CN102924536A - 草莓多酚的制备方法 - Google Patents

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程安玮
陈相艳
王文亮
弓志青
柳尧波
石贤权
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Abstract

本发明涉及一种草莓多酚的制备方法，属于植物提取技术领域。先将草莓打浆，冷冻干燥成粉；然后加水溶解，在超声波作用下纤维素酶解；过滤后将草莓残渣用乙醇溶解，超声萃取2-3次，浓缩得草莓多酚粗体液；然后用大孔吸附树脂层析柱对其进行层析，冷冻干燥后得到草莓多酚粉末。本发明将草莓中的多酚通过超声萃取、超滤、大孔树脂纯化等多部工艺进行纯化可使多酚的纯度到达75%以上，具有提取时间短、温度低、提取率高，安全、无污染等优点。

Description

草莓多酚的制备方法
技术领域
本发明涉及一种草莓多酚的制备方法，属于植物提取技术领域。
背景技术
草莓是对蔷薇科草莓属植物的通称，属多年生草本植物，是世界十大水果之一，在世界各类浆果中栽培面积和产量仅次于葡萄，位于第二位。在我国各地广有栽培，种植面积达150万亩，年产草莓约为150万吨，种植面积和产量均居世界第一位。
目前对草莓中活性物质的研究主要集中在抗坏血酸、花青素等成分，实际上草莓中的多酚含量也非常高，用福林酚测定法证明，草莓中的总多酚含量可达到干重的25 mg/g，这在果蔬原料中多酚的含量是非常高的。研究表明草莓中的多酚主要包括花青素、槲皮素、异槲皮素、儿茶酚、香豆酸、糅花酸、酚酸、堪非醇及其衍生物等。Link（2010）等研究认为多酚可预防癌症的发生。Leifert（2008）等研究认为多酚可降低低密度脂蛋白胆固醇的氧化及血小板的凝集，预防心血管疾病，包括抗动脉粥硬化、心率失调等作用，具有很强的抗氧化活性。多酚是植物体内复杂的酚类次生代谢产物，具有多元酚结构，主要存在于植物的皮、根、叶、壳及果肉中。多酚类物质作为人类“第七类营养素”逐渐受到重视，具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、抑菌等多种活性。
目前已经公开有从苹果提取苹果多酚、从茶叶中提取茶多酚的方法；但是由于各种植物、水果中所含的多酚的化学成分并不完全相同，因此从不同植物中提取多酚的方法不能一概而论。但是没有公开从草莓中提取草莓多酚的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种草莓多酚的制备方法。
 一种草莓多酚的制备方法，包括以下步骤：
（1）将草莓打成浆，冷冻干燥成粉状，得草莓粉；
（2）向草莓粉中加水溶解，然后加入纤维素酶，在300-400Hz的超声波作用下使草莓粉充分酶解，过滤得草莓残渣；每克草莓粉需加入5-10mg纤维素酶；
（3）超声萃取：向草莓残渣中加入10～30倍其体积的、质量浓度为50-80%的乙醇溶液，在20～50℃条件下，以300～600Hz超声萃取30-60min，然后过滤得萃取液；超声萃取2-3次，合并萃取液、过滤，浓缩到原体积的1/10～1/5，得草莓多酚粗体液；
（4）用质量浓度10%的甲醇溶液将草莓多酚粗体液的浓度调节为2～4mg/ml；然后用HP-20大孔吸附树脂层析柱对其进行层析，流速为5ml/3min；然后使用浓度为50～90%的乙醇溶剂，以5ml/3min的流速进行洗脱，取洗脱液；
（5）将洗脱液浓缩到原体积的1/5～1/2，冷冻干燥后得到草莓多酚粉末。
在上述草莓多酚的制备方法中，为了使草莓粉中的纤维素被纤维素酶充分酶解；优选的，步骤（2）中，草莓粉酶解的时间为10-20min。更优选的，每克草莓粉加水10/3g、加纤维素酶5mg，超声频率为400Hz，酶解时间为20min。
在上述草莓多酚的制备方法中，为了提高萃取效果，步骤（3）中优选的超声萃取条件为，乙醇溶液的浓度为50%，其用量为15倍草莓残渣的体积；温度为25℃，超声频率400Hz，超声萃取时间为60min；重复萃取2次；萃取液浓缩后的体积为原体积的1/5。
在上述草莓多酚的制备方法中，为了提高层析效果，步骤（4）中，所述草莓多酚粗体液的浓度优选为2mg/ml；层析时，层析柱中草莓多酚粗提液的体积优选为层析柱树脂层的3-5倍；洗脱时，乙醇溶液的体积优选为3～5倍的层析柱树脂层体积。
有益效果
    本发明将草莓中的多酚通过超声萃取、超滤、大孔树脂纯化等多部工艺进行纯化可使多酚的纯度到达75%以上，具有提取时间短、温度低、提取率高，安全、无污染等优点。
具体实施方式
    下面结合实例，对本发明做进一步的描述。
实施例1
将新鲜的草莓打碎成浆，然后冷冻干燥成粉状，既得草莓粉；
取3g草莓粉，用10ml的水溶解，然后加入15mg纤维素酶，以400Hz的超声频率超声20min，然后过滤得草莓残渣；
超声萃取：向草莓残渣中加入10倍草莓残渣体积的、质量浓度为50%乙醇溶液，常温条件下，以400Hz的超声频率超声萃取1h后取萃取液；
超声萃取两次；合并萃取液，过滤，浓缩到原体积的1/5，得到草莓多酚粗提液；
用HP-20大孔树脂吸附层析柱纯化草莓多酚粗提液：向草莓多酚粗提液中加入质量浓度为10%的甲醇溶液，将草莓多酚粗提液的浓度调节为2mg/ml；将草莓多酚的甲醇溶液加入层析柱，使其体积为3倍树脂层的体积，以5ml/3min的流速过柱;然后进行洗脱,选择质量浓度为80%的乙醇溶液作为洗脱剂加入层析柱，使乙醇溶液的体积为3倍树脂层的体积，乙醇溶液以5ml/3min的洗脱速度过柱，收集洗脱液；将洗脱液浓缩到原体积的1/3，然后冷冻干燥得到草莓多酚粉末。
实施例2
将新鲜的草莓打碎成浆，然后冷冻干燥成粉状，既得草莓粉；
取3g草莓粉，用10ml的水溶解，然后加入30mg纤维素酶，以300Hz的超声频率超声10min，然后过滤得草莓残渣；
超声萃取：向草莓残渣中加入20倍草莓残渣体积的、质量浓度为80%乙醇溶液，常温条件下，以600Hz的超声频率超声萃取45min后取萃取液；
超声萃取两次；合并萃取液，过滤，浓缩到原体积的1/7，得到草莓多酚粗提液；
用HP-20大孔树脂吸附层析柱纯化草莓多酚粗提液：向草莓多酚粗提液中加入质量浓度为10%的甲醇溶液，将草莓多酚粗提液的浓度调节为3mg/ml；将草莓多酚的甲醇溶液加入层析柱，使其体积为5倍树脂层的体积，以5ml/3min的流速过柱;然后进行洗脱,选择质量浓度为55%的乙醇溶液作为洗脱剂加入层析柱，使乙醇溶液的体积为5倍树脂层的体积，乙醇溶液以5ml/3min的洗脱速度过柱，收集洗脱液；将洗脱液浓缩到原体积的1/5，然后冷冻干燥得到草莓多酚粉末。
实施例3
将新鲜的草莓打碎成浆，然后冷冻干燥成粉状，既得草莓粉；
取3g草莓粉，用10ml的水溶解，然后加入20mg纤维素酶，以400Hz的超声频率超声15min，然后过滤得草莓残渣；
超声萃取：向草莓残渣中加入30倍草莓残渣体积的、质量浓度为60%乙醇溶液，50℃条件下，以500Hz的超声频率超声萃取35min后取萃取液；
超声萃取两次；合并萃取液，过滤，浓缩到原体积的1/10，得到草莓多酚粗提液；
用HP-20大孔树脂吸附层析柱纯化草莓多酚粗提液：向草莓多酚粗提液中加入质量浓度为10%的甲醇溶液，将草莓多酚粗提液的浓度调节为3mg/ml；将草莓多酚的甲醇溶液加入层析柱，使其体积为4倍树脂层的体积，以5ml/3min的流速过柱;然后进行洗脱,选择质量浓度为85%的乙醇溶液作为洗脱剂加入层析柱，使乙醇溶液的体积为5倍树脂层的体积，乙醇溶液以5ml/3min的洗脱速度过柱，收集洗脱液；将洗脱液浓缩到原体积的1/5，然后冷冻干燥得到草莓多酚粉末。

