CN102879486B - 一种筛选中药药效相关成分的方法及模型建立方法 - Google Patents
一种筛选中药药效相关成分的方法及模型建立方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102879486B CN102879486B CN201210324140.5A CN201210324140A CN102879486B CN 102879486 B CN102879486 B CN 102879486B CN 201210324140 A CN201210324140 A CN 201210324140A CN 102879486 B CN102879486 B CN 102879486B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- concentration
- composition
- peak area
- traditional chinese
- chinese medicine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 53
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 39
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 33
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 title claims abstract description 22
- 238000012216 screening Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 50
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 27
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims abstract description 26
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 claims abstract description 15
- 230000009471 action Effects 0.000 claims abstract description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 92
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 55
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 claims description 53
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 52
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 claims description 42
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 claims description 32
- 238000013461 design Methods 0.000 claims description 24
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 claims description 24
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 claims description 19
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 16
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 14
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 13
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 11
- 238000013178 mathematical model Methods 0.000 claims description 11
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 7
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 claims description 6
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 6
- 230000008878 coupling Effects 0.000 claims description 5
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 claims description 5
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims description 5
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims description 4
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000011835 investigation Methods 0.000 claims description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 claims description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 abstract description 5
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 abstract description 5
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 abstract description 4
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 abstract 1
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 66
- HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N dpph Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1[N]N(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 30
- ZZAJQOPSWWVMBI-UHFFFAOYSA-N calycosin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC=C1C1=COC2=CC(O)=CC=C2C1=O ZZAJQOPSWWVMBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- 235000006533 astragalus Nutrition 0.000 description 23
- 239000009636 Huang Qi Substances 0.000 description 22
- 241001061264 Astragalus Species 0.000 description 21
- -1 DPPH free radical Chemical class 0.000 description 21
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 20
- 230000007760 free radical scavenging Effects 0.000 description 18
- 235000010110 Astragalus glycyphyllos Nutrition 0.000 description 17
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- QUQPHWDTPGMPEX-UHFFFAOYSA-N Hesperidine Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1C1OC2=CC(OC3C(C(O)C(O)C(COC4C(C(O)C(O)C(C)O4)O)O3)O)=CC(O)=C2C(=O)C1 QUQPHWDTPGMPEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- CNHOGQMRRDHYGI-NJCGARBWSA-N beta-onocerin Chemical compound C([C@@]12C)C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]1CCC(C)=C2CCC1=C(C)CC[C@@H]2[C@]1(C)CC[C@H](O)C2(C)C CNHOGQMRRDHYGI-NJCGARBWSA-N 0.000 description 14
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 12
- IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N kaempferol Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 description 11
- 238000011160 research Methods 0.000 description 11
- WACBUPFEGWUGPB-MIUGBVLSSA-N calycosin-7-O-beta-D-glucoside Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC=C1C1=COC2=CC(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)=CC=C2C1=O WACBUPFEGWUGPB-MIUGBVLSSA-N 0.000 description 10
- WACBUPFEGWUGPB-UHFFFAOYSA-N calycosin-7-O-beta-D-glucoside Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1C1=COC2=CC(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)=CC=C2C1=O WACBUPFEGWUGPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000010238 partial least squares regression Methods 0.000 description 10
- 238000002211 ultraviolet spectrum Methods 0.000 description 9
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 description 8
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 description 8
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 8
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 7
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 7
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 7
- 235000008777 kaempferol Nutrition 0.000 description 7
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 7
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- UBSCDKPKWHYZNX-UHFFFAOYSA-N Demethoxycapillarisin Natural products C1=CC(O)=CC=C1OC1=CC(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 UBSCDKPKWHYZNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 6
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 6
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 6
