CN102994416A

CN102994416A - 一株犬源地衣芽孢杆菌y10及其应用

Info

Publication number: CN102994416A
Application number: CN2012103876263A
Authority: CN
Inventors: 倪学勤; 曾东; 李洁萍; 曾燕; 舒刚; 景波; 彭焕伟
Original assignee: Sichuan Agricultural University
Current assignee: Sichuan Agricultural University
Priority date: 2012-10-15
Filing date: 2012-10-15
Publication date: 2013-03-27

Abstract

本发明公开了一株耐酸、耐胆盐、抑菌效果好的地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)Y₁₀及其在防治犬肠炎、腹泻病方面的应用。该菌株通过分离、筛选和鉴定而获得，保藏编号为：CCTCC NO：M2011134；该地衣芽孢杆菌Y₁₀可制成微生态制剂，作为兽药和犬食品添加剂使用，调整肠道菌群失调，提高犬肠道微生物多样性及免疫器官指数，改善犬生长性能，有效防治犬腹泻病，为预防犬肠道细菌性疾病提供新的思路，同时也为犬源微生态制剂的发展提供可行的备用菌种。本发明适用于饲料厂和规模化养犬场。

Description

一株犬源地衣芽孢杆菌Y10及其应用

技术领域

本发明涉及一株经分离而获得的耐酸、耐胆盐、抑菌效果好且能较显著改善犬肠道环境，促进微生态平衡从而降低腹泻率的地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformi)Y₁₀及其在防治犬腹泻病方面的应用，属于预防兽医技术领域。

背景技术

自上世纪八十年代以来，微生态制剂作为生物兽药和饲料添加剂已广泛用于仔猪、犊牛、羔羊、家禽等动物肠炎、腹泻病的预防和治疗上。目前专门用于宠物犬的国产微生态制剂还没有问世，临床上常使用人用微生态制剂如整肠生、益菌生等来调节犬的肠道菌群平衡，但效果并不理想。国外已出现了犬用微生态产品，但由于目前微生态制剂作为食品添加剂的相关标准尚不完善，生产质量控制薄弱，一些产品达不到包装上所标示的活菌数量，有的产品根本就不含有活菌(任普军.2006.新兽医，6：48-50)，从而导致产品达不到治病、防病的作用，宠物用微生态制剂整体质量水平比较低，完全不能满足宠物市场快速发展的需要。从2006年1月开始，欧盟已全面禁止在动物饲料中添加抗生素(刘兴海.2007.现代畜牧兽医，5：35-36)。随着抗生素在我国的限用，甚至禁用，该病在我国养犬业中将越来越严重。因此，开发犬用微生态制剂，不仅对生态养犬和环境治理有重要意义，而且给生物兽药业和饲料工业带来巨大的经济效益。目前许多国外学者对乳酸杆菌应用于犬的研究较多，而对芽孢杆菌应用于犬的研究不足(刘昆.2008.饲料工业，15：54-55)。

益生菌(又叫微生态制剂，或微生物制剂，或微生物饲料添加剂)是最先被提出的抗生素替代品，它的作用主要在于扶植正常微生物菌群，调节生态平衡(李长强.2010.江西饲料，2：21-24)。迄今为止尚未见到有关地衣芽孢杆菌Y₁₀的筛选及其在防治犬腹泻病中的应用的报道。

发明内容

针对目前抗生素的滥用及禁用导致疾病很难治愈的情况以及犬感染细菌导致腹泻病后难以治愈或无法治疗等问题，本发明的目的是提供一株具有耐酸、耐胆盐、抑菌效果好的地衣芽孢杆菌Y₁₀；同时也提供该地衣芽孢杆菌Y₁₀在兽药或饲料中的应用，可用以预防和治疗犬腹泻病并调整犬肠道微生态平衡，提高肠道微生物多样性。

