CN103110576A - 一种香菇多糖注射液制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种香菇多糖注射液及其制备方法，该注射液由香菇多糖、合适浓度的NaOH溶液、pH调节剂和注射用水组成，其中NaOH溶液的浓度为0.1～1mol/L，优选0.3～0.6mol/L；pH调节剂为磷酸溶液、磷酸二氢钾溶液或磷酸二氢钠溶液，优选磷酸二氢钠溶液和磷酸溶液；每支注射液中含香菇多糖的有效治疗浓度是0.5mg/ml。本发明的香菇多糖注射液经稳定性试验，局部刺激性试验、全身主动过敏试验以及溶血性试验，表明完全符合规定标准，且具有生产操作简单易控制、质量稳定、毒副作用低等特点，解决了制备过程中pH不易调节及过滤环节影响香菇多糖有效成分等问题，使香菇多糖的临床使用更安全、有效。

Description

一种香菇多糖注射液制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于药物制剂技术领域，特别涉及一种生物反应调节剂抗肿瘤药物香菇多糖注射液制剂及其制备工艺。 

背景技术

香菇多糖（Lentinan）系从担子菌纲伞菌科真菌香菇子实体中提取分离纯化获得的均一组分的多糖。香菇多糖的化学结构是一种以β-D-[l→3]葡萄糖残基为主链，侧链为(1→6)葡萄糖残基的葡聚糖，重复结构单位一般含有7个葡萄糖残基，基中2个残基在侧链上。香菇多糖的抗肿瘤作用与其化学结构尤其是β-D-[l→3]链关系密切。香菇多糖的主要功能与作用为免疫调节作用，其特点在于能选择地作用于某一特定免疫环节，抑制其它不必要的免疫应答，并促成集体所需的免疫反应，是一种毒性副作用小、安全、有效的免疫调节剂。 

香菇多糖在临床上用作免疫调节剂，用于恶性肿瘤的辅助治疗。于1969年由日本千原吴郎发现，1986年获日本厚生省批准生产并外销，1988年我国卫生部批准进口，至今我国已有国产香菇多糖上市(如南京振中和福州梅峰等)。上市剂型有注射液（仅有金陵药业股份有限公司福州梅峰制药厂一家上市）、冻干剂、片剂、胶囊等。另外，专利CN1887292还公开了香菇多糖软胶囊的制备方法；CN1875978公开了香菇多糖肠溶胶囊的制备方法；专利CN1528337、CN1569022和CN100592910分别公开了香菇多糖滴丸的制备方法；CN101244093公开了香菇多糖口服液的制备方法。专利CN1126547、CN1969876、ZL200510086530.3和CN101632641B分别公开了香菇多糖冻干粉针剂的制备。专利CN1682752A和CN1823812A分别公开了一种香菇多糖滴注液的制备方法和一种香菇多糖等渗输液的制备方法。 

目前公开的香菇多糖注射剂专利如下：专利CN1076112A采用加乙醇、聚乙二醇、丙二醇、丙三醇等作为助溶剂，防止香菇多糖遇热析出沉淀物从而配制成合格的水针；专利ZL96116294.5提及了一种香菇多糖注射液及其制备方法，将香菇多糖溶解于合适浓度的NaOH溶液中，搅拌下加入柠檬酸调节pH，从而制得合格香菇多糖注射液。上述方法使用了有机醇或者酸，对人体有一定的危害。比如，CN1076112A使用了乙醇、丙二醇和丙三醇做为助溶剂，其对人体的刺激性显著增加，而且丙二醇的毒性较大，注射液中应慎用；ZL96116294.5中使用的柠檬酸可能对钙的代谢产生影响，从而可能导致低钙血症。因此，寻找稳定安全有效的香菇多糖注射液配方是非常必要的。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种稳定安全有效的具体涉及生物反应调节剂抗肿瘤药物香菇多糖（Lentinan）注射液制剂。 

