描述了毛泡桐的叶提取物的毛发生长和毛发促进特性。

白花泡桐也属于“泡桐科”。白花泡桐的花、叶、树皮、根和果实具有医学价值并且据报道用于治疗感染、炎症和外伤，用于抗肿瘤软膏。树皮据报道用于治疗骨科疾病、痔疮和脚臭，并且果实的外果皮据报道有抗微生物活性。树叶据报道用于化解化脓性感染以及促进毛发生长。

泡桐素（又称为异泡桐素或新泡桐素）是分离自多种植物地上部分的木酚素。该化学结构可如下给出：

本发明涉及申请人的发现，其发现泡桐属木材（更具体地为毛泡桐、白花泡桐（Paulownia fortunei）、兰考泡桐(Paulownia elongata)和台湾泡桐(Paulownia kawakamii)的木材）在组合物中对于皮肤应用是有益处的，并且其趋于表现出显著的和出乎意料的亮肤作用和其它特性。本发明还涉及申请人的发现，其发现所述化合物泡桐素表现出显著的和出乎意料的亮肤作用和其它特性。

发明内容

在一个方面，本发明涉及包含载体和提取物的组合物，所述提取物选自白花泡桐木材提取物、兰考泡桐木材提取物、台湾泡桐木材提取物、以及它们中两种或更多种提取物的组合。

在另一方面，本发明涉及增亮皮肤的方法，其包含对需要亮肤处理的皮肤施用提取物的步骤，所述提取物选自白花泡桐木材提取物、兰考泡桐木材提取物、台湾泡桐木材提取物、及其两种或更多种提取物的组合。

在另一个方面，本发明涉及增亮皮肤的方法，其包含对需要亮肤处理的皮肤施用组合物的步骤，所述组合物包含泡桐素和载体。

具体实施方式

如上指出，申请人已经出乎意料地发现，泡桐素和/或毛泡桐、白花泡桐、兰考泡桐和台湾泡桐的木材提取物可用于组合物（优选地是护肤组合物）以及用于包括但不限于亮肤作用的方法。

如本文所用，术语“增亮皮肤”通常指使肤色、皮肤颜色和/或皮肤色度变淡、变亮、变白和/或均匀，和/或指萎黄，和/或指色素斑痕和/或病损（包括但不限于色素斑、黑色素斑、老年斑、日晒斑、衰老性着色斑、雀斑、单纯性雀斑痣、色素性日光性角化病、脂溢性角化病、黑斑病、痤疮斑痕、发炎后色素沉着过度、着色斑、雀斑(ephelides)、它们中两种或更多种的组合等等）的淡化和/或褪色。在某些实施例中，“增亮皮肤”还指增加的皮肤光亮度、光泽度、半透明度和/或发光和/或获得更光亮、光泽、半透明的或发光的肤色外观或较低的黄色或萎黄色肤色。在某些优选的实施例中，“增亮皮肤”指使肤色增亮和均匀，增加皮肤光亮度和/或淡化老年斑。

如本文所用，术语“需要亮肤处理的皮肤”一般涉及表现出一个或多个性能的皮肤，所述性能选自：具有测量的个体类型角（ITA）值低于41的皮肤，如以引用方式并入本文，并且进一步描述于下文的，按照2007年公布的COLIPA GUIDELINE：GUIDELINE FOR THE COLORIMETRICDETERMINATION OF SKIN COLOUR TYPING AND PREDICTION OFTHE MINIMAL ERYTHEMAL DOSE(MED)WITHOUT UV EXPOSURE所确定的，变暗和/或灰黄色的皮肤，包括被紫外线变暗的皮肤，具有不均匀的皮肤色调的皮肤，或具有一个或多个色素沉着痕迹和/或损伤的皮肤，包括但不限于色素斑点、黑素斑点、老年斑、雀斑、老年性着色斑、雀斑、雀斑样痣、色素性光化性角化病、脂溢性角化病、黄黑斑、暗疮印、发炎后色素沉着过度、小痣、雀斑、它们中两种或更多种的组合等等。在COLIPA指南中，皮肤颜色被定义为ITA值的函数：非常浅色的皮肤>55；浅色的皮肤41-55，中等28-41，以及棕褐色皮肤<28。在某些优选的实施例中，“需要增亮的皮肤”是指皮肤的ITA值低于41，例如约40或更低，约35或更低，约30或更低，或更优选约28或更低的个体。在某些其它优选的实施例中，本发明涉及用于选自萎黄和/或暗化皮肤的需要亮肤处理的皮肤上的组合物和方法。在某些其它优选的实施例中，本发明涉及用于需要进行选自老年斑、雀斑、痤疮后留下的斑痕以及它们中两种或更多种的组合的亮肤处理的皮肤上的组合物和方法。

如本文所用，“需要改善老化迹象的皮肤”是指但不限于松垂、松弛、松散、粗糙、有皱纹、变薄和不平的皮肤。改善老化迹象是指改善皮肤紧实度、改善皮肤肌理、改善皮肤上皱纹的出现、改善皮肤色调或治疗皮肤中的外部侵害。

如本文所用，“改善皮肤的紧实度”是指增强皮肤的紧实度或弹性，预防皮肤紧实度或弹性损失或者预防或治疗松垂、松散和松弛的皮肤。皮肤的紧实度或弹性可通过使用皮肤弹性测试仪(cutometer）测量。参见Handbook of Non-Invasive Methods and the Skin,J.Serup，G.Jemec&G.Grove，第66.1章（2006）。皮肤弹性或紧实度的损失可能是多种因素造成的，包括但不限于老化、环境损害或对皮肤施用化妆品的结果。

如本文所用，“改善皮肤的肌理”是指使皮肤表面平滑以除去皮肤表面上的隆起块或裂隙。

如本文所用，“改善皮肤上皱纹的出现”是指预防、延缓、停止或逆转皮肤上皱纹和细纹形成的过程。

如本文所用，“治疗皮肤上的外部侵害”是指减少或预防皮肤中外部侵害带来的损害。外部侵害的实例包括但不限于使用清洁剂（例如含有表面活性剂的局部用清洁剂）、化妆品、剃须以及环境损害如来自紫外线光照（例如来自日光的阳光损害或来自非天然来源如紫外线灯和太阳模拟器的损害）、臭氧、废气、污染、氯和含氯化合物和抽烟带来对皮肤的损害。外部侵害对皮肤的影响包括但不限于对脂质、碳水化合物、肽、蛋白质、核酸和维生素的氧化和/或亚硝化损伤和对这些物质的修饰。外部侵害对皮肤的影响还包括但不限于细胞活力的损失、细胞功能的损失或改变以及基因和/或蛋白质表达的变化。

如本文所用，“改善肤色”是指增亮皮肤外观（如，增亮色素沉着标记或病损、减轻皮肤萎黄、和/或匀化皮肤的颜色）。

如本文所用，“需要减轻皮肤炎症的皮肤”是指表现出发红或红斑、浮肿或对外部因素具有反应性或过敏性的皮肤。外部因素包括但不限于太阳光线（紫外线、可见光、IR）、微生物、大气污染物（例如臭氧）、废气污染物、氯和产生氯的化合物、抽烟烟雾、低温、热、肥皂和洗涤剂、化妆品、珠宝。可通过使用本发明的组合物被处理或预防的炎性病症和相关的病症包括但不限于以下：关节炎、支气管炎、接触性皮炎、特应性皮炎、牛皮癣、皮脂溢性皮炎、漆藤皮炎和毒漆藤皮炎、湿疹、过敏性皮炎、多形性日光疹、炎性皮肤病、毛囊炎、秃头症、接触毒漆引起的皮疹、昆虫咬伤、粉刺炎症、外在因素引起的刺激，包括但不限于化学药品、外伤、污染物（如香烟烟雾）和日照，由炎症造成的次要病症，包括但不限于干燥症、角化过渡、瘙痒症、发炎后色素沉着过度、疤痕等等。优选地，可使用本发明的方法治疗或预防的炎性疾病和相关病症为关节炎、炎性皮肤病、接触性皮炎、过敏性皮炎、特应性皮炎、多形性日光疹、刺激（包括因外源性因素引起的红斑）、粉刺发炎、牛皮癣、皮脂溢性皮炎、湿疹、毒藤疹、毒漆藤疹、毒漆树疹、虫咬发炎、毛囊炎、脱发、以及次级病症等等。

如本文所用，除非另外指明，否则组合物中所有的成分百分比均为活性/固体成分的重量百分比（按组合物的总重量计）。

如本文所用，“基本上不含”某一成分的组合物是指含有约2重量%或更少的该成分的组合物（按该组合物的总重量计）。优选地，基本上不含某一成分的组合物含有约1重量%或更少，更优选约0.5重量%或更少，更优选约0.1重量%或更少，更优选约0.05重量%或更少，更优选约0.01重量%或更少的该成分（按该组合物的总重量计）。在某些更优选的实施例中，基本上不含某一成分的组合物不含该成分，也就是说组合物中完全不含该成分。

如本文所用，“美容上/皮肤病学可接受的”是指该术语描述的成分适于与组织（如皮肤或毛发）接触使用而不会引起不适当的毒性、不相容性、不稳定性、剌激性、变应性反应等。

泡桐属（例如毛泡桐、白花泡桐、兰考泡桐和/或台湾泡桐）木材的任何合适的提取物均可用于本发明。在某些优选的实施例中，所述提取物是白花泡桐、兰考泡桐和/或台湾泡桐的木材提取物。在某些尤其优选的实施例中，所述提取物是毛泡桐的木材提取物。一般而言，泡桐属树木的木材包括来自树干、树枝或这二者的组合的木材。泡桐属木材的合适提取物可来源于木屑、木粉和/或小切屑等等。

泡桐属树木的合适提取物可用常规的方法获得，包括但不限于：通过研磨、浸渍、压榨、挤压、捣碎、离心，和/或诸如冷渗漉、搅拌/蒸馏、微波辅助萃取、超声处理、使用或不使用极性修饰剂的超临界/亚临界CO₂压缩气体提取、加压溶剂提取、加速溶剂提取、加压或常压热水提取、表面活性剂辅助的加压热水提取、油提取、膜提取、索氏提取、例如在颁给Integrated Botanical Technologies,LLC的美国专利7442391、7473435和7537791中公开（以引用的方式并入本文）的金手指蒸馏/提取和/或工艺等等之类的工艺，或通过诸如溶剂萃取等之类的其它方法从木材直接提取物质。所述提取物可以是或制备自某一级分的物质或是一种或多种级分的物质的组合，其通过（诸如）本文所述的任意方法从泡桐属木材中提取。包括极性溶剂、非极性溶剂或它们中的两种或更多种的组合在内的多种溶剂中的任一种可用于包括溶剂萃取的方法中。合适的极性溶剂包括：极性无机溶剂如水等等，极性有机溶剂如一元醇和相应的有机酸（例如包括甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等等在内的C_1-C₈醇和包括乙酸、甲酸、丙酸等等在内的有机酸）、多元醇和二醇（包括C₁-C₈多元醇/二醇等等）以及它们中两种或更多种的组合。合适的非极性溶剂包括非极性有机溶剂如烷烃（包括C₁-C₈烷烃）、环烷烃（包括C₁-C₈烷烃）、烷基醚（包括C₁-C₈烷基醚）、石油醚、酮（包括C₁-C₈酮）、二氯甲烷、乙酸乙酯、二甲苯、甲苯、氯仿、植物油、矿物油等等。在另一个实施例中，可通过上述非极性溶剂或者使用或不使用极性修饰剂如（C₁-C₈醇、水、C₁-C₈多元醇/二醇或C₁-C₈有机酸）的超临界流体提取而获得提取物。在某些优选的实施例中，本发明的提取物是通过将木材研磨成粉并用20℃下介电常数值在1至100之间的极性溶剂提取，优选用20℃下介电常数值在4至60之间的极性溶剂提取，更优选用20℃下介电常数值在4和50之间的极性溶剂提取，还更优选用20℃下介电常数在4至40之间的极性溶剂提取而制备的极性提取物。优选的极性溶剂的实例包括20℃下介电常数值在1至100之间，优选在4至60之间，更优选在5至40之间的C₁-C₈醇、C₁-C₈多元醇/二醇、C₁-C₈有机酸、水、以及它们中两种或更多种的组合，包括但不限于如“DielectricConstants of Some Organic Solvent-W ater Mixtures at V arious Temperatures,”Akerlof，Gosta；JASC，第54卷，第11期（1932年11月），第4125-4139页（以引用的方式并入本文）中所述的具有所需的介电常数值的那些溶剂及溶剂的组合。在某些优选的实施例中，用一种或多种C₁-C₈一元醇、C₁-C₈多元醇、C₁-C₈二醇、以及它们中两种或更多种的组合提取极性提取物。在某些更优选的实施例中，用一种或多种C₁-C₄一元醇、C₁-C₄多元醇和/或C₁-C₄二醇提取提取物。在某些更优选的实施例中，在存在或不存在水的情况下用包含甲醇、乙醇或它们的组合的溶剂制备提取物。在更优选的实施例中，用无水醇或试剂级变性醇和干日本泡桐木材粉，在室温下搅拌3天来制备提取物。在某些优选的实施例中，可通过木炭（也称为活性炭）进一步精制提取物。