- QMNWISYXSJWHRY-YLNUDOOFSA-N astragaloside IV Chemical compound O1[C@H](C(C)(O)C)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@]2(C)CC[C@]34C[C@]4(CC[C@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO4)O)C4(C)C)[C@H]4[C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)C[C@H]3[C@]2(C)C[C@@H]1O QMNWISYXSJWHRY-YLNUDOOFSA-N 0.000 description 6
- QMNWISYXSJWHRY-BCBPIKMJSA-N astragaloside IV Natural products CC(C)(O)[C@@H]1CC[C@@](C)(O1)[C@H]2[C@@H](O)C[C@@]3(C)[C@@H]4C[C@H](O[C@@H]5O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]5O)[C@H]6C(C)(C)[C@H](CC[C@@]67C[C@@]47CC[C@]23C)O[C@@H]8OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]8O QMNWISYXSJWHRY-BCBPIKMJSA-N 0.000 description 6
- PFKIBRPYVNVMRU-UHFFFAOYSA-N cyclosieversioside F Natural products CC(C)(O)C1COC(C)(C1)C2C(O)CC3(C)C4CC(OC5OC(CO)C(O)C(O)C5O)C6C(C)(C)C(CCC67CC47CCC23C)OC8OCC(O)C(O)C8O PFKIBRPYVNVMRU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N morin Natural products OC1=CC(O)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 6
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 6
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 6
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 6
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 5
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 4
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 4
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 4
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 4
- 210000004233 talus Anatomy 0.000 description 4
- NAWXUBYGYWOOIX-SFHVURJKSA-N (2s)-2-[[4-[2-(2,4-diaminoquinazolin-6-yl)ethyl]benzoyl]amino]-4-methylidenepentanedioic acid Chemical compound C1=CC2=NC(N)=NC(N)=C2C=C1CCC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CC(=C)C(O)=O)C(O)=O)C=C1 NAWXUBYGYWOOIX-SFHVURJKSA-N 0.000 description 3
- MGJLSBDCWOSMHL-WFMNFSIZSA-N Ononin Natural products O(C)c1ccc(C=2C(=O)c3c(OC=2)cc(O[C@H]2[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O2)cc3)cc1 MGJLSBDCWOSMHL-WFMNFSIZSA-N 0.000 description 3
- 238000010219 correlation analysis Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 239000006101 laboratory sample Substances 0.000 description 3
- MGJLSBDCWOSMHL-MIUGBVLSSA-N ononin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C1=COC2=CC(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)=CC=C2C1=O MGJLSBDCWOSMHL-MIUGBVLSSA-N 0.000 description 3
- MGJLSBDCWOSMHL-UHFFFAOYSA-N ononoside Natural products C1=CC(OC)=CC=C1C1=COC2=CC(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)=CC=C2C1=O MGJLSBDCWOSMHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 240000001606 Adenanthera pavonina Species 0.000 description 2
- 235000011470 Adenanthera pavonina Nutrition 0.000 description 2
- 241000045403 Astragalus propinquus Species 0.000 description 2
- UOVGCLXUTLXAEC-IUODEOHRSA-N Methylnissolin Natural products O(C)c1c(OC)ccc2[C@@H]3[C@H](Oc12)c1c(OC3)cc(O)cc1 UOVGCLXUTLXAEC-IUODEOHRSA-N 0.000 description 2
- 241000594182 Sarcophaga sigma Species 0.000 description 2
- GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N Thermopsosid Natural products O(C)c1c(O)ccc(C=2Oc3c(c(O)cc(O[C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O4)c3)C(=O)C=2)c1 GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N 0.000 description 2
- BLUAFEHZUWYNDE-NNWCWBAJSA-N artemisinin Chemical compound C([C@](OO1)(C)O2)C[C@H]3[C@H](C)CC[C@@H]4[C@@]31[C@@H]2OC(=O)[C@@H]4C BLUAFEHZUWYNDE-NNWCWBAJSA-N 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 229930003944 flavone Natural products 0.000 description 2
- 150000002212 flavone derivatives Chemical class 0.000 description 2
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 description 2
- 235000008216 herbs Nutrition 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 238000007348 radical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 2
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N vitamin p Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C=C1C1=CC=CC=C1 VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012935 Averaging Methods 0.000 description 1
- 201000004569 Blindness Diseases 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 239000003390 Chinese drug Substances 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940123457 Free radical scavenger Drugs 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 229930101531 artemisinin Natural products 0.000 description 1
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- KSBKFMPADQUMTG-UHFFFAOYSA-N calycosin 7-O-beta-D-glucopyranoside Natural products OCC1OC(Oc2ccc3C(=O)C(=COc3c2)c4ccc(O)c(O)c4)C(O)C(O)C1O KSBKFMPADQUMTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 description 1
- 238000005562 fading Methods 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 1
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 235000021374 legumes Nutrition 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 238000009740 moulding (composite fabrication) Methods 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 229930183339 qinghaosu Natural products 0.000 description 1
- 238000013441 quality evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 238000013341 scale-up Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000000528 statistical test Methods 0.000 description 1
- 239000004575 stone Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了一种筛选中药药效相关成分的方法及模型建立方法，步骤如下：以所研究中药为对象，制备若干组化学成分浓度不同的供试品溶液；选择部分化学成分进行HPLC分析，考察峰面积与浓度的线性关系；选择线性范围内的若干组供试品溶液，测定各自的HPLC指纹图谱和药效指标；在线性关系范围内，采用线性回归分析方法得到各成分的峰面积与药效指标之间的相互关系，根据各成分标准化回归系数和/或t检验结果的大小和正负确定药效相关成分对药效指标的作用，从而筛选出中药药效相关成分。本发明的方法简便、易行、可靠且通用性好，并能体现多成分对药效指标综合作用的特点，适于中药复杂体系的药效相关成分的筛选，为中药活性成分的发现和筛选提供技术数据支持。
Description
技术领域
本发明涉及一种筛选中药药效相关成分的方法及模型建立方法。
背景技术
中药是中医临床预防及治疗疾病的重要物质基础，具有多成分、多靶点和多途径整体的特点。然而中药成分复杂，挖掘和阐释中药活性物质成分是研发安全有效、质量可控的现代中药的基础，是揭示中药科学内涵、指导临床合理用药的前提。
长期以来，中药药效活性成分研究的主流模式主要是借鉴国外对天然产物活性成分研究的基本策略[1-3]。这样的研究模式对一些中药药效活性成分的阐明起到了积极作用，如青蒿素的发现[4]。然而传统方法需要将所有部分逐一提取、分离得到单体，再做药效活性筛选，不仅实验周期长，成本高，而且还会出现活性成分易丢失，纯度与活性背离的问题[5]。日本科学家曾在过去数十年里试图从中草药中提取药效活性成分，但未获得成功[6]。靶细胞提取或脂质体色谱固定相已用于药物成分的初步筛选[7]，但筛选的成分是否为真正的活性成分还有待进一步探讨。近年来，针对体外抗氧化活性筛选模型，建立了高效液相色谱在线筛选方法[8,9]，该方法直观、快速，但需要改装仪器和柱后反应通道，且药理学模型特殊（仅用于抗氧化活性成分的筛选），限制了该方法的广泛应用。上述中药药效活性成分的筛选方法也不能体现多成分对药效指标综合作用的特点。