本发明参考益生菌可用于临床上预防和治疗动物疾病的思维，从健康犬粪样中筛选出耐酸、耐胆盐，抑菌效果好的地衣芽孢杆菌Y₁₀及菌剂，然后利用该菌剂在兽药或犬日粮中的应用，证明添加本发明菌剂Y₁₀后，可以预防和治疗犬腹泻病；同时发现菌剂Y₁₀的应用能显著提高犬肠道微生物的多样性，调整犬肠道微生态平衡，改善犬生长性能。

具体讲，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

本发明获得具有耐酸、耐胆盐，抑菌效果好的地衣芽孢杆菌Y₁₀的方法是(见图1)：采集健康犬粪样，用蒸馏水稀释后，用不同筛选培养基进行分离培养和鉴定，得到一株对葡萄球菌、大肠杆菌CVCC2060、绿脓杆菌、大肠杆菌ATCC25922、沙门氏菌339有显著抑制作用的菌株Y₁₀，然后进行耐酸、耐胆盐试验。通过PCR扩增出菌株H₂的16S rDNA片段，经测序获得目的基因序列。用美国生物信息学中心(NCBI)的BLAST程序对所初步获得的菌株H₂的16S rDNA序列进行登录，获得登录号为FJ549021(GenBank(Http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/)，与已收录的序列进行核苷酸同源性比较。经过微生物学分类鉴定，确定该分离的菌株Y₁₀为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)Y₁₀，该菌株已于2011年4月20日送交湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏编号为：CCTCC NO：M2011134。

本发明地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformi)Y₁₀(以下简称为“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”或“地衣芽孢杆菌Y₁₀”)按照常规甘油冷冻方法保藏。

本发明也提供本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”在兽药或饲料中的应用。采用农业微生物常规操作方法将本发明制备成含“地衣芽孢杆菌CCTCC2011134”活菌含量不低于1.0×10⁹cfu/g范围的微生物制剂(以下简称“菌剂”)，以不低于0.1％比例添加在犬日粮中，使其在犬日粮中活菌含量不低于1.0×10⁶cfu/g，可以预防和治疗犬腹泻病，促进其肠道内正常生理性厌氧菌的生长，调整肠道菌群失调，恢复肠道功能，提高犬肠道微生物多样性，增强机体免疫器官指数，改善犬的生长性能。本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”菌剂还可参照北京顺达四海生物药业有限公司公开的发明专利(公开号为CN 102120972A，发明名称：地衣芽孢杆菌菌粉及微生态制剂的制备方法)所介绍的方法生产，应用后同样能获得相同效果。

本发明具有以下效果：

(1)本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”具有耐酸、耐胆盐，抑菌效果好，可用于治疗由大肠杆菌、沙门氏菌等引起的犬腹泻病并提高犬肠道微生物多样性。

(2)本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”可直接在兽药或饲料中应用；也可制成微生态制剂，作为生物兽药和犬食品添加剂使用，比如添加于犬日粮中使用，可有效预防和治疗由大肠杆菌、沙门氏菌等引起的腹泻病，促进其肠道内正常生理性厌氧菌的生长，调整肠道菌群失调，恢复肠道功能，提高犬肠道微生物多样性及免疫器官指数，改善犬生长性能。这会给生物兽药业和饲料工业带来良好的经济效益。本发明适用于饲料厂和规模化养犬场。

附图说明

图1为本发明的技术流程图。

图2为本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”的抑菌试验结果图，其中A，B，C，D，E分别为本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”对大肠杆菌CVCC2060、ATCC25922，金黄色葡萄球菌，绿脓杆菌和沙门氏菌抑菌效果。

图3为本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”总DNA的2％琼脂糖凝胶电泳检测图。

图4为本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”16S rRNAPCR产物的1.0％琼脂糖凝胶电泳检测图。

图5为从Genbank里搜索出芽孢杆菌属内12个不同种的16S rRNA序列建立芽孢杆菌属系统发育树图。

图6为本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”治疗感染腹泻病幼犬粪样细菌总DNA的0.8％琼脂糖凝胶电泳检测结果图。该图中，Marker为λ-IIIdigest，样品在23kb处都有条带。

图7为本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”治疗感染腹泻病犬粪样细菌16S rRNA V3区PCR扩增结果。该图中，Marker为D2000，PCR扩增得到200bp左右的16S rRNA V3区片段。

