CN105085700A - 一种从桑叶中提取分离及纯化多糖的方法 - Google Patents

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李翠清
阴新负
彭晓明
王腾
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Abstract

本发明公开了一种从桑叶中提取分离及纯化多糖的方法，所述方法采用超声辅助法提取桑叶多糖，提取液浓缩后进行醇沉，将沉淀真空干燥得到桑叶粗多糖，采用蒽酮-硫酸法测定多糖含量，经测定产品中多糖的含量在15mg/g以上；通过响应面优化分析得到桑叶多糖的最佳提取工艺条件，桑叶多糖粗提液经三氯乙酸法除蛋白，并用大孔树脂法对多糖进行分离纯化，干燥得到桑叶多糖产品。该方法能得到高纯度多糖，且工艺简单易操作，产品得率高，安全并绿色环保，适合于工业化生产。

Description

一种从桑叶中提取分离及纯化多糖的方法
技术领域
本发明涉及天然产物提取活性成分的技术领域，尤其涉及一种从桑叶中提取分离及纯化多糖的方法。
背景技术
桑为桑科桑属植物，最早记录于《诗经》中，又名铁扇子。桑树在我国的历史非常悠久，自远祖人类出现养蚕以来，就存在桑树的栽培。桑叶拥有降血糖、降血脂及抗病毒等药理活性作用，为国家卫生部公布的药食两用产品，入药最早记录于《神农本草经》。桑叶中具有药理活性的成分主要是多糖、生物碱和黄酮。21世纪以来，糖尿病、癌症等疾病对人类产生巨大威胁，科学家针对桑叶降血糖、降血脂、抗病毒等生物活性进行了深入研究，对其有效成分和作用机理都已有一定的研究进展。
现有技术中关于桑叶多糖提取的方法较多，但现有技术的方法在桑叶多糖提取后，对桑叶进行测定优化以获得最优提取工艺条件的方法较少，造成所提取的多糖纯度不高。
发明内容
本发明的目的是提供一种从桑叶中提取分离及纯化多糖的方法,该方法能得到高纯度多糖，且工艺简单易操作，产品得率高，安全并绿色环保，适合于工业化生产。
一种从桑叶中提取分离及纯化多糖的方法，所述方法包括：
步骤1：在料液比为1:5～1:20，超声功率为150～500W，超声时间为10～100min以及超声温度为35～85℃的条件下，用去离子水对桑叶进行多次回流提取；
步骤2：收集合并多次回流提取得到的提取液，并将该提取液过滤后得到滤液，将所述滤液减压浓缩至1/5～1/4体积，得到多糖浓缩液；
步骤3：在所述多糖浓缩液中加入1～6倍体积的75％～95％的乙醇，醇沉多糖，并静置12h，过滤得到沉淀物；
步骤4：将所述沉淀物进行真空干燥，得到多糖粗产品；
步骤5：采用蒽酮‐硫酸法测定所述多糖粗产品在620nm处的吸光度，并以多糖提取量为考察指标，设定得到的多糖粗产品中多糖的含量在15mg/g以上；
步骤6：根据测定结果，采用响应面分析优化得到所述桑叶的最佳提取工艺条件；
步骤7：在所述多糖粗产品中加入质量浓度为1％～10％的三氯乙酸溶液，调整pH值为2.0～6.0，并静置过夜，以1000～4000r/min的速率离心分离5～30min，弃去沉淀，除去蛋白质后，得到多糖上清液；
步骤8：对所述多糖上清液利用大孔树脂法进行纯化，除去色素，经干燥后得到桑叶多糖产品。
由上述本发明提供的技术方案可以看出，该方法能得到高纯度多糖，且工艺简单易操作，产品得率高，安全并绿色环保，适合于工业化生产。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域的普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他附图。
图1为本发明实施例所提供从桑叶中提取分离及纯化多糖的方法流程示意图。
具体实施方式
下面结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。
下面将结合附图对本发明实施例作进一步地详细描述，如图1所示为本发明实施例所提供从桑叶中提取分离及纯化多糖的方法流程示意图，所述方法包括：
步骤1：在料液比为1:5～1:20，超声功率为150～500W，超声时间为10～100min以及超声温度为35～85℃的条件下，用去离子水对桑叶进行多次回流提取；
步骤2：收集合并多次回流提取得到的提取液，并将该提取液过滤后得到滤液，将所述滤液减压浓缩至1/5～1/4体积，得到多糖浓缩液；
步骤3：在所述多糖浓缩液中加入1～6倍体积的75％～95％的乙醇，醇沉多糖，并静置12h，过滤得到沉淀物；
在该步骤中，优选的可加入4倍体积的乙醇进行醇沉多糖，且所述乙醇的浓度优选为95％。
步骤4：将所述沉淀物进行真空干燥，得到多糖粗产品；
步骤5：采用蒽酮‐硫酸法测定所述多糖粗产品在620nm处的吸光度，并以多糖提取量(mg/g)为考察指标，设定得到的多糖粗产品中多糖的含量在15mg/g以上；
步骤6：根据测定结果，采用响应面分析优化得到所述桑叶的最佳提取工艺条件；
具体实现中,最佳提取工艺条件可以为料液比1:15.86，超声功率为484.5W，超声时间为58.2min以及超声温度为65℃，在此条件下多糖提取率为22.76mg/g。
步骤7：在所述多糖粗产品中加入质量浓度为1％～10％的三氯乙酸溶液，调整pH值为2.0～6.0，并静置过夜，以1000～4000r/min的速率离心分离5～30min，弃去沉淀，除去蛋白质后，得到多糖上清液；
在该步骤中，所加入的三氯乙酸溶液的质量浓度优选为5％。
进一步的，调整pH值优选为4.0；且离心分离的转速优选为3000r/min。
步骤8：对所述多糖上清液利用大孔树脂法进行纯化，除去色素，经干燥后得到桑叶多糖产品。
在该步骤中，纯化所用的大孔树脂为D152型树脂。
下面结合具体实施对本发明所述方法进行详细说明，但本发明方法不限于这些实施例：
实施例1、称取桑叶粉末100g，用4倍体积的95％乙醇浸泡过夜，加入适量去离子水，50℃下80％乙醇冷凝回流提取4小时，抽滤，弃掉滤液，收集滤渣置于空气中自然干燥，备用；
将预处理的桑叶置于超声反应器中，以去离子水为提取溶剂，在液料比为16:1，超声温度为55℃，超声时间为80min，超声功率为450W的条件下回流提取两次；
合并提取液并进行减压浓缩，多糖浓缩液中加入5％的三氯乙酸溶液，调整pH为4.0，以3000r/min的速率离心分离20min，弃去沉淀，除去蛋白质，得到多糖上清液；
上清液经大孔树脂法对其进行纯化，除去色素，经干燥得到桑叶多糖产品。
该多糖产品用蒽酮‐硫酸法测定620nm处吸光度，得到的多糖含量为17.48mg/g。
实施例2、称取桑叶粉末100g，用4倍体积的95％乙醇浸泡过夜，加入适量去离子水，50℃下80％乙醇冷凝回流提取4小时，抽滤，弃掉滤液，收集滤渣置于空气中自然干燥，备用；
将预处理的桑叶置于超声反应器中，以去离子水为提取溶剂，在液料比为16:1，超声温度为55℃，超声时间为60min，超声功率为500W的条件下回流提取两次；
合并提取液并进行减压浓缩，多糖浓缩液中加入5％的三氯乙酸溶液，调整pH为4.0，以3000r/min的速率离心分离20min，弃去沉淀，除去蛋白质，得到多糖上清液；
上清液经大孔树脂法对其进行纯化，除去色素，经干燥得到桑叶多糖产品。
该多糖产品用蒽酮‐硫酸法测定620nm处吸光度，得到的多糖含量为20.13mg/g。
实施例3、称取桑叶粉末100g，用4倍体积的95％乙醇浸泡过夜，加入适量去离子水，50℃下80％乙醇冷凝回流提取4小时，抽滤，弃掉滤液，收集滤渣置于空气中自然干燥，备用；
将预处理的桑叶置于超声反应器中，以去离子水为提取溶剂，在液料比为14:1，超声温度为65℃，超声时间为60min，超声功率为500W的条件下回流提取两次；
合并提取液并进行减压浓缩，多糖浓缩液中加入5％的三氯乙酸溶液，调整pH为4.0，以3000r/min的速率离心分离20min，弃去沉淀，除去蛋白质，得到多糖上清液；
上清液经大孔树脂法对其进行纯化，除去色素，经干燥得到桑叶多糖产品。
该多糖产品用蒽酮‐硫酸法测定620nm处吸光度，得到的多糖含量为21.05mg/g。
综上所述，本发明实施例所提供的方法具有如下优点：
1)对超声温度、超声时间、料液比、超声功率等因素进行了响应面优化组合分析，实验多糖提取率的最大化；
2)在多糖粗提液纯化过程中所用的大孔树脂可活化再生，生产成本低，本发明工艺简单，绿色、无毒且环保，适于工业化推广。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书的保护范围为准。

