CN101530388B - 一种米屈肼注射液的处方及制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明设计一种米屈肼注射液的处方及制备方法，其处方主要由活性成分米屈肼及磷酸盐缓冲液、注射用水组成，该处方的制备方法包括称取各组分，搅拌溶解，加入0.05％(W/V)的活性炭，加压过滤药液去除热原，调节溶液的pH值在7.0～8.5范围内，然后先用0.45μm滤膜粗滤，再用0.22μm滤膜精滤，质检合格后灌装入5ml的西林瓶中，压盖密封。后在121℃，20分钟的终端灭菌条件下灭菌后即得。本发明生产的米屈肼注射液无菌保证程度高，贮藏三年后各项指标均符合规定，对于临床用药来说，安全性能得到更充分的保证。

Description

一种米屈肼注射液的处方及制备方法

技术领域

本发明涉及一种米屈肼注射液的处方及制备方法，特别是本处方能采用终端灭菌条件进行灭菌，能保证本品的无菌程度，属于药物制剂领域。

背景技术

米屈肼注射液是由拉脱维亚JSC Grindeks公司的前身——拉脱维亚科学院有机合成所及其工厂合成研制的，属于JSC Grindeks的原研产品，拉脱维亚的JSC Grindeks公司在八十年代末将米屈肼推向前苏联市场，于1992年在拉脱维亚注册，目前在拉脱维亚、立陶宛、俄罗斯、白俄罗斯、格鲁吉亚、乌克兰、摩尔多瓦、阿塞拜疆、哈萨克斯坦、乌兹别克斯坦、亚美尼亚、等国家上市销售。上市剂型有注射液(500mg/5ml)，胶囊(250mg，500mg)和糖浆剂(250ml，50mg/ml)。米屈肼在这些国家上市的主要适应症有以下几方面：

(1)、心血管疾病：慢性缺血性心脏病，稳定型心绞痛，慢性心力衰竭，功能性心血管病症，心肌病。

(2)、急性及慢性缺血性脑血管病症。

(3)、绩效下降，增强体能。用于生理或精神心理负担过重，以及恢复期。

米屈肼是肉毒碱前体——γ-丁基甜菜碱(GBB)的结构类似物。

γ-丁基甜菜碱可以在所有器官的细胞中找到。在缺血的情况下，米屈肼扩大了血管，激活糖酵解并刺激ATP的产生和转运，恢复氧运输和氧耗之间的平衡，从而保护了细胞。米屈肼具有心脏保护作用。在慢性充血性心力衰竭中，它能够增强心肌的收缩性，提高器官对体力负荷的耐受性以及帮助迅速准备承受新的体力负荷。随着心肌内游离肉毒碱的浓度下降，依赖于肉毒碱的游离脂肪酸氧化受到抑制，活化的长链脂肪酸通过细胞膜的转运也受到抑制。这样一来，代谢物的蓄积对细胞膜产生的破坏作用得以阻止，继而激活了其他的产能途径(例如，糖酵解和三羧酸循环)。因此，米屈肼治疗对组织的保护包括三个层面：

(1)、保护细胞膜不受强表面活性剂(酰基肉毒碱和脂酰辅酶A)的破坏

(2)、维持ATP从线粒体到其利用部位的转运(缺血时ATP的转运被酰基肉毒碱和脂酰辅酶A阻断)。

(3)、通过激活化学结合氧化(例如缺氧代谢)，增强产能旁路糖酵解

此外，米屈肼治疗的另一个重要方面是，米屈肼诱导的肉毒碱浓度降低引起了其前体——γ-丁基甜菜碱浓度的增加，γ-丁基甜菜碱作为一种血管扩张剂，减少了内源性生物调节物引起的血管平滑肌收缩活动。

综上所述，米屈肼作为代谢调节物和细胞保护剂，能够改善心肌细胞的能量代谢过程，抑制肉毒碱依赖性脂肪酸氧化，强化细胞内糖代谢，通过无氧酵解给组织提供能量，改善心肌缺血、缺氧症状，可单用或与其它药物(如血管扩张药、利尿药等)联合用于缺血性心脏病的治疗。