在某些实施例中，可将泡桐属木材提取物制备为基本上不含某些物质。在一个实施例中，所述提取物基本上不含乌索酸、β-谷甾醇或这二者。

在某些实施例中，所述组合物可另外包含来自泡桐属树木的其它部分（例如树皮、叶、根、果实、种子或花中的一者或多者）的提取物。在其它实施例中，所述组合物基本上不含来自泡桐属树木的其它非木质部分的提取物。

在某些实施例中，所述组合物可包含来自泡桐属（诸如毛泡桐、白花泡桐兰考泡桐和/或台湾泡桐）植物的细胞培养物的提取物。

本发明的组合物中可使用任意适量的泡桐属木材提取物。优选地，该组合物包含安全且有效量的泡桐属木材提取物。如本文所用，“安全且有效量”是指多至足以产生预期效果但少至足以避免严重副作用（包括毒性等）的提取物或组合物的量。对于包括所述组合物的增亮皮肤用途的实施例而言，“皮肤增亮有效量”是指在作为增亮皮肤测试(ΔL)的皮肤表皮等同物模型中有效达到高于零的ΔL值的提取物的量，如下文所述。在某些优选的实施例中，增亮皮肤有效量为有效达到约1或更高的ΔL的量。

对于本发明中涉及使用组合物来改善皮肤老化迹象的实施例而言，“用于改善老化迹象的有效量”是指提供高于零的对MMP-1或MMP-9生成的抑制百分比的量，所述抑制百分比是根据下文实例11对紫外线诱导的MMP诱导的抑制的方法程序测得的。在某些优选的实施例中，用于改善老化迹象的有效量为提供约10%或更高对MMP-1或MMP-9生成的抑制百分比的量，所述抑制百分比是根据下文实例11对紫外线诱导的MMP诱导中的抑制的方法程序测得的。

对于本发明中涉及使用组合物来减轻发炎的实施例而言，“用于减轻发炎的有效量”是指提供高于零的皮肤发炎(IL-8)抑制百分比的量，所述皮肤发炎(IL-8)抑制百分比是根据下文实例7对紫外线诱导的促炎介质释放对重建表皮的抗炎效果的针对IL-8的方法程序测得的。在某些优选的实施例中，用于改善老化迹象的有效量为提供约10%或更高的皮肤发炎(IL-8)抑制百分比的量，所述皮肤发炎(IL-8)抑制百分比是根据下文实例7对紫外线诱导的促炎介质的释放对重建表皮的抗炎效果的针对IL-8的方法程序测得的。

在某些优选的实施例中，所述组合物包含大于零至约20%的泡桐属木材提取物。在某些其它优选的实施例中，所述组合物包含约0.0001至约20%、约0.001至约10%、约0.01至约5%、约0.1至约5%或约0.2至约2%的泡桐属木材提取物。在某些其它优选的实施例中，所述组合物包含约大于零至约1%、约0.0001至约1%、约0.001至约1%或约0.01至约1%的泡桐属木材提取物。在某些其它优选的实施例中，所述组合物包含约1至约5%，优选约2至约5%的泡桐属木材提取物。

任何合适的载体均可用于本发明的组合物。优选地，对于护肤组合物，该载体为美容上可接受的载体。正如本领域的技术人员将会认识到，美容上可接受的载体包括适于与身体尤其是皮肤接触以美白皮肤而无不适当的毒性、不相容性、不稳定性、刺激性、变应性反应等性质的载体。安全且有效量的载体占组合物的约50%至约99.999%，优选约80%至约99.9%，更优选约99.9%至约95%，最优选约99.8%至约98%。所述载体可呈多种形式。例如，包括但不限于水包油、油包水、水包油包水和硅氧烷包水包油乳状液的乳状液载体均可用于本文。这些乳状液可涵盖一系列的粘度，例如从约100厘泊至约200,000厘泊。合适的美容上可接受的载体的实例包括美容上可接受的适于化妆品溶液、悬浮液、洗剂、霜膏、精华素、精华液、凝胶、调色剂、棒剂、喷剂、油膏剂、洗液和条皂、洗发剂、护发剂、糊剂、泡沫、摩丝、粉末、剃须膏、擦拭物、贴片、带、强力贴片、微针贴片、绷带、水凝胶、成膜产品、面膜和皮肤贴膜、粉底、液滴等的溶剂和物质。这些产品类型可包含多种美容上可接受的载体，包括但不限于溶液、悬浮液、乳状液如微乳和纳米乳、凝胶、固体、脂质体、其它包封技术等。以下是此类载体的非限制性实例。其它的载体可由本领域普通技术人员配制。

在一个实施例中，所述载体包含水。在另一个实施例中，所述载体还可包含一种或多种含水溶剂或有机溶剂。有机溶剂的实例包括但不限于：二甲基异山梨醇、肉豆蔻酸异丙酯、阳离子、阴离子和非离子天然表面活性剂、植物油、矿物油、蜡、树胶、合成和天然胶凝剂、链烷醇、二醇和多元醇。二元醇的实例包括但不限于甘油、丙二醇、丁二醇、戊二醇、己二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、二甘醇、三甘醇、辛二醇、甘油、丁二醇和己三醇以及它们的共聚物或混合物。链烷醇的实例包括但不限于那些具有约2个碳原子至约12个碳原子（例如，约2个碳原子至约4个碳原子）的链烷醇，如异丙醇和乙醇。多元醇的实例包括但不限于那些具有约2个碳原子至约15个碳原子（例如，约2个碳原子至约10个碳原子）的多元醇，如丙二醇。按载体的总重量计，载体中有机溶剂的含量可为约1%至约99.99%（例如，约20%至约50%）。按载体的总重量计，载体（使用前）中水的含量可为约5%至约95%（例如，约50%至约90%）。溶液可包含任何合适量溶剂，包括约40至约99.99%。某些优选的溶液包含约50%至约99.9%、约60%至约99%、约70%至约99%、约80%至约99%或约90%至99%。

洗剂可以由此类溶液制成。除了溶剂外，洗剂通常含有至少一种润肤剂。洗剂可包含约1%至约20%（例如，约5%至约10%）的一种或多种润肤剂和约50%至约90%（例如，约60%至约80%）的水。

可由溶液配制的另一种产品是霜剂。霜剂通常包含约5%至约50%（例如，约10%至约20%）的一种或多种润肤剂和约45%至约85%（例如，约50%至约75%）的水分。

还可以由溶液配制的另一种产品是油膏剂。油膏剂可含有动物油、植物油或合成油或半固态烃的简单基料。膏剂可包含约2%至约10%的一种或多种润肤剂和约0.1%至约2%的一种或多种增稠剂。

可用于本发明的组合物还能配制成乳状液。如果载体是乳状液，则约1%至约10%（例如，约2%至约5%）的载体含有乳化剂。乳化剂可为非离子、阴离子或阳离子的。

洗剂和软膏可配制成乳状液。通常此类乳液包含0.5%至约5%的乳化剂，然而此类霜膏通常将包含约1%至约20%（如约5%至约10%）的润肤剂；约20%至约80%（如30%至约70%）的水；和约1%至约10%（如约2%至约5%）的乳化剂。

水包油型和油包水型单相乳状液护肤制剂（例如洗剂和霜膏）是本领域所熟知的并且可用于本主题发明。多相乳状液组合物（例如水包油包水型或油包水包油型）也可用于本主题发明。通常，此类单相乳状液或多相乳状液含有水分、润肤剂和乳化剂作为其基本成分。

本发明的组合物还可配制成凝胶（例如，使用合适的一种或多种胶凝剂制成的含水醇、醇/水或油凝胶）。用于水性凝胶和/或醇类凝胶的适当胶凝剂包括但不限于天然树胶、丙烯酸和丙烯酸酯聚合物和共聚物以及纤维素衍生物（例如羟甲基纤维素和羟丙基纤维素）。用于油（例如矿物油）的适当胶凝剂包括但不限于氢化丁烯/乙烯/苯乙烯共聚物和氢化乙烯/丙烯/苯乙烯共聚物。此类凝胶通常包含介于约0.1重量%和5重量%之间的此类胶凝剂。

本发明的组合物也可配制成固体制剂（如，蜡基棒剂、条皂组合物、粉剂或擦拭物）。本发明的组合物还可与固体、半固体或可溶解的基材（如，擦拭物、面膜、垫、手套或带）结合。

本发明的组合物还可配制成为用于口腔的制剂，诸如牙膏、牙胶、漂洗溶液、溶液、贴剂，等等。所述肿瘤还可经过配制以用于眼部，诸如作为滴眼液或洗眼液使用的溶液、乳液、悬液，等等，或经过配制以用于阴道粘膜，诸如通过凝胶、润滑剂等使用。

本发明的组合物还可包含多种附加的美容活性剂的任何一种。适宜的附加活性剂的实例包括：附加的亮肤剂、深色剂、附加的抗老化剂、弹性蛋白原促进剂、胶原促进剂、抗痤疮剂、控油光剂、抗微生物剂如抗酵母剂、抗真菌剂和抗菌剂、抗炎剂、抗寄生虫剂、外用止痛剂、防晒剂、光照保护剂、抗氧化剂、角质层分离剂、洗涤剂/表面活性剂、保湿剂、营养物质、维生素、能量增强剂、止汗剂、收敛剂、除臭剂、脱毛剂、毛发生长促进剂、毛发生长延缓剂、固化剂、补水剂、增效剂、抗硬结剂、皮肤调理剂、抗蜂窝炎剂、氟化物、牙齿美白剂、抗牙斑剂，以及牙斑助溶剂、气味控制剂（如气味掩蔽剂）或pH调节剂等。各种合适的附加美容上可接受的活性物质的实例包括羟基酸、过氧化苯甲酰、D-泛醇、紫外线过滤剂，例如但不限于阿伏苯宗(Parsol1789)、苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠(Neo Heliopan AP)、二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸己酯(Uvinul A Plus)、依莰舒(Mexoryl SX)、氨茴酸甲酯、4-氨基苯甲酸(PABA)、西诺沙酯、乙基己基三嗪酮(Uvinul T150)、胡莫柳酯、4-甲基亚苄基樟脑(Parsol5000)、甲氧基肉桂酸辛酯(Octinoxate)、水杨酸辛酯(Octisalate)、二甲氨苯酸辛酯(Escalol507)、苯基苯并咪唑磺酸(Ensulizole)、聚硅氧烷-15(Parsol SLX)、水杨酸三乙醇胺、双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪(Tinosorb S)、二苯酮1–12、二羟苯宗、甲酚曲唑三烷氧烷(Mexoryl XL)、二乙基己基丁酰胺基三嗪酮(Uvasorb HEB)、奥克立林、氧苯酮(Eusolex4360)、舒利苯酮、亚甲基二苯并三唑四甲基丁酚(Tinosorb M)、二氧化钛、氧化锌、类胡萝卜素、自由基清除剂、自旋捕捉剂、类视色素和类视色素前体（如视黄醇、视黄酸和视黄基棕榈酸酯）、神经酰胺、多不饱和脂肪酸、必需脂肪酸、酶、酶抑制剂、矿物质、激素（如雌激素）、类固醇（如皮质醇、2-二甲氨基乙醇）、铜盐（如氯化铜）、含铜肽（如Cu:Gly-His-Lys）、辅酶Q10、氨基酸（如脯氨酸）、维生素、乳糖酸、乙酰辅酶A、烟酸、核黄素、硫安素、核糖、电子转移体（如NADH和FADH2），以及其它植物提取物，如燕麦、芦荟、甘菊、大豆、香菇提取物，以及它们的衍生物和混合物。

在某些优选的实施例中，本发明的组合物为包含泡桐属木材提取物及至少一种附加的亮肤活性剂的护肤组合物。合适的附加亮肤活性剂的实例包括但不限于酪氨酸酶抑制剂、黑素降解剂、黑素小体转移抑制剂（包括PAR-2拮抗剂）、剥脱剂、防晒剂、类视色素、抗氧化剂、氨甲环酸、盐酸氨甲环酸十六酯、皮肤漂白剂、亚油酸、亚麻酸、油酸、腺苷单磷酸二钠盐、甘菊提取物、尿囊素、遮光剂、滑石和二氧化硅、锌盐等，以及描述于Solano等，Pigment Cell Res.19(550-571)和Ando等，Int J Mol Sci11(2566-2575)中的其它药剂。

