CN103012084A - 一种五味子酚的分离纯化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种五味子酚单体的分离纯化方法，属于中药活性成分的分离纯化技术领域。本发明是以五味子为原料，通过乙醇回流提取、正己烷及乙酸乙酯萃取、溶解结晶得到五味子酚单体。本发明通过最适宜的工艺及参数条件，使产品中五味子酚的含量达到98%以上；整个工艺过程操作简便、工艺稳定、成本低廉，适合工业化生产，且分离效率高、产品纯度高，即可大量实现五味子酚单体的高纯度分离制备。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药活性成分的分离纯化方法，具体涉及从五味子中提取一种木脂素即五味子酚的方法，属于中药分离纯化技术领域。
背景技术
五味子酚英文名schisanhenol，schizanhenol，CAS：69363-14-0，分子式为C23H30O6，分子量为402.20，结构式如下：
五味子作为传统常用中药，有敛肺生津、补肾养心、收敛固涩之功效，主治肺虚喘咳、津亏口渴、自汗盗汗、梦遗滑精、久泻久痢、失眠健忘、心悸怔忡，是常用中药之一。近年发现它除了具保肝降酶作用外，还具有抗癌、抗艾滋病毒（HIV）、拮抗血小板活化因子（PAF）和抑制醛糖还原酶等多种活性。
五味子含有多种木脂素类化合物，其中的五味子酚为主要的特征性成分。由于五味子酚对中枢神经系统有镇静、催眠、抗惊厥的作用，因而对于保护脑神经细胞，促进脑内蛋白质合成和改善智力、体力有一定功效。同时，对多种实验动物还有明显的呼吸兴奋作用，使呼吸加深、加快，并能对抗吗啡的呼吸抑制作用。五味子酚可以降低肝炎患者血清中的谷丙转氨酶，主要的降酶机制是促进肝细胞修复或抑制肝细胞病变，使细胞膜通透性降低，从而减少漏入血浆中的转氨酶，临床上用于治疗肝炎。五味子酚能促进肝糖原合成，加强糖代谢，和增加肝细胞蛋白质的合成；同时有促进淋巴细胞DNA合成的作用，增加淋巴母细胞生成，促进脾免疫功能。因此，从原植物中分离得到该化合物，对质量控制指标、阐明其药理作用以及为新药开发寻找先导化合物具有重要的意义。
中国专利CN200910242188.X公开了一种五味子单体成分的分离制备方法，将五味子乙醇提取物用石油醚萃取，将石油醚萃取物采用硅胶柱层析，用石油醚-乙酸乙酯洗脱，HPLC监测，收集洗脱流分粗提物A，粗提物B；洗脱剂石油醚-乙酸乙酯体积比为3-5∶1；粗提物A和粗提物B分别应用高速逆流色谱进行分离，得到五味子酚、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素、五味子醇甲、五味子醇乙和五味子酯乙单体，纯度均高于98%。该方法制备复杂，步骤多，制备成本高，且不适用于大量制备或者工业化生产。
发明内容
本发明旨在克服现有技术的缺陷，提供一种快速简便、成本低廉、可适用于大量制备或工业化生产的五味子酚的分离纯化方法。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的。
一种五味子酚的分离纯化方法，其特征在于以五味子为原料通过提取、萃取、结晶得到五味子酚单体，具体包括如下工艺步骤：
A、提取
将五味子粉碎成1～4mm的粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液，回流提取3-5次，每次1.5-3小时，提取液过滤，合并过滤液，浓缩回收乙醇，得50℃下相对密度为1.30-1.40的浓浸膏；
所述乙醇溶液的加入量为五味子:乙醇溶液=1Kg:(8～12)L。
B、萃取
将步骤A所得的浓浸膏按体积比加入10量的水进行分散，用正己烷萃取3-5次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取4-6次，合并乙酸乙酯萃取液，回收滤液至干，得黄绿色的五味子酚粗品；
C、结晶
按照黄绿色固体物:甲醇=1g:（10-1000）ml 计算，将步骤B得到的五味子酚粗品用甲醇完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入2-5倍量体积的蒸馏水，在2-4℃中冷藏结晶，根据晶体具体纯度，重复结晶2～3次，直至纯度≥98%，于100℃干燥后即可得到五味子酚单体产品。
步骤C所述甲醇可以用乙醇或丙酮替代。
本发明的优点在于：
1、本发明通过步骤A的提前，确保了提取物中小极性杂质的有效去除。
2、本发明通过步骤B的萃取，使五味子酚达到了很好的富集效果。
3、本发明通过步骤C 的结晶，进一步纯化了五味子酚，有效保证了五味子酚的纯度。
4、本发明通过步骤A、B、C的顺序搭配，以及适当的参数组合，有效分离出了五味子酚单体；整个工艺过程操作简便、工艺稳定、成本低廉，适合工业化生产，且分离效率高、产品纯度高达98%以上。
附图说明
