CN1947737B - 沙生蜡菊总皂甙在制备药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种沙生蜡菊总皂甙在药物中的应用，是利用沙生蜡菊中活性成分总皂甙作为制备治疗糖尿病降血糖药物的应用。在应用时，首先从中药沙生蜡菊中提取纯化总皂甙，然后将提取物总皂甙根据需要制成口服或肌肉注射的给药方式按药剂学常规生产方法制成片剂、颗粒剂、滴丸、冲剂、液体制剂、胶囊剂、喷雾剂、气雾剂和注射剂，或将其活性成分与一种或多种载体或药物混合，制成片剂、颗粒剂、滴丸、冲剂、液体制剂、胶囊剂、喷雾剂、气雾剂和注射剂使用；为以沙生蜡菊总皂甙为原料制备治疗糖尿病降血糖药物提供了新的途径。

Description

沙生蜡菊总皂甙在制备药物中的应用

技术领域

本发明涉及一种沙生蜡菊总皂甙作为制备治疗糖尿病降血糖的药物的应用，包括I型糖尿病和II型糖尿病的预防和治疗，也可以制成保健食品用于糖尿病的预防和患者辅助治疗。

背景技术

糖尿病是一种全身性慢性进行性疾病。其基本病理是绝对性或相对性胰岛素分泌不足，β细胞对胰岛素的敏感性降低而导致的内分泌失调症，进而导致人体里的糖、蛋白质、脂肪和水、电解质代谢紊乱。随着时间的延长容易并发全身性血管病变，严重威胁人体健康和生命安全。

目前，糖尿病及其并发症已成为威胁人类健康的主要疾病之一，随着人们生活水平的提高，生活方式的改变，糖尿病的患病率正逐年增加。当前，治疗糖尿病的药物不少，但大多数已降糖西药和控制饮食为主，必要时采用注射胰岛素。西药双胍类、黄酮类药物可控制血糖，尿糖升高以至达到正常。最近又推出中药制剂治疗糖尿病，有“中药活胰素”、“降糖胰复丹”、“降糖宁胶囊”、“糖复康胶囊”等用来降低血糖、尿糖等。但化学合成降糖降脂药物毒副作用较大，价格昂贵，对控制糖尿病及其并发症尚不够满意，而关于降糖降脂的天然药物的研究报道较多，其中皂甙被认为是降糖降脂的有效成分之一。

沙生蜡菊是我国的一种传统中药，在利胆、抗氧化，抗病毒等方面有较多的报道。但通过对大量的相关文献的检索，对沙生蜡菊的总皂甙在降血糖降血脂方面还没有相关报道。

发明内容

本发明目的在于，研究沙生蜡菊总皂甙在药物中的应用，是利用沙生蜡菊中活性成分总皂甙作为制备治疗糖尿病降血糖药物的应用。在应用时，首先从中药沙生蜡菊中提取纯化总皂甙，然后将提取物总皂甙根据需要制成口服或肌肉注射的给药方式按药剂学常规生产方法制成片剂、颗粒剂、滴丸、冲剂、液体制剂、胶囊剂、喷雾剂、气雾剂和注射剂，或将其活性成分与一种或多种载体或药物混合，制成片剂、颗粒剂、滴丸、冲剂、液体制剂、胶囊剂、喷雾剂、气雾剂和注射剂使用；为以沙生蜡菊总皂甙为原料制备治疗糖尿病降血糖药物提供了新的途径。

本发明所述的沙生蜡菊总皂甙在药物中的应用，是利用沙生蜡菊中活性成分总皂甙作为制备治疗糖尿病降血糖药物的应用，首先从中药沙生蜡菊中提取纯化总皂甙，然后将提取物总皂甙根据需要制成口服或肌肉注射的给药方式按药剂学常规生产方法制成片剂、颗粒剂、滴丸、冲剂、液体制剂、胶囊剂、喷雾剂、气雾剂和注射剂，或将其活性成分与一种或多种载体或药物混合，制成片剂、颗粒剂、滴丸、冲剂、液体制剂、胶囊剂、喷雾剂、气雾剂和注射剂使用；其中从中药沙生蜡菊中提取纯化总皂甙的方法，按下例步骤进行：以1公斤为基数