通过高效液相色谱指纹图谱与药效指标进行关联确定可能的药效相关成分亦有报道，这些方法均采用相对峰面积代替成分含量进行筛选[10,11]。由于色谱指纹图谱的相对峰面积不能反映这些成分实际含量，因此筛选结果有待商榷。
对于中药这种复杂体系，寻找简便、快速、准确且通用的中药药效相关成分的筛选方法一直是中药现代化的关键科学问题之一。
随着计算机信息技术的迅猛发展，一些先进方法已应用于中医药研究领域，不仅加速了中药药效活性成分的发现和辨识，而且也减少了盲目性和偶然性，为中药活性成分的筛选提供了先进的技术手段。
参考文献
[1]李萍，齐炼文，闻晓东，盛亮洪.中药效应物质基础和质量控制研究的思路与方法[J].中国天然药物，2007,5(1):1-9.
[2]熊清平，张强华，石莹莹.基于代谢组学的中药药效物质基础研究思路与方法
[J].现代中药研究与实践，2011,25(6):97-99.
[3]Li HJ,Jiang Y，Li P.Chemistry，bioactivity and geographical diversity of steroidal alkaloids from the Liliaceae family[J].Natural Product Reports,2006,23(5):735-752.
[4]Michelle Grayson.Traditional asian medicine[J].Nature,2011,480:S81.
[5]刘庆山，张梓倩，方亮，江一帆，尹小英.高通量技术与网络药理学在中药活性成分筛选中的应用[J].中国中药杂志,2012,37(2):134-137.
[6]Zhiguo Xu.Modernization one step at a time[J].Nature,2011,480:S90-S92.
[7]傅超美，章津铭，许丽佳，游宇，付薛衡，建立中药质量多元化控制的创新体系[J].亚太传统医药，2010,6(4):4-6.
[8]王虹，陈军辉，赵恒强，王磊磊，张道来，王小如，杨东方.高效液相色谱-质谱-二苯基三硝基苯肼在线筛选与鉴别茶叶中抗氧化活性成分[J].分析化学，2009,37(6):795-800.
[9]王小淞，陈波，姚守拙.HPLC-DPPH在线法筛选黄芩提取物中抗氧化活性成分[J].中草药（增刊），2009,40:224-227.
[10]周立艳，梁生旺，王淑美，吴明侠，陈春艳.牡丹皮高效液相色谱“药效指纹图谱”研究[J]，时珍国医国药，2008,19(6):1337-1339.
[11]梁生旺，崔永霞，王淑美，吴明侠.金银花的HPLC药效指纹图谱研究[J]，中草药，2006,37(10):1489-1493.
发明内容
针对上述现有技术，为了解决现有筛选中药药效相关成分时间周期长，成本高，通用性较差且可靠性有待考察的问题，本发明提供了一种能够快速、简单、准确且通用性较好的筛选中药药效相关成分的方法，该法能够有效确定药效相关成分，并能体现多成分对药效指标综合作用的特点。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种筛选中药药效相关成分的方法，步骤如下：
（1）以所研究中药为对象，制备若干组化学成分浓度不同的供试品溶液；
（2）选择部分化学成分配制成不同浓度的溶液进行HPLC分析和/或将同一供试品溶液以不同浓度进行HPLC分析，测定其浓度和峰面积，并考察峰面积与对应成分浓度的线性关系；
（3）选择在浓度与峰面积的线性范围内的若干组供试品溶液，并测定各自的HPLC指纹图谱和对应药效指标；
（4）在与峰面积呈线性关系的浓度范围内，采用线性回归分析方法得到各成分的峰面积与药效指标之间的相互关系，根据各成分标准化回归系数和/或t检验结果的大小和正负确定药效相关成分对药效指标的作用，从而筛选出中药药效相关成分。
所述步骤（1）中通过对所研究中药的产地和/或提取工艺的变化来获得化学成分浓度不同的供试品溶液。
优选的，选择产地和/或提取工艺中不同因素和水平进行正交实验，得到若干组化学成分浓度不同的供试品溶液。
所述步骤（2）中选择部分化学成分制成对照品溶液进行HPLC分析的方法是：选择部分化学成分配制成对照品混合溶液，并以该对照品混合液配制不同浓度的对照品溶液，然后进行HPLC分析，以各化学成分浓度为横坐标，以各成分对应的色谱峰面积为纵坐标，考察峰面积与对应成分浓度的线性关系，确定各成分浓度的线性范围。
所述步骤（2）中将同一供试品溶液以不同浓度进行HPLC分析的方法是：将同一供试品溶液制成供试液，分别以不同的进样量进行HPLC分析，选择全部或部分共有峰，以色谱分析的进样量作为所选择的共有峰所代表的化学成分的浓度单位，并以该浓度单位作为横坐标，以该共有峰对应的色谱峰面积为纵坐标，考察峰面积与对应成分浓度的线性关系，确定各成分浓度的线性范围。
它还包括取若干已知对照品进行HPLC分析，从而对所研究中药图谱对应色谱峰进行定性分析的步骤。
所述步骤（2）中的部分成分并不限定成分数量，只是为了研究问题的方便。为了体现各种成分对药效指标的综合作用，成分数量应大于1。
所述步骤（4）还包括根据各成分与药效指标建立的数学表达式体现各成分对药效指标的综合作用，所述数学表达式为：药效是各成分的浓度与其标准化回归系数的乘积之和。
本发明的另一目的是提供一种筛选中药药效相关成分的模型建立方法，步骤如下：择取中药中多个化学成分，采用正交试验设计将各成分看作试验因素按不同浓度水平组合安排各次试验样品，然后在25℃室温下，采用高效液相色谱仪对正交试验设计的各次试验样品测定得到高效液相色谱（HPLC）指纹图谱。对各次试验样品测定对应药效指标。采用线性回归分析方法建立HPLC指纹图谱各色谱峰面积与药效指标之间的相互关系。在浓度线性范围内，用峰面积代替成分含量与药效指标计算的标准化回归系数是一致的。根据各成分标准化回归系数的大小及统计检验结果确定药效相关成分；根据各成分标准化回归系数的正负确定药效相关成分对药效指标的正向或负向作用；根据各成分与药效指标建立的数学表达式体现多成分对药效指标的综合作用。
具体而言，所述模型建立方法是以下步骤：
（1）以所研究中药为对象，择取中药中所含多个（数量大于1个）已知的化学成分；
（2）将这些化学成分配制成对照品混合溶液，然后进行HPLC分析，以各化学成分浓度为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，考察色谱峰面积与对应成分浓度的线性关系，确定各成分浓度的线性范围。
（3）将这些化学成分作为因素，在浓度线性范围内，采用正交试验设计将这些化学成分按不同浓度水平进行组合，得到各次试验样品。
（4）在25℃室温下，采用高效液相色谱仪采集上述各次试验样品的原始高效液相色谱指纹图谱；
（5）将上述所得的各次试验样品HPLC指纹图谱各色谱峰按照保留时间相近的原则进行色谱峰匹配；
（6）将上述取得的各次试验样品进行药理学实验，测定相应的药效指标；
（7）采用线性回归分析法将匹配后的各次试验样品HPLC指纹图谱色谱峰面积与对应药效指标进行关联建立数学模型（即采用线性回归分析建立数学模型），计算各个成分对应的标准化回归系数；
（8）根据各成分标准化回归系数的大小及统计检验结果确定与药效相关的成分；根据各成分标准化回归系数的正、负确定药效相关成分对药效指标的正向或负向作用；根据各成分与药效指标建立的数学表达式体现各成分对药效指标的综合作用。
（9）对上述确定药效相关成分进行实验验证。
优选的，所述步骤（7）中，所述HPLC指纹图谱色谱峰面积是指在色谱峰面积与对应成分浓度线性关系良好（在浓度线性范围内）的条件下，基于色谱峰面积与药效指标计算的标准化回归系数和基于成分含量与药效指标计算的标准化回归系数是一致的。因此可以采用指纹图谱色谱峰面积代替成分含量与药效指标建立数学模型。
优选的，所述步骤（7）中，所述数学模型中，用HPLC指纹图谱色谱峰面积代替成分含量与药效指标进行关联建立数学模型是通过数学证明得到的。
本发明的方法简便、易行、可靠且通用性好，并能体现多成分对药效指标综合作用的特点，适于中药复杂体系的药效相关成分的筛选，为中药活性成分的发现和筛选提供技术数据支持。
附图说明
图1-1为25℃的室温下，采用Agilent 1260型高效液相色谱仪取得的代表性黄芪药材5个成分对照品混合液原始高效液相色谱（HPLC）指纹图谱。
图1-2为正交试验设计（L16（45））16次试验样品的原始HPLC指纹图谱经中药指纹图谱相似度评价系统2004A（国家药典委员会）按保留时间数据进行匹配后得到的各次试验样品的HPLC指纹图谱。
图1-3为DPPH溶液与黄芪药材中5种成分溶液在400nm～600nm范围内紫外吸收光谱。
图1-4为黄芪甲苷及芒柄花素与DPPH自由基反应时间曲线。
图2-1为黄芪药材与对照品HPLC图谱（1.毛蕊异黄酮苷2.毛蕊异黄酮3.芒柄花素）。
图2-2为黄芪药材指纹图谱的共有峰图谱。
图2-3为正交设计各次实验的HPLC指纹图谱。
图2-4为黄芪样本的t1/u1图一。
图2-5为色谱峰的标准化回归系数一。
图2-6为PLSR模型的VIP图一。
图2-7为黄芪样本的t1/u1图二。
图2-8为色谱峰的标准化回归系数二。
图2-9为PLSR模型的VIP图二。
图2-10为黄芪药材部分色谱峰紫外光谱及一级质谱图（分别为图2-2中编号8、13、14、15、16、17、18所代表的色谱峰的紫外光谱和一级质谱图）。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明进一步说明。
实施例1所用中药：黄芪药材；所用药效指标：清除DPPH自由基活性（DPPH自由基清除率）。虽然以中药黄芪和清除DPPH自由基活性药效指标为例，但本发明所述方法对所用中药及药效指标并无限制。
1.1对照品溶液的配制
精密称取黄芪药材中所含的4种化学成分山奈酚、槲皮素、毛蕊异黄酮及芒柄花素的标准品各约5mg、5mg、2mg和2mg，加甲醇溶解并分别定容于10mL棕色容量瓶中，即得各个成分储备液；精密称取黄芪甲苷标准品约10mg，加甲醇溶解并定容于5mL棕色容量瓶中，即得其储备液。对照品溶液进样前用0.45μm微孔滤膜过滤。精密称取维生素C 10mg，加甲醇溶解并定容于10mL棕色容量瓶中，即得维生素C储备液，作为阳性对照；精密称取维生素E 25mg，加甲醇溶解并定容于10mL棕色容量瓶中，即得维生素E储备液（应立即在4℃温度下保存），作为阳性对照。
1.2DPPH标准溶液的配制及DPPH自由基清除率的计算
精密称取DPPH约5mg，用甲醇溶解并定容于50mL的棕色容量瓶当中，即得DPPH储备液。DPPH自由基清除率由式（1）计算得到：
式（1）中[DPPH·]t=40和[DPPH·]t=0分别表示时间为40分钟和0分钟时的DPPH自由基的浓度。该浓度可以采用紫外分光光度法在515nm处通过吸光度A与DPPH自由基浓度的回归曲线（A=0.0273×[DPPH·]+0.0229，相关系数的平方R2=0.9997）计算得到。由图1-3可见，DPPH自由基在515nm处有吸收峰，而其它成分不干扰DPPH吸光度的测定。DPPH标准曲线的测定方法如下：将98.4μg·mL-1DPPH甲醇溶液依次稀释，得到6个不同浓度的DPPH甲醇溶液(98.4μg·mL-1，49.2μg·mL-1，24.6μg·mL-1，6.15μg·mL-1，3.075μg·mL-1，1.538μg·mL-1)，在515nm处测定上述各个浓度下的吸光度值(纯甲醇作为空白)，以DPPH浓度（μg·mL-1）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
1.3色谱条件
色谱柱：Phenomex Synergi Hydro-RP C18（250mm×4.6mm，4μm）；流动相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脱（0min，25%乙腈；20min，45%乙腈）；DAD设定波长范围190~400nm，色谱检测波长采用切换波长法（0min，254nm；15.8min，203nm；17min，254nm）；柱温25℃；流速1mL/min；进样量10μL，分析时间为28min。
1.4线性范围
精密量取5种黄芪对照品储备液，加甲醇制成含槲皮素62.8μg/mL、山奈酚56.5μg/mL、黄芪甲苷880.0μg/mL、芒柄花素27.5μg/mL、毛蕊异黄酮29.1μg/mL的混合溶液，作为混合对照品溶液。精密吸取混合对照品溶液0.1mL、0.2mL、0.5mL、1mL、1.5mL和2mL，置于2mL容量瓶中，加甲醇定容，精密吸取10μL，进行HPLC分析，如图1-1所示。以对照品浓度X（μg/mL）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线，各对照品回归方程及线性范围如表1-1所示，5种成分在测定的浓度范围内，线性关系良好。
表1-1 黄芪药材所含的5种成分的线性回归结果
1.5各成分正交试验设计组合试验
对5种成分采用5因素、4水平的正交试验设计（即L16（45））进行组合。正交试验设计各成分浓度水平如表1-2所示。按照表1-3将各成分溶液按不同浓度水平进行组合得到各次试验样品混合液。
表1-2正交试验设计各因素水平（即各成分浓度水平）
表1-3 L16（45）正交试验设计表
符号*：表中数字表示各次试验样品混合液中各成分的浓度水平，该浓度水平与表1-2中所 示浓度水平对应。
1.6各次试验样品的高效液相色谱指纹图谱的测定及匹配
在25℃的室温下，采用高效液相色谱仪在实施例1“1.3”项所示色谱条件下取得表1-3所示各次试验样品的原始HPLC指纹图谱；将取得的原始HPLC指纹图谱色谱峰采用中药指纹图谱相似度评价系统2004A（国家药典委员），按保留时间相近原则进行匹配，匹配结果如附图1-2所示；
1.7正交试验设计各次试验样品药效指标的测定：
对正交试验设计各次试验样品的清除DPPH自由基活性进行测定，测定结果根据公式（1）计算清除率，结果详见表1-4。
表1-4正交试验设计各次试验样品的清除DPPH自由基活性（以清除率表示）
1.8基于指纹图谱色谱峰面积与药效指标建立数学模型
将上述所得各次试验样品的HPLC指纹图谱色谱峰面积数据与对应药效指标数据（DPPH自由基清除率）采用线性回归分析进行关联建立数学模型（见表1-5），计算各成分对应的标准化回归系数，结果见表1-6。
