CN103044507B - 一种从野生黄芩里提取黄芩苷的工艺方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生黄芩里提取黄芩苷的方法，特别是涉及一种采用生物酶解、超声波提取、聚酰胺-大孔树脂联用技术，得到高纯度黄芩苷的新方法。本发明优点：提取方便快捷，纯化效果明显，可以工业化生产。1、应用生物酶解技术，使细胞内有效成分充分溶出。2、采用超声波提取技术，有效成分受热时间降低，活性损失少，产品生物活性高。3、聚酰胺-大孔树脂联用技术结合使用，使有效成分更加纯化，树脂可重复使用，生产成本大大降低，可以工业化使用。本发明利用生物酶解技术使有效成分尽可能溶出，再用超声波提取，最后经聚酰胺-大孔树脂二级纯化技术，再经过重结晶，将黄芩苷纯度提高到98.6％。
Description
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生黄芩里提取黄芩苷的方法，特别是涉及一种采用生物酶解、超声波提取、聚酰胺-大孔树脂联用技术，得到高纯度黄芩苷的方法。
背景技术：
黄芩系高大草本，茎高60－150厘米，有长柔毛。羽状复叶。小叶21－31，卵状披针形或椭圆形有，长7－30毫米，宽4－10毫米，两面有白色长柔毛。叶轴有长柔毛。托叶狭披针形，长约6毫米，有白色长柔毛。总状花序腋生。花下有条形苞片。花萼筒状，长约5毫米，萼齿短，有白色长柔毛。花冠黄白色，旗瓣无爪，较翼瓣和龙骨瓣长，翼瓣、龙骨瓣有长爪。子房有毛，有子房柄。荚果膜质，膨胀，卵状矩圆形，有长柄，有黑色短柔毛。
国内一般用水提取，调酸使沉淀，分离沉淀，洗涤干燥生产黄芩苷，存在着提取时间长、得率低等缺点。本发明的不同之处在于采用生物酶解、超声波提取法，后期采用聚酰胺-大孔树脂联用技术的新方法。
发明内容：
本发明优点：
本发明主要采用生物酶解、超声波逆流提取技术，采用乙醇做溶剂，先得到浸膏，再采用聚酰胺-大孔树脂联用技术，重结晶得到黄芩苷。本发明方法简单易操作，适合大生产，成本低，选用食品添加剂允许使用的乙醇，无化学残留。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种采用生物酶解、超声波提取、聚酰胺-大孔树脂联用技术，得到高纯度黄芩苷的方法，其步骤如下：
(1)酶解：
黄芩根粉碎至10-20目，酶用量为底物的0.5-1％，酶解温度40-50℃，保温沉淀2-4h；
(2)超声提取：
加入乙醇，超声波提取，超声频率50-80KHZ，料液比1:8-10，超声时间50-80min，薄层层析检测分析，回收乙醇，得粗提液；
(3)过滤：
将提取液经4℃左右静置4-6h，过滤得上清液；
(4)聚酰胺初步精制：
将所得溶液拌入干燥的聚酰胺粉末，先以水洗去水溶性杂质，再用20％、40％、60％、80％乙醇依次洗脱，收集洗脱液，得提取液；
(5)聚酰胺-大孔树脂联用纯化：
将提取液水浴蒸至近干，加少量乙醇与1/4-1/6，药材用量的聚酰胺粉拌合，水浴挥去溶剂，将聚酰胺放置底部铺有棉花的渗漉筒中，水洗脱至无色，取出铺在填充于3倍至5倍于药材用量的大孔树脂上。湿法装柱，树脂柱的高径比为5:1—8:1，流速为3-5BV/h；
(6)乙醇洗脱：
在常温常压下，以1-3BV/h流速，用乙醇液洗脱，洗脱体积为5-7BV；
