CN103159846B - Hmg粗品的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种HMG粗品的制备方法。HMG粗品的制备方法，包括下述的步骤：a.收集绝经期妇女尿液，过滤，乙酸调pH值，静置后除去沉淀；b.在尿液中加入硅胶搅拌，静置；c.取上清液，干燥沉淀；d.将沉淀置于洗脱柱中，用丙酮和无水乙酸钠洗脱；e.在洗脱液加入丙酮，静置8小时；f.取出上清液，回收复新，将沉淀用无水乙醇洗涤两次，真空干燥，得成品HMG粗品。采用以上的方法制备HMG粗品，和传统的HMG粗品的制备方法相比，其成本低，不需要采用高岭土、珍珠盐，还不需要采用压滤机，节约了成本；步骤简单，不需要采用超滤的步骤，简化了步骤。
Description
技术领域
本发明属于技术生物医药技术领域，具体涉及一种HMG粗品的制备方法。
背景技术
人绝经期促性腺激素(human menopausal gonadotropin，HMG)是由绝经期妇女尿中提取的物质，含有FSH和LH，其促卵泡发育的作用主要是FSH。人绒毛膜促性腺激素(human chorionic，gonadotropin，HGG)是妊娠妇女尿中提取的物质，可使成熟卵泡排卵，或用于HMG疗法后的黄体支持疗法。
现有的HMG的制备方法是：取绝经期的妇女尿液，在尿液中加入高岭土，再采用压滤机压饼，同时加入氨水，脱出有效成分液体，液体再进入超滤机，超滤到原体积的15%，再加入丙酮溶液沉淀，有效成分沉淀下来，沉淀置于离心机离心，再真空干燥，得到成品HMG。以上的方法中所采用的高岭土其价格昂贵，因此导致HMG的生产成本较高，在以上的方法时，有时会采用珍珠盐作为助滤剂，其成本也较高；另外以上的方法其缺点于，压滤机的成本较高。
因此需要针对以上的方法进行改进，降低HMG的生产成本。
发明内容
为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种成本低、步骤简单、易于工业化生产的HMG粗品的制备的方法。
HMG粗品的制备方法，包括下述的步骤：
a.收集绝经期妇女尿液，采用40目滤网过滤，用乙酸调pH值到3.8-4.0，静置3-5小时后除去沉淀；
b.在步骤a中除去沉淀后的尿液中加入硅胶，所述的硅胶的加入量为尿液重的0.6-1.5%，搅拌1.5-3小时，静置0.5-1.5小时；
c.取上清液，干燥沉淀；
d.将沉淀置于洗脱柱中，用40-60%的丙酮和1/20-1/10mol的无水乙酸钠洗脱；
e.在洗脱液中加入丙酮，至丙酮的浓度达到65-80%之间，在4-10℃的温度区间静置6-10小时；
f.取出上清液，回收，将沉淀用无水乙醇洗涤，真空干燥，得HMG的粗品。
优选的，步骤d中，洗脱的条件为：洗脱柱高1米，上样60cm，每吨尿液的洗脱柱粗横截面为0.042m2，洗脱时间为1.5-2.5小时，洗脱完毕，每吨尿液每小时流洗脱液9-11L。
更优选的，步骤d中，洗脱的条件为：洗脱柱高1米，上样60cm，每吨尿液的洗脱柱粗横截面为0.042m2，洗脱时间为2小时，洗脱完毕，每吨尿液每小时流洗脱液10L。
优选的，步骤e中，在洗脱液加入丙酮至丙酮的浓度达到70%，在4-10℃的温度区间静置8小时。
步骤a中，绝经期妇女尿液中，不得检出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab。
步骤a中，成品HMG粗品中不得检出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab。
步骤b中采用的硅胶为经处理的硅胶，其处理步骤是：将硅胶用纯净水洗至pH 7，然后置于6mol/L盐酸内浸泡2小时，最后再用纯净水将硅胶洗至pH值4-6，采用该方法处理过的硅胶，其吸附能力更强。