本发明的另一个目的是提供了一种制备新的香菇多糖注射液制剂的方法。 

本发明在研究中发现采用热水溶解及加水溶胀后再加热溶解香菇多糖的方式均不能将其溶解完全，且耗时长，不利于实际生产，所以采用一定浓度的NaOH溶液将香菇多糖溶解后再用pH调节剂进行中和的方式较好。在通过对pH调节剂的考察中发现，盐酸、硫酸在调节过程中pH不易稳定，经常出现反复，且室温静置1天后pH变化较大；醋酸在调节过程中pH容易稳定，静置1天后pH基本不变，但影响含量的测定；磷酸和磷酸二氢盐在调节过程中pH容易稳定，且不干扰检测，静置1天后pH基本不变；柠檬酸在调节过程中pH较易稳定，基本不反复，耗时较磷酸和磷酸二氢盐长，静置1天后pH变化较磷酸和磷酸二氢盐为大。其结果详见表1。 

表1 不同pH调节剂的选择 

本发明在研究中还发现香菇多糖作为高分子物质，过滤环节对其影响较大。通过对各种不同材质和不同孔径的微孔滤膜进行考察，发现各种滤膜均对香菇多糖的含量有不同程度的影响，但并未影响重均分子量和分子量分布，其中尼龙膜对香菇多糖的含量影响最小，孔径为0.22μm时还可以起到过滤除菌的作用，具体结果见表2。

另外，通过对滤纸和针用活性炭的考察发现滤纸和针用活性炭对重均分子量有一定影响，但对含量影响较小，具体结果见表3。本研究采用的香菇多糖原料的重均分子量为42.1mw，分子量分布为98.9%。 

 表2 微孔滤膜对香菇多糖的影响 

 表3 滤纸和活性炭对香菇多糖的影响

（其中A1表示未加活性炭，先经滤纸粗滤后再经0.22μm尼龙膜过滤；A2表示未加活性炭，直接经0.22μm尼龙膜过滤；B1表示加入0.1%针用活性炭，先经滤纸粗滤后再经0.22μm尼龙膜过滤；B2表示加入0.1%针用活性炭，直接经0.22μm尼龙膜过滤；C1表示加入0.01%针用活性炭先经滤纸粗滤后再经0.22μm尼龙膜过滤；C2表示加入0.01%针用活性炭，直接经0.22μm尼龙膜过滤）

以上简单展示了发明人为本发明而进行的部分实验结果，但无法穷尽发明人的全部工作。

本发明技术方案如下： 

一种香菇多糖注射液制剂，其特征在于：含有效治疗量的香菇多糖溶于合适浓度的NaOH溶液中，搅拌下加入适宜pH调节剂调节pH至4.5～8.0，过滤，分装至安瓿中，高温热压灭菌，制得香菇多糖注射液。

香菇多糖的有效治疗浓度是0.5mg/ml。 

pH调节剂为磷酸溶液、磷酸二氢钾溶液或磷酸二氢钠溶液，优选磷酸二氢钠溶液和磷酸溶液。 

NaOH溶液的浓度是0.1～1mol/L，优选0.3～0.6mol/L。 

过滤方式为经0.01%～0.05%活性炭吸附热原后直接用0.22μm有机膜过滤，优选0.22μm尼龙膜。 

一种香菇多糖注射液的制备方法，其特征在于： 

①配料：称取有效剂量的香菇多糖，溶解于合适浓度的NaOH溶液中，搅拌至完全溶解； 

②调节pH值：用pH调节剂适量调节pH至4.5～8.0；

③脱炭过滤：加入0.01%～0.05%（w/v）针用活性炭，室温下搅拌15～30min，直接经0.22μm尼龙膜过滤；

④中间体测定：根据滤液含量测定的结果，补加注射用水，使浓度为1ml:2mg；

⑤灌封：调整灌装机，将药液灌装于安瓿中，熔封；

⑥灭菌：经121℃热压灭菌12～20min；

⑦检验，印字，包装。

采用上述技术方案制备香菇多糖注射液，生产操作简单易控制，制成的香菇多糖注射液质量更稳定，使香菇多糖的临床使用更安全、有效。 

为说明本发明技术效果，发明人进行了以下研究。 

一、香菇多糖注射液稳定性试验 

1.试验目的：

考查本产品的稳定性，并与上市对照药品（福州梅峰制药，批号：090202-2）进行比较，包括加速试验及长期试验。

2.试验方法： 

取样品和上市对照药品，通过其性状、pH值、含量、重均分子量及分子量分布的变化情况，考察香菇多糖注射液的稳定性。

3.试验结果： 

A、加速稳定试验：

将上市包装的样品和上市对照药品置于恒温培养箱中，调节温度40℃±2℃，连续放置，分别于0、1、2、3、6月取样测定，结果见表4-7：

表4 香菇多糖注射液 091201 加速试验结果

 