(7)重结晶：
取纯化的黄芩苷按一定的量加甲醇，加热溶解，趁热抽滤，放置过夜，析出结晶，过滤，分离晶体；将剩余物用如上方法加热溶解，重结晶，如此反复两次，得到精制的黄芩苷，纯度在98％以上。
具体实施方式：
实施例1：一种采用生物酶解、超声波提取、聚酰胺-大孔树脂联用技术，得到高纯度黄芩苷的方法，其步骤如下：
(1)50g黄芩粉碎至10目，采用复合纤维素酶，酶用量为底物的1％，酶解温度40℃，保温沉淀2h；
(2)加入70％浓度的乙醇，超声波提取，超声频率50KHZ，料液比1:8，超声时间50min，薄层层析检测分析，回收乙醇，得粗提液；
(3)将提取液经4℃左右静置4h，过滤得上清液；
(4)聚酰胺初步精制：
将所得溶液拌入干燥的60目的聚酰胺粉末，先以水洗去水溶性杂质，再用20％、40％、60％、80％乙醇依次洗脱，收集洗脱液，得提取液；
(5)聚酰胺-大孔树脂联用纯化：
将提取液水浴蒸至近干，加少量乙醇与1/4药材用量的聚酰胺粉拌合，水浴挥去溶剂，将聚酰胺放置底部铺有棉花的渗漉筒中，水洗脱至无色，取出铺在填充于3倍于药材用量的NKA-II大孔树脂上。湿法装柱，树脂柱的高径比为5:1；上样流速为3BV/h；
(6)乙醇洗脱：
在常温常压下，以1BV/h流速，先用乙醇液洗脱，洗脱体积为5BV，乙醇浓度为80％；
(7)重结晶：
取纯化的黄芩苷按1:50的量加甲醇，加热溶解，趁热抽滤，放置过夜，析出结晶，过滤，分离晶体；将剩余物用如上方法加热溶解，重结晶，如此反复两次，得到精制的黄芩苷2.51g，纯度在98.3％。
实施案例2：一种采用生物酶解、超声波提取、聚酰胺-大孔树脂联用技术，得到高纯度黄芩苷的方法，其步骤如下：
(1)100g黄芩粉碎至10目，酶用量为底物的0.5％，酶解温度45℃，保温沉淀4h；
(2)加入75％浓度的乙醇，超声波提取，超声频率60KHZ，料液比1:9，超声时间60min，薄层层析检测分析，回收乙醇，得粗提液；
(3)将提取液经4℃左右静置5h，过滤得上清液；
(4)聚酰胺初步精制：
将所得溶液拌入干燥的80目聚酰胺粉末，先以水洗去水溶性杂质，再用20％、40％、60％、80％乙醇依次洗脱，收集洗脱液，得提取液；
(5)聚酰胺-大孔树脂联用纯化：
将提取液水浴蒸至近干，加少量乙醇与1/5药材用量的聚酰胺粉拌合，水浴挥去溶剂，将聚酰胺放置底部铺有棉花的渗漉筒中，水洗脱至无色，取出铺在填充于4倍于药材用量的HPD100大孔树脂上。湿法装柱，树脂柱的高径比为6:1；上样流速为4BV/h；
(6)乙醇洗脱：
在常温常压下，以2BV/h流速，先用乙醇液洗脱，洗脱体积为6BV，乙醇浓度为85％；,
(7)重结晶：
取纯化的黄芩苷按1:100的量加甲醇，加热溶解，趁热抽滤，放置过夜，析出结晶，过滤，分离晶体；将剩余物用如上方法加热溶解，重结晶，如此反复两次，得到精制的黄芩苷5.23g，纯度在98.4％。
实施案例3：
一种采用生物酶解、超声波提取、聚酰胺-大孔树脂联用技术，得到高纯度黄芩苷的方法，其步骤如下：
(1)100g黄芩粉碎至20目，采用复合纤维素酶，酶用量为底物的0.8％，酶解温度50℃，保温沉淀3h；
(2)加入80％浓度的乙醇，超声波提取，超声频率80KHZ，料液比1:10，超声时间80min，薄层层析检测分析，回收乙醇，得粗提液；