合适的酪氨酸酶抑制剂的实例包括但不限于维生素C及其衍生物、维生素E及其衍生物、曲酸、熊果苷、间苯二酚、对苯二酚、黄酮（如甘草总黄酮、甘草根提取物、桑树根提取物、菊叶薯蓣根提取物、虎耳草提取物等）、鞣花酸、水杨酸盐和衍生物、葡糖胺和衍生物、富勒烯、扁柏酚、脂羟基酸(Dioic acid)、乙酰氨基葡萄糖、5,5’-二丙基-联苯-2,2’-二醇(厚朴木酚素)、4-(4-羟基苯基)-2-丁醇(4-HPB)，以及它们中两种或更多种的组合等。维生素C衍生物的实例包括但不限于抗坏血酸和盐、抗坏血酸-2-葡糖苷、维生素C磷酸酯钠、维生素C磷酸酯镁，以及富含维生素C的天然提取物。维生素E衍生物的实例包括但不限于α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-生育三烯酚、β-生育三烯酚、γ-生育三烯酚、δ-生育三烯酚以及它们的混合物、生育酚乙酸酯、生育酚磷酸酯以及富含维生素E衍生物的天然提取物。间苯二酚衍生物的实例包括但不限于间苯二酚、4-取代的间苯二酚如4-烷基间苯二酚诸如4-正丁基间苯二酚(rucinol)、4-己基间苯二酚（(Synovea HR,Sytheon)）、苯乙基间苯二酚（Symwhite,Symrise）、1-(2,4-二羟基苯基)-3-(2,4-二甲氧基-3-甲基苯基)-丙烷（nivitol,Unigen）等，以及富含间苯二酚的天然提取物。水杨酸盐的实例包括但不限于4-甲氧基水杨酸钾、水杨酸、乙酰水杨酸、4-甲氧基水杨酸以及它们的盐。在某些优选的实施例中，酪氨酸酶抑制剂包括4-取代的间苯二酚、维生素C衍生物或维生素E衍生物。在更优选的实施例中，酪氨酸酶抑制剂包括苯乙基间苯二酚、4-己基间苯二酚或抗坏血酸-2-葡糖苷。

合适的黑素降解剂的实例包括但不限于过氧化物和酶，如过氧化物酶和木素酶。在某些优选的实施例中，黑素抑制剂包括过氧化物或木素酶。

合适的黑素体转移抑制剂的实例包括PAR-2拮抗剂如大豆胰蛋白酶抑制剂或Bowman-Birk抑制剂、维生素B3和衍生物如烟酰胺、大豆精华、全大豆、大豆提取物。在某些优选的实施例中，黑素体转移抑制剂包括大豆提取物或烟酰胺。

剥离素的实例包括但不限于α-羟基酸（如乳酸、乙醇酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸或上述物质的任意组合）、β-羟基酸（如水杨酸）、多羟基酸（如乳糖酸和葡萄糖酸），以及机械剥离（如微晶换肤术）。在某些优选的实施例中，剥离素包括乙醇酸或水杨酸。

防晒剂的实例包括但不限于阿伏苯宗(Parsol1789)、苯基二苯并咪唑四磺酸酯二钠(Neo Heliopan AP)、二乙氨基羟基苯甲酰基苯甲酸己酯(UvinulA Plus)、依莰舒(Mexoryl SX)、氨茴酸甲酯、4-氨基苯甲酸(PABA)、西诺沙酯、乙基己基三嗪酮(Uvinul T150)、胡莫柳酯、4-甲基亚苄基樟脑(Parsol5000)、甲氧基肉桂酸辛酯(Octinoxate)、水杨酸辛酯(Octisalate)、二甲氨苯酸辛酯(Escalol507)、苯基苯并咪唑磺酸(Ensulizole)、聚硅氧烷-15(ParsolSLX)、水杨酸三乙醇胺、双-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪(Tinosorb S)、二苯酮1–12、二羟苯宗、甲酚曲唑三烷氧烷(Mexoryl XL)、二乙基己基丁酰胺基三嗪酮(Uvasorb HEB)、奥克立林、氧苯酮(Eusolex4360)、舒利苯酮、亚甲基二苯并三唑四甲基丁酚(Tinosorb M)、二氧化钛、氧化锌等等。

类视色素的实例包括但不限于视黄醇（醇式维生素A）、视黄醛（醛式维生素A）、视黄醇乙酸酯、视黄醇丙酸酯、视黄醇亚油酸酯、视黄酸、视黄醇棕榈酸酯、异维甲酸、他佐罗汀、蓓萨罗丁、阿达帕林以及它们中两种或更多种的组合等。在某些优选的实施例中，所述类视色素选自视黄醇、视黄醛、视黄醇乙酸酯、视黄醇丙酸酯、视黄醇亚油酸酯，以及它们中两种或更多种的组合。在某些更优选的实施例中，所述类视色素为视黄醇。

抗氧化剂的实例包括但不限于水溶性抗氧化剂如巯基化合物和它们的衍生物（如焦亚硫酸钠和N-乙酰基半胱氨酸、谷胱甘肽）、硫辛酸和二氢硫辛酸、茋类化合物如白藜芦醇和衍生物、乳铁蛋白、铁和铜的螯合剂以及抗坏血酸和抗坏血酸衍生物（如抗坏血酸-2-葡糖苷、抗坏血酸棕榈酸酯和抗坏血酸多肽）。适用于本发明的组合物中的油溶性抗氧化剂包括但不限于丁基化羟基甲苯、类视色素（如，视黄醇和视黄基棕榈酸酯）、生育酚类（如，生育酚乙酯）、生育三烯酚类和泛醌。包含适用于本发明的组合物中的抗氧化剂的天然提取物包括但不限于：包含黄酮类和异黄酮类以及它们的衍生物（如，染料木黄酮和二联玉米蛋白）的提取物、包含白藜芦醇的提取物等。此类天然提取物的实例包括葡萄籽、绿茶、红茶、白茶、松树树皮、小白菊、不含小白菊内酯的小白菊、燕麦提取物、黑莓提取物、黄栌属提取物、大豆提取物、柚提取物、麦芽精提取物、橙皮素、葡萄提取物、马齿苋属提取物、甘草查耳酮、查耳酮、2,2’-二羟查耳酮、2’-羟基-2,3,5’-三甲氧基查耳酮、报春花提取物、蜂胶，等等。

组合物中可存在任意适量的附加美容活性剂，例如含量为约组合物的0.0001重量%至约20重量%，如约0.001重量%至约10重量%（如约0.01重量%至约5重量%）。在某些优选的实施例中，该含量为0.1%至0.5%，而在其它优选的实施例中，该含量为1%至2%。

在某些优选的实施例中，本发明的组合物为包含泡桐属木材提取物及至少一种附加的抗炎剂的护肤组合物。合适的附加的附加的抗炎活性物包括但不限于针对下文示出的抗炎测定法中的白介素-2具有低于或等于100μg/ml的IC50（化合物对炎症产生50%抑制的浓度）的化合物。在一个优选的实施例中，第二种抗炎化合物的IC50低于约70μg/ml，更优选地低于约50μg/ml，更优选地低于约40μg/ml，更优选地低于约30μg/ml。

所述抗炎测定法估测了所述药剂降低受到T细胞受体(TCR)激活剂植物血凝素(PHA)刺激的人淋巴细胞产生细胞因子的能力，并且所述测定法以如下方式进行。人淋巴细胞通过白细胞分离法(leukopheresis)采集自健康成年男性，并且在无血清淋巴细胞生长培养基(ExVivo-15,Biowhittaker,Walkersville,Md.)中调整至1×10⁶细胞/mL的密度。根据公开的方法（Hamamoto Y.等，Exp Dermatol2:231-235,1993），在存在或不存在测试样品的情况下使用10μg/mL PHA刺激PBL。在37℃下使用5%的CO₂温育48小时后，将上清液去除，并且使用市售的多路复用细胞因子检测套件评估细胞因子浓度。

合适的抗炎剂的实例包括取代的间苯二酚、(E)-3-(4-甲基苯基磺酰基)-2-丙烯腈（如“Bay11-7082”，可从Sigma-Aldrich(St.Louis,Missouri)商购获得）、四氢姜黄素（如四氢姜黄素CG，可得自Sabinsa Corporation(Piscataway,NJ)），以及源自以下物质的提取物和材料：

黄柏外皮提取物(PCE)

非变性大豆（黄豆）

甘菊（小白菊）

姜（生姜）

银杏（银杏属）

羟基积雪草苷（积雪草提取物成分）

黄栌（黄栌属）

蜂斗菜提取物（蜂斗菜）

枸杞子（枸杞）

奶蓟提取物（水飞蓟（Silybum marianum））

金银花（金银花（Lonicera japonica））

秘鲁香胶（秘鲁香树）

鼠尾草（药用鼠尾草）

越橘提取物（越橘）

苋菜油（繁穗苋）

石榴（石榴科）

巴拉圭茶（巴拉圭茶叶提取物）

百合花提取物（百合）

百合花球茎提取物（百合）

橄榄叶提取物（橄榄）

根皮素（苹果提取物）

燕麦粉（燕麦）

Lifenol（啤酒花属植物：啤酒花）提取物

芒柄花P（刺芒柄花）

甘草查耳酮（甘草：胀果甘草提取物成分）

馨敏舒（红没药醇和姜提取物）

大米提取物

它们中两种或更多种的组合等。

间苯二酚是具有如下结构的二羟基酚化合物（即1,3二羟基苯）：

如本文所用，“取代的间苯二酚”是指在2、4、5或6位中具有至少一个取代基间苯二酚。因而，取代的间苯二酚可具有少至一个且多至四个的取代基。取代的间苯二酚的位置1和3具有–OH羟基，如上所示。

在其中将取代的间苯二酚用于抗炎的实施例中，高度优选的是，取代的间苯二酚的所有取代基均不含苯基（–C₆H₅芳族）部分。在某些实施例中，所有取代基均不含（具有或不具有杂原子的）芳族部分。在某些此类实施例中，优选的是取代的间苯二酚的所有取代基均不含酮官能团（与另外两个碳原子键合的羰基）。在某些其它此类实施例中，取代的间苯二酚的所有取代基既不含苯基官能团也不含酮官能团。在某些其它此类实施例中，取代的间苯二酚包括至少一个具有5至11个碳原子，优选5至10个碳原子，更优选5至9个碳原子，最优选5至8个碳原子的取代基。在某些其它此类实施例中，至少一个取代基包含烷基，例如具有上述碳原子数目的烷基。该烷基优选是不饱和的。

在某些实施例中，间苯二酚的4位被取代，在某些实施例中，仅4位被取代。在另一个实施例中，4位被烷基取代。在某些优选的实施例中，取代的间苯二酚包含单个4位取代基，该取代基包含烷基。在某些其它的优选的实施例中，取代的间苯二酚包含单个4位取代基，该取代基由与苯环直接键合的烷基组成。

用于抗炎剂的特别合适的取代的间苯二酚包括4-已基间苯二酚和4-辛基间苯二酚，尤其是4-已基间苯二酚。4-己基间苯二酚和4-辛基间苯二酚在下面示出：

4-己基间苯二酚可以“SYNOVEA HR”从Sytheon(Lincoln Park,NJ)商购获得。4-辛基间苯二酚可从City Chemical LLC(West Haven,Connecticut)商购获得。

在某些实施例中，取代的间苯二酚在2、4、5或6位具有至少两个取代基。这种取代基可任选连接而形成环，例如任选包含杂原子例如硫或氧的环状脂族烃。例如连接的取代基可包含5至10碳原子，如8至10碳原子，并任选包括1至3杂原子。具有连接2位和3位的环状脂族取代基的合适取代的间苯二酚的实例包括玉米赤霉酮和β-玉米赤霉醇：

玉米赤霉酮和β-玉米赤霉醇可从Sigma Chemicals(St.Louis,Missouri)商购获得。

在某些其它实施例中，取代的间苯二酚具有含卤和/或含亚硝基的取代基。合适的实例含有与苯环直接键合的-Cl或-N=O。这些取代基可存在于例如2和4位、2和6位或4和6位上。二卤取代的间苯二酚的实例为2,6-二氯间苯二酚。二亚硝基取代的间苯二酚的实例为A2,4-二亚硝基间苯二酚：

2,6-二氯间苯二酚和2,4-二亚硝基间苯二酚可得自City Chemical LLC(WestHaven,Connecticut)。

取代的间苯二酚可通过本领域已知的方法制备，例如使用美国专利No.4,337,370中描述的技术制备，将该专利的内容以引用的方式并入本文。

取代的间苯二酚可具有任何合适的分子量。在某些实施例中，取代的间苯二酚的分子量在约175至约300之间的范围内。

“甘菊的提取物”是指例如可根据名称为“PARTHENOLIDE FREEBIOACTIVE INGREDIENTS FROM FEVERFEW(TANACETUMPARTHENIUM)AND PROCESSES FOR THEIR PRODUCTION”（得自甘菊（小白菊）的不含小白菊内酯的生物活性成分及其制备方法）的美国专利申请公开2007/0196523中设置的细节制备的植株“小白菊”的提取物。一种尤其合适的小白菊提取物可以约20%的活性甘菊从Integrated BotanicalTechnologies(Ossining,NY)商购获得。

本发明的组合物可包含美容有效量的一种或多种附加抗炎化合物。该组合物优选包含基于活性物质计的约0.1%至约10%，更优选约0.5%至约5%的附加抗炎化合物。

在本发明的组合物中，泡桐属木材提取物与附加的抗炎化合物的比率是可变的。例如，所述提取物和所述抗炎化合物可以约0.001至约100，优选约0.01至约10，更优选约0.25至约2的重量浓度比（重量浓度百分比通过用所述干提取物的重量浓度除以所述附加的抗炎化合物的重量浓度来测定）存在。

在某些优选的实施例中，本发明的组合物为包含泡桐属木材提取物及至少一种附加的改善老化迹象的药剂。合适的附加改善老化迹象的药剂的实例包括但不限于弹性蛋白原促进剂、胶原促进剂、类视色素、透明质酸、二甲基氨乙醇、N,N,N',N'-四(2-羟基丙基)乙二胺、α-羟基酸、多羟基酸，以及它们中两种或更多种的组合。