图8-图9为本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”对各组幼犬处理0日粪样菌群的DGGE图谱、聚类分析图。

图10-图11为本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”对各组幼犬处理9日粪样菌群的DGGE图谱、聚类分析图。

图12-图13为本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”对试验组3幼犬粪样菌群的DGGE图谱、聚类分析图。

图14-图15为本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”对试验组4幼犬粪样菌群的DGGE图谱、聚类分析图。

图16为本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”对试验幼犬粪样微生物群落多样性的影响图。

具体实施方式

实施例1：本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”的获取与鉴定，见图1

1、本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”(即地衣芽孢杆菌Y₁₀)的分离、获取

1.1菌株Y₁₀的分离

采集位于中国四川省雅安市内常见的、家养的健康宠物犬的新鲜粪样，立即送实验室检测。取新鲜粪样0.5g，放入加有49.5ml生理盐水并带有玻璃珠的三角瓶中，摇床37℃震荡20min，然后60℃恒温水浴20min。取0.5ml稀释粪液做十倍递减稀释到10^-5。从10^-3～10^-5各稀释度取100μL涂布于普通营养琼脂培养基，37℃恒温培养12h。

镜检培养基上的单个菌落。挑取芽孢杆菌单菌落在普通营养琼脂平板上画线培养，每个单菌落重复平板画线2～3次，直到得到纯的菌株Y₁₀即本发明地衣芽孢杆菌Y₁₀。将得到的菌株Y₁₀接种于营养琼脂斜面，保存备用。

1.2耐酸试验

将筛选到的菌株Y₁₀培养过夜，离心收集菌体(4000r/min，10min，4℃)；0.25％生理盐水漂洗一次后离心；悬浮于0.0SM磷酸缓冲液-pH2.0中，37℃培养1～3h，检测培养期间活菌数的变化。试验结果显示，pH2.0的缓冲液中3小时后存活率达到80.32％(见表1)。表明本发明菌株Y₁₀具有较强的耐酸性。

表1菌株Y₁₀耐酸实验结果 Log₁₀CFU/mL

1.3耐胆盐试验

将筛选到的菌株Y₁₀培养过夜，离心收集菌体(4000r/min，10min，4℃)；0.25％生理盐水漂洗一次后离心；悬浮于与初培养基等体积的含1％胆盐的生理盐水中，37℃作用6h；检测活菌数的变化率。试验结果显示，菌株Y₁₀在6小时后存活率达94.11％(见表2)。这表明本发明菌株Y₁₀具有较强的胆盐耐受性。

表2菌株Y₁₀的胆盐耐受结果 Log₁₀CFU/mL

1.4抑菌试验

采用双层琼脂扩散法：将菌株Y₁₀接于普通营养琼脂平板上，37℃培养24h。然后用0.7％软营养琼脂覆盖(加有10⁸/mL的指示菌)，倒置平板。37℃再培养24h。测量抑菌圈的直径(见图2)。实验结果表明本发明菌株Y₁₀具有较好的抑菌效果。

1.5药敏试验

采用纸片扩散法(Kerby-Bauer)进行药敏检测，结果显示菌株Y₁₀对氨苄青霉素、氯霉素、红霉素、庆大霉素、卡那霉素、利福平、四环素、VI、强力霉素、多粘菌素、万古霉素、痢菌剂等十二种抗生素敏感，其中，红霉素、卡那霉素和庆大霉素达到了20mm以上。(见表3)

表3菌株Y₁₀对12种常见抗生素的耐受力

2、本发明菌株Y₁₀的鉴定

2.1该菌株Y₁₀的菌学特征如下：菌体大小为(0.6-0.8)um×(1.5-2.0)um，普通培养基(LB琼脂糖平板)上形成的菌落呈乳白色、不透明、边缘不整齐、表面粗糙的大菌落。显微镜下呈革兰氏阳性杆菌，菌体两端平整，内生芽孢呈椭圆形。最适生长温度为30℃，pH5.8-8均生长良好，最适生长pH为6.8-7.2。还原石蕊牛奶、硝酸盐，水解马尿酸盐、酪素、淀粉，接触酶阳性，在7％氯化钠中生长。

