CN102875517A

CN102875517A - 一种大叶茜草素及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN102875517A
Application number: CN2012103810088A
Authority: CN
Inventors: 康文艺; 张伟
Original assignee: Henan University
Current assignee: Henan University
Priority date: 2012-10-08
Filing date: 2012-10-08
Publication date: 2013-01-16

Abstract

本发明公开了一种大叶茜草素及其制备方法，由以下步骤制得：取茜草原药材，用5~15倍量的石油醚加热回流提取20~40min；回收石油醚，真空干燥去除石油醚，得到提取物；提取物经过硅胶200-300目柱色谱，用石油醚洗脱，TLC检测，合并富含大叶茜草素组分，后经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，用氯仿：石油醚：甲醇=5：5：1洗脱，然后再经硅胶H柱减压柱色谱，用石油醚洗脱，最后用热乙醇重结晶得到大叶茜草素。本发明同时公开了大叶茜草素在制备降血糖药物方面的应用及制备治疗糖尿病药物方面的应用。实验表明，大叶茜草素能有效降低四氧嘧啶致高血糖小鼠的血糖值、TC、TG值和MDA含量，能显著升高小鼠的SOD活力值和肝糖原含量。

Description

一种大叶茜草素及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种大叶茜草素及其制备方法，同时还涉及其在制备降血糖药物方面的应用及制备治疗糖尿病药物方面的应用，属于天然药物领域。

背景技术

糖尿病（diabetes）是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征。糖尿病主要分为两种类型：Ⅰ型糖尿病（即胰岛素依赖型糖尿病）和Ⅱ型糖尿病（即非胰岛素依赖型糖尿病）。临床上以高血糖为主要特点，典型病例可出现多尿、多饮、多食、消瘦等表现，即“三多一少”症状。糖尿病（血糖）一旦控制不好会引发并发症，导致肾、眼、足等部位的衰竭病变，且无法治愈。国外给它的别名叫"沉默的杀手"（Silent Killer），特别是"成人型糖尿病"。四十岁以上的中年人染患率特别高，一旦患上"糖尿病"，将减少寿命十年之多，可能发生的并发症遍及全身。所有的糖尿病并发症可以通过严格血糖控制，从最大程度上进行预防，如果糖尿病患者能将自己的血糖水平控制在接近正常的血糖范围内，则糖尿病并发症就不会出现，或者出现得比较晚并且程度也较轻。

多年来糖尿病的治疗药物以西药为主，长期以来主要集中于磺脲类与双胍类药物。但这些药物存在着低血糖症和胃肠道反应等不良反应，因而寻找高效低毒的降糖药仍是医药专家追求的目标。由于传统中药及天然植物药具有相对安全和价格低廉、作用温和持久和可延缓并发症等优点，不失为寻找降糖新药的一条重要途径，因此开发中药及天然植物药作为降糖药可以提供更广泛的糖尿病治疗药物来源，而中药中有效的降血糖成分更是目前研究开发的热点。

茜草，俗名血见愁、小活血、活血草、锯子草、拉拉藤、小血藤，为茜草科植物茜草(Rubiacordifolia L.)的干燥根及根茎。茜草科茜草属植物全世界有60余种，主要分布于亚洲、欧洲、美洲和非洲。我国有24种10变种，遍布全国各地，尤以西南地区种类最多。茜草分布甚广，但至今仍以陕西、山西和河南为主产区，茜草性寒味苦，归心肝经，具有凉血止血、祛风除湿、祛淤通经、活血祛瘀、止咳祛痰之功效，主治吐血、衄血、血热崩漏、闭经、跌打损伤。茜草中主要含有水溶性的环已肽系列物、脂溶性成分蒽醌及其糖苷、萘醌及其糖苷，此外还含有萜类、β-谷甾醇、脂肪酸化合物和微量元素。

大叶茜草素是茜草中提取、分离出来的一种化合物，目前，主要用于胃肠痉挛、胃肠炎、肠蛔虫症、胆道蛔虫症、胆石症及其它胆道疾病引起的疼痛的治疗，但对大叶茜草素其它方面药理活性未见研究报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种大叶茜草素。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是提供一种大叶茜草素，由以下方法制备获得：茜草原药材经石油醚加热回流提取；回收石油醚，得到提取物；将提取物经硅胶200-300目柱色谱，用石油醚洗脱，TLC检测合并组分，经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，用氯仿：石油醚：甲醇=5:5:1洗脱，再经硅胶H柱减压柱色谱，用石油醚洗脱，热乙醇结晶即得。