表5 香菇多糖注射液 091202 加速试验结果

表6 香菇多糖注射液 091203 加速试验结果

表7 上市对照药品090202-2加速试验结果

B.长期稳定性试验：

将上市包装的样品置于恒温培养箱中，调节温度25℃±2℃，连续放置，分别于0、3、6、9、12、18月取样测定，结果见表8-11：

表8 香菇多糖注射液 091201 长期试验结果

表9 香菇多糖注射液 091202 长期试验结果

表10 香菇多糖注射液 091203 长期试验结果

表11 上市对照药品090202-2长期试验结果

4、结论：

经过6个月加速和18个月长期试验考察，本产品和上市对照药品的各考察指标均无明显变化，且均符合标准规定。由表中数据可知，本产品较上市对照药品的稳定性更好。

 二、香菇多糖注射液局部刺激性试验 

1.试验目的：

    观察家兔静脉注射香菇多糖注射液后对注射局部所产生的刺激反应情况，以确保临床用药安全。

2试验材料：  受试药香菇多糖注射液，规格：2ml：1mg，由河北凯盛医药科技有限公司提供，批号：20091201。 

动物：新西兰大耳白兔，雌雄均可，由北京市海淀兴旺动物养殖场提供，实验动物合格证号：SCXK（京）2006-0006，使用许可证号：SYXK（晋）2009-0001。 

3.试验方法： 

选取3只新西兰大耳白家兔，体重为1.7-3.0kg，在试验室环境适应至少1天后供试验用。采用通体左右自身对照，右侧为给药组，左侧为氯化钠注射液对照组，每次4ml/kg，药液浓度为20μg/ml，1日1次，连续5日。

4.观察指标： 

在末次给药后48h对动物和注射部位进行肉眼观察；观察是否有充血水肿等刺激反应症状。依照表12标准对血管刺激性进行评分。然后处死家兔，剪下兔耳，从血管距最远端1cm处开始，每隔1cm切下0.5cm宽的标本，按A、B、C、D、E等数段，浸入10%甲醛固定，送病理切片检查并按表13分级。

表12 血管刺激大体检查分级 

 

表13 血管刺激病理组织分级

5.试验结果：

家兔耳缘静脉推注供试品溶液后，每次给药前及末次给药后48h肉眼检查注射局部均未见明显的红肿、充血、坏死等刺激反应，与对照组无明显差异。依据表12标准，给药组和对照组的各个家兔的得分均为0。

耳血管未见药物引起的刺激性损伤。兔耳组织之表皮、皮脂腺、软骨、间质之结缔组织成分，小静脉及毛细血管结构清楚、形态正常。三例均未见水肿、炎细胞浸润、变性及坏死。血管腔内未见血栓形成。与对照组比较无明显差异。两组光镜观察评分均为0。 

6.试验结论： 

家兔静脉推注香菇多糖注射液20μg/ml、4ml/kg，1日1次，连续5日，结果该药对家兔注射局部均无刺激性，表明本品局部刺激性符合注射剂的安全检查要求。

  