作为抗心力衰竭用药，米屈肼与其他心力衰竭类药物相比，具有以下特点：

米屈肼能够提高心肌的收缩力，但不会像地高辛那样导致心肌缺血(运动心电图的ST段降低)，因此更为安全。此外，临床研究表明，米屈肼与ACEII抑制剂合用时，能降低后者的剂量，并且更显著的提高运动耐量。此外，米屈肼具有极为理想的安全性，不良反应仅包括偶见的过敏反应、消化系统紊乱、头痛、虚弱、心动过速、血压变化、精神激动，这些不良反应少而轻，部分可以通过合并用药和基础疾病来解释，往往在停药后不需专门处理就可以自行恢复。因此，米屈肼能够单独用于病情较轻的患者，或者与其他药物合用用于重症患者的治疗。

本品目前在中国尚无上市，有部分厂家正在申请临床试验。原研厂家在上市以来一直采用的处方是米屈肼主药和注射用水，没有任何辅料，采用的是过滤灭菌工艺，在中国属于无菌保证水平较低的过滤除菌工艺。在现在的中国市场，注射液的药害事件屡有发生，多数是因为无菌导致，因此无菌过滤工艺不能保证米屈肼注射液的临床安全性。

发明内容

为克服上述的不足，本发明的目的在于提供一种米屈肼注射液的处方，采用终端灭菌方法进行本品的制备，来提高本品的无菌保证程度和产品质量，以及临床使用的安全性。

本发明中，我们根据注射剂灭菌工艺的选择原则，选择了无菌水平保证程度较高的终端灭菌方法进行灭菌(过度杀灭法(F0≥12)。本发明中，我们先制备了不加辅料的米屈肼注射液(米屈肼、水)，采用终端灭菌，在经受高温后注射液pH值升高，溶液颜色变黄，散发出难闻气味。因此这个处方无法采用终端灭菌工艺来进行灭菌。

本发明中，我们需要对处方进行优选，以保证灭菌后产品质量不变。根据米屈肼原料的性质：米屈肼是白色结晶性粉末或白色晶体，极易溶于水，它的pH值7.0-8.5的范围内稳定性较好。因此我们得选择一个处方，让溶液灭菌后pH值能在7.0-8.5这个范围内。

根据米屈肼的稳定pH值区间，我们参考中国药典2005年版二部附录中的缓冲液，选择了pH值在7～8区间内的缓冲液进行试验，试验不同pH值的缓冲液制成米屈肼注射液，并将配好的溶液采用121℃，20分钟进行灭菌，选择在经受高温后注射液pH值符合规定，溶液颜色也无变化，也无气味的处方，经初步试验，基本确定了本品的处方和所有的磷酸盐缓冲液种类。

本发明中，上述所述磷酸盐组合为：磷酸氢二钠+磷酸二氢钾单元、磷酸氢二钾+磷酸二氢钾单元、磷酸二氢钾+氢氧化钠单元中的任一种，根据确定的磷酸盐缓冲液种类，我们确定处方为每升注射液含有60-150克米屈肼、1.8-2.1克磷酸氢二钠和0.2-0.3克磷酸二氢钾，其余为注射用水；每升注射液含有60-150克米屈肼、4.5-6.7克磷酸氢二钾和0.3-0.5克磷酸二氢钾，其余为注射用水；每升注射液含有60-150克米屈肼、5.5-8.3克磷酸二氢钾和1.4-2.0克氢氧化钠，其余为注射用水。