如本文所用，“弹性蛋白原促进剂”是指拥有增强的弹性蛋白原产生的生物活性的化合物种类。弹性蛋白原根据本发明，促进剂包括能够增强人体中弹性蛋白原产生的所有的天然的或合成化合物。

合适的弹性蛋白原促进剂可例如用下文的“弹性蛋白原促进剂测定法”来确定。“弹性蛋白原促进剂测定法”如下进行：使用大鼠心肌母细胞H9C2（其可例如从ATCC(Manassas,VA)购得）。将培养物维持在补充有10%胎牛血清、2mM谷氨酰胺、100单位/ml青霉素和50μg/ml链霉素(Invitrogen LifeTechnologies,Carlsbad,CA)的达尔伯克氏改良伊格尔培养基(DMEM,Invitrogen Life Technologies,Carlsbad,Calif.)中。用弹性蛋白启动子-荧光素酶报告基因构建体（Elp2.2，从nt-2267至nt+2的2.2kb弹性蛋白启动子片段，驱动荧火荧光素酶基因，其可从Promega(Madison Wis.)获得）瞬时转染细胞培养物。通过Qiagen Maxi柱(Qiagen Valencia,CA)制备DNA。在所有的转染中，包括了具有胸苷激酶启动子和海肾荧光素酶报告基因的构建体(pRL-TK,Promega,Madison Wis.)作为内部对照。通常，使用Lipofectamine2000(Invitrogen Life Technologies,Carlsbad,CA)，用0.45μg总DNA/孔转染在48孔板中培养的细胞。转染后一天，用试剂以指定的浓度处理细胞大约24小时，然后使其裂解用于使用购自Promega(Madison,Wis.)的双荧光素酶报告基因系统，按照生产商的规程进行荧光素酶测定法。使用购自Molecular Devices(Sunnyvale,CA)的发光计LMAX，首先测量萤火虫荧光素酶活性（代表弹性蛋白促进剂活性），然后测量海肾荧光素酶活性（内部对照）。将这两种荧光素酶活性(RLU)的比值用于评价“弹性蛋白原促进剂活性”。以在0.5微克/毫升至2.5毫克/毫升（以活性物质计）范围内的至少一种浓度，并且优选以在1.0微克/毫升至2.5毫克/毫升（以活性物质计）范围内的至少一种浓度，弹性蛋白原促进剂优选具有至少1.1，优选至少1.25，更优选至少1.3并且最优选至少1.5的弹性蛋白原促进剂活性。

合适的弹性蛋白原促进剂包括但不限于黑莓提取物、黄栌提取物、小白菊提取物、珠子草(Phyllanthus niruri)的提取物以及具有铜和/或锌组分的双金属络合物。具有铜和/或锌组分的双金属络合物可以是例如柠檬酸铜-锌、草酸铜-锌、酒石酸铜-锌、苹果酸铜-锌、琥珀酸铜-锌、丙二酸铜-锌、马来酸铜-锌、天冬氨酸铜-锌、谷氨酸铜-锌、戊二酸铜-锌、富马酸铜-锌、葡糖二酸铜-锌、聚丙烯酸铜-锌、已二酸铜-锌、庚二酸铜-锌、辛二酸铜-锌、壬二酸铜-锌、癸二酸铜-锌、十二酸铜-锌或者它们的组合。在一个优选的实施例中，弹性蛋白原促进剂选自黑莓提取物、黄栌提取物、小白菊提取物和它们的组合。在一个特别优选的实施例中，弹性蛋白原促进剂选自黑莓提取物、小白菊提取物以及它们的组合。

所谓“黄栌提取物”是指“黄栌(Cotinus coggygria)”叶的提取物，例如其水提取物，可得自Bilkokoop(Sofia,Bulgaria)。

所谓“黑莓提取物”是指从悬钩子(Rubus)属植物，优选黑莓(Rubusfruticosus)分离的化合物的共混物。在一个实施例中，所述化合物分离自所述植物的花。在另一个实施例中，所述提取物分离自所述植物的干燥花。这类化合物可分离自植物的一个或多个部分（例如整株植物、植物的花、种子、根、根状茎、茎、果实和/或叶）。在一个优选的实施例中，黑莓提取物是黑莓叶提取物。

提取工艺可包括物理移出一块这种植物并例如对其进行研磨。合适化合物的进一步提取还可用本领域熟知的提取方法（例如，使用有机溶剂如低级C1-C8醇、C1-C8烷基多元醇、C1-C8烷基酮、C1-C8烷基醚、乙酸C1-C8烷基酯及氯仿，和/或无机溶剂如水、无机酸如盐酸和无机碱如氢氧化钠）从所述植物分离。

例如，可通过用水、醇如乙醇或它们的组合提取而制备黑莓叶提取物。然而，用包括乙醇和水两者的溶剂制备提取物是优选的。在提取前，优选对黑莓叶进行干燥。还优选仅将黑莓植物的叶用于提取，而不还使用黑莓的其它植物部分例如果实（浆果)或其分枝和根。

在一个实施例中，用于产生黑莓叶提取物的提取方法包括以下步骤：a）向包含醇的溶剂添加黑莓叶，所述醇选自甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇，b）用溶剂提取黑莓叶至多72小时。

用于制备黑莓叶提取物的详细方法在美国专利申请公布2008/0095719中公开，将该文献的公开内容全文并入本文。

一种特别合适的黑莓提取物通过用水和乙醇的混合物提取黑莓叶，用麦芽糖糊精基质（从Symrise Inc.Teterboro,NJ商购获得并且以名称“SymMatrix”销售）配混成约5%至约10%的活度而制备。

可采集“珠子草”的提取物并以全植株使用，或任选使用植物的一个或多个部分（如花、种子、根、根状茎、茎、果实和/或植物的叶）。可将珠子草植株或其部分细分（例如通过研磨或碾磨）成粉末。珠子草的合适碾磨形式可从Raintree Nutrition,Inc.(Carson City,Nevada)商购获得。优选的是，使用珠子草的低分子量级分，例如珠子草的基本上无分子量大于约100,000道尔顿的分子种类的级分。优选的是，这种低分子量级分是可从珠子草植株提取的。

本发明的组合物可包含美容有效量的一种或多种弹性蛋白原促进剂，例如上文所述的弹性蛋白原促进剂。以活性物质计，所述组合物优选包含约0.1%至约10%的弹性蛋白原促进剂，更优选约0.5%至约5%的弹性蛋白原促进剂，最优选约0.5%至约2%的弹性蛋白原促进剂。

如本文所用，“胶原促进剂”指具有增强胶原产生的生物活性的化合物。根据本发明，“非类视色素胶原促进剂”包括并非类视色素或来自视色素的，并且能增强人体中的胶原产生的所有天然或合成化合物。

合适的胶原促进剂可例如用“胶原促进剂测定法”测定。“胶原促进剂测定法”如下进行。使用大鼠心肌母细胞H9C2（其可从ATCC(Manassas,VA)购得）。将培养物维持在补充有10%胎牛血清、2mM谷氨酰胺、100单位/ml青霉素和50μg/ml链霉素(Invitrogen life technologies,Carlsbad,CA)的达尔伯克氏改良伊格尔培养基(DMEM,Invitrogen LifeTechnologies,Carlsbad,CA)中。

用驱动萤火虫荧光素酶基因的Collagen1A启动子-荧光素酶报告基因构建体（其可例如从PREMAS Biotech Pvt.获得）瞬时转染细胞培养物。Ltd(Haryana,India)）瞬时转染细胞培养物。在所有的转染中，包括了具有胸苷激酶启动子和海肾荧光素酶报告基因的构建体(pRL-TK,Promega,Madison,Wisconsin)作为内部对照。使用Lipofectamine2000(Invitrogen lifetechnologies,Carlsbad,CA)，用0.45μg总DNA/孔转染在48孔板中培养的细胞。转染后一天，用试剂以指定的浓度处理细胞大约24小时，然后使其裂解以用于使用购自Promega(Madison,WI)的双荧光素酶报告基因系统，按照生产商的规程进行荧光素酶测定法。使用购自Molecular Devices(Sunnyvale,CA)的发光计LMAX，首先测量荧火虫荧光素酶活性（代表胶原促进剂活性），然后测量海肾荧光素酶活性（内部对照）。将这两种荧光素酶活性(RLU)的比值用于评价每种促进剂的活性。

以在0.5微克/毫升至2.5毫克/毫升（以活性物质计）范围内的至少一种浓度，优选以在1.0微克/毫升至2.5毫克/毫升（以活性物质计）范围内的至少一种浓度，适宜的胶原促进剂优选具有至少1.2，优选至少1.25，更优选至少1.3的弹性蛋白原促进剂活性。

适宜的非类视色素胶原促进剂包括但不限于以下：龙牙草（小白菊）提取物、积雪草提取物、豨莶草提取物、大豆提取物、胶原促进肽、乌索酸和积雪草苷。

积雪草（在留尼汪岛(Reunion Island)上也称为Violette marronne，在印度称为Gotu Kola或Indian pennywort，在北美称为Centella repanda，而在马达加斯加称为Talapetraka）是多形态草本(polymorphous herb)，属于伞形科(Umbelliferae,Apiaceae)，具体来讲属于天胡荽(Hydrocotyle)亚科。其在整个热带野生生长，喜好海拔高度约600至1200米的潮湿阴暗区域。积雪草具有三种品种：迪比卡型、阿比西尼亚型和佛罗里达型。该草本是已知的并因其愈合、镇静、止痛、抗抑郁、抗病毒和抗微生物性质而被使用。该草本的生物活性看起来是由于该草本中存在三萜分子。积雪草可以商品名TECA购自Bayer Consumer HealthCare(Basel,Switzerland)。

所谓“豨莶的提取物”是指植物豨莶的多种提取物中的任一种，包括可得自Sederma(Croda International Group,Edison,NJ)的豨莶苷(Darutoside)。

合适的胶原促进肽包括如下物质：

(1)matrikine肽（即胞外基质蛋白-胶原、弹性蛋白或蛋白聚糖降解而衍生的肽），包括棕榈酰五肽，特别是以商品名MATRIXYL得自Sederma(Croda International Group,(Edison,NJ))的Pal-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser-OH；

(2)GHK铜肽，可以商品名PROCYTE得自Photomedex(Montgomeryville,PA)；

(3)棕榈酰GHK肽，可以商品名Biopoeptide CL得自Sederma(CrodaInternational Group,(Edison,NJ))；

(4)在Peptides EP1775306B1中公开并在下面式I、II和III中描述的肽VFTRN、TRNDKL或它们的美容上可接受的盐：

其中式I包含至少六个氨基酸残基；并且

A1是Val、Ala、Leu、Met或不存在；

A2是Arg、Lys或不存在；

A3是Phe、Tyr或不存在；

A4是Thr、Ser、Ala或Lys；

A5是Arg或Lys；

A6是Asn、Asp、Gly或Gln；

A7是Asp、Asn、Glu或不存在；

A8是Lys、Arg或不存在；并且

A9是Leu、Met、Val、Ile、Phe或不存在；

前提条件是如果A2不存在则仅A3可不存在，如A1不存在则仅A2可不存在，只要A8不存在则A7可不存在，并且如果A9不存在则仅A8可不存在；每个R1和R2独立地为H、C1-12烷基、C7-10苯基烷基或C(=O)E1，其中E1为C1-12烷基、C3-14烯基、C3-14炔基、苯基、3,4-二羟基苯基烷基、萘基或C7-10苯基烷基；前提条件是当R1或R2任何一个为C(＝O)E1时，另一个必须为H；并且R3为OH、NH2、C1-12烷氧基、C7-10苯基烷氧基、C11-14萘基烷氧基、C1-12烷氨基、C7-10苯基烷氨基或C11-14萘基烷氨基；或它们美容上可接受的盐。

其中式II含有至少六个氨基酸残基；并且

A'1是Val、Ala、Leu或Met；

A'2是Arg或Lys；

A'3是Phe或Tyr；

A'4是Leu、Met、Val、Ile或Phe；

A'5是His、Tyr或Phe；

A'6是Ser、Thr、Ala或Lys；

A'7是Tyr或Phe；

A'8是Asp、Asn或Glu；

A'9是Leu、Met、Val、Ile或Phe；

A'10是Lys或Arg；

A'11是Asn、Asp、Gly或Gln；并且

R1、R2和R3与式I中定义相同。

其中式III含有至少六个氨基酸残基；并且

A"1是Cys或Ser；

A"2是His、Tyr或Phe；

A"3是Lys或Arg；

A"4是Leu、Met、Val、Ile或Phe；

A"5是Leu、Met、Val、Ile或Phe；

A"6是His、Tyr或Phe；

A"7是Asn、Asp、Gly或Gln；

A"8是Val、Ala、Leu或Met；

A"9是Asn、Asp、Gly或Gln；

A"10是Lys或Arg；并且

R1、R2和R3与式I中定义相同。

(5)仿生四肽，例如可以商品名Chronoline Tri肽购自Unipex(Québec,Canada)的那些；以及

(6)棕榈酰三肽，可以商品名Syn-Coll购自DSM(Basel,Switzerland)。乌索酸还已知为五环三萜酸，熊果酸（Prunol）、熊果酸（Malol）、熊果酸（Urson）、β-乌索酸和3-β-羟基-Urs-12-En-28-Oic Acid，它例如可由St.Louis，MO的Sigma-Aldrich商购获得。