三、香菇多糖注射液全身主动过敏试验

1.试验目的：

考察本品全身给药后对动物引起的过敏反应。

2.试验材料： 

受试药香菇多糖注射液，规格：2ml：1mg，由河北凯盛医药有限公司提供，批号：20091201。

阴性对照：氯化钠注射液，山东华鲁药业有限公司，批号：C09082712 

阳性对照：人血白蛋白（20%），广东卫伦生物制药有限公司，批号：20060824。

动物：豚鼠，雌雄各半，由北京海淀兴旺动物养殖场提供，实验动物合格证号：SCXK（京）2006-0006，使用许可证号：SYXK（晋）2009-0001。 

3.试验方法： 

选取体重为250-350g 的豚鼠18只，在试验室环境适应至少3天后供试验用。将动物按体重、性别采用随机取组分组法，将试验豚鼠分成三组。

表14 试验豚鼠分组 

致敏：腹腔注射致敏，供试品给药容积为1ml/kg（50μg/ml），阴性组和阳性组给药容积为0.5ml/只，试验第0、2、4日各致敏一次，共3次。

激发：试验第14日和第21日各取3只动物一次快速静脉注射激发，供试品给药容积为2ml/kg，阴性组和阳性组给药容积为1ml/只。 

4.观察指标： 

致敏期间：每日观察每只动物的症状。初次、最后一次致敏和激发当日测定每组每只动物的体重。

激发：静脉注射后立刻至30min，按表15症状详细观察每只动物的反应症状及症状的出现消失时间，最长可延长观察至3h。 

表15 过敏反应症状 

结果评价：可按表16判断过敏反应发生程度。计算过敏反应发生率。根据过敏反应发生率和发生程度进行综合判断。

表16 全身致敏性评价标准 

5.试验结果：见表17

表17 香菇多糖注射液对豚鼠主动全身过敏反应的影响

由上表可见供试品组、阴性组于第一次注射后的14日与21日激发，均未发生过敏反应。阳性组给予1%人血白蛋白激发后6只动物均呈极强阳性反应。

6.试验结论： 

香菇多糖注射液组以50μg/kg致敏，100μg/kg激发后，阳性率为0，表明该药过敏试验符合规定。

  

四、香菇多糖注射液溶血试验

1.试验目的：

考察本品与兔红细胞混悬液温育后是否产生溶血和凝聚反应，以确保临床用药安全。

2.试验材料： 

受试药香菇多糖注射液，规格：2ml：1mg，由河北凯盛医药科技有限公司提供，批号：20091201。

阴性对照：氯化钠注射液，山东华鲁药业有限公司，批号：C09082712 

动物：新西兰大耳白兔，雌雄均可，2.0-3.0kg，由北京市海淀兴旺动物养殖场提供，实验动物合格证号：SCXK（京）2006-0006，使用许可证号：SYXK（晋）2009-0001。在试验室环境适应至少7天后供试验用。

3.试验方法： 

3.1实验用血红细胞混悬液的准备：

兔心脏取血20ml，放入含玻璃珠的三角烧瓶中振摇10分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血液。加入0.9%氯化钠溶液约10倍量，摇匀，2500~3000r/min离心15分钟，除去上清液。沉淀的红细胞再用0.9%氯化钠溶液按上述方法洗涤2~3次，至上清液不显红色为止。将所得红细胞用0.9%氯化钠溶液配成2%的混悬液，供试验用。

3.2受试物的制备： 

根据本品临床用药说明书，取香菇多糖注射液原液使用。

3.3试验方法： 

取试管7只，按表加入各种溶液，1~5号管为供试品管，7号管为阴性对照，第6号管为阳性对照管。按表18所示依次加入2%红细胞悬液、0.9%氯化钠溶液或蒸馏水及供试品溶液，混匀后，立即置37℃的恒温箱中进行温育，开始每隔15分钟观察1次，1小时后，每隔1小时观察1次，观察4小时。

表18 香菇多糖注射液溶血性试验加样表 

4.结果判断：

当阴性对照管无溶血和凝聚发生，阳性对照管有溶血发生时，若受试物管中的溶液在4小时内不发生溶血和凝聚，则受试物可以注射使用。若受试物管中的溶液在4小时内发生溶血和（或）凝聚，则受试物不宜注射使用。                              

5.试验结果：见表19 

表19 香菇多糖注射液溶血性试验结果

由表19可见供试品1-5号及6号管（阴性对照），在37℃保温4h内，均未出现溶血和凝聚反应，7号管（阳性对照）在15分钟即出现溶血现象。

6.试验结论： 

香菇多糖注射液（0.5mg/ml）无溶血及凝聚作用，符合静脉注射用安全性检查的要求。 

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的目的和可行性作进一步说明和解释，但不能限制本发明的范围。 