2.2将分离得到的菌株Y₁₀的基因组总DNA按照(Li M.2003.Journal ofMicrobiology Methods，54∶13-20)采用

DNA Stool Mini Kit提取，用2％琼脂糖凝胶电泳检测总DNA(见图3)。菌株Y₁₀基因组总DNA的16S rDNA V₃按照(Walter J.2001.Applied and Environmental Microbiology，67∶2578-2585)方法扩增，PCR产物用1.0％琼脂糖进行凝胶电泳检测(见图4)。纯化后将菌株的16S rRNA的PCR反应产物用ABI3700基因测序仪测序，测序由上海生物技术有限公司完成，测得Y₁₀的16S rRNA大部分序列为1459个bp，见核苷酸序列表。将该菌株Y₁₀的16S rRNA序列提交美国生物信息学中心(NCBI) 网站，获得登录号为FJ549021。在Genbank里搜索出芽孢杆菌属内12个不同种的16S rRNA序列，应用ClustalXl.81软件进行多重序列比对，再用Tree View和Phylod Raw软件进行系统发育分析，构建无根进化树，见表4和图5。

表4菌株Y₁₀构建系统进化树所用序列

从进化树图得出本发明菌株Y₁₀与地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformi)在同一分支上，与它的亲缘关系最近，同源性高达99％。因此，本发明菌株Y₁₀鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformi)，并已于2011年4月20日在位于湖北省武汉市的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，其保藏编号为：CCTCC N0：M2011134。

本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”按照常规甘油冷冻方法保藏。

实施例2：本发明“益生芽孢杆菌CCTCC 2011134”(即芽孢杆菌Y₁₀)的应用

1、本发明地衣芽孢杆菌Y₁₀安全性实验

(1)试验动物：15g左右昆明系小白鼠40只(雌雄各半)，购自四川大学华西医学院动物试验中心。

(2)培养基：营养肉汤培养基(蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠5g，1000mL水，pH7.2，120℃灭菌30min)

(3)菌剂的制备：用营养琼脂平板，采用固体平板培养法，收集菌体，加入适量的碳酸钙载体，60℃烘干菌剂，稀释法检测菌剂活菌数。

(4)鼠料的制作：根据菌剂的活菌数量，分别与一定量的鼠料混合均匀制备出每克含10⁹、10⁸、10⁷地衣芽孢杆菌Y₁₀的鼠料。

(5)试验设计

40只小鼠试喂3天后，随机分成4个组(雌雄各半)。对照组，每天饲喂不含菌株Y₁₀的鼠料；试验组每天分别饲喂10⁹、10⁸、10⁷地衣芽孢杆菌Y₁₀的鼠料，饲喂四周。每隔一周，记录各组老鼠体重。四周后，断头采取各组血液，每组取三份血清检测尿素氮、谷丙转氨酶ALT、总糖和总蛋白等生化指标(送于雅安市人民医院血液生化中心检测)。无菌解剖各试验组鼠内脏器官，对肾脏、肝脏、脾脏和胸腺等器官称重，计算各免疫器官指数。采集各组试验鼠的盲肠，检测乳酸杆菌、双歧杆菌、芽孢杆菌、大肠杆菌的含量，分析各组肠道菌群组成差异；用液相色谱仪检测结肠内容物中短链脂肪酸(乙酸、丙酸、丁酸)的含量。

(6)小鼠体重变化结果

小鼠体重结果见表5。第0天时各试验组小鼠体重无差异；一周后地衣芽孢杆菌Y₁₀浓度为10⁸的小鼠体重小于对照组，地衣芽孢杆菌Y₁₀浓度为10⁹的体重大于对照组，且差异显著；第二、三、四周时，各试验组的小鼠体重与对照组无差异性。说明本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”对小鼠体重无毒性作用。