Claims (5)

1.一种草莓多酚的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将草莓打成浆，冷冻干燥成粉状，得草莓粉；
（2）向草莓粉中加水溶解，然后加入纤维素酶，在300-400Hz的超声波作用下使草莓粉充分酶解，过滤得草莓残渣；每克草莓粉加入5-10mg纤维素酶；
（3）超声萃取：向草莓残渣中加入10～30倍其体积的、质量浓度为50-80%的乙醇溶液，在20～50℃条件下，以300～600Hz超声萃取30-60min，过滤得萃取液；超声萃取2-3次，合并萃取液、过滤，浓缩到原体积的1/10～1/5，得草莓多酚粗体液；
（4）用质量浓度10%的甲醇溶液将草莓多酚粗体液的浓度调节为2～4mg/ml；然后用HP-20大孔吸附树脂层析柱对其进行层析，流速为5ml/3min；然后使用浓度为50～90%的乙醇溶剂，以5ml/3min的流速进行洗脱，取洗脱液；
（5）将洗脱液浓缩到原体积的1/5～1/2，冷冻干燥后得草莓多酚粉末。
2.根据权利要求1所述的草莓多酚的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，草莓粉酶解时间为10-20min。
3.根据权利要求1或2所述的草莓多酚的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，每克草莓粉加水10/3g、加纤维素酶5mg，超声频率为400Hz，酶解时间为20min。
4.根据权利要求3所述的草莓多酚的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，乙醇溶液的浓度为50%，其用量为15倍草莓残渣的体积；温度为25℃，超声频率400Hz，超声萃取时间为60min；重复萃取2次；萃取液浓缩后的体积为原体积的1/5。
5.根据权利要求4所述的草莓多酚的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，所述草莓多酚粗体液的浓度为2mg/ml；层析柱中草莓多酚粗提液的体积为层析柱树脂层的3-5倍；层析柱中乙醇溶液的体积为3～5倍的层析柱树脂层体积。
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