Claims (4)

1.一种从桑叶中提取分离及纯化多糖的方法，其特征在于，所述方法包括：
步骤1：在料液比为1:5～1:20，超声功率为150～500W，超声时间为10～100min以及超声温度为35～85℃的条件下，用去离子水对桑叶进行多次回流提取；
步骤2：收集合并多次回流提取得到的提取液，并将该提取液过滤后得到滤液，将所述滤液减压浓缩至1/5～1/4体积，得到多糖浓缩液；
步骤3：在所述多糖浓缩液中加入1～6倍体积的75％～95％的乙醇，醇沉多糖，并静置12h，过滤得到沉淀物；
步骤4：将所述沉淀物进行真空干燥，得到多糖粗产品；
步骤5：采用蒽酮‐硫酸法测定所述多糖粗产品在620nm处的吸光度，并以多糖提取量为考察指标，设定得到的多糖粗产品中多糖的含量在15mg/g以上；
步骤6：根据测定结果，采用响应面分析优化得到所述桑叶的最佳提取工艺条件；
步骤7：在所述多糖粗产品中加入质量浓度为1％～10％的三氯乙酸溶液，调整pH值为2.0～6.0，并静置过夜，以1000～4000r/min的速率离心分离5～30min，弃去沉淀，除去蛋白质后，得到多糖上清液；
步骤8：对所述多糖上清液利用大孔树脂法进行纯化，除去色素，经干燥后得到桑叶多糖产品。
2.根据权利要求1所述从桑叶中提取分离及纯化多糖的方法，其特征在于，
在所述步骤3中，优选的加入4倍体积的乙醇进行醇沉多糖，且所述乙醇的浓度优选为95％。
3.根据权利要求1所述从桑叶中提取分离及纯化多糖的方法，其特征在于，在所述步骤7中：
所加入的三氯乙酸溶液的质量浓度优选为5％；
调整pH值优选为4.0；
离心分离的转速优选为3000r/min。
4.根据权利要求1所述从桑叶中提取分离及纯化多糖的方法，其特征在于，
在所述步骤8中，纯化所用的大孔树脂为D152型树脂。
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