CN102807595A - 一种从淫羊藿属植物制备高含量(98％)淫羊藿甙的技术 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种从淫羊藿属植物中制备含量大于98％的淫羊藿甙的方法。它是将淫羊藿叶子粉碎过目，从淫羊藿中提取淫羊藿甙，利用极性或者弱极性的大孔树脂进行初分离，利用溶剂处理法对粗分离淫羊藿甙进行纯化，利用溶剂处理法对初结晶物进行重结晶处理；该发明的技术优势在于：a)联合使用大孔树脂和有机溶剂纯化法相结合，使产品的回收率和纯度都有明显的提高。b)简化生产工艺，缩短生产周期，使生产成本有所降低。c)使用了无毒无害的有机溶剂，大大降低了产品中有毒有害溶剂的残留量，提高了产品的品质。

Description

一种从淫羊藿属植物制备高含量(98%)淫羊藿甙的技术

技术领域

本发明涉及一种从淫羊藿属植物中制备含量大于98％的淫羊藿甙的方法。

背景技术

淫羊藿属小檗科植物心叶淫羊藿(Epimedium brevicornum Maxim.)、箭叶淫羊藿(Epimedium sagittatum Maxim.)、柔毛淫羊藿(Epimediumpubescens Maxim.)、或朝鲜淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai)的干燥茎叶。淫羊藿主要含有主要含黄酮类化合物、木脂素、生物碱、挥发油等，其中黄酮类主要包括淫羊藿甙(icariin)、淫羊藿次甙(icarisoside)等，；朝鲜淫羊藿含淫羊藿甙、淫羊藿新甙(epimedoside)A、B、C、D、E等；箭叶淫羊藿含淫羊藿甙、脱水淫羊藿甙元-3-O-α-鼠李糖甙，淫羊藿甙元-3-O-α-鼠李糖甙，槲皮素等。目前主要研究内容是分离纯化淫羊藿甙的工艺，淫羊藿甙主要用于改善心脑血管系统功能、增强机体免疫能力、促进DNA合成及预防和治疗性功能障碍等，淫羊藿甙还有抗衰老和抗肿瘤作用。

目前，淫羊藿甙提取方法主要有水提醇沉、醇提水沉、酶法提取、超声波提取、微波助提等，纯化方法有絮凝剂纯化法、大孔树脂联合纯化法、硅胶层析柱纯化法、聚酰胺层析纯化法等。但是现有工艺生产的产品存在以下几个问题：产品含量普遍偏低、产品生产成本较高、产品有毒有机溶剂残留量较高、提纯步骤冗长、生产周期长、生产工艺对环境污染较严重。

中国专利文献公开的“一种制备高纯度淫羊藿甙的方法”(申请号：01120115)，其特征在于：它是采用高速逆流色谱(HSCCC)法从淫羊藿粗提物中制备高纯度的淫羊藿甙，其溶剂体系由A、B、C三个组分组成，A组分可以为氯仿，二氯甲烷，四氯化碳，1，2-二氯乙烷等氯代物；B组分可以为甲醇，乙醇，乙腈，丙酮等；C组分为水，体积比依次为2-6∶1-5∶1-4。

“从淫羊藿中提取分离淫羊藿苷及总黄酮的方法”(申请号：200810196890)，其特征在于包括如下步骤：a.将淫羊藿药材加至逆流提取罐内，再将20-40％乙醇缓慢倒入提取罐中，乙醇用量为淫羊藿重量的10-30倍，提取2-4次，每次1-1.5小时；每次按5L/kg药材量添加新的溶剂；b.合并上述数次提取液，以离心机分离；收集上清液；c.以孔径为0.02-0.1μm的微滤膜除沉过滤，跨膜压力为0.1-0.3Mpa，料液温度为30-60度，得透过液；d.将所得透过液通过截留分子量为1000-50000的超滤膜分离，跨膜压力0.5-1Mpa，料液温度30-50℃，得超滤液；e.将所得超滤液以截留分子量为200-500的纳滤膜处理，跨膜压力为1-2Mpa，料液温度30-50℃，得截留液；f.将截留液干燥，干燥温度60℃以下，干燥物水份≤5.0％，干燥物即为淫羊藿有效成分富集物。

发明内容

本发明的目的是为从淫羊藿属植物中制备高含量(98％)淫羊藿甙开发一种新工艺，以便解决目前市场上生产该产品的技术中所存在的问题，以便得到高回收率和高含量的淫羊藿甙产品。