本发明的目的还在于提供一种大叶茜草素的制备方法。

本发明所采用的技术方案还在于提供一种大叶茜草素的制备方法，由以下方法制备获得：取茜草原药材，用5~15倍量的石油醚加热回流提取20~40min；回收石油醚，真空干燥去除石油醚，得到提取物；提取物经过硅胶200-300目柱色谱，用石油醚洗脱，TLC检测，合并富含大叶茜草素组分，后经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，用氯仿：石油醚：甲醇=5：5：1洗脱，然后再经硅胶H柱减压柱色谱，用石油醚洗脱，最后用热乙醇重结晶得到大叶茜草素。

所述的茜草原药材经干燥处理。

本发明的目的还在于提供一种大叶茜草素在制备降血糖药物方面的应用。

本发明所采用的技术方案还在于提供了一种大叶茜草素在制备降血糖药物方面的应用。

本发明的目的还在于提供一种大叶茜草素在制备治疗糖尿病药物方面的应用。

本发明所采用的技术方案还在于提供了一种大叶茜草素在制备治疗糖尿病药物方面的应用。

四氧嘧啶（Alloxan）是胰岛β细胞毒剂，可选择性的损伤多种动物的胰岛β细胞，进而引起糖尿病。小鼠四氧嘧啶糖尿病模型造模方法简便，形成率高，是最常见的糖尿病动物模型。对于四氧嘧啶小鼠糖尿病模型的稳定性研究中，主要是通过四氧嘧啶溶液，在注射后所致糖尿病，一定时间内检测小鼠血清中血糖值。糖尿病时，机体内糖原合成过程中的某些酶活性低下，糖原合成减少，表现为肝糖原含量减少。另外，糖尿病同时可造成组织的氧化损伤，表现为肝组织中的超氧化物歧化酶（SOD）降低和丙二醛（MDA）的含量的升高。还可引起脂类代谢障碍，表现为血清甘油三酯（TG）、血清总胆固醇（TC）的升高。

本发明以四氧嘧啶诱导小鼠β细胞损伤，造成糖尿病模型后，以化合物大叶茜草素溶液灌胃，检测小鼠血清中的空腹血糖值、餐后血糖值、TC含量、TG含量、肝糖原含量、SOD和MDA值。实验表明：化合物大叶茜草素高剂量组和中剂量组作用显著，能有效降低四氧嘧啶致高血糖小鼠的血糖值、TC值、TG值和MDA含量，且能显著的升高小鼠血清的SOD活力值以及增加组织肝糖原含量，证明大叶茜草素具有很好的降血糖以及治疗糖尿病作用。

通过采用本发明的方法处理所得的化合物大叶茜草素，可以制成各种制剂，包括：栓剂、片剂、丸剂、颗粒剂、膜剂、微囊剂、滴丸剂、气雾剂、酒剂、糖浆剂、口服液等。

茜草是一种很常见的中药材，在自然界中分布广泛，因此，化合物大叶茜草素的原料容易得到，成本很低。本发明制备大叶茜草素的方法操作简单、工序较少，便于工业化的推广。实验表明，化合物大叶茜草素具有良好的降血糖作用，化合物大叶茜草素在制备降血糖药物方面及制备治疗糖尿病药物方面有着很好的应用。

具体实施方式

实施例1

本实施例的大叶茜草素，是从茜草中提取后洗脱得到的，具体制备方法如下：取干燥的茜草原药材，用5倍量的石油醚加热回流提取40min；回收石油醚，真空干燥去除石油醚，得到提取物；提取物经过硅胶200-300目柱色谱，用石油醚洗脱，TLC检测，合并富含大叶茜草素组分，后经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，用氯仿：石油醚：甲醇=5：5：1洗脱，然后再经硅胶H柱减压柱色谱，用石油醚洗脱，最后用热乙醇重结晶得到大叶茜草素。

实施例2

本实施例的大叶茜草素，是从茜草中提取后洗脱得到的，具体制备方法如下：取干燥的茜草原药材，用10倍量的石油醚加热回流提取30min；回收石油醚，真空干燥去除石油醚，得到提取物；提取物经过硅胶200-300目柱色谱，用石油醚洗脱，TLC检测，合并富含大叶茜草素组分，后经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，用氯仿：石油醚：甲醇=5：5：1洗脱，然后再经硅胶H柱减压柱色谱，用石油醚洗脱，最后用热乙醇重结晶得到大叶茜草素。