图1是本发明实施例1五味子酚单体产品的HPLC图谱。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步的详细描述，但不应将此理解为本发明的范围仅限于下述实施例。
下述各实施例中，终产品五味子酚单体的纯度复检均采用反相分析型液相色谱（RP-HPLC）法，色谱条件如下：
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈:水V/V=60:40为流动相；柱温30℃；流速1.0ml/min；检测波长为254 nm。
实施例1
一种五味子酚单体的分离纯化方法，包括如下工艺步骤：
A、提取
将五味子200g粉碎成1～4mm的粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液1.6L，回流提取3次，每次1.5小时，将提取液过滤，合并过滤液，减压浓缩回收乙醇，得相对密度为1.32的浓浸膏150ml；
B、萃取
将步骤A所得的浓浸膏加1.5L水分散，用正己烷萃取3次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取5次，合并乙酸乙酯萃取液，回收滤液至干，得黄绿色的五味子酚粗品1.8g；
C、结晶
将步骤B得到的黄绿色固体用55ml甲醇完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入20ml蒸馏水，在4℃中冷藏结晶，重复结晶2次，在100℃干燥得到五味子酚1.2g，纯度>98%。
实施例2
一种五味子酚单体的分离纯化方法，包括如下工艺步骤：
A、提取
将五味子200g粉碎成1～4mm的粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液2L，回流提取4次，每次2小时，将提取液过滤，合并过滤液，减压浓缩回收乙醇，得浓浸膏相对密度为1.35（50℃），体积120ml；
B、萃取
将步骤A所得的浓浸膏加1.2L水分散，用正己烷萃取4次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取6次，合并乙酸乙酯萃取液，回收滤液至干，得黄绿色的五味子酚粗品2.1g；
C、结晶
将步骤B得到的黄绿色固体用21ml甲醇完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入20ml蒸馏水，在2℃中冷藏结晶，重复结晶2次，在100℃干燥得到五味子酚1.6g，纯度>98%。
实施例3
一种五味子酚单体的分离纯化方法，包括如下工艺步骤：
A、提取
将五味子200g粉碎成1～4mm的粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液2.4L，回流提取5次，每次3小时，将提取液过滤，合并过滤液，减压浓缩回收乙醇，得浓浸膏相对密度为1.30（50℃），体积160ml。
B、萃取
将步骤A所得的浓浸膏加1.6L水分散，用正己烷萃取5次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯萃取液，回收滤液至干，得黄绿色的五味子酚粗品1.5g；
C、结晶
将步骤B得到的黄绿色固体用1500ml甲醇完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入25ml蒸馏水，在,3℃中冷藏结晶，重复结晶3次，在100℃干燥得到五味子酚1.0g，纯度>98%。
实施例4
一种五味子酚单体的分离纯化方法，包括如下工艺步骤：
A、提取
将五味子200g粉碎成1～4mm的粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液1.8L，回流提取4次，每次2小时，将提取液过滤，合并过滤液，减压浓缩回收乙醇，得浓浸膏相对密度为1.33（50℃），体积145ml。
B、萃取
将步骤A所得的浓浸膏加1.45L水分散，用正己烷萃取4次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯萃取液，回收滤液至干，得黄绿色的五味子酚粗品1.4g；
C、结晶
将步骤B得到的黄绿色固体用140ml乙醇完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入15ml蒸馏水，在4℃冷藏结晶，重复结晶3次，在100℃干燥得到五味子酚1.2g，纯度>98%。
实施例5
一种五味子酚单体的分离纯化方法，包括如下工艺步骤：
A、提取
将五味子200g粉碎成1～4mm的粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液2.2L，回流提取4次，每次2.5小时，将提取液过滤，合并过滤液，减压浓缩回收乙醇，得浓浸膏相对密度为1.35（50℃），体积120ml。
B、萃取