优选的，HMG粗品的制备方法，包括下述的步骤：
a.收集绝经期妇女尿液，采用40目滤网过滤，用乙酸调pH值到3.9，静置4小时后除去沉淀；
b.在步骤a中除去沉淀后的尿液中加入硅胶，硅胶的加入量为尿液重的1%，搅拌2小时，静置1小时，以上的硅胶为经处理的硅胶，其处理步骤是：将硅胶用纯净水洗至pH 7，然后置于6mol/L盐酸内浸泡2小时，最后再用纯净水将硅胶洗至pH值4-6；
c.取上清液，干燥沉淀；
d.将沉淀置于洗脱柱中，用50%的丙酮和1/15mol的无水乙酸钠洗脱；
e.在洗脱液中加入丙酮，至丙酮的浓度达到70%之间，在4℃下静置8小时；
f.取出上清液，回收，将沉淀用无水乙醇洗涤，真空干燥，得HMG的粗品。
本发明的有益效果在于，采用以上的方法制备HMG粗品，和传统的HMG粗品的制备方法相比，其成本低，不需要采用高岭土、珍珠盐，还不需要采用压滤机，节约了成本；步骤简单，不需要采用超滤的步骤，简化了步骤。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本发明，但并不因此限制本发明。
实施例1
HMG粗品的制备方法，包括下述的步骤：
a.收集绝经期妇女尿液，绝经期妇女尿液中，未检出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab，采用40目滤网过滤，用浓度为50%的乙酸调pH值到3.8，静置4小时后除去沉淀；
b.在步骤a中除去沉淀后的尿液中加入硅胶，硅胶的加入量为尿液重的1%，搅拌2小时，静置1小时，以上的硅胶，将使用过的硅胶用纯净水洗至pH 7，然后置于6mol/L盐酸内浸泡2小时，最后再用纯净水将硅胶洗至pH值5的硅胶，将硅胶酸化，达到该pH值时，硅胶的吸附能力最强；
c.取上清液，干燥沉淀；
d.将沉淀置于洗脱柱中，用50%的丙酮和1/15mol的无水乙酸钠洗脱，洗脱的条件为：洗脱柱高1米，上样60cm，每吨尿液的洗脱柱粗横截面为0.042m2，洗脱时间为2小时，洗脱完毕，每吨尿液每小时流洗脱液10L；
e.在洗脱液中加入丙酮至丙酮的浓度达到70%左右，在4℃下静置8小时；
f.取出上清液，回收，将沉淀用无水乙醇洗涤两次，真空干燥，得HMG的粗品，经检测成品HMG粗品中未检出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab。
采用以上的实施例中的方法制备HMG粗品，其实验结果如下：
对比例
收集绝经期妇女尿液，绝经期妇女尿液中，未检出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab，采用40目滤网过滤，在尿液中加入占尿液总重为0.7%的高岭土吸附，加助滤剂0.2%的珍珠盐，吸附时间为2小时，沉淀，再采用压滤机压滤，将废液排出，有效活性成分被吸附在高岭滤饼中，将滤饼置于1mol的氨水中，氨水的用量为40升/吨原尿液，搅拌均匀，搅拌2小时，沉淀1小时，再通过压滤机压滤，活性成分通过压滤出的液体排出，该液体再经过微滤，超滤，超滤至原液体的15%，再置于丙酮中沉淀，干燥得粗品HMG。
从以上表格中的数据可以看出：本发明的实施例1中的粗品比活稍高于对比例中的粗品比活，但是本发明实施例1中的粗品其生产成本要大大降低，每50克粗品的生产成本降低了18%左右，而且其生产的时间要减少将近一半，大大提高了生产效率。
实施例2
HMG粗品的制备方法，包括下述的步骤：
a.收集绝经期妇女尿液，绝经期妇女尿液中，未检出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab，采用40目滤网过滤，用浓度为50%的乙酸调pH值到3.9，静置4小时后除去沉淀；