实施1： 

称取香菇多糖0.5g，加入总体积量400ml的0.3mol/L氢氧化钠溶液，搅拌至完全溶解；用0.75mol/L磷酸二氢钠溶液调节pH至5.0；加入定量后混合均匀；加入0.01%针用活性炭在室温下搅拌15min后直接经0.22μm尼龙膜过滤至澄明；分装于安瓿瓶中，每瓶2ml，封口；121℃热压灭菌12min；检漏，灯检；成品全检，包装入库。

实施2： 

称取香菇多糖0.5g，加入总体积量400ml的0.4mol/L氢氧化钠溶液，搅拌至完全溶解；用0.5mol/L磷酸溶液调节pH至5.5；加入定量后混合均匀；加入0.02%针用活性炭在室温下搅拌20min后直接经0.22μm尼龙膜过滤至澄明；分装于安瓿瓶中，每瓶2ml，封口；121℃热压灭菌15min；检漏，灯检；成品全检，包装入库。

实施3： 

称取香菇多糖0.5g，加入总体积量400ml的0.5mol/L氢氧化钠溶液，搅拌至完全溶解；用0.75mol/L磷酸二氢钠溶液调节pH至6.0；加入定量后混合均匀；加入0.03%针用活性炭在室温下搅拌30min后直接经0.22μm尼龙膜过滤至澄明；分装于安瓿瓶中，每瓶2ml，封口；121℃热压灭菌20min；检漏，灯检；成品全检，包装入库。

实施4： 

称取香菇多糖0.5g，加入总体积量400ml的0.6mol/L氢氧化钠溶液，搅拌至完全溶解；用0.5mol/L磷酸溶液调节pH至6.5；加入定量后混合均匀；加入0.04%针用活性炭在室温下搅拌15min后直接经0.22μm尼龙膜过滤至澄明；分装于安瓿瓶中，每瓶2ml，封口；121℃热压灭菌12min；检漏，灯检；成品全检，包装入库。

实施5： 

称取香菇多糖0.5g，加入总体积量400ml的0.5mol/L氢氧化钠溶液，搅拌至完全溶解；用0.75mol/L磷酸二氢钠溶液调节pH至7.0；加入定量后混合均匀；加入0.05%针用活性炭在室温下搅拌20min后直接经0.22μm尼龙膜过滤至澄明；分装于安瓿瓶中，每瓶2ml，封口；121℃热压灭菌15min；检漏，灯检；成品全检，包装入库。

实施6： 

称取香菇多糖0.5g，加入总体积量400ml的0.5mol/L氢氧化钠溶液，搅拌至完全溶解；用0.75mol/L磷酸二氢钠溶液调节pH至7.5；加入定量后混合均匀；加入0.01%针用活性炭在室温下搅拌30min后直接经0.22μm尼龙膜过滤至澄明；分装于安瓿瓶中，每瓶2ml，封口；121℃热压灭菌20min；检漏，灯检；成品全检，包装入库。

Claims (5)

1.一种香菇多糖注射液制剂，其特征在于：由有效治疗量的香菇多糖、NaOH溶液、pH调节剂和注射用水组成。

2.根据权利要求1中所述的一种香菇多糖注射液制剂，其特征在于：香菇多糖的有效治疗浓度是0.5mg/ml。

3.根据权利要求1中所述的一种香菇多糖注射液制剂，其特征在于：NaOH溶液的浓度是0.1～1mol/L；优选浓度为0.3～0.6mol/L。

4.根据权利要求1中所述的一种香菇多糖注射液制剂，其特征在于：pH调节剂为磷酸溶液、磷酸二氢钾溶液或磷酸二氢钠溶液；优选磷酸溶液或磷酸二氢钠溶液。

5.一种香菇多糖注射液的制备方法，其特征在于：

1）配料：称取有效剂量的香菇多糖，溶解于总体积40%的合适浓度的NaOH溶液中，搅拌至完全溶解；

2）调节pH值：用pH调节剂适量调节pH至4.5～8.0；

3）脱炭：加入0.01%～0.05%（w/v）针用活性炭，室温下搅拌15～30min，脱炭滤过；

4）过滤：经0.22μm尼龙膜过滤；

5）中间体测定：根据滤液含量测定的结果，补加注射用水，使浓度为2ml:1mg；

6）灌封：调整灌装机，将药液灌装于安瓿中，熔封；

7）灭菌：经121℃热压灭菌12～20min；

8）检验，印字，包装。