将步骤A所得的浓浸膏加1.2L水分散，用正己烷萃取5次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取6次，合并乙酸乙酯萃取液，回收滤液至干，得黄绿色的五味子酚粗品1.35g；
C、结晶
将步骤B得到的黄绿色固体用200ml丙酮完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入20ml蒸馏水，在3℃冷藏结晶，重复结晶2次，在100℃干燥得到五味子酚1.18g，纯度>98%。
Claims (6)
1.一种五味子酚的分离纯化方法，其特征在于以五味子为原料通过提取、萃取、结晶得到五味子酚单体，具体包括如下工艺步骤：
A、提取
将五味子粉碎成1～4mm的粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液，回流提取3-5次，每次1.5-3小时，提取液过滤，合并过滤液，浓缩回收乙醇，得50℃下相对密度为1.30-1.40的浓浸膏；
B、萃取
将步骤A所得的浓浸膏按体积比加入10量的水进行分散，用正己烷萃取3-5次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取4-6次，合并乙酸乙酯萃取液，回收滤液至干，得黄绿色的五味子酚粗品；
C、结晶
按照黄绿色固体物:甲醇=1g:（10-1000）ml 计算，将步骤B得到的五味子酚粗品用甲醇完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入2-5倍量体积的蒸馏水,在2-4℃中冷藏结晶，根据晶体具体纯度，重复结晶2～3次，直至纯度≥98%，于100℃干燥后即可得到五味子酚单体产品。
2.根据权利要求1所述五味子酚的分离纯化方法，其特征在于步骤A所述乙醇溶液的加入量为五味子:乙醇溶液=1Kg:(8～12)L。
3.根据权利要求1所述五味子酚的分离纯化方法，其特征在于步骤C所述甲醇可以用乙醇或丙酮替代。
4.根据权利要求1所述五味子酚的分离纯化方法，其特征在于包括如下工艺步骤：
A、提取
将五味子200g粉碎成1～4mm的粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液1.6L，回流提取3次，每次1.5小时，将提取液过滤，合并过滤液，减压浓缩回收乙醇，得相对密度为1.32的浓浸膏150ml；
B、萃取
将步骤A所得的浓浸膏加1.5L水分散，用正己烷萃取3次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取5次，合并乙酸乙酯萃取液，回收滤液至干，得黄绿色的五味子酚粗品1.8g；
C、结晶
将步骤B得到的黄绿色固体用55ml甲醇完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入20ml蒸馏水，在4℃中冷藏结晶，重复结晶2次，在100℃干燥得到五味子酚1.2g，纯度>98%。
5.根据权利要求1所述五味子酚的分离纯化方法，其特征在于包括如下工艺步骤：
A、提取
将五味子200g粉碎成1～4mm的粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液2L，回流提取4次，每次2小时，将提取液过滤，合并过滤液，减压浓缩回收乙醇，得浓浸膏相对密度为1.35，体积120ml；
B、萃取
将步骤A所得的浓浸膏加1.2L水分散，用正己烷萃取4次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取6次，合并乙酸乙酯萃取液，回收滤液至干，得黄绿色的五味子酚粗品2.1g；
C、结晶
将步骤B得到的黄绿色固体用21ml甲醇完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入20ml蒸馏水，在2℃中冷藏结晶，重复结晶2次，在100℃干燥得到五味子酚1.6g，纯度>98%。
6.根据权利要求1所述五味子酚的分离纯化方法，其特征在于包括如下工艺步骤：
A、提取
将五味子200g粉碎成1～4mm的粗粉，加入质量百分比浓度为95%的乙醇溶液2.4L，回流提取5次，每次3小时，将提取液过滤，合并过滤液，减压浓缩回收乙醇，得浓浸膏相对密度为1.30，体积160ml；
B、萃取
将步骤A所得的浓浸膏加1.6L水分散，用正己烷萃取5次，除去正己烷萃取液，水相用乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯萃取液，回收滤液至干，得黄绿色的五味子酚粗品1.5g；
C、结晶
将步骤B得到的黄绿色固体用1500ml甲醇完全溶解，溶解完全后用纳米有机膜过滤，滤液加入25ml蒸馏水，在3℃中冷藏结晶，重复结晶3次，在100℃干燥得到五味子酚1.0g，纯度>98%。
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