表1-5线性模型参数（色谱峰面积）
表1-6HPLC指纹图谱色谱峰面积与清除率的多元线性回归分析
**：P<0.01.
1.9药效相关成分的确定
根据表1-5所示结果可知，基于色谱峰面积建立的数学回归模型具有统计意义。根据表1-6所示的各成分标准化回归系数的大小及统计检验（即t检验）结果确定与药效指标相关的 成分（即清除DPPH自由基活性成分）是槲皮素和山萘酚，剩余三种成分的回归系数较小，不具有统计学意义（见表1-6中P值）；槲皮素和山萘酚两个成分的标准化回归系数的符号均为正，提示这两个成分对药效指标的作用为正向作用。根据表1-6所示的各成分标准化回归系数可得DPPH自由基清除率与各成分的关系如式2所示：
DPPH自由基清除率（%）标准化=0.629×槲皮素+0.712×山萘酚-0.109×黄芪甲苷+0.069×芒柄花素-0.057×毛蕊异黄酮 （2）
式（2）体现了各成分对药效指标的综合作用。
对实施例1建立的数学模型进行验证
实验验证方法1为：将上述所得各次试验样品的各成分浓度数据与对应药效指标数据（DPPH自由基清除率）采用线性回归分析进行关联建立数学模型（见表1-7），计算各成分对应的标准化回归系数，结果见表1-8。
表1-7线性模型参数（成分浓度）
表1-8各成分浓度与清除率的多元线性回归分析
**：P<0.01.
根据表1-7所列结果可知，基于成分浓度建立的数学回归模型具有统计意义。比较表1-6和表1-8所示结果，各成分的标准化回归系数基本一致。同样，槲皮素和山萘酚两种成分的回归系数较大，是清除DPPH自由基的药效相关成分。只要HPLC指纹图谱色谱峰面积和对应成分浓度的线性关系良好，可以采用HPLC指纹图谱色谱峰面积代替成分浓度与药效指标进行关联建立数学模型，确定药效相关成分。
实验验证方法2为：将黄芪中5种成分单独配成溶液与DPPH自由基作用，考察每个成分清除DPPH自由基的活性。5种成分清除DPPH自由基能力的大小可由EC50值来评价，其计算是在式（1）基础上，当DPPH自由基清除率为50%时对应的各成分浓度，具体结果见表1-9：
表1-9各成分与阳性对照品对DPPH的清除作用
EC50值越小，说明DPPH自由基清除率为50%时，所用成分的浓度就越小，表明该成分清除DPPH自由基的能力就越强。由于黄芪甲苷和芒柄花素与DPPH自由基反应溶液的吸光度几乎不随时间发生变化（见附图1-4），说明这两种成分对DPPH自由基几乎没有清除作用，因此没有测定这两种成分的EC50值。由表9可见，各成分对DPPH自由基清除活性的作用顺序为：维生素C>槲皮素>山奈酚>维生素E>毛蕊异黄酮>芒柄花素≈黄芪甲苷。
通过各成分清除DPPH自由基活性结果可见，槲皮素和山萘酚对DPPH自由基有较强的清除活性，进一步验证本发明所述的筛选中药药效相关成分方法是可靠的。
理论验证（数学证明如下）：
假设某一指纹图谱色谱峰面积与对应成分的浓度存在线性关系（理性情况下，线性相关系数r=1为完全相关），其数学表达式可以用式（3）表示：
A＝kc+b （3）
式（3）中k为斜率，b为截距。A为峰面积，c为成分的浓度。k与高效液相色谱检测器对该成分的响应值有关。不同成分的k值不同。在药效相关成分筛选过程中，由于色谱指纹图谱中包含多个成分，因此将上式写成多元线性回归形式：
A＝CK+B （4）
式（4）中，A，C，K和B分别为峰面积矩阵，浓度矩阵，斜率矩阵和截距矩阵。这些矩阵的表示如式（5）～式（8）：
上述式（5）～式（8）表示的矩阵中，n表示矩阵的行数，等于测定的试验样品数；p表示矩阵的列数，即为色谱指纹图谱中的色谱峰数。K矩阵为对角矩阵，其对角线上为各色谱峰面积与对应成分浓度之间的比例系数（即斜率）。在B矩阵中，各行向量的元素都相同，对应于各色谱峰面积与其相应浓度线性关系中的截距。
在筛选药效相关成分过程中，需要将指纹图谱的各色谱峰面积或对应成分浓度与药效指标数据进行多元回归分析建模，如式（9）。
Y＝Aβ+ε或Y＝Cβ+ε （9）
式（9）中Y为n×1维药效指标数据向量（假设只有一个药效指标。若有p个药效指标，Y应为n×p维矩阵）。β为回归系数矩阵。ε是n×1维随机误差向量（若有p个药效指标，ε应为n×p维矩阵）。
通过回归分析得到各色谱峰或各成分浓度的标准化回归系数（即对色谱峰面积或成分含量及药效数据进行标准化后再进行回归分析得到的回归系数），然后进行比较。
数据的标准化公式如式（10）表示：
式（10）中， 与 分别为色谱峰面积矩阵中第j列均值和标准偏差，浓度矩阵中第j列均值及相应标准偏差。
经过标准化后，式（9）可改写为式（11）：
As和Cs分别为标准化后的峰面积矩阵和浓度矩阵。根据式（11），只要我们能够证明As=Cs即可。也就是说在成分浓度和相应色谱峰面积之间存在良好的线性关系，标准化后的峰面积与标准化后的浓度是相等的，这样基于式（11）得到的回归系数
对式（4）进行标准化处理，可以看成两个步骤：①对数据矩阵进行中心化处理；②然后再除以对应列的方差。
首先用如下矩阵形式表示数据矩阵的中心化处理：
HA＝HCK+HB （12）
式（12）中H矩阵表示如下：
H＝In-1/n11' （13）
称为中心化矩阵。HA相当于对A矩阵进行了中心化处理。In为单位矩阵。1表示n维的列向量。由于HB=0，所以式（12）转化为式（13）：
HA＝(HC)K （13）
其次，在式（13）的两边分别乘以标准偏差矩阵（S）的逆矩阵（S-1），如式（14）所示：
HAS-1＝HCKS-1 （14）
其中矩阵S-1为对角矩阵，表示如下：
式（15）中S-1对角线上的各元素 实际上也就是式（10）中 由于峰面积与对应浓度线性关系良好，则 所以S=ScK，进而S-1=(ScK)-1。代入式（14）得：
As＝HAS-1＝HCKS-1＝HCK(ScK)-1＝HCKK-1(Sc)-1＝HC(Sc)-1＝Cs （16）
式（16）的左边相当于对峰面积矩阵进行了标准化处理，右边相当于对成分浓度矩阵进行了标准化处理。因此我们有As=Cs，证毕。如果C＝AK+B，上述证明依然成立。
实施例2黄芪药材的HPLC指纹图谱与抗氧化作用的相关分析
自由基是具有孤对电子的化学基团，性质十分活泼，目前研究认为，衰老、某些慢性疾病、心血管疾病等均与其存在着密切关系。黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge．的干燥根，具有补气固表、排脓脱毒、敛疮生肌的功效，是一味常用的中药材。黄芪主要成分包括黄酮类、皂苷类、多糖类等，现代药理研究证明，黄芪可能具有抗氧化的活性。清除自由基活性的测定方法有多种，包括烃过氧自由基清除法、DPPH自由基清除法、羟基自由基清除法、ABTS自由基离子清除法、超氧阴离子自由基清除法等。1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）是一种比较稳定的自由基，其在可见光区有特 征吸收峰，当有自由基清除剂存在的时候会褪色，褪色程度与物质的清除自由基能力呈量效关系，通过测定吸光度值的变化即可评价物质的抗氧化能力。DPPH分光光度法操作简单、稳定性好、灵敏可靠，在测定物质抗氧化能力的研究中具有广泛应用。
在进行偏最小二乘回归（PLSR）分析的研究时，若因变量的数据是来自于统计实验设计，可以更好的建立和解释模型。因此，本实施例对黄芪药材样本和其提取条件采用正交实验设计，分别测定各次实验的HPLC图谱和清除DPPH自由基的能力，采用PLSR法进行“谱”和“效”的相关分析，挖掘与抗氧化活性显著相关的特征峰，并利用紫外光谱（UV）和质谱（MS）为重要特征峰进行定性分析，为黄芪药材药效相关成分的确定和质量控制及评价提供了参考依据。
1仪器与试药
1.1药材来源黄芪药材均为蒙古黄芪，分别购自内蒙古包头，吉林吉安和山西广灵，药材均由山东大学药学院生药教研室陈永林教授鉴定。
1.2仪器与试剂
仪器：Agilent 1260型高效液相色谱仪，包括G1311B四元泵，G1316A柱温箱，G1367E自动进样器，G4212B DAD检测器（美国Agilent公司）；液相-质谱联用仪，包括Agilent 1260型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）和API 4000三重串联四级杆质谱仪（美国AB公司）；KQ5200型数控超声清洗机（昆山市超声仪器有限公司）；AG135型分析天平（梅特勒—托利多仪器上海有限公司）；D11951型超纯水系统（美国ThermoFisher公司）。
试剂：DPPH试剂（美国Sigma公司）；维生素C（≥99.7%，国药集团化学试剂有限公司），维生素E（≥97%，美国sigma公司）；乙腈为色谱纯（安徽时联特种溶剂股份有限公司）；甲醇为色谱纯（国药集团化学试剂有限公司）；水为超纯水。