实施例3

本实施例的大叶茜草素，是从茜草中提取后洗脱得到的，具体制备方法如下：取干燥的茜草原药材，用15倍量的石油醚加热回流提取20min；回收石油醚，真空干燥去除石油醚，得到提取物；提取物经过硅胶200-300目柱色谱，用石油醚洗脱，TLC检测，合并富含大叶茜草素组分，后经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，用氯仿：石油醚：甲醇=5：5：1洗脱，然后再经硅胶H柱减压柱色谱，用石油醚洗脱，最后用热乙醇重结晶得到大叶茜草素。

实施例4

本实施例为化合物大叶茜草素的治疗糖尿病作用的实验，采用小鼠四氧嘧啶糖尿病模型。

实验选取雄性小鼠，体重22±2g。

仪器：UV-2000型紫外可见分光光度计（尤尼可上海仪器有限公司）；CS-H1型混合器（北京博励阳科技公司）；LRH-150生化培养箱（上海一恒科技有限公司）；Multiskan MK3酶标仪（热电上海仪器有限公司）；TGL-16高速离心机（江苏金坛市中大仪器厂）；各种规格移液器等。

试剂：Alloxan（alfa asear公司批号：2244-11-3）；阿卡波糖片（杭州中美华东制药有限公司批号：080105）；葡萄糖测定试剂盒（上海荣盛生物技术有限公司批号：20080705）；血清总胆固醇（TC）测定试剂盒（上海北海生物技术工程有限公司批号：BH20510）；血清甘油三酯（TG）测定试剂盒（上海北海生物技术工程有限公司批号：BH20612）；肝糖原检测试剂（南京建成生物工程研究所批号：20090604）；丙二醛（MDA）测定试剂盒（南京建成生物工程研究所批号：20090604）；SOD测定试剂盒（南京建成生物工程研究所批号：20090727），其他试剂均为分析纯。

小鼠适应7d后，随机分组，选取10只作为空白对照组，其余小鼠作为糖尿病造模组。糖尿病造模组于禁食不禁水12h后，按80mg/kg一次性尾静脉注射4%四氧嘧啶致糖尿病。

小鼠正常饮食饮水96h后，禁食不禁水6h，称重，眼眶静脉取血，分离血清。以血糖值大于11.1mmol/L作为成功造模的标准，根据血糖值均衡原则将造模成功的小鼠分成6组，每组10只，分别为空白组、模型组、阿卡波糖阳性对照组、大叶茜草素高、中、低三个剂量组。

分组后对阿卡波糖阳性对照组和大叶茜草素高、中、低三个剂量组每天灌胃相应的药物，阿卡波糖阳性对照组每天灌胃75mg/kg，化合物大叶茜草素高剂量组每天灌胃200mg/kg，中剂量组每天灌胃100mg/kg，低剂量组每天灌胃50mg/kg。空白对照组和模型组每天灌胃一定量的CMC-Na，给药8d后禁食6h，摘眼球取血分离血清测定空腹血糖值、TC含量、TG含量、MDA和SOD值。

血糖值、TC、TG、肝糖原含量、SOD和MDA的测定均按照试剂盒的要求进行，实验数据x±S表示，实验统计采用spss11.0统计软件进行单因素方差分析。

（1）化合物大叶茜草素高、中、低剂量对四氧嘧啶糖尿病小鼠空腹血糖值、餐后血糖值、肝糖原含量的影响（结果见表1）

表1数据显示：与模型组比较，大叶茜草素高剂量和中剂量空腹血糖值和餐后血糖值均显示有显著性降低，降血糖作用明显，低剂量组作用则不显著。肝糖原含量高剂量组和中剂量组也有显著性差异，且高剂量组升高肝糖原含量作用优于中剂量组；低剂量组无显著升高糖原含量作用。因此，大叶茜草素高、中剂量有显著的治疗糖尿病作用，低剂量不明显。与阿卡波糖阳性对照组比较各剂量组均无显著性差异，说明剂量组有较好的降血糖和餐后血糖效果，与阿卡波糖相差不大，因此说明化合物大叶茜草素有降血糖作用，且在一定剂量下作用显著。