根据试验本发明的制备工艺如下步骤：

1)、按规定称取3-(2，2，2-三甲基肼)丙酸盐二水化物至混合罐中。

2)、按规定加入处方量75％的注射用水到上述混合罐中，混合至完全溶解。

3)、按规定称取磷酸盐组合至混合罐中混合至完全溶解。

4)、加注射用水至处方量，混合。

5)、向溶液中加入0.05％(W/V)的活性炭，搅拌15分钟，加压使药液通过用外裹中性滤纸的1μm和0.45μm钛棒过滤器，滤除活性炭至稀配罐中。

6)、测定溶液的pH值，pH值应在7.0～8.5范围内，如不在，使用0.01mol/L的盐酸溶液或者0.01mol/L的氢氧化钠溶液进行调节。

7)、溶液先用0.45μm滤膜粗滤，再用0.22μm滤膜精滤。

8)、滤液取样进行质量检测。

9)、将溶液灌装入5ml的西林瓶中，然后压盖密封。

10)、取西林瓶放在121℃，20分钟终端灭菌条件下灭菌，后取出放至室温即得。

具体实施例

下列实施例仅为了进一步说明本发明，而不是限制本发明。

实施例1

米屈肼注射液的制备

称取米屈肼[3-(2，2，2-三甲基肼)丙酸盐二水化物]100g至混合罐中，加入750ml的注射用水到混合罐中，搅拌使主药完全溶解，称取磷酸氢二钠1.97g加入到混合罐中，搅拌混合至完全溶解，再称取磷酸二氢钾0.23g加入到混合罐中，搅拌混合至完全溶解，加注射用水至1000ml，混匀，向溶液中加入0.05％(W/V)的活性炭，搅拌15分钟，加压使药液通过用外裹中性滤纸的1μm和0.45μm钛棒过滤器，滤除活性炭至稀配罐中，取样检查溶液的pH值，pH值在合格范围内，不需要调节，取合格的滤液先用0.45μm滤膜粗滤，再用0.22μm滤膜精滤，滤液取样进行质量检测，测定含量，pH值，溶液比重，合格后，将溶液装入5ml的西林瓶中，压盖密封，取西林瓶在121℃条件下灭菌20分钟，灭菌后取出放至室温即得最终产品。

实施例2

米屈肼注射液的制备

称取米屈肼[3-(2，2，2-三甲基肼)丙酸盐二水化物]105g至混合罐中，加入750ml的注射用水到混合罐中，搅拌使主药完全溶解，称取磷酸氢二钾5.6g加入到混合罐中，搅拌混合至完全溶解，再称取磷酸二氢钾0.4g加入到混合罐中，搅拌混合至完全溶解，加注射用水至1000ml，混匀，向溶液中加入0.05％(W/V)的活性炭，搅拌15分钟，加压使药液通过用外裹中性滤纸的1μm和0.45μm钛棒过滤器，滤除活性炭至稀配罐中，取样检查溶液的pH值，pH值在合格范围内，不需要调节，取合格的滤液先用0.45μm滤膜粗滤，再用0.22μm滤膜精滤，滤液取样进行质量检测，测定含量，pH值，溶液比重，合格后，将溶液装入5ml的西林瓶中，压盖密封，取西林瓶在121℃条件下灭菌20分钟，灭菌后取出放至室温即得最终产品。

实施例3

米屈肼注射液的制备

称取米屈肼[3-(2，2，2-三甲基肼)丙酸盐二水化物]90g至混合罐中，加入750ml的注射用水到混合罐中，搅拌使主药完全溶解，称取磷酸二氢钾6.8g加入到混合罐中，搅拌混合至完全溶解，再称取氢氧化钠1.7g加入到混合罐中，搅拌混合至完全溶解，加注射用水至1000ml，混匀，向溶液中加入0.05％(W/V)的活性炭，搅拌15分钟，加压使药液通过用外裹中性滤纸的1μm和0.45μm钛棒过滤器，滤除活性炭至稀配罐中，取样检查溶液的pH值，pH值在合格范围内，不需要调节，取合格的滤液先用0.45μm滤膜粗滤，再用0.22μm滤膜精滤，滤液取样进行质量检测，测定含量，pH值，溶液比重，合格后，将溶液装入5ml的西林瓶中，压盖密封，取西林瓶在121℃条件下灭菌20分钟，灭菌后取出放至室温即得最终产品。