对照品：毛蕊异黄酮（批号：1328-110106），芒柄花素（批号：1054-090402），毛蕊异黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（批号：1166-101013），均购买自中国固体制剂制造技术国家工程研究中心。
2实验方法
2.1溶液的制备
2.1.1供试品溶液的制备取黄芪药材细粉（过65目筛，60℃下干燥至恒重）1.0g，置于具塞锥形瓶中，加入一定比例的甲醇若干体积，在一定的温度下超声处理一段时间（具体实验条件按正交表2-1和表2-2进行），滤过，减压浓缩，用适量的甲醇定容至5mL容量瓶中，摇匀，置于4℃下保存，测定前用0.22μm微孔滤膜过滤。
对产地（A）、提取时间（B）、提取温度（C）、甲醇比例（D）、固液比（E）5因素进行L18（37）正交实验。因素水平见表2-1，实验安排表见表2-2。
表2-1因素水平表
表2-2 L18（37）正交实验安排表
2.1.2对照品溶液的制备分别精密称取毛蕊异黄酮苷，毛蕊异黄酮苷各约2mg，用甲醇溶解并定容于5mL棕色容量瓶中，芒柄花素对照品约2mg，用甲醇溶解并定容于10mL棕色容量瓶中，摇匀，过0.45μm滤膜，备用。精密称取维生素C 10mg，加甲醇溶解并分别定容于10mL棕色容量瓶中，即得维生素C储备液；精密称取维生素E 25mg，加甲醇溶解并分别定容于10mL棕色容量瓶中，即得维生素E储备液（应立即放在4℃下存储）。
2.1.3DPPH标准溶液的配制精密称取DPPH约5mg，用甲醇溶解并定容于50mL的棕色容量瓶当中，即得DPPH储备液。
2.2实验条件
2.2.1HPLC色谱条件色谱柱：Phenomex Synergi Hydro-RP C18（250mm×4.6mm,4μm）；流动相：乙腈(A)-水(B)，进行梯度洗脱，梯度条件见表2-3；流速：0.8mL/min；进样量：20μL；DAD设定波长范围190nm～400nm，检测波长：230nm。
表2-3 HPLC梯度条件
2.2.2质谱条件
离子源：电喷雾离子化源（ESI），正离子检测；气帘气（CUR）：20psi；雾化气（GS1）：45psi；辅助气（GS2）：45psi；ESI源电压：4200V；温度：450℃；解簇电压（DP）：60V；入口电压（EP）：10V；全离子扫描模式，扫描范围m/z 200~1000，所有气体均为N2。
2.3方法学考察
2.3.1精密度考察取同一黄芪样品制备的供试品溶液，连续测定5次，计算图谱中的23个共有峰（以图2-2中8号色谱峰为参照峰S）相对保留时间的RSD为0.0040～1.8%，相对峰面积的RSD为0.83～2.9%，表明仪器的精密度良好。
2.3.2重现性考察取同一的黄芪样品5份，分别制备供试品溶液并进行HPLC测定。计算23个共有峰（以图2-2中8号色谱峰为参照峰S）的相对保留时间的RSD为0.056～1.3%，相对峰面积的RSD为0.81～2.9%，表明实验方法重现性良好。
2.3.3稳定性考察取同一黄芪样品制备的供试品溶液，分别在0，2，4，8，12h检测图谱，计算色谱图中23个共有峰（以图2-2中8号色谱峰为参照峰S）的相对保留时间RSD为0.039～0.99%，相对峰面积的RSD分别为1.1～2.9%，表明样品在12h内稳定。
2.3.4线性范围分别精密吸取毛蕊异黄酮对照品储备液0.5mL，毛蕊异黄酮苷对照品储备液2.0mL，芒柄花素对照品溶液1mL，置同一5mL容量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液；分别精密吸取混合对照品溶液0.05、0.25、0.5、0.75、1、1.5ml，置2mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，精密吸取20μL，进行HPLC分析，记录色谱图（图2-1）。以标准品浓度X（μg·mL-1）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：
毛蕊异黄酮：Y=102.9302X+25.4703 r=0.9995（0.99-29.9μg·mL-1）
毛蕊异黄酮苷：Y=80.6482X+58.5374 r=0.9997（3.78-113.40μg·mL-1）
芒柄花素：Y=112.9327X+2.0754 r=1.0000（0.92-27.6μg·mL-1）
由r可见，当毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、芒柄花素在以上浓度范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系。
2.3.5回收率实验精密称取已知毛蕊异黄酮（245.16μg·g-1）、毛蕊异黄酮苷（1052.42μg·g-1）、芒柄花素（60.40μg·g-1）含量的吉林黄芪药材6份，每份约0.5g，置于锥形瓶中，精密加入对照品混合溶液2mL（毛蕊异黄酮c=62.47μg·mL-1、毛蕊异黄酮苷c=265.20μg·mL-1、芒柄花素c=14.95μg·mL-1），按“2.1.1”下方法制备供试品溶液并进行HPLC测定，结果毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷和芒柄花素的平均回收率分别为101.95%（RSD=0.93%）、102.81%（RSD=0.86）和100.64%（RSD=1.44）。
2.4指纹图谱共有峰线性关系的考察取同一黄芪样品制备的供试液，分别进样2μL，10μL，20μL，30μL，40μL，以各共有峰的峰面积为纵坐标（y），以进样量为横坐标（x）绘制标准曲线，结果如表2-4所示。
表2-4 23个共有峰的线性关系结果
结果表明，各共有峰在进样量为2uL-40μL的范围内线性关系良好，2、6、7、10、12、15、16、20、21号峰（见图2-2）的R2在0.99以上，其它各峰的R2均在0.999以上。
2.5DPPH法测定正交设计各次实验的抗氧化活性
2.5.1DPPH标准曲线的测定方法同实施例1中项“1.2DPPH标准溶液的配制及DPPH自由基清除率的计算”方法测定。
2.5.2样品测定精密吸取实施例2“2.1溶液的制备”项下制备的各次实验样品溶液与对照品溶液，按实施例1“1.2DPPH标准溶液的配制及DPPH自由基清除率的计算”方法测定抗氧化活性。
2.6数据处理采用中药指纹图谱相似度评价系统2004A（国家药典委员会）、SIMCA-P 11.5（Umetrics公司）及SPSS15.0（美国SPSS公司）。
3结果与讨论
3.1正交设计各次实验的HPLC指纹图谱的建立和相似度评价
采用药典委员会推荐的《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》软件对黄芪药材18次正交实验的高效液相色谱指纹图谱数据进行了分析处理，以实验10的指纹图谱为参照谱，经过多点校正，自动匹配，采用均值法生成了对照指纹图谱，确定了23个共有峰（如图2-2所示），18次正交实验的HPLC指纹图谱见图2-3，各次实验样品的指纹图谱与对照谱图的相似度数据见表2-5。
表2-5正交实验设计各次实验的相似度评价结果
a：相似度计算以对照图谱为参考
由表2-5可见，各次实验的指纹图谱相对于对照图谱有一定差异，其中第1，5和13组实验相似度值小于0.700，差异较大。这表明通过正交实验设计各个因素水平相互组合后，各次实验得到的物质成分及浓度有一定差异。
3.2黄芪正交设计各次实验的抗氧化活性结果
3.2.1DPPH标准曲线
根据DPPH标准曲线的测定方法（见实施例1中项1.2，DPPH甲醇溶液的具体浓度根据实验样品适当调整），得线性回归方程Y=0.0269X+0.0082（r＝1.0000），线性范围为1.61~103.2μg·mL-1。
3.2.2黄芪正交设计各次实验抗氧化活性的测定结果
根据正交实验设计，测定各次实验清除DPPH自由基的活性，结果见表2-6。
表2-6黄芪正交设计各次实验对DPPH自由基的清除作用
3.3正交设计各因素对黄芪抗氧化作用的影响
以抗氧化实验的结果EC50值为评价正交实验的指标，对18次实验进行方差分析，见表2-7。
表2-7方差分析表
a：R Squared=0.981(Adjusted R Squared=0.953)；b：df表示自由度
由方差分析的结果，在α=0.05水平上，校正模型的P=0.000，所用的模型有显著性意义。各因素中，产地（P=0.000）、提取时间（P=0.010）、提取温度（P=0.002）与提取溶剂比例（P=0.000）对EC50的影响均具有显著性意义，各因素影响次序为产地>提取溶剂>提取温度>提取时间>固液比。