积雪草苷，还化学地已知为：[6-[[3,4-二羟基-6-(羟甲基)-5-(3,4,5-三羟基-6-甲基四氢吡喃-2-基)氧基四氢吡喃-2-基]氧基甲基]-3,4,5-三羟基四氢吡喃-2-基]10,11-二羟基-9-(羟甲基)-1,2,6a,6b,9,12a-六甲基-2,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-十四氢-1H-苉-4a-甲酸酯)，可例如从Bayer Santé Familiale Division Serdex,69,Boulevard Victor Hugo93400SAINT-OUEN France商购获得。

本发明的组合物可包含美容有效量的一种或多种胶原促进剂。以活性物质计，所述组合物优选包含约0.1%至约10%的胶原促进剂，更优选约0.5%至约5%的胶原促进剂，最优选约0.5%至约2%的胶原促进剂。

许多其它物质也可存在于本发明的组合物中。在某些优选的实施例中，所述组合物为包含一个种或多种材料的护肤组合物，所述材料选自：表面活性剂、螯合剂、润肤剂、湿润剂、调理剂、防腐剂、遮光剂、芳香剂等等。

润肤剂是指有助于维持皮肤的柔软、光滑和柔韧外观的化合物（例如，通过存留于皮肤表面或角质层中发挥润滑剂的作用）。合适的润肤剂的实例包括在Handbook of Cosmetic Science and Technology(A.Barel、M.Paye和H.Maibach编辑，2001年由Marcel Dekker,Inc New York,NY出版)的第35章，第399-415页(Skin Feel Agents,G Zocchi编辑)中所见的润肤剂，并且其包括但不限于凡士林、己基癸醇硬脂酸酯以及植物、坚果和蔬菜油，诸如夏威夷果油、米糠油、葡萄籽油、棕榈油、月见草油、氢化花生油和鳄梨油，

湿润剂是指用于提高皮肤表层水含量的化合物（例如，吸湿的化合物）。合适的湿润剂的实例包括在Handbook of Cosmetic Science andTechnology(A.Barel、M.Paye和H.Maibach编辑，2001年由MarcelDekker,Inc New York,NY出版)的第35章第399-415页(Skin Feel Agents,GZocchi编辑)中所见的湿润剂，并且其包括但不限于甘油、山梨醇或海藻糖（例如，α,α-海藻糖、β,β-海藻糖、α,β-海藻糖）或它们的盐或酯（例如，海藻糖6-磷酸）。

表面活性剂是指用于清洗或乳化的表面活性剂。合适的表面活性剂的实例包括在Handbook of Cosmetic Science and Technology(A.Barel、M.Paye和H.Maibach编辑，2001年由Marcel Dekker,Inc New York,NY出版)的第37章第431-450页(Classification of surfactants，L.Oldenhove deGuertechin编辑)中所见的表面活性剂，并且包括但不限于阴离子表面活性剂（诸如硫酸酯）、阳离子表面活性剂（诸如甜菜碱）、两性表面活性剂(诸如椰油酰甘氨酸钠)、非离子表面活性剂（诸如烷基多苷）。

合适的螯合剂的实例包括能够保护和保存本发明组合物的那些。优选地，所述螯合剂是乙二胺四乙酸(“EDTA”)，并且更优选地是EDTA四钠，其可以商品名“Versene100XL”商购自Dow Chemical Company（Midland,Michigan）。

适用的防腐剂包括例如对羟基苯甲酸酯、季铵类物质、苯氧基乙醇、苯甲酸盐、DMDM乙内酰脲、有机酸，并可以组合物的总量的约0%至约1%或约0.05%至约0.5%的量存在于组合物中。

赋予头发其它特性（例如光泽）的多种调理剂中的任何一种（例如挥发性硅氧烷）均适用于本发明。实例包括但不限于大气压沸点低于约220℃的挥发性硅氧烷调理剂。合适的挥发性硅氧烷的实例非排它性地包括聚二甲基硅氧烷、环聚二甲基矽氧烷、六甲基二硅氧烷、环甲基硅酮（cyclomethicone）液体，诸如环聚二甲基矽氧烷（可以商品名“DC-345”商购自Dow Corning Corporation of Midland、Michigan），以及它们的混合物，并且其优选地包括环甲基硅酮液体。其它合适的调理剂包括阳离子聚合物（包括聚季铵盐、阳离子瓜耳胶等）。

多种可商购获得的珠光剂或遮光剂中的任一种均可适用于本发明。适宜的珠光剂或遮光剂的实例包括但不限于（a）具有约16至约22个碳原子的脂肪酸和（b）乙二醇或者丙二醇的单酯或二酯；（a）具有约16至约22个碳原子的脂肪酸和（b）式：HO-(JO)_a-H的聚亚烷基二醇的单酯或二酯，其中J为具有约2至约3个碳原子的亚烷基；并且a为2或3；包含约16至约22个碳原子的脂肪醇；式：KCOOCH₂L的脂肪酸酯，其中K和L独立地包含约15至约21个碳原子；不溶解于洗发剂组合物中的无机固体以及它们的混合物。

适合在皮肤上使用并且对于护肤组合物而言理想的任何芳香剂均可用于本发明。

在某些优选的实施例中，本发明的形式为包含本发明组合物的基材。任何合适的基材均可用于本发明。例如在已公布的美国专利申请2005/0226834和2009/0241242中公开了合适的基材和基材材质的实例，该专利全文以引用方式并入本文。

在某些优选的实施例中，基材为擦拭物、手套或面膜。优选地，此类实施例包含水不溶性基材，此类基材如上文引用的文献中所定义。对于某些实施例，水不溶性基材可具有一定的尺寸和形状，以便能够覆盖个人使用者的面部，从而有利于将水不溶性基材作为面膜基材放在使用者的脸上。例如，水不溶性面膜基材可具有为使用者的嘴、鼻和/或眼配置的开口。作为另外一种选择，水不溶性基材可不具此类开口。这种无开口的构造可用于本发明的一些实施例，其中水不溶性基材旨在用于覆盖非面部的大片皮肤或水不溶性基材旨在用作擦拭物。水不溶性基材可具有各种形状，如有角形状（如矩形）或弓形，例如圆形或椭圆形。对于某些实施例，所述基材是手套，诸如描述于美国公开申请2006/0141014的手套，其全文以引用的方式并入本文。

在本发明的一个实施例中，产品包括多个具有不同形状的水不溶性基材。在本发明的一个实施例中，产品包括第一种水不溶性基材和第二种水不溶性基材。第一种水不溶性基材被成形为施用于前额上，而第二种水不溶性基材则被成形为施用于嘴部附近，如唇的上方区域和/或下方区域、下巴和/或面颊。在本发明的一个实施例中，第一种水不溶性基材还可施用于面部的鼻区。第一种水不溶性基材的表面积可为约100cm²至约200cm²，如约120cm²至约160cm²，而第二水不溶性基材的表面积为约100cm²至约300cm²，如约150cm²至约250cm²。在本发明的一个实施例中，水不溶性基材的硬度较低，使得可以例如轻易地覆盖或服贴于使用者的面部或其它身体部位。

本发明还包括增亮皮肤的方法，该方法通过向需要进行亮肤处理的皮肤施用泡桐属木材提取物来进行，此类提取物及其实施例如上文所述。在某些实施例中，所述方法包含将本发明的组合物施用于需要进行亮肤处理的皮肤，所述组合物包含泡桐属木材提取物，例如毛泡桐木材提取物或白花泡桐木材提取物、兰考泡桐木材提取物、台湾泡桐木材提取物，或其中两种或三种的组合。

优选地，本发明的方法包括向皮肤施用亮肤有效量的，优选安全且有效量的泡桐属木材提取物。在某些优选的实施例中，该方法包括向有需要的皮肤施用大于零至约20%的泡桐属木材提取物。在某些其它优选的实施例中，该方法包括向有需要的皮肤施用约0.0001至约20%、约0.001至约10%、约0.01至约5%、约0.1至约5%、或约0.2至约2%的泡桐属木材提取物。在某些其它优选的实施例中，该方法包括向皮肤施用大于零至约1%、约0.0001至约1%、约0.001至约1%或约0.01至约1%的泡桐属木材提取物。在某些其它优选的实施例中，该方法包括向皮肤施用约1至约5%，优选约2至约5%的泡桐属木材提取物。

可根据本发明使用任何适于将提取物施用于有需要的皮肤的方法。例如，可将提取物直接从包装中施用于有需要的皮肤上，用手施用于有需要的皮肤上，或可通过基材（如擦拭物或面膜）来转移，或它们中两种或更多种的组合。在其它实施例中，可通过点滴器、管、辊、喷剂、贴片来施用提取物，或将提取物加入浴盆中或换句话讲加入水中以施用于皮肤上等等。

在某些实施例中，本发明的方法还包括让所述泡桐属木材提取物与皮肤接触一段时间的步骤。例如，在某些优选的实施例中，施用后，可让提取物与皮肤接触大约15分钟或更长的时间。在某些更优选的实施例中，让提取物与皮肤接触约20分钟或更长的时间，更优选约1小时或更长的时间。

在某些实施例中，本发明的方法包括疗程，该疗程包括在选定的时期内多次向皮肤施用泡桐属木材提取物。例如，在某些实施例中，本发明提供增亮皮肤的方法，该方法包括每天一次或两次向需要增亮的皮肤施用包含泡桐属木材提取物的组合物并维持至少12周，优选至少8周，更优选至少2周。

在某些优选的实施例中，本发明的方法包括向皮肤施用至少两种不同的包含泡桐属木材提取物的组合物或产品。例如，所述方法可包括先向需要增亮的皮肤施用第一种包含泡桐属木材提取物的组合物，然后继续在需要增亮皮肤的该皮肤上施用第二种包含泡桐属木材提取物但又不同于第一种组合物的组合物。在某些优选的实施例中，第一种和第二种组合物可独立地选自洗剂、清洁剂、面膜、擦拭物、霜膏、精华素、凝胶等等。在某些优选的实施例中，第一种和第二种组合物中的至少一种为清洁剂、洗剂、霜膏、精华液或精华素，而另一种为面膜或擦拭物。在某些其它优选的实施例中，第一种和第二种组合物中的至少一种为清洁剂，而另一种为洗剂或霜膏。

在某些其它优选的实施例中，所述方法包含将至少三种包含泡桐属木材提取物的产品施用于需要增亮的皮肤。优选地，这三种产品选自清洁剂、洗剂、霜膏、精华液和面膜。

本发明还包含改善皮肤老化迹象的方法，其包含向需要改善老化迹象的皮肤使用泡桐属木材提取物的步骤（此类提取物和组合物如上文所述），以及减轻皮肤炎症的方法，其包含向需要减轻皮肤炎症的皮肤使用泡桐属木材提取物，此类提取物和组合物如上文所述。

本发明可包括向身体上任何需要治疗的皮肤施用。例如，可在面部、唇部、颈部、胸部、背部、臂部、腋部、手部、足部和/或腿部的任何一处或多处皮肤上进行施用。

优选地，本发明的方法包括向皮肤施用安全且有效量的泡桐属木材提取物。在某些优选的实施例中，该方法包括向有需要的皮肤施用大于零至约20%的泡桐属木材提取物。在某些其它优选的实施例中，该方法包括向有需要的皮肤施用约0.0001至约20%、约0.001至约10%、约0.01至约5%、约0.1至约5%、或约0.2至约2%的泡桐属木材提取物。在某些其它优选的实施例中，该方法包括向皮肤施用大于零至约1%、约0.0001至约1%、约0.001至约1%或约0.01至约1%的泡桐属木材提取物。在某些其它优选的实施例中，该方法包括向皮肤施用约1至约5%，优选约2至约5%的泡桐属木材提取物。

在某些实施例中，本发明的方法包括疗程，该疗程包括在选定的时期内多次向皮肤施用泡桐属木材提取物。例如，在某些实施例中，本发明提供了方法，该方法包括每天一次或两次向有需要的皮肤施用包含泡桐属木材提取物的组合物并维持至少12周，优选至少8周，更优选至少2周。

在某些优选的实施例中，本发明的方法包括向皮肤施用至少两种不同的包含泡桐属木材提取物的组合物或产品。例如，所述方法可包括先向有需求的皮肤施用第一种包含泡桐属木材提取物的组合物，然后继续在所述此类皮肤上施用包含泡桐属木材提取物的第二种组合物，但所述第二种组合物不同于用于所述有需求的皮肤的第一种组合物。