表5地衣芽孢杆菌Y₁₀添加对小鼠体重的影响单位：g

同一行中肩标有相同字母者或不标者表示差异不显著(P＞0.05)，肩标字母不同者表示差异显著(P＜0.05)。

(7)组织学检测

小鼠各组织重量指数结果见表6。实验组地衣芽孢杆菌Y₁₀浓度为10⁷组中肾脏指数低于对照组，试验组中芽孢杆菌浓度为10⁸和10⁹组中的肾脏指与对照组没有差异，而各试验组中的脾脏免疫指数均高于对照组。说明本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”对小鼠的免疫器官无毒性，而且对脾脏免疫指数有增大的作用。

表6地衣芽孢杆菌Y₁₀添加对小鼠组织重量的影响单位：mg/g

(8)血液生化指标

小鼠各血液生化指标检测结果见表7。各试验组与对照组的总蛋白(IP)和尿素(BUN)含量无显著差异性；对照组中的丙氨酸氨基转移酶(ALT)有少数个体的含量高于正常值，而各试验组中的含量均在正常值内，且与对照组差异显著；各试验组中的葡萄糖含量均小于对照组，且差异显著。说明本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”对小鼠的血液生化指标没有影响，对血液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量偏高的小鼠有降低的作用。

表7地衣芽孢杆菌Y₁₀添加对小鼠血液生化指标的影响

(9)肠道内主要微生物数量

小鼠肠道内4种主要微生物的数量检测结果见表8。有益菌群数量没有明显的差异性。实验组中芽孢杆菌数量均高于对照组，这可能是因为实验组饲喂了本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”后芽孢杆菌总数增加。对照组中大肠杆菌数量均高于各实验组，说明本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”对小鼠的内环境有保护作用，降低了大肠杆菌数量，调节了肠道微生态平衡。

表8地衣芽孢杆菌Y₁₀添加对小鼠肠道主要微生物数量的影响Log₁₀CFU/g

(10)小鼠结肠内的短链脂肪酸含量

小鼠结肠内的短链脂肪酸含量检测结果见表9。试验组小鼠结肠中的乙酸含量明显高于对照组，且芽孢杆菌饲喂浓度越高，乙酸含量越大，说明本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”可以促进小鼠体内乙酸的形成；实验组中丙酸含量比对照组略有提高，而丁酸含量能被仪器检测出，对照组未检测出丁酸含量。说明本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”能够提高小鼠结肠中短链脂肪酸的浓度且无毒副作用。

表9地衣芽孢杆菌Y₁₀添加对小鼠结肠内的短链脂肪酸含量的影响单位：mg/g

2、动物治疗试验

(1)试验菌株：地衣芽孢杆菌Y₁₀(本发明菌株“地衣芽孢杆菌CCTCC2011134”)；大肠杆菌(E.coli)CVCC2060购自中国兽药监察，沙门氏菌339(四川农业大学微生态实验室提供)。

(2)试验动物：约一月龄健康杂交幼犬24只。

(3)地衣芽孢杆菌Y₁₀菌剂活菌数检测：地衣芽孢杆菌Y₁₀菌剂的活菌数测定结果为1.0×10⁹CFU/g；按0.1％拌入基础料后，地衣芽孢杆菌Y₁₀活菌数测定结果为1.0×10⁶CFU/g。

(4)试验设计：将幼犬按体重相近的原则随机分为四组，每组六只，按表10对各组进行处理。

表10试验设计

注：试验组1为阳性对照组；试验组2为阴性对照组；试验组3和4为攻毒试验组。

饲喂7天后，用大肠杆菌CVCC2060(10⁸cfu/ml)、沙门氏菌339(10⁸cfu/m1)混合培养液，按2mL/kg对试验组3和4进行攻毒实验，12h灌胃一次，连续灌胃2次，记录幼犬腹泻头数。实验期间，定期观察对照组、试验组的粪便情况、精神状态，记录腹泻率和死亡率。随机采集各试验组和对照组各三只犬第0天、第3天、第6天和第9天的粪样(每组每个阶段采样3份)，用PCR-DGGE分子生物学法观察各处理组肠道微生物群落结构和多样性的差异性。