3.4黄芪正交设计组合与清除DPPH自由基作用的相关分析
各色谱峰之间存在着多重相关性，而且变量数（色谱峰数）大于样本数，因此采用偏最小二乘回归法（PLSR）建立谱效关系模型。首先采用EC50值作为药效指标（Y）与色谱峰面积（X）进行PLSR分析。将数据导入SIMCA-P软件，经过计算，系统选取了一个有意义的成分，它可以解释71.9%的Y变量（R2=0.719，Q2=0.67）。由于只有一个PLS成分，只能观察到t1/u1得分散点图（图2-4），由图2-4可以看出，所有的样本基本上都处于对角线附近，没有异常值。由标准化的回归系数图（图2-5）和VIP图（图2-6）可以看出，大部分的色谱峰都与EC50呈负相关，即它们含量增加，EC50值降低，清除DPPH自由基的能力将会增加。其中，14、15、11、19、6、10、12、8、5、18、21、9号峰对样品清除DPPH自由基的能力起主要作用，仅有17，23号峰起抑制作用（2，7，16，22号峰的置信区间过零点，无显著性意义，见图2-5）。由以上可知，黄芪中多数化学成分具有清除DPPH自由基的能力。
其次，尝试采用清除率作为药效指标（Y）与色谱峰面积（X）进行PLSR分析。SIMCA-P 系统选取了一个有意义的成分（R2=0.854，Q2=0.832）。图2-7，2-8，2-9分别为t1/u1得分散点图、标准化的回归系数图和VIP图。由三张图可以看出，大部分的色谱峰都与清除率呈正相关，其中，15、14、19、11、10、6、9、12、5、21、18号峰对样品清除DPPH自由基的能力起正相作用，仅有17，23号峰起抑制作用，分析结果基本上与采用EC50作为药效指标的结果一致。这说明，在数据合理的情况下，也可以采用清除率代替EC50进行谱效关系的研究。
3.5定性分析
通过采集部分特征峰的紫外光谱及一级质谱图（见图2-10），结合文献报道，初步对与黄芪抗氧化活性相关的部分特征峰进行定性分析。
峰8在质谱中给出了m/z447的[M+H]+和m/z469的[M+Na]+，推测其分子量为446，在正离子模式下，m/z447的[M+H]+裂解成碎片m/z285的[M+H-glc]+。将该化合物的紫外光谱与对照品比较，鉴定为毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷。同理，峰16鉴别为毛蕊异黄酮，m/z591为[2M+Na]+。
峰13在质谱中给出了m/z431的[M+H]+和m/z453的[M+Na]+，推测其分子量为430，在正离子模式下，m/z431的[M+H]+裂解成碎片m/z269的[M+H-glc]+。对比文献中报道的芒柄花苷的紫外光谱，鉴定为芒柄花苷。同理，峰17鉴别为芒柄花素，m/z559为[2M+Na]+。
峰14在质谱中给出了m/z463的[M+H]+、m/z485的[M+Na]+和m/z480的[M+NH4]+，推测其分子量为462，在正离子模式下，m/z463的[M+H]+裂解成碎片m/z301的[M+H-glc]+。对比文献中报道的黄芪黄酮类成分的紫外光谱，鉴定为9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷。同理，峰18鉴别为3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷。
峰15在质谱中给出了m/z487的[M+Na]+和m/z482的[M+NH4]+，推测其分子量为464，在正离子模式下，m/z487的[M+H]+裂解成碎片m/z303的[M+H-glc]+。对比文献中报道的黄芪黄酮类成分的紫外光谱，鉴定为2’-羟基-3’,4’-二甲氧基异黄烷-7-O-β-D-葡萄糖苷。
各色谱峰鉴别结果见表2-8。
表2-8黄芪HPLC色谱峰化学成分分析
4结论
本实施例考察了不同提取条件对黄芪提取液清除自由基活性的影响。采用偏最小二乘回归对黄芪药材指纹图谱与抗氧化活性相互关系进行了研究，挖掘了与抗氧化活性显著相关的特征峰，结果表明：多数成分对清除自由基活性起正向作用。利用HPLC-DAD-MS联用技术对部分色谱峰对应成分进行了定性分析，这些成分是毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、芒柄花苷、9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷、2’-羟基-3’,4’-二甲氧基异黄烷-7-O-β-D-葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素和3-羟基-9,10-二甲氧基紫檀烷。本实施例为黄芪药材的药效相关成分的确定及质量控制和评价提供了参考依据。
上面所述的实施例仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的构思和保护范围进行限定，在不脱离本发明设计构思的前提下，本领域中普通工程技术人员对本发明的技术方案作出的各种变型和改进，均应落入本发明的保护范围。
Claims (5)
1.一种筛选中药药效相关成分的方法，其特征是，步骤如下：
（1）以所研究中药为对象，制备若干组化学成分浓度不同的供试品溶液；（2）选择部分化学成分配制成不同浓度的溶液进行高效液相色谱（HPLC）分析和/或将同一供试品溶液以不同进样量进行HPLC分析，测定其浓度或进样量和峰面积，并考察峰面积与对应成分浓度或进样量的线性关系；该线性关系的考察及范围的确定不依赖色谱峰对应成分的对照品；（3）选择在浓度或进样量与峰面积的线性范围内的若干组供试品溶液，测定各自的HPLC指纹图谱和对应药效指标；（4）在与峰面积呈线性关系的浓度或进样量范围内，采用线性回归分析方法得到各成分的峰面积与药效指标之间的相互关系，根据各成分标准化回归系数和/或统计检验结果的大小和正负确定药效相关成分对药效指标的作用，从而筛选出中药药效相关成分；各成分标准化回归系数是通过各成分峰面积计算得到的标准化回归系数，它实质是指对应成分含量的标准化回归系数；所述步骤（4）还包括根据各成分与药效指标建立的数学表达式体现各成分对药效指标的综合作用，所述数学表达式为：药效是各成分的标准化浓度与其标准化回归系数的乘积之和，即药效标准化其中ai为第i个成分的标准化回归系数，ci为第i个成分的标准化浓度，n为所检测的成分数。
2.如权利要求1所述的方法，其特征是，所述步骤（1）中通过对所研究中药的产地和/或提取工艺的变化来获得化学成分浓度不同的供试品溶液。
3.如权利要求1所述的方法，其特征是，所述步骤（2）中选择部分化学成分制成对照品溶液进行HPLC分析的方法是：选择部分化学成分配制成对照品混合溶液，并以该对照品混合液配制不同浓度的对照品溶液，然后进行HPLC分析，以各化学成分浓度为横坐标，以各成分对应的色谱峰面积为纵坐标，考察峰面积与对应成分浓度的线性关系，确定各成分浓度的线性范围。
4.如权利要求1所述的方法，其特征是，所述步骤（2）中将同一供试品溶液以不同进样量进行HPLC分析的方法是：将同一供试品溶液制成供试液，分别以不同的进样量进行HPLC分析，选择全部或部分共有峰，以色谱分析的进样量作为所选择的共有峰所代表的化学成分的浓度单位，并以该进样量作为横坐标，以该共有峰对应的色谱峰面积为纵坐标，考察峰面积与对应成分进样量的线性关系，确定各成分进样量的线性范围。
5.一种筛选中药药效相关成分的模型建立方法，其特征是，步骤如下：所述方法是通过以下步骤建立的：（1）以所研究中药为对象，择取中药中所含多个化学成分；（2）配制含有这些化学成分的混合溶液，然后进行HPLC分析，以各化学成分浓度或进样量为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，考察色谱峰面积与对应成分浓度或进样量的线性关系，确定各成分浓度或进样量的线性范围；（3）在浓度或进样量线性范围内，采用正交试验设计得到这些化学成分不同浓度水平组合的各次试验样品；（4）在25℃室温下，采用高效液相色谱仪采集上述各次试验样品的原始高效液相色谱指纹图谱；（5）将上述所得的各次试验样品HPLC指纹图谱各色谱峰按照保留时间相近的原则进行色谱峰匹配；（6）将上述取得的各次试验样品进行药理学实验，测定相应的药效指标；（7）采用线性回归分析法将匹配后的各次试验样品HPLC指纹图谱色谱峰面积与对应药效指标进行建立线性回归数学模型，计算各个成分对应的标准化回归系数；（8）根据各成分标准化回归系数的大小及统计检验结果确定与药效相关的成分；根据各成分标准化回归系数的正、负确定药效相关成分对药效指标的正向或负向作用；根据各成分标准化浓度与其标准化回归系数的乘积之和体现各成分对药效指标的综合作用；（9）对上述确定药效相关成分进行实验验证。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210324140.5A CN102879486B (zh) | 2012-09-05 | 2012-09-05 | 一种筛选中药药效相关成分的方法及模型建立方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210324140.5A CN102879486B (zh) | 2012-09-05 | 2012-09-05 | 一种筛选中药药效相关成分的方法及模型建立方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102879486A CN102879486A (zh) | 2013-01-16 |