a、取中药沙生蜡菊药材切成常规的饮片，先用馏分为30-60℃的石油醚脱脂，再用3-8倍量的20-95％乙醇提取三次；

b、提取液用2％药用活性炭脱色，过滤，回收乙醇；

c、再用去离子水稀释，过滤，经由D101大孔吸附树脂柱纯化，其中经大孔吸附树脂纯化乙醇洗脱液优选含有70％的乙醇和30℃的水，先用去离子水洗近至无色，再用20-95％的乙醇洗脱，收集乙醇液，减压浓缩回收乙醇，浓缩干燥得到沙生蜡菊总皂甙。

利用含有1％-99％的沙生蜡菊总皂甙和99％-1％的药用载体制成降血糖药物。

选含有10％-90％的沙生蜡菊总皂甙和90％-10％的药用载体制成降血糖药物。

优选含有30％-80％的沙生蜡菊总皂甙和70％-20％的药用载体制成降血糖药物。

优选含有60％-70％的沙生蜡菊总皂甙和40％-30％的药用载体制成降血糖药物。

所述载体是指药剂学常规应用的载体，其中包括：防腐剂、矫味剂、稀释剂、崩解剂、吸附剂、着色剂、赋型剂。

所述的沙生蜡菊总皂甙用于制备治疗糖尿病药物的应用，其中包括I型糖尿病和II型糖尿病的预防和治疗，也可以制成保健食品用于糖尿病的预防和患者辅助治疗。

本发明具有从沙生蜡菊中提取、分离、精制总皂甙的方法，工艺简单、成熟，实验室和工业化生产都适用。同时，根据沙生蜡菊提取物的药理、毒理实验表明，沙生蜡菊总皂甙几乎无毒，使用安全，降糖降脂的作用明显等特点。

本发明所述的沙生蜡菊总皂甙在药物中的应用，对人用药剂量可根据年龄、体重和糖尿病的类型及病情的严重程度而确定，安全有效剂量为20-100mg/人次，由以下的试验得到验证。

本发明所述沙生蜡菊总皂甙的药理作用：

摘要在100、200、400mg/kg剂量下多次灌服沙生蜡菊总皂甙对葡萄糖、肾上腺素引起的高血糖均有明显的降低作用，具有抑制肾上腺素引起的肝糖原分解和促进肝糖原合成的作用。但对动物正常血糖却无明显影响。多次灌服沙生蜡菊总皂甙能够降低四氧嘧啶引起的糖尿病小鼠高血糖，降低其血清尿素氮，并能改善肝脏和肾脏的功能。

目的本发明对沙生蜡菊总皂甙的主要药效学进行了研究，在实验动物身上验证其疗效，现报告如下：

药物沙生蜡菊总皂甙由中国科学院理化技术研究所提供，为棕黄色粉末。盐酸二甲双胍片由北京中慧药业有限公司(生产批号：20040308)出品，试验时用蒸馏水配成所需浓度。肾上腺素、四氧嘧啶均为Sigma公司产品。

仪器京都血糖仪，日本ARKRAY，Inc.株式会社；无菌塑柄采血针，无锡信达医疗器械有限公司(生产批号：031104)。

动物昆明种小鼠，体重18-22g，雌雄兼用，动物质量合格证编号为：SYXK(军)2002-027，动物由中国人民解放军兰州军区乌鲁木齐总医院实验动物中心提供。

所有数据均用X±SD表示，采用组间t检验。

(一)蜡菊对正常小鼠的影响：

取健康小鼠50只，雌雄各半，按体重随机分为5组，每组10只。空白对照组ig等体积生理盐水；阳性对照组ig二甲双胍130mg/kg；沙生蜡菊-2高、中、低3个剂量组分别ig400，200，100mg/kg；每天1次，给药体积0.2mL/10g，连续7d。末次给药前禁食(不禁水)12h，末次给药后2h用京都血糖仪测定尾静脉血糖值。各给药组与空白对照组采用Excel进行t检验。(见表1)

表1蜡菊对正常小鼠的影响(X±S，n＝10)