实施例4

对本发明生产的米屈肼注射液进行安全性试验。

本发明生产的米屈肼注射液过敏性、溶血性和血管刺激性试验的研究资料如下：

1.米屈肼注射液的过敏性试验

1.1试验目的

观察米屈肼静脉注射对豚鼠有无过敏反应，初步考查本品的安全性。

1.2受试药品

米屈肼注射液，批号：060201，浓度：100克/升，装量5ml，由南京赛诺科技有限公司提供。

灭菌注射用水：由南京赛诺科技有限公司提供。

卵白蛋白，天津市中山研究所生产，1.0g/支。

1.3受试动物

豚鼠，体重250-350g，雌雄各半，喂以豚鼠专用颗粒饲料，辅以新鲜蔬菜洗净饲用，自由饮水。饲养室温度24±1℃，相对湿度50-60％，自然通风。

1.4试验方法

试验前，参照米屈肼注射液国外使用说明书，取健康豚鼠24只，按体重随机分为4组，每组6只，阴性对照组给予注射用水0.5ml致敏，并以400mg/kg体重的量使用米屈肼注射液腹腔注射进行攻击；阳性对照组预先以1％卵白蛋白溶液0.5mi致敏，并以400mg/kg体重的量使用米屈肼注射液腹腔注射进行激发；受试药高剂量组以200mg/kg体重的量使用米屈肼注射液致敏，并以400mg/kg体重的量使用米屈肼注射液激发。受试药低剂量组以100mg/kg体重的量使用米屈肼注射液致敏，并以200mg/kg体重的量使用米屈肼注射液激发。

各组首先隔日肌肉注射药液，共注射3次。于末次给药后第14天由前肢静脉注射相应药物进行激发，剂量见前。于最后一次致敏和激发当日测定每只动物体重。激发当日按表1症状详细观察每只动物静脉注射药物后30分钟内的反应，症状的出现及消失时间。并按表2判断过敏反应发生程度。计算过敏反应发生率。根据过敏反应发生率和发生程度进行综合判断。

表1过敏反应症状

0正常	7呼吸急促	14步态不稳
			1躁动	8排尿	15跳跃
2竖毛	9排粪	16喘息

3颤抖	10流泪	17痉挛
			4搔鼻	11呼吸困难	18旋转
5喷嚏	12哮鸣音	19潮式呼吸
			6咳嗽	13紫癜	20死亡

表2全身致敏性评价标准

0	-	过敏反应阴性
			1-4症状	+	过敏反应弱阳性
5-10症状	++	过敏反应阳性
			11-19症状	+++	过敏反应强阳性
20	++++	过敏反应极强阳性

1.5试验结果

米屈肼注射液的高、低剂量组豚鼠分别于末次致敏后第14天用对应剂量药物进行攻击均未发生过敏性反应，评分均为0；而阳性对照组豚鼠于注射后5分钟内出现跳跃、呼吸困难，抽搐倒下，而后死亡，评分均为20，过敏反应均呈极强阳性。阴性对照组6只豚鼠均未发生过敏反应，评分均为0。结果见表3。末次致敏和激发当日各组动物体重没有明显差别。综合以上试验结果，米屈肼注射液全身主动过敏反应为阴性。

表3过敏性反应试验结果

1.6试验结论

在本次试验条件下，米屈肼注射液对受试豚鼠无致敏作用。

2.米屈肼注射液的溶血性试验

2.1试验目的

观察米屈肼注射液对家兔红细胞有无溶血和凝集作用，初步考查本品的安全性。

2.2受试药物

米屈肼注射液，批号：060201，浓度：100克/升，装量5ml，由南京赛诺科技有限公司提供。

灭菌注射用水：由南京赛诺科技有限公司提供。

2.3受试动物

家兔，体重2.2kg，雄性。饲养室温度24±1℃，相对湿度50-60％，自然通风。

2.4试验方法

2.4.12％红细胞悬液制备

取健康家兔1只，颈动脉取血5ml至洁净干燥小烧杯中，用玻璃棒搅拌去纤维蛋白，加入0.9％氯化钠注射液5ml，离心，弃去上清液，再加10ml 0.9％氯化钠注射液轻轻摇匀，离心，弃去上清液，如此反复几次至上清液不呈红色为止，然后按所得红细胞容积，用灭菌注射用水配制成2％红细胞悬液，置冰箱备用。