| CN102879486B true CN102879486B (zh) | 2014-08-13 |
Family
ID=47480888
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210324140.5A Expired - Fee Related CN102879486B (zh) | 2012-09-05 | 2012-09-05 | 一种筛选中药药效相关成分的方法及模型建立方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102879486B (zh) |
Families Citing this family (34)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104569199B (zh) * | 2014-12-30 | 2016-08-24 | 上海现代中医药股份有限公司 | 一种黄芪指纹图谱的测定方法 |
| CN105987966B (zh) * | 2015-02-12 | 2018-11-30 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 基于谱效关系的广东紫珠质量控制方法及其模型建立方法 |
| CN105758950B (zh) * | 2016-02-26 | 2018-02-06 | 辽宁中医药大学 | 基于量效色卡的气滞胃痛颗粒抗炎镇痛质量控制方法 |
| CN105758949B (zh) * | 2016-02-26 | 2018-02-06 | 辽宁中医药大学 | 基于量效色卡的气滞胃痛颗粒促胃肠动力质量控制方法 |
| CN105738519B (zh) * | 2016-02-26 | 2018-03-06 | 辽宁中医药大学 | 一种基于量效色卡的气滞胃痛颗粒抗溃疡质量控制方法 |
| CN106570351B (zh) * | 2016-10-17 | 2019-02-05 | 浙江和谱生物科技有限公司 | 基于谱图相似度计算的搜库匹配结果的计算机模拟统计验证方法 |
| CN108205027B (zh) * | 2016-12-20 | 2020-12-29 | 北京蓝标一成科技有限公司 | 流苏石斛化学小分子成分的相关特征指纹图谱的建立方法 |
| CN108205039B (zh) * | 2016-12-20 | 2020-12-25 | 北京蓝标一成科技有限公司 | 兜唇石斛化学小分子成分的相关特征指纹图谱的建立方法 |
| CN108205040B (zh) * | 2016-12-20 | 2020-12-29 | 北京蓝标一成科技有限公司 | 叠鞘石斛化学小分子成分的相关特征指纹图谱的建立方法 |
| CN108205025B (zh) * | 2016-12-20 | 2020-12-29 | 北京蓝标一成科技有限公司 | 齿瓣石斛化学小分子成分的相关特征指纹图谱的建立方法 |
| CN108205037B (zh) * | 2016-12-20 | 2020-12-29 | 北京蓝标一成科技有限公司 | 铁皮石斛化学小分子成分的相关特征指纹图谱的建立方法 |
| CN108205038B (zh) * | 2016-12-20 | 2020-12-29 | 蓝标一成(海南)生物科技有限公司 | 鼓槌石斛化学小分子成分的相关特征指纹图谱的建立方法 |
| CN108205028B (zh) * | 2016-12-20 | 2020-12-29 | 北京蓝标一成科技有限公司 | 金钗石斛化学小分子成分的相关特征指纹图谱的建立方法 |
| CN108205026B (zh) * | 2016-12-20 | 2020-12-29 | 北京蓝标一成科技有限公司 | 霍山石斛化学小分子成分的相关特征指纹图谱的建立方法 |
| CN108205029B (zh) * | 2016-12-20 | 2020-12-25 | 北京蓝标一成科技有限公司 | 美花石斛化学小分子成分的相关特征指纹图谱的建立方法 |
| CN108398516B (zh) * | 2017-02-04 | 2020-12-15 | 北京蓝标一成科技有限公司 | 一种流苏石斛的质量检测方法 |
| CN108398515B (zh) * | 2017-02-04 | 2020-09-29 | 蓝标一成(海南)生物科技有限公司 | 一种鼓槌石斛的质量检测方法 |
| CN108398512B (zh) * | 2017-02-04 | 2021-03-16 | 北京蓝标一成科技有限公司 | 一种齿瓣石斛的质量检测方法 |
| CN108398490B (zh) * | 2017-02-04 | 2021-03-16 | 北京蓝标一成科技有限公司 | 一种金钗石斛的质量检测方法 |
| CN108398511B (zh) * | 2017-02-04 | 2021-03-16 | 北京蓝标一成科技有限公司 | 一种霍山石斛的质量检测方法 |
| CN108398510B (zh) * | 2017-02-04 | 2021-03-16 | 北京蓝标一成科技有限公司 | 一种兜唇石斛的质量检测方法 |
| CN108398492B (zh) * | 2017-02-04 | 2021-03-16 | 北京蓝标一成科技有限公司 | 一种铁皮石斛的质量检测方法 |
| CN108398491B (zh) * | 2017-02-04 | 2021-03-16 | 北京蓝标一成科技有限公司 | 一种美花石斛的质量检测方法 |
| CN108398513B (zh) * | 2017-02-04 | 2021-03-16 | 北京蓝标一成科技有限公司 | 一种叠鞘石斛的质量检测方法 |
| CN107247867B (zh) * | 2017-05-15 | 2019-10-25 | 浙江大学 | 一种中药效应化学标志物群的辨识方法 |
| CN107367567B (zh) * | 2017-07-17 | 2019-02-26 | 中山市中智药业集团有限公司 | 芪枣口服液的指纹图谱构建及其质量检测方法 |
| CN109100460A (zh) * | 2018-10-18 | 2018-12-28 | 大理大学 | 一种美洲大蠊抗肺纤维化的活性部位的药效分析检测方法 |
| CN109658984B (zh) * | 2018-12-18 | 2021-12-03 | 北京深度制耀科技有限公司 | 一种信息推荐和信息推荐模型训练方法、相关装置 |
| CN110346495B (zh) * | 2019-07-03 | 2021-09-28 | 山西大学 | 黄芪不同极性部位利水消肿药效活性成分的分析辨识方法 |
| US11443854B2 (en) | 2020-02-24 | 2022-09-13 | International Business Machines Corporation | Identifying potential medicinal interactions for online clinical trial study groups |
| CN113176366A (zh) * | 2021-05-08 | 2021-07-27 | 宁夏医科大学 | 基于谱效关系的二精方多糖及黄酮类成分的评价方法 |
| CN115356405B (zh) * | 2021-05-17 | 2024-10-11 | 福州致融医药科技有限公司 | 一种药物成分谱效关联特征解析方法 |