各组和空白组比较，P＞0.05。

结果表明：沙生蜡菊高、中、低剂量虽然比与空白组血糖略有升高，但无显著性差异。

(二)蜡菊对小鼠糖耐量的影响：

取健康小鼠52只，按体重随机分为6组。空白对照组正常饲养，模型对照组给予同体积生理盐水，阳性对照组ig二甲双胍130mg/kg；沙生蜡菊高、中、低3个剂量组分别ig 400，200，100mg/kg，每天1次，给药体积0.2mL/10g，连续7d。末次给药前禁食(不禁水)12h，给药后2h后除空白对照组ig生理盐水外，其余各组小鼠ig葡萄糖溶液2g/kg。给糖后30min、60min和120min用京都血糖仪测定尾静脉血糖值。各给药组血糖值与模型对照组进行t检验，(见表2)。

表2蜡菊对小鼠糖耐量的影响(X±S)

模型组与空白组比较△P＜0.001，各组和模型组比较，^*P＜0.05；^**P＜0.01，^***P＜0.001。

结果表明：沙生蜡菊的高、中、低剂量在30min时对外源性葡萄糖引起的血糖升高有抵抗作用，并且起效较快。LJ的高、低剂量在60min时还具有对外源性葡萄糖引起的血糖升高有抵抗作用，持续时间较长。

(三)沙生蜡菊对肾上腺素小鼠高血糖的影响：

取健康小鼠58只，按体重随机分为6组。空白对照组正常饲养，模型对照组给予同体积生理盐水，阳性对照组ig二甲双胍130mg/kg；LJ高、中、低3个剂量组分别ig 400，200，100mg/kg，，每天1次，给药体积0.2mL/10g，连续7d。末次给药前禁食(不禁水)12h，给药后2h后除空白对照组ip生理盐水外，其余各组小鼠ip肾上腺素0.2mg/kg。注射后30min用京都血糖仪测定尾静脉血糖值。各给药组血糖值于模型组进行t检验，(见表3)。

表3蜡菊对肾上腺素高血糖小鼠血糖水平的影响(X±S)

模型组与空白组比较△P＜0.001(表明肾上腺素导致小鼠高血糖模型建立成功)，各组和模型组比较，*P＜0.05；**P＜0.01，***P＜0.001。

结果表明：LJ高、中、低各剂量能显著降低肾上腺素导致的小鼠高血糖。

然后小鼠迅速断颈处死，取肝脏，按照南京建成生物工程研究所提供的试剂盒及方法测定肝糖原，(见表4)。

表4蜡菊对肾上腺素高血糖小鼠肝糖原含量的影响(X±S)

模型组与空白组比较△P＜0.001，各组和模型组比较，*P＜0.05；**P＜0.01，***P＜0.001。

结果表明：LJ高、中、低剂量组均能显著增加肾上腺素导致的高血糖小鼠的肝糖原。

(四)沙生蜡菊总皂苷对四氧嘧啶糖尿病小鼠的影响：

选健康小鼠禁食12h后，尾静脉注射(iv)四氧嘧啶80mg/kg，72h后用京都血糖仪测血糖。选血糖11.1mmol/L以上者用于实验。同时随机取糖尿病小鼠3只，断颈处死，取肝脏和肾脏，10％甲醛溶液中浸泡，进行常规HE染色。

取53只糖尿病小鼠，按血糖水平随机分为6组，模型对照组给予同体积生理盐水，阳性对照组ig二甲双胍130mg/kg；沙生蜡菊高、中、低3个剂量组分别ig 400，200，100mg/kg，每天1次，给药体积0.2mL/10g，连续7d。末次给药前禁食(不禁水)12h，给药2h后用京都血糖仪测定尾静脉血糖值。各给药组血糖值与模型组进行t检验，(见表5)。

表5蜡菊对四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠血糖水平的影响(X±S)

模型组与空白组比较△P＜0.001(表明四氧嘧啶糖尿病小鼠造模成功)，各组和模型组比较，*P＜0.05；**P＜0.01。

结果表明：沙生蜡菊高、中剂量能够降低四氧嘧啶糖尿病小鼠的血糖。

测完血糖，小鼠迅速摘眼球取血并且断颈处死，取肝脏和肾脏，10％甲醛溶液中浸泡。血液离心后，按照南京建成生物所提供的的尿素氮试剂盒及方法测试血清中尿素氮的含量，结果表明沙生蜡菊中、低剂量对四氧嘧啶导致的血清尿素氮上升有抑制作用，高剂量对四氧嘧啶导致的血清尿素氮上升有显著抑制作用(见表6)，每组随机取3只小鼠的肝脏和肾脏，进行常规HE染色。