b.在步骤a中除去沉淀后的尿液中加入硅胶，所述的硅胶的加入量为尿液重的1%，搅拌2小时，静置1小时，以上的硅胶为经处理的硅胶，其处理步骤是：将硅胶用纯净水洗至pH 7，然后置于6mol/L盐酸内浸泡2小时，最后再用纯净水将硅胶洗至pH值4；
c.取上清液，干燥沉淀；
d.将沉淀置于洗脱柱中，用50%的丙酮和1/15mol的无水乙酸钠洗脱，洗脱的条件为：洗脱柱高1米，上样60cm，每吨尿液的洗脱柱粗横截面为0.042m2，洗脱时间为1.5小时，洗脱完毕，每吨尿液每小时流洗脱液9L；
e.在洗脱液中加入丙酮至丙酮的浓度达到70%左右，在4℃下静置8小时；
f.取出上清液，回收，将沉淀用无水乙醇洗涤两次，真空干燥，得HMG的粗品，经检测成品HMG粗品中未检出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab。
实施例3
HMG粗品的制备方法，包括下述的步骤：
a.收集绝经期妇女尿液，绝经期妇女尿液中，未检出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab，采用40目滤网过滤，用浓度为50%的乙酸调pH值到4.0，静置4小时后除去沉淀；
b.在步骤a中除去沉淀后的尿液中加入硅胶，所述的硅胶的加入量为尿液重的1%，搅拌2小时，静置1小时，以上的硅胶为经处理的硅胶，其处理步骤是：将硅胶用纯净水洗至pH 7，然后置于6mol/L盐酸内浸泡2小时，最后再用纯净水将硅胶洗至pH值6；
c.取上清液，干燥沉淀；
d.将沉淀置于洗脱柱中，用50%的丙酮和1/15mol的无水乙酸钠洗脱，洗脱的条件为：洗脱柱高1米，上样60cm，每吨尿液的洗脱柱粗横截面为0.042m2，洗脱时间为2.5小时，洗脱完毕，每吨尿液每小时流洗脱液11L；
e.在洗脱液中加入丙酮至丙酮的浓度达到70%左右，在4℃下静置10小时；
f.取出上清液，回收，将沉淀用无水乙醇洗涤两次，真空干燥，得HMG的粗品，经检测成品HMG粗品中未检出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab。
实施例4
a.收集绝经期妇女尿液，绝经期妇女尿液中，未检出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab，采用40目滤网过滤，采用40目滤网过滤，用乙酸调pH值到3.9，静置4小时后除去沉淀；
b.在步骤a中除去沉淀后的尿液中加入硅胶，所述的硅胶的加入量为尿液重的1%，搅拌2小时，静置1小时，以上的硅胶为经处理的硅胶，其处理步骤是：将硅胶用纯净水洗至pH 7，然后置于6mol/L盐酸内浸泡2小时，最后再用纯净水将硅胶洗至pH值5；
c.取上清液，干燥沉淀；
d.将沉淀置于洗脱柱中，用50%的丙酮和1/12mol的无水乙酸钠洗脱，洗脱的条件为：洗脱柱高1米，上样60cm，每吨尿液的洗脱柱粗横截面为0.042m2，洗脱时间为2小时，洗脱完毕，每吨尿液每小时流洗脱液10L；
e.在洗脱液中加入丙酮，至丙酮的浓度达到70%之间，在4℃下静置8小时；
f.取出上清液，回收，将沉淀用无水乙醇洗涤，真空干燥，得HMG的粗品。
Claims (7)
1.HMG 粗品的制备方法，包括下述的步骤：
a. 收集绝经期妇女尿液，采用40 目滤网过滤，用乙酸调pH 值到3.8-4.0，静置3-5 小时后除去沉淀；
b. 在步骤a 中除去沉淀后的尿液中加入硅胶，所述的硅胶的加入量为尿液重的0.6-1.5%，搅拌1.5-3 小时，静置0.5-1.5 小时；
所述的步骤b 中采用的硅胶为经处理的硅胶，其处理步骤是：将硅胶用纯净水洗至pH 7，然后置于6mol/L 盐酸内浸泡2小时，最后再用纯净水将硅胶洗至pH 值4-6；