本发明的目的主要通过以下技术过程来实现：

具体步骤如下：

1)从淫羊藿中提取淫羊藿甙：将淫羊藿叶子粉碎过10目，加其重量12-15倍量的含水有机溶剂(Ⅰ)加热回流提取三次，每次提取1.5小时，过滤提取液，用含水有机溶剂(Ⅰ)洗涤提取渣，合并提取液及洗涤液，减压浓缩至一定的比重，就得到淫羊藿甙的粗提液；上述含水有机溶剂(Ⅰ)中有机溶剂的含量为40-95v％；上述有机溶剂包括：甲醇、乙醇、甘油、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯；

2)粗分离淫羊藿甙：利用极性或者弱极性的大孔树脂进行初分离。将非离子型的极性或者弱极性大孔网状吸附树脂置于乙醇中浸泡24小时，然后用乙醇、去离子水依次冲洗树脂；将经过上述过程活化过的树脂，用重力沉降法装柱；将过程1)中得到的粗提液经过滤后，清夜上样，在采用含水有机溶剂(Ⅱ)对大孔树脂进行洗脱，分段收集，用HPLC法检测洗脱过程，在270nm直到检测不出淫羊藿甙；减压浓缩收集的各部分洗脱液，就得到粗分离的淫羊藿甙产物；上述含水有机溶剂(Ⅱ)中有机溶剂的含量为20-90v％；上述含水有机溶剂(Ⅱ)中的有机溶剂包括：甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇；

3)纯化粗分离淫羊藿甙：利用溶剂处理法对粗分离淫羊藿甙进行纯化。将过程2)得到的粗分离的淫羊藿甙产物，用含水有机溶剂(Ⅲ)加热溶解，过滤，不溶物再用含水有机溶剂(Ⅲ)加热溶解一次，合并两次过滤液，减压浓缩至含有机溶剂至一定浓度，静置，放凉，析晶，过滤结晶物，用有机溶剂(Ⅳ)洗涤结晶物；上述含水有机溶剂(Ⅲ)中有机溶剂的含量为30-90v％；上述含水有机溶剂(Ⅲ)中有机溶剂包括：甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇；上述有机溶剂(Ⅳ)包括：甲醇、乙醇、丙酮；

4)重结晶处理：利用溶剂处理法对初结晶物进行重结晶处理。将过程3)得到的初结晶物，用含水有机溶剂(Ⅴ)加热回流溶解，过滤，清夜浓缩至一定的浓度，静置，结晶，过滤结晶物，再用含水有机溶剂(Ⅵ)对结晶物加热溶解，过滤，过滤液静置，结晶，过滤结晶物，就得到含量大于98％的淫羊藿甙产物；上述含水有机溶剂(Ⅴ)中有机溶剂含量为50-90v％；上述含水有机溶剂(Ⅴ)中有机溶剂包括：甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇；上述含水有机溶剂(Ⅵ)中有机溶剂含量为70-95v％；上述含水有机溶剂(Ⅵ)中有机溶剂包括：甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇；

所述步骤1)中淫羊藿属植物包括心叶淫羊藿、柔毛淫羊藿、朝鲜淫羊藿和巫山淫羊藿。

所述步骤2)中所用的大孔网状吸附树脂包括聚丙乙烯树脂、聚苯乙烯树脂、聚甲基丙烯酸酯树脂、丙烯酰胺与苯乙烯共聚物树脂。

所述步骤3)、过程4)中有机溶剂的用量为15-30倍量；

所述步骤3)、过程4)中静置，析晶时间为24-48小时。

该发明所述说的一种从淫羊藿属植物制备高含量(98％)淫羊藿甙的技术优势在于：

a)联合使用大孔树脂和有机溶剂纯化法相结合，使产品的回收率和纯度都有明显的提高。

b)简化生产工艺，缩短生产周期，使生产成本有所降低。

c)使用了无毒无害的有机溶剂，大大降低了产品中有毒有害溶剂的残留量，提高了产品的品质。

附图说明

图1为粗分离淫羊藿甙产物的HPLC分析图谱

图2为初结晶淫羊藿甙产物的HPLC分析图谱

图3为重结晶淫羊藿甙产物(98％)的HPLC分析图谱

具体实施实例

实例1：

1)提取：将200g淫羊藿甙含量为0.6％原料经过粉碎，放入3000ml三角瓶中，加入2000ml、70％含水乙醇溶液，提取三次，一次1.5H/次，合并三次提取液，减压浓缩至d＝1.08(比重)，约300ml，加去离子水稀释至500ml，静置、放凉、过滤，清夜490ml待用，经HPLC检测，清夜中淫羊藿甙的浓度为2.4mg/ml，有效成分回收率为98％。