表6蜡菊对四氧嘧啶诱发的小鼠糖尿病的血清尿素氮浓度(X±S)

模型组与空白组比较△P＜0.001，各组和模型组比较，*P＜0.05；**P＜0.01

造模小鼠肝脏病理切片结果：

大部分肝细胞有不同程度的颗粒样变性、水样变性和嗜酸性变，并有散在点状坏死(图1)；肝细胞普遍浊肿，有散在嗜酸性变，2只肝实质内有点状坏死，1只有灶性坏死，肝实质及汇管区有较多炎细胞浸润(图2)；

沙生蜡菊高剂量组对模型组小鼠肝脏保护作用的病理切片结果：2只有较多散在的点状或片状坏死，肝细胞有轻度浊肿和少量嗜酸变。1只肝细胞以颗粒样变为主，(图3)；

沙生蜡菊中剂量组对模型组小鼠肝脏保护作用的病理切片结果：1只肝细胞轻度浊肿、轻度水样变、散在嗜酸性变和点状坏死；2只散在嗜酸变，(图4)；

沙生蜡菊低剂量组对模型组小鼠肝脏保护作用的病理切片结果：肝细胞有少量散在嗜酸变，偶见点状坏死，(图5)；

造模小鼠肾脏病理切片结果：

肾小球体积增大，基膜轻度增厚，致肾小囊腔变狭，呈裂隙状，甚至闭塞，结构消失，肾小管上皮轻度浊肿，未见明显空泡变性(图6)。肾小球体积不大，细胞不增生，肾小囊腔结构恢复正常，基膜及系膜未见明显改变，小管上皮显轻度浊肿并有较多空泡变性，尤以近包膜处为著，部分官腔有少量蛋白管型，偶见髓质血管充血(图7)。

沙生蜡菊高剂量组对模型组小鼠肾脏保护作用的病理切片结果：

小部分肾小球、肾小管空泡变性；部分近端小管轻度浊肿，少量蛋白管型，(图8)。

沙生蜡菊中剂量组对模型组小鼠肾脏保护作用的病理切片结果：

1只小鼠肾小球轻度充血，有少量空泡变性，肾小管细胞轻度浊肿，皮质内有少量管型，(图9)。

沙生蜡菊低剂量组对模型组小鼠肾脏保护作用的病理切片结果：

肾小球充血，肾小球足细胞减少，部分肾小球空泡变性。近端小管轻度浊肿，可见少量管型，髓质中有散在局灶性充血和蛋白渗出，(图10)。

结论：

实验结果表明沙生蜡菊提取的总皂甙可降低肾上腺素性高血糖小鼠的血糖值，具有抑制肾上腺素引起的肝糖原分解和促进肝糖原合成的作用，从而可减少血糖的来源，降低小鼠的血糖值。沙生蜡菊还能使葡萄糖所致高血糖小鼠的血糖水平下降，而对正常小鼠的血糖水平无显著影响。

四氧嘧啶为胰岛β细胞杀伤剂，可选择性地损伤胰岛β细胞，引起实验性糖尿病，利用四氧嘧啶选择性破坏胰岛β细胞建立糖尿病小鼠模型.发现沙生蜡菊能降低四氧嘧啶糖尿病小鼠的高血糖，降低糖尿病小鼠血清尿素氮的含量。

病理学对沙生蜡菊高、中、低剂量研究表明其肾脏共同表现为：肾小球轻度充血，细胞少，部分出现空泡变性。近曲管上皮轻度浊肿，有少量管型，血管扩张充血。集合管腔有较多蛋白管型；肝脏共同表现为：肝细胞轻度浊肿，散在嗜酸变，轻度水样变。与模型组病变程度相似。说明沙生蜡菊高剂量、中剂量、低剂量在降糖治疗时对小鼠的肝、肾组织毒性较小，对肝脏肾脏具有保护作用。