(3)将提取液经4℃左右静置6h，过滤得上清液；
(4)聚酰胺初步精制：
将所得溶液拌入干燥的60目聚酰胺粉末，先以水洗去水溶性杂质，再用20％、40％、60％、80％乙醇依次洗脱，收集洗脱液，得提取液；
(5)聚酰胺-大孔树脂联用纯化：
将提取液水浴蒸至近干，加少量乙醇与1/6药材用量的聚酰胺粉拌合，水浴挥去溶剂，将聚酰胺放置底部铺有棉花的渗漉筒中，水洗脱至无色，取出铺在填充于4倍于药材用量的AB-8大孔树脂上。湿法装柱，树脂柱的高径比为7:1；上样流速为5BV/h；
(6)乙醇洗脱：
在常温常压下，以3BV/h流速，先用乙醇液洗脱，洗脱体积为7BV，乙醇浓度为90％；
(7)重结晶：
取纯化的黄芩苷按1:80的量加甲醇，加热溶解，趁热抽滤，放置过夜，析出结晶，过滤，分离晶体；将剩余物用如上方法加热溶解，重结晶，如此反复两次，得到精制的黄芩苷5.17g，纯度在98.6％。
Claims (5)
1.采用生物酶解、超声波提取、聚酰胺-大孔树脂联用技术，得到高纯度黄芩苷的方法，其步骤如下：
(1)酶解：
黄芩根粉碎至10-20目，采用复合纤维素酶，酶用量为底物的0.5-1％，酶解温度40-50℃，保温沉淀2-4h；
(2)超声提取：
加入70％、75％或80％体积浓度的乙醇，超声波提取，超声频率50-80KHZ，料液比1:8-10，超声时间50-80min，薄层层析检测分析，回收乙醇，得粗提液；
(3)过滤：
将提取液经4℃静置4-6h，过滤得上清液；
(4)聚酰胺初步精制：
将所得上清液拌入干燥的聚酰胺粉末，先以水洗去水溶性杂质，再用20％、40％、60％、80％体积浓度乙醇依次洗脱，收集洗脱液，得提取液；
(5)聚酰胺-大孔树脂联用纯化：
将提取液水浴蒸至近干，加少量乙醇与1/4-1/6药材用量的聚酰胺粉拌合，水浴挥去溶剂，将聚酰胺放置底部铺有棉花的渗漉筒中，水洗脱至无色，取出铺在填充于3倍至5倍于药材用量的大孔树脂上，湿法装柱，树脂柱的高径比为5:1—8:1，流速为3-5BV/h；
(6)乙醇洗脱：
在常温常压下，以1-3BV/h流速，用乙醇液洗脱，洗脱体积为5-7BV；
(7)重结晶：
取纯化的黄芩苷按一定的量加甲醇，加热溶解，趁热抽滤，放置过夜，析出结晶，过滤，分离晶体；将剩余物用如上方法加热溶解，重结晶，如此反复两次，得到精制的黄芩苷，纯度在98％以上。
2.根据权利要求1所述的采用生物酶解、超声波提取、聚酰胺-大孔树脂联用技术，得到高纯度黄芩苷的方法，其中，在所述的步骤(4)中，聚酰胺目数为60-80目。
3.根据权利要求2所述的采用生物酶解、超声波提取、聚酰胺-大孔树脂联用技术，得到高纯度黄芩苷的方法，其中，在所述的步骤(5)中，大孔树脂为NKA-II、HPD100、AB-8中的一种。
4.根据权利要求3所述的采用生物酶解、超声波提取、聚酰胺-大孔树脂联用技术，得到高纯度黄芩苷的方法，其中，在所述的步骤(6)中，洗脱液乙醇体积浓度为80-90％。
5.根据权利要求4所述的采用生物酶解、超声波提取、聚酰胺-大孔树脂联用技术，得到高纯度黄芩苷的方法，其中，在所述的步骤(7)中，黄芩苷与甲醇的用量比为1:50-100。
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