2)粗分离：将1)中待用的490ml清夜上样于经过处理的200g大孔树脂HPD-100(沧州宝恩)，HPLC检测上样过程，上样结束后，用去离子水洗脱杂质，再用梯度洗脱淫羊藿甙，收集50％含水乙醇洗脱部分，减压浓缩，得到粗分离产物3.0g，经HPLC检测，含量为38％，有效成分回收率为94.8％.

3)初结晶：将2)中得到的粗分离产物3.0g，用65％含水丙加热溶解，回流两次，合并两次清夜，浓缩至d＝1.05(比重)，加丙酮调节浓缩液中丙酮含量为50％，静置、结晶、过滤，得到初结晶粉末1.65g，经HPLC检测含量为65.4％，有效成分回收率为90％。

4)重结晶：将3)中得到的1.65g初结晶用不含水丙酮热回流溶解两次，每次30min，合并两次清夜，浓缩至1/3体积，冷却结晶，结晶再用不含水丙酮重结晶一次，得到最终结晶产物0.98g，经HPLC检测含量为98.23％，有效成分回收率为80％。

实例2：

1)提取：将200g淫羊藿甙含量为0.6％原料经过粉碎，放入3000ml三角瓶中，加入2000ml、70％含水乙醇溶液，提取三次，一次1.5H/次，合并三次提取液，减压浓缩至d＝1.06(比重)，约350ml，加去离子水稀释至600ml，静置、放凉、过滤，清夜580ml待用，经HPLC检测，清夜中淫羊藿甙的浓度为2.07mg/ml，有效成分回收率为100％。

2)粗分离：将1)中待用的580ml清夜上样于经过处理的200g大孔树脂DM-130(山东鲁抗)，HPLC检测上样过程，上样结束后，用去离子水洗脱杂质，再用梯度洗脱淫羊藿甙，收集40％含水乙醇洗脱部分，减压浓缩，得到粗分离产物2.45g，经HPLC检测，含量为47.2％，有效成分回收率为96％.

3)初结晶：将2)中得到的粗分离产物2.45g，用80％含水丙加热溶解，回流两次，合并两次清夜，浓缩至d＝1.08(比重)，加丙酮调节浓缩液中丙酮含量为70％，静置、结晶、过滤，得到初结晶粉末1.58g，经HPLC检测含量为70.2％，有效成分回收率为92％。

4)重结晶：将3)中得到的1.58g初结晶用乙醇热回流溶解两次，每次30min，合并两次清夜，浓缩至l/4体积，冷却结晶，结晶再用无水乙醇重结晶一次，得到最终结晶产物1.05g，经HPLC检测含量为98.86％，有效成分回收率为87％。

实例3：

1)提取：将200g淫羊藿甙含量为0.6％原料经过粉碎，放入3000ml三角瓶中，加入2000ml、70％含水乙醇溶液，提取三次，一次1.5H/次，合并三次提取液，减压浓缩至d＝1.08(比重)，约300ml，加去离子水稀释至500ml，静置、放凉、过滤，清夜500ml待用，经HPLC检测，清夜中淫羊藿甙的浓度为2.3mg/ml，有效成分回收率为95.8％。

2)粗分离：将1)中待用的500ml清夜上样于经过处理的200g大孔树脂LX-11(西安蓝晓)，HPLC检测上样过程，上样结束后，用去离子水洗脱杂质，再用梯度洗脱淫羊藿甙，收集50％含水乙醇洗脱部分，减压浓缩，得到粗分离产物3.2g，经HPLC检测，含量为35.7％，有效成分回收率为95％.