本发明的药效学试验为临床应用沙生蜡菊总皂甙提供了一定的药理学依据。

附图说明

参见附图

图1为本发明糖尿病小鼠造模成功后肝脏病理切片HE，×100图

图2为本发明模型组肝脏病理切片，HE染色×100图

图3为本发明蜡菊高剂量组肝脏病理切片，HE染色×100图

图4为本发明蜡菊中剂量组肝脏病理切片，HE染色×100图

图5为本发明蜡菊低剂量组肝脏病理切片，HE染色×100图

图6为本发明糖尿病小鼠造模成功后肾脏病理切片HE，×100图

图7为本发明模型组肾脏病理切片，HE染色×100图

图8为本发明蜡菊高剂量组肾脏病理切片，HE染色×100图

图9为本发明蜡菊中剂量组肾脏病理切片，HE染色×100图

图10为本发明蜡菊低剂量组肾脏病理切片，HE染色×100图

具体实施方式

实施例1(以1公斤为基数)

取中药沙生蜡菊药材1kg，切成2mm常规的饮片，先用馏分为30℃的石油醚脱脂，再用3倍量的30％乙醇提取三次；

提取液用2％药用活性炭脱色，过滤，回收乙醇；

再用去离子水稀释到1500ml，过滤，经由D101大孔吸附树脂柱纯化，其中经大孔吸附树脂纯化乙醇洗脱液优选含有70％的乙醇和30℃的水，先用去离子水洗近至无色，再用20％的乙醇洗脱，收集乙醇液，减压浓缩回收乙醇，浓缩干燥得到沙生蜡菊总皂甙，沙生蜡菊总皂甙1kg，药用淀粉0.5kg，用80％乙醇湿法制粒，整粒，干燥，装1#胶囊，每粒0.2g，其他项目应符合中华人民共和国药典2000年版胶囊项要求。

实施例2(以1公斤为基数)

取中药沙生蜡菊药材1kg，切成2mm常规的饮片，先用馏分为50℃的石油醚脱脂，再用5倍量的50％乙醇提取三次；提取液用2％药用活性炭脱色，过滤，回收乙醇；

再用去离子水稀释到1500ml，过滤，经由D101大孔吸附树脂柱纯化，其中经大孔吸附树脂纯化乙醇洗脱液优选含有70％的乙醇和30℃的水，先用去离子水洗近至无色，再用50％的乙醇洗脱，收集乙醇液，减压浓缩回收乙醇，浓缩干燥得到沙生蜡菊总皂甙，将1.5kg聚乙二醇4000在水浴上加热1h得溶解液，趁热加入沙生蜡菊总皂甙细粉0.5kg，在保温锅中65℃约1h，用定量泵滴丸机滴制，滴速约120丸/分，滴制温度65-70℃，在约14℃的液体石蜡中冷却，制得的丸重约60mg，按规定干燥后丸重约40-45mg，其他项目应符合中华人民共和国药典2000年版滴丸项要求。

实施例3(以1公斤为基数)

取中药沙生蜡菊药材1kg，切成2mm常规的饮片，先用馏分为45℃的石油醚脱脂，再用6倍量的60％乙醇提取三次；

提取液用2％药用活性炭脱色，过滤，回收乙醇；

再用去离子水稀释到1500ml，过滤，经由D101大孔吸附树脂柱纯化，先用30℃的去离子水洗近至无色再用60％的乙醇洗脱，收集乙醇液，减压浓缩回收乙醇，浓缩干燥得到沙生蜡菊总皂甙，沙生蜡菊总皂甙1kg，淀粉0.5kg，糊精1kg，50％乙醇适量，制粒，整粒，干燥，压片，每片0.3g，其他项目应符合中华人民共和国药典2000年版片剂项要求。

实施例4(以1公斤为基数)