本发明的组合物可适于多种其它用途。例如，本发明的组合物可有用于清洁和/或湿润皮肤、治疗老化迹象和/或治疗炎症（包括发炎后色素沉着过度）、用于缩小孔径、痤疮治疗、用于减少皮脂生成、用于疤痕消减以及减少萎缩纹的外观、用于减少脂肪团的外观或橘皮状。在某些其它实施例中，可将本发明的组合物与机械或物理表皮剥脱处理（例如微晶磨皮处理）同时施用或在该处理的数小时内施用，或与化学剥脱剂或角质层分离剂例如水杨酸同时施用。在某些其它实施例中，可将本发明的组合物施用至粘膜或其它组织例如阴道组织、口腔组织或眼组织。在某些其它实施例中，可将本发明的组合物施用至轻度伤口或术后部位以促进愈合、施用至昆虫叮咬处、施用至毒藤皮肤病症或相似皮肤状况，或通常用于减轻发痒。在某些其它实施例中，本发明的组合物用于减少皮肤刺激。所述刺激可具有外部起源，其由护肤和美容产品中的成分（例如类视色素及其衍生物、过氧苯甲酰、α-羟基酸及其衍生物、水杨酸、表面活性剂、天然植物提取物、防晒活性剂、脲以及防腐剂等）导致。所述刺激可具有其它外部起源，诸如太阳、风或修剃毛发。所述刺激也可由先天疾病症状引起，例如痤疮、红斑痤疮、特应性皮炎以及其它疾病状态。在其它实施例中，本发明的组合物可用于减轻牙龈发红。所述提取物还可适用于减少毛细管扩张或蛛状静脉的外观、减少酒渣鼻、皮肤色斑和皮肤斑点的外观。在某些实施例中，将本发明的组合物施用于毛发、头皮或它们两者以改善毛发健康、质量和强度，促进毛发生长或延缓毛发脱落，防止或治疗头皮屑，防止或治疗皮脂溢、头部皮脂溢，以及改善头皮健康和湿度。在其它实施例中，将本发明的组合在口腔中物施用于牙龈以防止或治疗牙龈发红或刺激，减轻牙周炎，治疗或防止齿龈炎，治疗口干的症状或感觉。在另一些实施例中，将本发明的组合物适用于眼部以治疗、防止或减轻红眼或眼部刺激的外观，防止或治疗结膜炎，改善眼部湿度，减轻眼干的感觉。在其它实施例中，将本发明的组合物施用于阴道粘膜以防止或治疗刺激或发干的迹象、紧致度的丧失。

本发明还包含含有泡桐素的皮肤护理组合物以及治疗皮肤的方法，例如增亮皮肤、治疗一种或多种皮肤老化迹象、治疗炎症和/或类似的方法，其通过向需要亮肤处理的皮肤施用包含泡桐素的组合物，所述泡桐素即下式的化合物：

泡桐素

用于包本文用途的泡桐素可通过多种天然来源的任一来源产生，诸如提取自植物，或可使用已知的合成方法进行合成（参见例如StereoselectiveSynthesis of3-Alkyl-2-aryltetrahydrofuran-4-ols：Total Synthesis of(±)-Paulownin。Angle，Steven R.；Choi，Inchang；Tham，Fook S.Departmentof Chemistry.Wright State University,Dayton,OH,USA.Journal of OrganicChemistry（2008），73(16)，6268-6278；和Total synthesis of(+)-paulownin。Okazaki，Momotoshi；Ishibashi，Fumito；Shuto，Yoshihiro；Taniguchi，Eiji。Faculty Agric.,Ehime Univ.,Matsuyama,Japan.Bioscience,Biotechnology,and Biochemistry(1997),61(4),743-745）。在某些优选的实施例中，所述泡桐素提取自植物。合适的植物的实例包括泡桐属的植物，诸如毛泡桐、白花泡桐、兰考泡桐、台湾泡桐，以及其它植物，诸如Amanoaoblongifolia、Amanoa oblongifolia、Dolichandrone crispa、梧桐（Firmianaplatanifolia）、云南石梓（Gmelina arborea）、亚洲石梓（Gmelinaasiatica）、Gmelina vitiensis、小叶香茶菜（Isodon parvifolius）、吊瓜树(Kigelia pinnata)、Markhamia platycalyx、Markhamia stipulate、老鸦烟筒花(Millingtonia hortensis)、植物物种木犀榄、Phyllarthron comorense、英卡纳紫罗兰（Tabebuia incana）、蔓荆子（Vitex trifolia）、Prasium majus，其中两种或更多种的组合等。在某些优选的实施例中，所述泡桐素提取自毛泡桐、白花泡桐、兰考泡桐和/或台湾泡桐的木材。

在某些实施例中，泡桐素可通过对多种植物的细胞培养物进行提取来获得，其包括泡桐属植物（诸如毛泡桐、白花泡桐、兰考泡桐和/或台湾泡桐）的细胞培养物。进行提取以获得用于本发明的提取物/泡桐素的细胞培养物可以是任何形式，包括悬浮细胞培养物等。

本发明的组合物可包含如上所述的任何合适的任选化妆品成份并且可以是如上所述的任何合适的化妆品形式（例如溶液、悬浮液、条块、清洗剂、洗剂、软膏、精华液、面膜等）。此外，本发明的组合物可包含如上所述的一种或多种附加的亮肤剂、抗炎剂、胶原促进剂和/或弹性蛋白原促进剂。在某些优选的实施例中，所述组合物包含一种或多种附加的亮肤剂。在某些优选的实施例中，所述组合物包含一种或多种附加的抗炎剂。在某些优选的实施例中，所述组合物包含一种或多种附加的胶原促进剂。在某些优选的实施例中，所述组合物包含一种或多种附加的弹性蛋白原促进剂。

在某些实施例中，本发明的方法包括向需要治疗的皮肤（例如，需要增亮皮肤等）施用包含植物提取物的组合物，其中所述提取物包含至少约20重量%的泡桐素。在某些更优选的实施例中，所述方法包括施用包含植物提取物的组合物，所述植物提取物包含至少约40重量%的泡桐素，例如至少约50重量%、至少约60重量%、至少约70重量%或至少约80重量%的泡桐素。

包含泡桐素的提取物可以是通过本文所述的提取方法产生自泡桐属木材的物质的一种或多种级分，或者由其制成。在某些实施例中，所述提取物包含产生自泡桐属木材的一种级分或两种或更多种级分的组合。

在某些实施例中，本发明的方法包括向需要治疗的皮肤施用包含泡桐素的组合物，所述泡桐素经过分离和/或纯化达到至少90%。在某些优选的实施例中，所述组合物已经向其中掺入或加入了泡桐素物质，其为超过90%的纯泡桐素。

在某些实施例中，所述分离的泡桐素和/或包含所述泡桐素的组合物可经过制备而基本不含某些物质。在一个实施例中，所述泡桐素物质、包含所述泡桐素的组合物或两者基本不含乌索酸、β-谷甾醇或者两者均不包含。

优选地，本发明的方法包括向皮肤施用有效量（优选安全和有效量）的泡桐素。在某些优选的实施例中，该方法包括向有需要的皮肤施用大于零至约20%的泡桐素。在某些其它优选的实施例中，所述方法包括向有需要的皮肤施用约0.0001至约20%、约0.001至约10%、约0.01至约5%、约0.1至约5%或约0.2至约2%的泡桐素。在某些其它优选的实施例中，该方法包括向皮肤施用大于零至约1%、约0.0001至约1%、约0.001至约1%或约0.01至约1%的泡桐素。在某些其它优选的实施例中，该方法包括向皮肤施用约1至约5%，优选约2至约5%的泡桐素。

可根据本发明使用任何适于将包含泡桐素的组合物施用于有需要的皮肤的方法。例如，可将提取物直接从包装中施用于有需要的皮肤上，用手施用于有需要的皮肤上，或可通过基材（如擦拭物或面膜）来转移，或它们中两种或更多种的组合。在其它实施例中，可通过点滴器、管、辊、喷剂、贴片来施用提取物，或将提取物加入浴盆中或换句话讲加入水中以施用于皮肤上等等。

在某些实施例中，本发明的方法还包括让泡桐素与皮肤接触一段时间的步骤。例如，在某些优选的实施例中，施用后，可让提取物与皮肤接触大约15分钟或更长的时间。在某些更优选的实施例中，让提取物与皮肤接触约20分钟或更长的时间，更优选约1小时或更长的时间。

在某些实施例中，本发明的方法包括疗程，该疗程包括在选定的时期内多次向皮肤施用泡桐素。例如，在某些实施例中，本发明提供增亮皮肤或其它治疗的方法，该方法包括每天一次或两次向有需要的皮肤施用包含泡桐素的组合物并维持至少12周，优选至少8周，更优选至少2周。

在某些优选的实施例中，本发明的方法包括向皮肤施用至少两种不同的包含泡桐素的组合物或产品。例如，所述方法可包括先向需要增亮皮肤或其它治疗的皮肤施用第一种包含泡桐素的组合物，然后继续在所述需要增亮皮肤或其它治疗的皮肤上施用第二种包含泡桐素但又不同于第一种组合物的组合物。在某些优选的实施例中，第一种和第二种组合物可独立地选自洗剂、清洁剂、面膜、擦拭物、霜膏、精华素、凝胶等等。在某些优选的实施例中，第一种和第二种组合物中的至少一种为清洁剂、洗剂、霜膏、精华液或精华素，而另一种为面膜或擦拭物。在某些其它优选的实施例中，第一种和第二种组合物中的至少一种为清洁剂，而另一种为洗剂或霜膏。

在某些其它优选的实施例中，所述方法包含将至少三种产品施用于需要增亮皮肤或其它治疗的皮肤，所述产品包含泡桐素。优选地，这三种产品选自清洁剂、洗剂、霜膏、精华液和面膜。

实例

实例中采用了以下测试方法：

黑素合成抑制测试

如下所示制备B16(F10)鼠黑素瘤细胞的对照样品并收获，但不添加任何测试样品，也不暴露于UVB（未处理的对照）。如下所示制备其它对照样品并收获，其中不添加测试样品，但如下所述将其暴露于UVB（处理的对照）。制备一个或多个B16(F10)细胞样品，都用测试样品（如E1）进行预处理，然后如下所述将其暴露于UVB。处理后，UVB刺激了细胞中黑素的生成，然后根据测试化合物抑制或降低黑素生成速率的能力来评价该测试化合物。裂解细胞以在595nm处进行蛋白测量，在470nm处进行黑素含量测量。通过将测试化合物获得的抑制百分比与处理的对照进行比较，以确定测试化合物的效力。

测试步骤：

第一天，将鼠黑素瘤B16(F10)细胞接种到60mm平板中，密度为每个平板约1百万个细胞，然后在37℃、5%CO₂条件下孵育48小时。第2天，利用预定浓度（如25μg/mL）的测试化合物处理汇合率为90-100%的细胞两小时（仅限测试化合物样品），然后将其暴露于200mJ/cm²的UVB中（用于测试样品和处理的对照）。在第3天（对测试样品和处理的对照进行UVB照射后24小时）收获细胞，将其在蛋白裂解缓冲液（50mMTris，pH8，2mM EDTA，150mM NaCl，和1%Triton X100-购自BioRad目录号161-0407的非离子表面活性剂）中裂解，并且离心。将所得上清液与蛋白染料定量分析试剂（Bio-rad蛋白检测试剂）充分混合，然后使用分光光度计(Molecular Devices VERSAmax)在595nm处测定样品的光密度（蛋白定量分析OD值）。将除去上清液后剩下的细胞沉淀溶于碱性DMSO缓冲液中，然后将所得的溶液用于470nm处的黑素吸光度测定，从而确定黑素定量分析OD。

未处理对照、处理对照和测试样品各制备三个样品，然后测量各样品的黑素和蛋白OD值。通过以下公式计算各未处理对照（3个样品）、处理对照（3个样品）和测试样品（每种测试化合物3个样品）的归一化黑素：

归一化黑素=黑素定量分析OD/蛋白定量分析OD。

计算未处理对照的平均归一化黑素（三个计算值之和除以3），然后用同样方法计算处理对照的平均归一化黑素。

通过以下公式计算对照的诱导值：

对照的诱导值=处理对照的平均归一化黑素–未处理对照的平均归一化黑素。

然后通过以下公式计算各个测试样品的诱导值：

测试样品的诱导值=测试样品的归一化黑素–未处理对照的平均归一化黑素。

然后通过以下公式计算各个测试样品的抑制百分比：

100×[(对照的诱导值–测试样品的诱导值)/对照的诱导值]。根据对于各测试样品所得的三组抑制百分比数值的和除以三来计算平均抑制百分比。

通过理论实例解释抑制百分比的计算顺序，参见下表。

用作增亮皮肤测试(ΔL)的皮肤表皮等效模型

皮肤表皮等效组织可从MatTek的MelanoDerm^TMSystem商购获得并用于以下测试。MatTek的MelanoDerm^TMSystem由正常的人源性表皮角质细胞(NHEK)和黑素细胞(NHM)组成，这些细胞已经过培养形成了多层、高度分化的人表皮模型。具体地讲，在以下测试中采用了MEL-300-B组织，每个的直径均为9mm。

每天将这些采用适当载体并以测试浓度制备的测试材料局部施用于皮肤模型上，实验持续8天。在第9天进行测量。

通过用数码相机拍照，测出宏观和微观视觉组织颜色变深终点。使用分光光度计(Konica Minolta CM-2600d)测出各组织的明亮度（L值）。按照以下公式计算每个测试样品的ΔL（相比于对照的明亮度）：

ΔL=处理样品的L值–对照样品的L值。

细胞活力测试

使用如下所述的MTT测定法来评估实验期间组织的细胞活力。MTT组织活力测定是一种比色测定系统，它测量活细胞线粒体将黄色噻唑兰(MTT)还原为紫色不溶性产物的能力。

将之前用来测定各测试材料和未处理组织的明亮度的皮肤表皮组织用于测定实验结束时剩余的活细胞的百分比。在增亮程度测试之后将皮肤表皮组织与MTT试剂共同孵育3h。孵育结束后，加入提取缓冲液以裂解细胞并放置过夜。利用酶标仪在570nm的波长处读取样品，然后与未处理的对照进行比较，以相对于对照的细胞存活百分比表示。相对于对照，细胞存活率降低≥30%，则视为测试材料造成了明显的细胞毒性。产生的紫色的量与活细胞数成正比。