c. 取上清液，干燥沉淀；
d. 将沉淀置于洗脱柱中，用40-60% 的丙酮和1/20-1/10M 的无水乙酸钠洗脱；
e. 在洗脱液中加入丙酮，至丙酮的浓度达到65-80% 之间，在4-10℃的温度区间静置6-10 小时；
f. 取出上清液，回收，将沉淀用无水乙醇洗涤，真空干燥，得HMG 的粗品。
2.如权利要求1 所述的HMG 粗品的制备方法，其特征在于，所述的步骤d 中，洗脱的条件为：洗脱柱高1 米，上样60cm，每吨尿液的洗脱柱粗横截面为0.042m2，洗脱时间为1.5-2.5 小时，洗脱完毕，每吨尿液每小时流洗脱液9-11L。
3.如权利要求1 所述的HMG 粗品的制备方法，其特征在于，所述的步骤d 中，洗脱的条件为：洗脱柱高1 米，上样60cm，每吨尿液的洗脱柱粗横截面为0.042m2，洗脱时间为2 小时，洗脱完毕，每吨尿液每小时流洗脱液10L。
4.如权利要求1 所述的HMG 粗品的制备方法，其特征在于，所述的步骤e 中，在洗脱液中加入丙酮至丙酮的浓度达到70%，在4-10℃的温度区间静置8 小时。
5.如权利要求1 所述的HMG 粗品的制备方法，其特征在于，所述的步骤a 中，所述的绝经期妇女尿液中，不得检出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab。
6.如权利要求1 所述的HMG 粗品的制备方法，其特征在于，所述的步骤f 中，所述的HMG 粗品中不得检出艾滋病毒、乙肝病毒HBs-Ab、HBc-Ab、Hbe-Ab。
7.如权利要求1 所述的HMG 粗品的制备方法，包括下述的步骤：
a. 收集绝经期妇女尿液，采用40 目滤网过滤，用乙酸调pH 值到3.9，静置4 小时后除去沉淀；
b. 在步骤a 中除去沉淀后的尿液中加入硅胶，所述的硅胶的加入量为尿液重的1%，搅拌2 小时，静置1 小时，硅胶为经处理的硅胶，其处理步骤是：将硅胶用纯净水洗至pH 7，然后置于6mol/L 盐酸内浸泡2 小时，最后再用纯净水将硅胶洗至pH 值4-6 ；
c. 取上清液，干燥沉淀；
d. 将沉淀置于洗脱柱中，用50% 的丙酮和1/15M的无水乙酸钠洗脱；
e. 在洗脱液中加入丙酮，至丙酮的浓度达到70% 之间，在4℃下静置8 小时；
f. 取出上清液，回收，将沉淀用无水乙醇洗涤，真空干燥，得HMG 的粗品。
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| 一种新型硅酸铝吸附剂提取绝经期妇女尿促性腺激素;顾华庆;《药物生物技术》;19971231;第4卷(第1期);第56-58页 * |
| 人尿促性腺激素生产新工艺研究;阎家麒;《中国生化药物杂志》;19921231(第2期);第34-36页 * |
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Denomination of invention: Preparation of crude HMG Effective date of registration: 20210625 Granted publication date: 20150422 Pledgee: Jinxiang County sub branch of Postal Savings Bank of China Ltd. Pledgor: Shandong Bohai Biological Products Co.,Ltd. Registration number: Y2021980005330 |
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