(6)地衣芽孢杆菌Y₁₀对幼犬腹泻的影响：各处理组的采食量和腹泻率见表11。各处理组幼犬前六天采食量无差异，且未出现腹泻现象。试验第七天，试验组3、4幼犬用含地衣芽孢杆菌Y₁₀培养液灌胃。第九天，试验组4中四只犬均出现腹泻现象，并且采食量降低；而试验组3仅一只犬出现腹泻现象。试验结果表明本发明菌株“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”能够降低攻毒幼犬的腹泻率，对幼犬具有保护作用。

表11地衣芽孢杆菌Y₁₀对幼犬腹泻的影响

(7)粪样微生物菌群测定：

按照(Kaldhusdal M.2000.World Poultry.16∶50-51)描述，用PCR-DGGE分子生物学法观察各处理组粪样微生物群落结构和多样性的差异性。按照上述方法提取粪样总DNA和细菌16S rRNA V3区扩增，结果见表12、图6和图7。

表12细菌总DNA编号

(8)细菌基因组总DNA 16S rRNA V₃区扩增片段DGGE分析

配制35％和60％变性梯度胶并用Bio-Rad Dcode进行DGGE凝胶电泳和硝酸银染色，然后用Bio-Rad GS800 Calibrated Densitometer扫描胶成像。试验数据用Excel进行预处理后用SPSS进行显著性分析。DGGE图谱使用NTSYSpc 2.10s软件进行多样性聚类分析。

幼犬粪样菌群的DGGE图谱、聚类分析图和多样分析图(见表13、14)。DGGE图谱上的条带反映了犬粪样中的优势菌群，条带的数量和位置的复杂性说明菌群的多样性。饲喂本发明0.1％“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”菌剂(活菌数为1.0×10⁹CFU/g)的试验组3腹泻率仅25％，而试验组4却高达100％，说明本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”对幼犬肠道有保护作用；DGGE图谱分析看出，试验组1肠道微生物多样性高于阴性对照组，说明本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC2011134”能够提高犬肠道微生物多样性；试验组3攻毒后，肠道微生物多样性略有下降，可能是由于机体内环境为抵抗病原微生物所引起，而未饲喂本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”的试验组4攻毒后肠道微生物多样性增加，可能是因为肠道微生物紊乱，发生腹泻，肠道内的大量微生物排出体外所引起，说明饲喂本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”能促进犬肠道微生态平衡，对防止犬腹泻有一定的积极作用。试验结果均说明饲喂本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”能够调整犬肠道微生态平衡，提高犬肠道微生物的多样性，在一定程度上治疗腹泻。

表13各试验组幼犬粪样菌群的DGGE图谱、聚类分析图和多样分析图

表14试验组3和试验组4幼犬粪样菌群的DGGE图谱、聚类分析图

(9)地衣芽孢杆菌Y₁₀对试验幼犬粪样微生物群落多样性的影响

各处理组在实验期间粪样菌群多样性结果见图16。第0天，图谱条带组内和各组间差异不显著(P＞0.05)，各处理组平均条带数为11条；第3天，试验组3平均条带数为15，试验组4平均条带数为13；第6天，试验组3平均条带数为15.3，试验组4平均条带数为12.6；第9天，各处理组的多样性条带数上升到平均14条，试验组1的平均条带数为14.7，试验组2的平均条带数为12.7，试验组3攻毒后的平均条带数为13.3，试验组4攻毒后平均条带数为16.6。试验结果说明添加本发明“地衣芽孢杆菌CCTCC 2011134”能明显提高犬肠道微生物菌群的多样性。

Claims

1.一株地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)Y₁₀，其特征在于该菌株耐酸、耐胆盐、抑菌效果好，且能较显著改善犬肠道环境，促进微生态平衡从而降低腹泻率。该菌株已于2011年4月20日由中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，其保藏号为CCTCC N0：M2011134。

2.权利要求1所述的菌株或含有该菌株的微生物制剂在防治犬腹泻病方面的应用。