2.4.2试验步骤

试验前，参照米屈肼注射液使用说明书，取1支米屈肼注射液，打开西林瓶备用，取试管7支，1-5管分别加入0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml的米屈肼注射液，并用0.9％氯化钠注射液稀释至2.5ml，于6号、7号试管中分别加入0.9％氯化钠注射液及蒸馏水2.5ml(完全溶血对照)。最后每管均加入2％兔红细胞悬液2.5ml，轻轻摇匀，置37℃水浴中，分别记录15min、30min、45min、1h、2h、3h、4h各管的溶血和凝集情况。

溶血结果判断标准为：

完全溶血：溶液澄清，红色，管底无红细胞残留。

部分溶血：溶液澄清，红色或棕色，管底尚有少量红细胞残留。

不溶血：红细胞全部下沉，上层液无色澄明。

凝集：虽不溶血，但出现红细胞凝集，振摇后不能分散，或出现药物沉淀。

2.5试验结果

米屈肼注射液1-5管在4小时内未引起溶血和凝集反应(见表4)。

表4米屈肼注射液的溶血试验结果

注：-不溶血；+部分溶血；++完全溶血

2.6试验结论

本次试验条件下，米屈肼注射液对兔红细胞无溶血和凝集作用。表明米屈肼注射液不引起溶血和凝集反应。

3.米屈肼注射液的血管刺激性试验

3.1试验目的

观察米屈肼注射液静脉注射对家兔耳缘静脉的刺激性，为临床安全用药提供依据。

3.2受试药物

米屈肼注射液，批号：060201，浓度：100克/升，装量5ml，由南京赛诺科技有限公司提供。

灭菌注射用水：由南京赛诺科技有限公司提供。

3.3受试动物

白色家兔，体重2.0-2.5kg，雌雄各半，饲养室温度24±l℃，相对湿度50-60％，自然通风。

3.4剂量设计

根据米屈肼注射液使用说明书，米屈肼注射液剂量设计为4ml/kg，注射用水为5ml/kg，家兔耳缘静脉注射给予。

3.5试验方法

家兔8只，采用同体左右侧自身对比法，左侧耳缘静脉作为受试药物组，另一侧作为注射用水对照组。左侧每日耳缘静脉注射受试药物4ml/kg，另一侧耳缘静脉亦每日注射5ml/kg注射用水，每日1次，连续3日，末次给药后48h，肉眼观察试验家兔耳缘静脉，并处死4只动物，剪取距注射部位1cm处和5cm处兔耳，置10％福尔马林溶液中固定，石蜡包埋，HE染色。剩余动物继续观察注射部位静脉14天，于观察末期，处死剩余动物，剪取距注射部位1cm处和5cm处家兔耳缘静脉，放于10％福尔马林溶液中固定，石蜡包埋，HE染色。光镜下观察给药后48小时及末次给药14天后对兔耳血管的刺激性反应。

3.5.1肉眼观察标准

观察注射部位兔耳静脉有无充血、水肿变性、硬结及坏死现象，记录病变程度及出现血管组织变化的家兔数目，血管充血及水肿程度分为0、I、II、III度，0度为无变化，I度为轻微变化，II度为明显变化，III度为严重变化。

3.5.2病理组织学检查标准

观察注射部位兔耳静脉血管扩张充血、血栓形成、水肿和炎性细胞浸润等改变，每项内容按病变程度分正常、轻、中、重，分别以-、+、++、+++表示。

3.6试验结果

3.6.1肉眼观察结果

家兔末次给药后48小时肉眼观察给药侧与对照侧有充血、水肿等表现，但两组没有明显差别。末次给药后第14天，剩余家兔给药侧与注射用水对照侧均已恢复正常，无任何异常表现。试验结果见表7。

表7米屈肼注射液家兔耳缘静脉滴注后肉眼观察结果

3.6.2病理组织学检查结果

末次给药后48h，家兔双侧耳缘静脉给药1em及5cm处均可见充血、水肿及出血，周围血管有轻度的炎性细胞浸润，未见硬结和坏死。给药后第14d，注射用水侧与给药侧均未见充血、出血、水肿及硬结和坏死等病理变化，对照侧与给药侧无明显的差异性，试验结果显示米屈肼注射液对家兔静脉血管没有明显的刺激性。