以下实例示出了泡桐属木材提取物的制备和功效。

实例1

由Plant Extract Bank in Korea Research Institute of Biosciences&Biotechnologies获得的泡桐的四次提取物，每次至少20mg，代表植物部分的组合或植物的单个部分。它们来源于：杆/树皮/枝的组合（E1）、叶（C1）、树皮（C2）和杆（E2）。全部所述提取物均使用甲醇在50摄氏度下以超声法制备。

实例2

以下实例根据本发明的某些实施例示出了毛泡桐木材提取物(E3)的制备。

毛泡桐木粉获自Kurosawa Kiri Wood Supply Shop（Kitakata-city,Japan）。将十克(10g)干木粉悬浮于250mL的试剂纯乙醇中并且在室温下搅拌72h。对所产生的悬浮液进行过滤并在低压下使用旋转蒸发器以30摄氏度干燥该滤过液。以3.5%的产率获得了干燥的粗提取物(350mg)。将所述粗提取物以1%的浓度溶解于甲醇中，并且在室温下使用活性炭(700mg)处理5分钟。通过0.45微米的滤纸过滤悬浮液。干燥该滤过液以获得颜色明显更浅的物质E3，210mg（产率为粗提取物的60%)。

实例3

以下实例示出了基本不含β-谷甾醇和乌索酸的毛泡桐木材提取物(E4)的制备。

将去离子级别的水(2.4mL)加入来自上文实例1的毛泡桐树干/树皮/树枝提取物(E1,24mg)并在室温下超声处理5分钟。通过0.45μ的滤筒过滤所产生的悬浮液并且通过冷冻干燥对该滤过液进行干燥以43%的收率来获得水溶性组分（E4；10.3mg）HPLC分析显示所述组合物基本不含β-谷甾醇和乌索酸。E4中不存在可检测量的这两种化合物。β-谷甾醇的检测限（lod值）为9ppm(w/v)，乌索酸的检测限为0.5ppm(w/v)。

实例4

以下实例示出了毛泡桐提取物E1-E5的增亮皮肤特性以及比较实例C1-C2。

在最高达2%的不同的浓度（如表1所列）下通过以皮肤表皮等效模型作为增亮皮肤测试(ΔL)如上所述测试了全部七组提取物。

利用MTT测定法来测定所有提取物的细胞毒性潜力，计算方式为相对于对照的细胞活力下降百分比，其中>30%的细胞活力下降表明存在明显的细胞毒性问题。结果示于下表1中。

还在室温下实施了仅以水作为溶剂对所述木粉进行的简单一步提取(E5)并且该提取在所述增亮皮肤测试中并不产生活性。据认为更为剧烈的提取(附加的加热、搅拌等)可产生活性。

表1

来自毛泡桐的部分的提取物在3D皮肤模型中的增亮皮肤

*表示显著的细胞毒性问题。

实例5

以下实例示出了关联于毛泡桐木材提取物的黑素合成抑制特性。

根据上文描述的黑素合成抑制测试来针对黑素合成抑制测试树干/树皮/树枝提取物(E1)和木粉提取物(E3)，并还针对酪氨酸酶抑制进行了测试。所得的测量显示E1&E3的增亮皮肤效果是相关联的，至少部分地与黑素合成抑制并且非酪氨酸酶抑制相关联。提取物E1和E3对于黑素合成抑制的IC50值为30和40μg/mL，而各提取物均无酪氨酸酶抑制。

实例6

NF-κB抑制测定法

所述NF-κB促进剂的测定如下进行：大鼠心脏成肌细胞H9c2细胞购自ATCC（Manassas，VA）。将培养物维持在补充有10%胎牛血清、100单位/ml青霉素和50μg/ml链霉素(Invitrogen life technologies,Carlsbad,CA)的达尔伯克氏改良伊格尔培养基（Invitrogen life technologies,Carlsbad,CA的DMEM）中。通常，使用Lipofectamine2000(Invitrogen life technologies,Carlsbad,CA)，以0.45μg总DNA/孔瞬时转染在96孔板中培养的1×104细胞。在所有的转染中，除荧光素酶启动子外还包括了具有胸苷激酶启动子和海肾荧光素酶报告基因的构建体(pRL-TK,Promega,Madison,WI)作为内部对照。转染后一天，用所述提取物以指定的浓度处理细胞并且以100ng/mL的肿瘤坏死因子-α(TNFα,Sigma-Aldrich,St Louis,MO)刺激细胞大约24小时，然后使其裂解以用于使用购自Promega(Madison,WI)的双荧光素酶报告基因系统，按照生产商的规程进行荧光素酶测定法。简而言之，使用购自Molecular Devices(Sunnyvale,CA)的发光计LMAX，首先测量萤火虫荧光素酶活性（代表NF-κB启动子活性），然后测量海肾荧光素酶（内部对照）。将这两种荧光素酶活性(RLU)的比值用于评价每种启动子的活性。

NF-κB抑制=[1-(RLU_样品/RLU_对照)]×100

其中RLU_样品和RLU_对照分别是所述样品和对照的归一化的荧光素酶活性比率。

对不同量的提取物E3和E5实施了上述的NF-κB抑制测定法。在表2a和2b中报道了所述经过归一化的NF-κB基因报告基因活性和NF-κB抑制百分比。

表2a

表2b

实例7

紫外线诱导的促炎介质释放对重建表皮的抗炎效果

在人表皮等同物上针对局部抗炎活性评估毛泡桐提取物(E3)的效果。表皮等同物(EPI200HCF)，包含正常人表皮角质细胞的多层分化表皮购自MatTek(Ashland,MA)。收到以后，表皮等同物在无氢化可的松的维持培养基中在37℃下孵育24小时。在暴露于太阳紫外线之前（配备1mm SchottWG320滤光器的1000W-Oriel太阳模拟器；施加的紫外线量：70kJ/m²，如在360nm测量），用在70%乙醇/30%丙二醇中的泡桐提取物来局部处理等同物（2mg/cm²）2小时。将等同物在37℃下使用维持培养基孵育24小时，然后使用市售套件(Millipore Corp.,Billerica,MA)对上清液分析IL-8和IL-1α细胞因子释放。

表3

表4

根据上述实例，所述毛泡桐提取物的局部施用能够显著地降低紫外线诱导的炎性介质释放。因此，毛泡桐提取物在施用至皮肤时有望取得有效的抗炎效果。

实例8

反应性氧物质形成在重建表皮中的抑制使用对Martin等，ArchDermatol Res.(2008)300：69-80中方法的改进方法在重建表皮和人表皮细胞系KB中测定紫外线诱导的过氧化氢形成。表皮等同物(EPI 200 HCF)，包含正常人表皮角质细胞的多层分化表皮购自MatTek(Ashland，MA)。收到以后，表皮等同物在无氢化可的松的维持培养基中在37℃下孵育24小时。24小时之后，将组织与5μM的过氧化氢敏感型荧光探针5-(和-6)-氯甲基-2′，7′-二氯二氢-荧光素二乙酯、乙酰基酯(CM-H2DCFDA)(Invitrogen Corp.(Carlsbad，CA))孵育30分钟。在孵育后，清洗所述板以除去过量的探针并且使用70％乙醇/30％丙二醇媒介物中的毛泡桐提取物(E3)局部处理等同物(2mg/cm²)。立即在设为485nm激发波长/530nm发射波长的荧光读板器上阅读所述板以检测基本过氧化物的形成。然后所述板被暴露于紫外线下(配备1mm Schott WG320滤光器的1000W-Oriel太阳模拟器；施加的紫外线量4.2kJ/m²，如在360nm下测量)。在紫外线照射之后60分钟阅读所述板。

表5

根据本实例，毛泡桐提取物的局部施用能够显著地降低重建表皮中紫外线诱导的ROS生成。因此，毛泡桐提取物在施用至皮肤时有望提供保护以防日光照射诱导ROS。

实例9

反应性氧物质形成在人表皮细胞中的抑制

将得自ATCC(ATCC#CCL-17,Manassas,VA)的KB细胞以5000细胞/孔的密度铺板在96孔的组织培养处理板中的补充有10%胎牛血清(Invitrogen Corp.,San Diego,CA)的达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)内。48小时之后，将细胞与5μM的过氧化氢敏感型荧光探针5-(和-6)-氯甲基-2',7'-二氯二氢-荧光素二乙酯、乙酰基酯(CM-H2DCFDA)(Invitrogen Corp.,Carlsbad,CA)孵育30分钟。孵育之后，清洗所述板以除去过量的探针并且加入指定浓度下的毛泡桐提取物(E3)。立即在设为485nm激发波长/530nm发射波长的荧光读板器上阅读所述板以检测基本过氧化物的形成。然后所述板被暴露于紫外线下（配备1mm Schott WG320滤光器的1000W-Oriel太阳模拟器；施加的紫外线量4.2kJ/m²，如在360nm下测量）。在紫外线照射之后60分钟阅读所述板。

表6

根据本实例，使用毛泡桐提取物进行处理能够显著地降低人表皮细胞中紫外线诱导的ROS生成。因此，毛泡桐提取物在施用至皮肤时有望提供保护以防日光照射诱导ROS。

实例10

针对弹性蛋白酶降解的保护

人白细胞弹性蛋白酶(HLE)购自Sigma(St.Louis,Mo.)，并且在1单位/ml的磷酸盐缓冲液(PBS,Invitrogen life Technologies,Carlsbad,CA)中重建。用BODIPY FL染料标示的可溶牛颈韧带弹性蛋白购自MolecularProbes,Inc.(Eugene,OR)，使得该荧光染料在所述缀合物中淬灭，并且可经弹性蛋白酶消化而激活。人白细胞弹性蛋白酶(0.0625U/ml)、弹性蛋白底物(25μg/ml)和浓度递升的测试材料在37℃下孵育两小时。使用来自的Molecular Devices(Sunnyvale,CA)荧光酶标仪Gemini以490nm的激发和520nm的发射测量荧光。底物自身的背景荧光已从每次测量值中减去。在DMSO中以10mg/ml的储液浓度制备毛泡桐提取物(E3)并对其进行系列稀释。如表7所示，毛泡桐提取物以剂量依赖的方式抑制HLE活性。

表7

毛泡桐提取物（剂量，%w/v）	弹性蛋白酶抑制作用(%)
		0	0.0
0.00001%	23.1%
		0.001%	30.2%
0.005%	66.6%
		0.01%	75.5%

0.02%

99.4%

本实例显示，毛泡桐提取物可保护弹性蛋白纤维免于损伤和降解。

实例11

紫外线诱导的MMP诱导的抑制

在来源于正常人表皮角质细胞的表皮等同物中评估了毛泡桐提取物(E3)抑制紫外线诱导的基质金属蛋白酶1和9（MMP-1和-9）的能力。MMP是在细胞外基质的生理性重构和病理性破坏中发挥主要作用的酶家族。众所周知亚红斑剂量(suberythemal dose)的紫外线光照诱导MMP在人皮肤中的分泌，其继而降解了细胞外基质并且在光老化皱纹形成和紧致度和弹性的丧失中发挥重要作用。参见G.J.Fisher等，J Investig Dermatol.SymposiumProceedings.14(1)：20–24（2009）。

为评估毛泡桐提取物抑制紫外线诱导MMP的能力，表皮等同物(EPI200HCF)购自MatTek(Ashland,MA)，其为由正常人表皮角质细胞组成的多层与分化的表皮。收到以后，表皮等同物在无氢化可的松的维持培养基中在37℃下孵育24小时。在暴露于太阳紫外线之前（配备1-mm SchottWG320滤光器的1000W-Oriel太阳模拟器；施加的紫外线量：70kJ/m²，如在360nm测量），用在70%乙醇/30%丙二醇中的泡桐提取物（E3）来局部处理等同物（2mg/cm²）2小时。等同物在37℃下使用维持培养基孵育48小时，然后使用市售的套件(R&D Systems,Minneapolis,MN)针对MMP-1和-9分析上清液。表8中的数据是2组独立实验的平均值，各组实验使用重复的组织进行。

表8

表9

根据上述实例，所述毛泡桐提取物的局部施用能够显著地降低紫外线诱导的MMP-1和-9的释放。因此，毛泡桐提取物在施用至皮肤时有望提供保护以防日光照射诱导MMP-1和-9。

实例12

对TNF-α诱导MMP生成的抑制

为评估毛泡桐提取物(E3)抑制TNF-α诱导的MMP的能力，表皮等同物(EPI200HCF)购自MatTek(Ashland,MA)，其为由正常人表皮角质细胞组成的多层与分化的表皮。收到以后，表皮等同物在无氢化可的松的维持培养基中在37℃下孵育24小时。等同物在使用TNF-α（100ng/m）处理之前使用70%乙醇/30%丙二醇中的毛泡桐提取物(E3)进行局部处理(2mg/cm²)2小时。等同物在37℃下使用维持培养基孵育48小时，然后使用市售的套件(R&D Systems,Minneapolis,MN)针对MMP-1和-9分析上清液。