取中药沙生蜡菊药材1kg，切成2mm常规的饮片，先用馏分为55℃的石油醚脱脂，再用7倍量的70％乙醇提取三次；

提取液用2％药用活性炭脱色，过滤，回收乙醇；

再用去离子水稀释到1500ml，过滤，经由D101大孔吸附树脂柱纯化，先用30℃的去离子水洗近至无色，再用70％的乙醇洗脱，收集乙醇液，减压浓缩回收乙醇，浓缩干燥得到沙生蜡菊总皂甙19.8克，收率为1.98％。，沙生蜡菊总皂甙1kg，淀粉0.5kg，糊精1kg，50％乙醇适量，制粒，整粒，干燥，压片，每片0.3g，其他项目应符合中华人民共和国药典2000年版片剂项要求。

实施例5(以1公斤为基数)

取中药沙生蜡菊药材1kg，切成2mm常规的饮片，先用馏分为60℃的石油醚脱脂，再用8倍量的95％乙醇提取三次；

提取液用2％药用活性炭脱色，过滤，回收乙醇；

再用去离子水稀释到1500ml，过滤，经由D101大孔吸附树脂柱纯化，其中经大孔吸附树脂纯化乙醇洗脱液优选含有70％的乙醇和30℃的水，先用去离子水洗近至无色，再用95％的乙醇洗脱，收集乙醇液，减压浓缩回收乙醇，浓缩干燥得到沙生蜡菊总皂甙，将1.5kg聚乙二醇4000在水浴上加热1h得溶解液，趁热加入沙生蜡菊总皂甙细粉0.5kg，在保温锅中65℃约1h，用定量泵滴丸机滴制，滴速约120丸/分，滴制温度65-70℃，在约14℃的液体石蜡中冷却，制得的丸重约60mg，按规定干燥后丸重约40-45mg。

实施例6(以1公斤为基数)

取中药沙生蜡菊药材1kg，切成2mm常规的饮片，先用馏分为55℃的石油醚脱脂，再用7倍量的80％乙醇提取三次；

提取液用2％药用活性炭脱色，过滤，回收乙醇；

再用去离子水稀释到1500ml，过滤，经由D101大孔吸附树脂柱纯化，其中经大孔吸附树脂纯化乙醇洗脱液优选含有70％的乙醇和30℃的水，先用去离子水洗近至无色，再用80％的乙醇洗脱，收集乙醇液，减压浓缩回收乙醇，浓缩干燥得到沙生蜡菊总皂甙。沙生蜡菊总皂甙1kg，药用淀粉0.5kg，用80％乙醇湿法制粒，整粒，干燥，装1#胶囊，每粒0.2g，其他项目应符合中华人民共和国药典2000年版胶囊项要求。

本发明不限于以上实施例，依据本发明原理及一般制药常识，可对提取、分离、精制工艺进行适当的改进，得到的沙生蜡菊提取物还可以制成其它剂型，每种剂型都可以用其它辅料。

Claims (2)

1.一种利用沙生蜡菊中活性成分总皂甙作为制备治疗糖尿病降血糖药物的应用，其特征在于首先从中药沙生蜡菊中提取纯化总皂甙，然后将提取物总皂甙根据需要通过口服给药或肌肉注射给药的方式按药剂学常规生产方法制成片剂、颗粒剂、滴丸、冲剂、液体制剂、胶囊剂、喷雾剂、或气雾剂，或将沙生蜡菊中活性成分总皂甙与一种或多种载体混合，制成片剂、颗粒剂、滴丸、冲剂、液体制剂、胶囊剂、喷雾剂或气雾剂使用；其中从中药沙生蜡菊中提取纯化总皂甙的方法，按下例步骤进行：以1公斤为基数

a、取中药沙生蜡菊药材切成常规的饮片，先用沸程为30-60℃的石油醚脱脂，再用3-8倍量的20-95％乙醇提取三次；

b、提取液用2％药用活性炭脱色，过滤，回收乙醇；

c、再用去离子水稀释，过滤，经由D101大孔吸附树脂柱纯化，先用去离子水洗近至无色，再用20-95％的乙醇洗脱，收集乙醇液，减压浓缩回收乙醇，浓缩干燥得到沙生蜡菊总皂甙。

2.根据权利要求1所述的沙生蜡菊总皂甙在药物中的应用，其特征在于所述载体是指药剂学常规应用的防腐剂、矫味剂、稀释剂、崩解剂、吸附剂、着色剂或赋型剂。

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