表8米屈肼注射液家兔耳缘静脉滴注后病理组织学观察结果

3.7试验结论

本次试验条件下，米屈肼注射液对家兔耳缘静脉无明显局部刺激反应。

从以上安全性试验可知，本发明采用的新处方生产米屈肼注射液安全性有保证。

实施例5

根据中国药典2005年版二部附录“药物稳定性试验指导原则”的要求，对本发明采用新处方新制备方法生产的样品及用原处方过滤灭菌工艺生产的样品进行稳定性考察，考察项目包括：性状、pH值、有关物质、含量、可见异物、无菌，细菌内毒素。

考查条件

1.加速试验

取本发明的一批样品及采用米屈肼+水的处方在过滤灭菌工艺下生产的样品各一批适量，分别置加速条件下(40℃，RH75％±5％)放置6个月，并于第1、2、3、6月末取样测定，并与0月数据对比。

2.长期留样试验

取本发明的一批样品及及采用米屈肼+水的处方在过滤灭菌工艺下生产的样品各一批适量，分别置室温条件下(25℃，RH60％±5％)放置36个月，并于第3、6、9、12、18、24、36月末取样测定，并与0月数据对比。

稳定性考查结果如下：

加速试验6个月结果：

长期试验36个月结果：

加速试验结论：米屈肼+水的处方在过滤灭菌工艺下生产的米屈肼注射液，在加速试验6个月条件下，无菌和细菌内毒素均不符合规定，本发明生产的样品各项指标均与0天无明显变化，尤其是无菌和内毒素均符合规定。对于注射液来说，无菌是一下重要的指标，如果不合格，用在临床上有可能造成安全事故，可见本发明的方法生产的注射液质量和安全性均能得到有效的保证。

长期试验结论：米屈肼+水的处方在过滤灭菌工艺下生产的米屈肼注射液，在长期试验36个月条件下，于第12个月开始，无菌就不符合规定，细素内毒素从第18个月开始也不符合规定，本发明生产的样品在长期试验条件下36个月，各项指标与0天相比均无明显变化，在长期36月时，无菌符合规定，细菌内毒素也符合规定，含量、有关物质与0天相比均稳定，长期试验仍在继续进行之中，可见本发明生产的样品无菌保证程度比过滤灭菌生产的要高，并且本发明生产的样品各方面均稳定。解决了老处方不能终端灭菌，无菌不能保证的问题。

Claims (2)

1.一种米屈肼注射液，含有活性成分米屈肼，其特征在于：其处方为

每升注射液含有60-150克米屈肼、1.8-2.1克磷酸氢二钠和0.2-0.3克磷酸二氢钾，其余为注射用水；或

每升注射液含有60-150克米屈肼、4.5-6.7克磷酸氢二钾和0.3-0.5克磷酸二氢钾，其余为注射用水；或

每升注射液含有60-150克米屈肼、5.5-8.3克磷酸二氢钾和1.4-2.0克氢氧化钠，其余为注射用水；

上述处方制得的溶液pH值范围在7.0～8.5；

该米屈肼注射液的制备方法采用121℃，20分钟的终端灭菌条件进行灭菌。

2.权利要求1所述的米屈肼注射液的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

1)、按规定称取米屈肼至混合罐中；

2)、按规定加入75％的注射用水到上述混合罐中，混合至完全溶解；

3)、按规定称取其余辅料到混合罐中混合至完全溶解；

4)、加注射用水至处方量，混合；

5)、向溶液中加入0.05％(W/V)的活性炭，搅拌15分钟，加压使药液通过用外裹中性滤纸的1μm和0.45μm钛棒过滤器，滤除活性炭至稀配罐中；

6)、测定溶液的pH值，pH值应在7.0～8.5范围内，如不在，应使用0.01mol/L的盐酸或者0.01mol/L的氢氧化钠溶液进行调节；

7)、溶液先用0.45μm滤膜粗滤，再用0.22μm滤膜精滤；

8)、滤液取样进行质量检测；

9)、将溶液灌装入5ml的西林瓶中，然后压盖密封；

10)、取西林瓶放在121℃，20分钟的终端灭菌条件下灭菌，后取出放至室温即得。