| CN114113436B (zh) * | 2021-12-02 | 2024-05-31 | 广州白云山光华制药股份有限公司 | 基于指纹图谱的黄芩总黄酮含量的测定方法及应用 |
| CN115472236B (zh) * | 2022-10-19 | 2024-04-30 | 湖南中医药大学 | 一种利用“印迹模板”成分簇动力学与热力学平衡原理确定、表征与评价药效物质的方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1473583A (zh) * | 2002-08-05 | 2004-02-11 | 浙江大学 | 一种中药新药研制方法 |
| CN102100706A (zh) * | 2009-12-18 | 2011-06-22 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种应用代谢组学对中成药质量评价的方法 |
-
2012
- 2012-09-05 CN CN201210324140.5A patent/CN102879486B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1473583A (zh) * | 2002-08-05 | 2004-02-11 | 浙江大学 | 一种中药新药研制方法 |
| CN102100706A (zh) * | 2009-12-18 | 2011-06-22 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种应用代谢组学对中成药质量评价的方法 |
Non-Patent Citations (8)
| Title |
|---|
| Quality Control Approaches for Chinese Herbal Medicines;YUAN Hai-long等;《Chinese Herbal Medicines》;20111231;第3卷(第1期);第17-22页 * |
| YUAN Hai-long等.Quality Control Approaches for Chinese Herbal Medicines.《Chinese Herbal Medicines》.2011,第3卷(第1期), |
| 多元线性回归分析法在蒙药森登汤谱效关系解析中的应用;许良等;《计算机与应用化学》;20081031;第25卷(第10期);第1190-1191页第2-4节 * |
| 张磊等.黄芪注射液色谱指纹图谱与抗氧化作用的相关分析.《中药材》.2009,第32卷(第11期), |
| 蒙药森登-4汤药效物质基础研究;许良;《中国博士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》;20091230;第43页5.2.1节，第38页 * |
| 许良.蒙药森登-4汤药效物质基础研究.《中国博士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》.2009, |
| 许良等.多元线性回归分析法在蒙药森登汤谱效关系解析中的应用.《计算机与应用化学》.2008,第25卷(第10期), |
| 黄芪注射液色谱指纹图谱与抗氧化作用的相关分析;张磊等;《中药材》;20091130;第32卷(第11期);第1757-1760页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102879486A (zh) | 2013-01-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102879486B (zh) | 一种筛选中药药效相关成分的方法及模型建立方法 | |
| He et al. | Rapid identification and quantitative analysis of the chemical constituents in Scutellaria indica L. by UHPLC–QTOF–MS and UHPLC–MS/MS | |
| CN102749348B (zh) | 一种鉴别药用植物中活性成分组的方法 | |
| CN102621244B (zh) | 一种参芪扶正注射液hplc指纹图谱的构建方法及其应用 | |
| CN106645450B (zh) | 新生化颗粒的质量检测方法 | |
| Duan et al. | Study on the destructive effect to inherent quality of Fritillaria thunbergii Miq.(Zhebeimu) by sulfur-fumigated process using chromatographic fingerprinting analysis | |
| CN102028840A (zh) | 一种复方中成药的超高压液相检测方法 | |
| Xu et al. | Potential and applications of capillary electrophoresis for analyzing traditional Chinese medicine: a critical review | |
| Xie et al. | Simultaneous determination of six main components in Bushen Huoxue prescription by HPLC-CAD | |
| CN106950324A (zh) | 一种黄芪建中丸指纹图谱的构建方法 | |
| Yu et al. | Quality consistency evaluation of Isatidis Folium combined with equal weight quantified ratio fingerprint method and determination of antioxidant activity | |
| Chen et al. | Quality Evaluation of Ilex asprella Based on Simultaneous Determination of Five Bioactive Components, Chlorogenic Acid, Luteoloside, Quercitrin, Quercetin, and Kaempferol, Using UPLC–Q-TOF MS Study | |
| CN110441413B (zh) | 千柏鼻炎片hplc指纹图谱的构建方法和检测方法 | |
| CN103063766B (zh) | 一种脑栓通制剂hplc指纹图谱的构建方法及其应用 | |
| Yang et al. | An efficient method for qualitation and quantitation of multi-components of the herbal medicine Qingjin Yiqi Granules | |
| CN104007198B (zh) | 一种灵芝皇制剂hplc标准指纹图谱及其构建方法和应用 | |
| CN102879516A (zh) | 补阳还五汤的鉴别和含量测定方法 | |
| CN111487350B (zh) | 丹参-三七药对的质量检测方法 | |
| CN110274978A (zh) | 一种芪参益气滴丸中三七多皂苷成分含量测定方法 | |
| CN111220719B (zh) | 一种人参药材质量的指纹图谱评价方法 | |
| CN103969355A (zh) | 一种黄芪药材的指纹图谱的鉴别方法 | |
| CN103969356B (zh) | 一种丹参药材的指纹图谱的鉴别方法 | |
| Famei et al. | Strategy and chromatographic technology of quality control for traditional Chinese medicines | |
| CN105616946A (zh) | 一种治疗咳嗽的制剂及其制备和质量控制方法 | |
| CN105044260B (zh) | 玉屏风制剂指纹图谱的构建方法和检测方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20140813 |