表10

处理（剂量，以%w/v计)	平均MMP-1释放(ng/ml)	MMP-1生成的抑制百分比
			未处理的	4848.4	-
TNF-α诱导的	7867.2	0%
			TNF-α+毛泡桐1%	7225.2	0.8%
TNF-α+毛泡桐5%	5370.6	31.7%

表11

处理（剂量，以%w/v计)	平均MMP-9释放(ng/ml)	MMP-9生成的抑制百分比
			未处理的	13217.6	-
TNF-α诱导的	42958.6	0%
			TNF-α+毛泡桐1%	35145.3	18.2%
TNF-α+毛泡桐5%	16101.1	62.5%

根据上述实例，所述毛泡桐提取物的局部施用能够显著地降低TNF-α诱导的MMP-1和-9的释放。因此，毛泡桐提取物在施用至皮肤时有望提供保护以防MMP-1和-9的诱导。

实例13

使用小白菊(不含小白菊内酯的小白菊提取物，其来自IntegratedBotanical Technologies，Ossining,NY)实施弹性蛋白原促进剂测定法。

将小白菊稀释于细胞培养基中(DMEM培养基，Invitrogen,San DiegoCA)并且将毛泡桐稀释于DMSO中直至下文表12中指明的“活性”浓度。将这些化合物添加至转染的H9C2细胞，并孵育24小时。将测试样品与各自的对照进行比较。结果示于下表12中。

表12

从表12中示出的结果可以看出，毛泡桐和小白菊在弹性蛋白原促进作用上分别显示出超出各自对照32%和2%的变化百分比。相比之下，毛泡桐与小白菊两者的组合在弹性蛋白原促进作用上显示出超出媒介物对照55%的改善。这比仅一种添加剂的效果表现好得多。

当小白菊的浓度从0.002%升高至0.005%时，观察到相似的协同增强效果。较高浓度的小白菊在弹性蛋白原促进作用上显示出超过媒介物对照2%的变化百分比，而毛泡桐和小白菊的组合在弹性蛋白原促进作用上实现了超过媒介物对照62%的变化百分比。

该数据显示毛泡桐和弹性蛋白原促进剂(小白菊)的组合在弹性蛋白原促进活性上产生了令人惊奇协同性的提高。

实例14

以下护肤组合物使用表13中示出的成份根据本发明而制备。

表13

上述组合物如下制备：在20-40℃的温度下，随着平稳地搅拌将纯化水添加到主罐中。随后将Versene NA（乙二胺四乙酸二钠）加入该主罐。停止对主罐的搅拌并且将Ultrez10（卡波姆）通过均匀覆盖所述水混合物上部的方式加入。所述混合物进行浸泡和搅拌并开始加热。加热所述混合物并维持于55-60℃，并且进一步混合15分钟或直至均匀。

通过向干净的合适相容器中搅拌加入Finsolv TN（C12-15苯甲酸烷基酯）并加热达到55-60℃而制备油相。在达到此温度后，加入Brij72&721（分别为硬脂基聚氧乙烯醚-2、-21）、Miglyol（辛酸/癸酸甘油三酯）、Emery917（甘油）和Penreco雪白（凡士林）并在55-60℃下混合直至添加到主罐中。

将所述油相加入该主罐，同时加强搅拌并停止加热。以高速混合所产生的混合物10-20分钟。在50℃或更低温度下加入聚二甲基硅氧烷（DowCorning硅氧烷流体）。随后将所述批次混合物冷却至40℃并加入Phenonip XB（防腐剂混合物）。进一步混合所述混合物10分钟或直至均匀。快速加入氢氧化钠(目标pH=5.4)并进一步搅拌10分钟或直至达到均一的pH。

通过将乙二醇单乙基醚CG、丁二醇、和公主树提取物加入独立的烧杯并混匀直至均匀而制备活性物预混液。

通过将所述活性物预混液加入所述主罐的主相并进行另外10-20分钟的混合以完全溶解或直至均匀，从而制备最终的制剂。以水制得最终体积，混合所述制剂10分钟并记录pH。

将组合物的样品在50℃烘箱内放置2周，并且其表现出基本的良好稳定性。

实例15

以下护肤组合物使用表14中示出的成份根据本发明而制备。

表14

上述组合物如下制备：将纯化水添加到主罐中，随后添加乙二胺四乙酸二钠并混合直至乙二胺四乙酸溶解。喷入丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP同聚物并且将所产生的混合物加热至70-75℃。达到设定的温度后，加入橄榄油鲸蜡醇酯/橄榄油鲸蜡山梨醇酐酯和硬脂酸，同时在设定温度下搅拌所述混合物5分钟。

通过在独立的容器内将公主树提取物在40-50℃下溶解于丁二醇中来制备活性物预混液。将聚丙烯酸酯13和聚异丁烯和聚山梨酸酯20加入该公主树混合物中并随后混合直至均匀。降低温度至35-40℃并且在一旁放置直至准备好加入所述主罐。

通过在独立容器中将Chlorophehesin加入丁二醇并且加热至35℃，随后加入甲基异噻唑啉酮，从而制备Chlorophehesin预混液。将所产生的混合物加热至50-55℃并维持该温度直至准备好混入主罐。

通过在独立的容器内将环戊硅氧烷与聚二甲基硅氧烷交联聚合物加入环戊硅氧烷和环己硅氧烷，同时进行混合并且加热至55-60℃直至均匀，从而制备油相。随后加入乙基己基甘油并且混合直至均匀，随后加入硬脂酸，同时维持温度在55-60℃。

随后将所述油相缓慢加入该主罐，同时在70-75℃下进行剧烈地搅拌。将聚二甲基硅氧烷醇和聚二甲基硅氧烷加入所述主批量物，并且搅拌所产生的混合物20分钟或直至均匀，此后停止加热。使用氢氧化钠将主pH调节至5.0-5.5。在50-55℃下缓慢加入所述Chlorophenesin相，同时持续搅拌。将该混合物冷却至35-40℃并加入芳香剂、FD&C红和D&C黄，并且混匀，同时维持该温度。

通过将所述活性物预混液缓慢地搅拌加入该主罐而制备最终制剂。对所述混合物再混合10-20分钟直至均匀。以水制得最终体积，混合所述制剂10分钟并记录pH。

实例16

以下基本方法示出了根据本发明的某些实施例通过泡桐属物种对泡桐属木材提取物的制备。

兰考泡桐木得自Paulownia Barn，LLC；Swansea，SC29160作为刨花，或Mount Hope Farms，Haggerstown，MD21740作为新伐的木头。白花泡桐、毛泡桐和台湾泡桐获自Mount Hope Farms（其为新鲜切割的木材）。分别将来自各种木材的十克(10g)干木刨屑悬浮于玻璃容器内，各自使用250mL试剂纯的乙醇，并且在室温下保持72h并对内容物不时加以混合。对所产生的悬浮液进行过滤并在低压下使用旋转蒸发器以30摄氏度干燥该滤过液。以3-5%的产率获得了干燥的粗提取物。

表15

木材名称	提取物样品
		兰考泡桐	E6
白花泡桐	E7
		台湾泡桐	E8
毛泡桐	E9

实例17

下列实例示出了泡桐属物种提取物E6-E9的增亮皮肤特性。

在最高达2%的不同的浓度下（数据示出于表16中）通过以皮肤表皮等效模型作为增亮皮肤测试(ΔL)如上所述测试了全部四组提取物。

利用MTT测定法来测定所有提取物的细胞毒性潜力，计算方式为相对于对照的细胞活力下降百分比，其中≥30%的细胞活力下降表明所述测试材料存在明显的细胞毒性问题。产生的紫色的量与活细胞数成正比。在本实验中，所述提取物中无一在测试浓度下表现出任何显著的细胞活力问题。

表16

来自泡桐属的物种的提取物在3D皮肤模型中的亮肤作用

实例18：泡桐素的分离和鉴定

使用分级和制备HPLC步骤的组合完成从毛泡桐提取物中对主要成分（泡桐素）的分离。获得了170mg的样品，其具有与纯度为>90%的提取物的主信号相同的持留时间和紫外线谱。光谱研究证实其为泡桐素。

实例19

在最高达2%的不同的浓度（数据示出于表17中）下通过以皮肤表皮等效模型作为增亮皮肤测试(ΔL)如上所述测试了泡桐素。

通过MTT测定法如上所述测定潜在细胞毒性。泡桐素在受测浓度下并未表现出任何显著的细胞毒性。

表17

*p-值通过T检验参考检验文献数据以媒介物对照加以计算

实例20

以下实例示出了泡桐属物种提取物E6-E9的NF-κB的抑制特性。

针对提取物E6-E9以及>90%纯度的泡桐素样品实施了上文描述的NF-κB抑制测定法。分别以表18和19中的IC50值报道了它们的NF-κB抑制作用。

表18：泡桐物质抑制NF-κB抑制。

提取物代码	NF-κB抑制，IC50(μg/mL)
		E6	38
E7	<30
		E8	130
E9	47

表19：泡桐素抑制NF-κB抑制

提取物代码	NF-κB抑制，IC50(μg/mL)
		泡桐素	148

实例21

泡桐素富集级分的制备和测试

来自日本泡桐木材提取物的泡桐素富集级分如下制备：

将日本泡桐木粉(1g)溶解于足量的甲醇中并且加样至反相硅胶(2g)。使用水(100%)、水/甲醇(1:1)混合物和甲醇(100%)进行的先后洗脱提供了所述提取物的不同级分。合并使用甲醇(100%)获得的洗脱物并进行干燥以获得富含泡桐素主要成分(>50%)的级分样品。

在最高达0.5%的不同的浓度（数据示出于表20中）下通过以皮肤表皮等效模型作为增亮皮肤测试(ΔL)如上所述测试了所述泡桐素富集级分。通过MTT测定法如上所述测定潜在细胞毒性。泡桐素富集级分在受测浓度下并不表现出显著的细胞毒性。

表20：泡桐富集部分的增亮皮肤

Claims

1.一种增亮皮肤的方法，包括向皮肤施用亮肤有效量的提取物，所述提取物选自泡桐木材提取物、白花泡桐木材提取物、兰考泡桐木材提取物、台湾泡桐木材提取物、以及它们中两种或更多种的组合。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述提取物为极性提取物。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述极性提取物使用一种或多种溶剂提取，所述溶剂包含C₁-C₈醇、C1-C8二醇或它们中两种或更多种的组合。

4.根据权利要求2所述的方法，其中所述极性提取物使用一种或多种溶剂提取，所述溶剂包含乙醇、甲醇或它们的组合。

5.根据权利要求2所述的方法，其中所述极性提取物使用在20℃下具有约4至约60介电常数的溶剂提取。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述提取物为非极性提取物。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述施用步骤包括向需要亮肤处理的皮肤施用大于零至约20%的所述提取物。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述施用步骤包括向需要亮肤处理的皮肤施用约0.01至约5%的所述提取物。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述提取物为泡桐木材极性提取物。

10.根据权利要求8所述的方法，其中所述提取物为泡桐木材极性提取物。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述施用步骤包括施用包含提取物的组合物，所述提取物选自泡桐木材提取物、白花泡桐木材提取物、兰考泡桐木材提取物、以及它们中两种或更多种的组合，并向所述皮肤施用载体，所述组合物为以下形式：溶液、悬浮液、洗剂、霜膏、精华素、凝胶、棒剂、喷剂、油膏剂、洗液、条皂、洗发剂、毛发调理剂、糊剂、泡沫、粉末、摩丝、剃刮膏、水凝胶或成膜产品。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述施用步骤包括将所述组合物从基质转移到所述皮肤。

13.根据权利要求10所述的方法，其中所述基质包括擦拭物或面膜。

14.根据权利要求13所述的方法，其中所述提取物为泡桐木材提取物。

15.根据权利要求1所述的方法，其中所述施用步骤包括向所述皮肤施用组合物，所述组合物包含泡桐木材提取物和附加的亮肤活性剂。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述附加的亮肤剂选自苯乙基间苯二酚、4-己基间苯二酚、α-熊果苷、曲酸、Nivitol、抗坏血酸-2-葡糖苷、大豆提取物、烟酰胺、以及它们中两种或更多种的组合。

17.一种增亮皮肤的方法，所述方法包括向皮肤施用亮肤有效量的泡桐素。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述施用步骤包括施用包含约0.001%至约10%泡桐素的组合物，并向所述皮肤施用载体，所述组合物为以下形式：溶液、悬浮液、洗剂、霜膏、精华素、凝胶、棒剂、喷剂、油膏剂、洗液、条皂、洗发剂、毛发调理剂、糊剂、泡沫、粉末、摩丝、剃刮膏、水凝胶或成膜产品。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述组合物包含约0.01%至约1%的泡桐素，所述泡桐素被施用到需要亮肤处理的皮肤。

20.根据权利要求18所述的方法，其中所述施用步骤包括将所述组合物从基质转移到所述皮肤，并且其中所述基质包括擦拭物或面膜。

21.根据权利要求17所述的方法，其中所述施用步骤包括向所述皮肤施用包含泡桐素和附加的亮肤活性剂的组合物。

22.根据权利要求21所述的方法，其中所述附加的亮肤剂选自苯乙基间苯二酚、4-己基间苯二酚、α-熊果苷、曲酸、Nivitol、抗坏血酸-2-葡糖苷、大豆提取物、烟酰胺、以及它们中两种或更多种的组合。