表1 大叶茜草素对糖尿病小鼠的治疗作用

各组与空白对照组比较：^△P<0.05，^△△P<0.01，^△△△P<0.001；

各组与模型组比较：^*P<0.05，^**P<0.01，^***P<0.001。

（2）大叶茜草素对四氧嘧啶糖尿病小鼠的氧化损伤的影响（结果见表2）

表2数据显示：模型组的MDA含量显著高于空白对照组，SOD水平明显低于空白对照组；而大叶茜草素高剂量组的MDA含量显著低于模型组，显示显著的抗氧化作用；中剂量组MDA含量显著降低而SOD含量与模型组没有差异，具有一定抗氧化作用；低剂量组两个指标与模型组均无差别，且与空白组有差异，没有抗氧化作用。表明化合物大叶茜草素高、中剂量有一定的抗氧化作用，可以治疗糖尿病相关的氧化损伤，也可以通过此机制预防糖尿病并发症。

（3）大叶茜草素对四氧嘧啶糖尿病小鼠的血脂水平的影响（结果见表2）

表2数据显示：模型组的TC、TG含量明显高于空白对照组，而大叶茜草素高、中剂量组的TC、TG含量均显著低于模型组，低剂量组作用不明显。说明大叶茜草素在一定剂量下有降血脂作用，表明它对于糖尿病引起的血脂代谢异常有一定治疗作用。

表2大叶茜草素对糖尿病小鼠的抗氧化和降血脂作用

各组与模型组比较：^*P<0.05，^**P<0.01，^***P<0.001。

实验结果表明，糖尿病模型组与空白组对照组的血清中，空腹血糖值和餐后血糖值均维持较高水平，肝糖原含量降低，说明所造糖尿病模型稳定；血清中，TC、TG值明显升高，说明引起了脂代谢障碍；血清MDA含量显著升高，SOD值降低，说明糖尿病引起了相关的氧化损伤。

大叶茜草素各剂量组均具能降低糖尿病模型小鼠的空腹血糖值和餐后血糖值，升高肝组织中肝糖原含量，且高、中剂量效果显著，可见大叶茜草素在剂量为100mg/kg以上时有很好的降血糖作用，可开发用于糖尿病的治疗；同时，大叶茜草素高、中剂量明显降低糖尿病小鼠血清TC、TG含量、MDA值，同时提升小鼠的SOD活力水平，且高剂量作用最为显著。可见化合物大叶茜草素200mg/kg剂量，将具有很好抗氧化以及降血脂等辅助糖尿病治疗的作用。

实施例5

本实施例提供化合物大叶茜草素片剂（以1000片药片为例）的制备方法：

取化合物大叶茜草素334g，与淀粉120g混匀，加10%淀粉浆48g制成软材，用14目筛制粒后，置80℃干燥后于12目整粒，加入干淀粉46g及硬脂酸镁6g混匀后，压片，质检、包衣，得到化合物大叶茜草素片剂。

实施例6

本实施例提供化合物大叶茜草素胶囊剂（以1000片药片为例）的制备方法：

取化合物大叶茜草素180g，与80g淀粉混匀，加10%的淀粉浆制成软材，用14目筛制粒后，置70℃干燥后用8目筛制粒，按照0.4g粉末/粒直接装入胶囊，得到化合物大叶茜草素胶囊剂。

Claims

1.一种大叶茜草素，其特征在于，由以下方法制备获得：茜草原药材经石油醚加热回流提取；回收石油醚，得到提取物；将提取物经硅胶200-300目柱色谱，用石油醚洗脱，TLC检测合并组分，经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，用氯仿：石油醚：甲醇=5:5:1洗脱，再经硅胶H柱减压柱色谱，用石油醚洗脱，热乙醇结晶即得。

2.一种如权利要求1所述的大叶茜草素的制备方法，其特征在于，由以下方法制备获得：取茜草原药材，用5~15倍量的石油醚加热回流提取20~40min；回收石油醚，真空干燥去除石油醚，得到提取物；提取物经过硅胶200-300目柱色谱，用石油醚洗脱，TLC检测，合并富含大叶茜草素组分，后经Sephadex LH-20凝胶柱色谱，用氯仿：石油醚：甲醇=5：5：1洗脱，然后再经硅胶H柱减压柱色谱，用石油醚洗脱，最后用热乙醇重结晶得到大叶茜草素。

3.根据权利要求2所述的一种大叶茜草素的制备方法，其特征在于，所述的茜草原药材经干燥处理。

4.大叶茜草素在制备降血糖药物方面的应用。

5.大叶茜草素在制备治疗糖尿病药物方面的应用。