3)初结晶：将2)中得到的粗分离产物3.2g，用80％含水丙加热溶解，回流两次，合并两次清夜，浓缩至d＝1.08(比重)，加丙酮调节浓缩液中丙酮含量为60％，静置、结晶、过滤，得到初结晶粉末1.7g，经HPLC检测含量为63.9％，有效成分回收率为91％。

4)重结晶：将3)中得到的1.7g初结晶用80％热回流溶解两次，每次30min，合并两次清夜，浓缩至1/4体积，调节乙醇含量至50％，冷却结晶，结晶再用不含水丙酮重结晶一次，得到最终结晶产物1.02g，经HPLC检测含量为98.67％，有效成分回收率为84％。

Claims (4)

1.一种从淫羊藿属植物制备高含量(98％)淫羊藿甙的技术，其特征在于：

1)从淫羊藿中提取淫羊藿甙：将淫羊藿叶子粉碎过10目，加其重量12-15倍量的含水有机溶剂(Ⅰ)加热回流提取三次，每次提取1.5小时，过滤提取液，用含水有机溶剂(Ⅰ)洗涤提取渣，合并提取液及洗涤液，减压浓缩至一定的比重，就得到淫羊藿甙的粗提液；上述含水有机溶剂(Ⅰ)中有机溶剂的含量为40-95v％；上述有机溶剂包括：甲醇、乙醇、甘油、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯；

2)粗分离淫羊藿甙：利用极性或者弱极性的大孔树脂进行初分离；将非离子型的极性或者弱极性大孔网状吸附树脂置于乙醇中浸泡24小时，然后用乙醇、去离子水依次冲洗树脂；将经过上述过程活化过的树脂，用重力沉降法装柱；将过程1)中得到的粗提液经过滤后，清夜上样，在采用含水有机溶剂(Ⅱ)对大孔树脂进行洗脱，分段收集，用HPLC法检测洗脱过程，在270nm直到检测不出淫羊藿甙；减压浓缩收集的各部分洗脱液，就得到粗分离的淫羊藿甙产物；上述含水有机溶剂(Ⅱ)中有机溶剂的含量为20-90v％；上述含水有机溶剂(Ⅱ)中的有机溶剂包括：甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇；

3)纯化粗分离淫羊藿甙：利用溶剂处理法对粗分离淫羊藿甙进行纯化；将过程2)得到的粗分离的淫羊藿甙产物，用含水有机溶剂(Ⅲ)加热溶解，过滤，不溶物再用含水有机溶剂(Ⅲ)加热溶解一次，合并两次过滤液，减压浓缩至含有机溶剂至一定浓度，静置，放凉，析晶，过滤结晶物，用有机溶剂(Ⅳ)洗涤结晶物；上述含水有机溶剂(Ⅲ)中有机溶剂的含量为30-90v％；上述含水有机溶剂(Ⅲ)中有机溶剂包括：甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇；上述有机溶剂(Ⅳ)包括：甲醇、乙醇、丙酮；

4)重结晶处理：利用溶剂处理法对初结晶物进行重结晶处理；将过程3)得到的初结晶物，用含水有机溶剂(Ⅴ)加热回流溶解，过滤，清夜浓缩至一定的浓度，静置，结晶，过滤结晶物，再用含水有机溶剂(Ⅵ)对结晶物加热溶解，过滤，过滤液静置，结晶，过滤结晶物，就得到含量大于98％的淫羊藿甙产物；上述含水有机溶剂(Ⅴ)中有机溶剂含量为50-90v％；上述含水有机溶剂(Ⅴ)中有机溶剂包括：甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇中的一种或者更多；上述含水有机溶剂(Ⅵ)中有机溶剂含量为70-95v％；上述含水有机溶剂(Ⅵ)中有机溶剂包括：甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇。

2.按权利要求1所述的一种从淫羊藿属植物制备高含量(98％)淫羊藿甙的技术，其特征在于：所述步骤1)中淫羊藿属植物包括心叶淫羊藿、柔毛淫羊藿、朝鲜淫羊藿和巫山淫羊藿。

3.按权利要求1所述的一种从淫羊藿属植物制备高含量(98％)淫羊藿甙的技术，其特征在于：所述步骤2)中所用的大孔网状吸附树脂包括聚丙乙烯树脂、聚苯乙烯树脂、聚甲基丙烯酸酯树脂、丙烯酰胺与苯乙烯共聚物树脂。

4.按权利要求1所述的一种从淫羊藿属植物制备高含量(98％)淫羊藿甙的技术，其特征在于：所述步骤3)、过程4)中有机溶剂的用量为15-30倍量；所述步骤3)、过程4)中静置，析晶时间为24-48小时。

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