CN101147749B - 治疗糖尿病的白背三七药物制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明给出的是治疗糖尿病的药物制剂，该药物主要是以菊科植物白背三七Genera divaricata(L.)DC.的提取物总黄酮，也可以是含有总黄酮、花色苷、苷类和萜、甾醇类成分的白背三七提取的混合物。它对动物实验中的胰岛-β细胞损伤/坏死性所致的高血糖具有降血糖作用，但对正常的实验动物或临床中已处于正常范围血糖值的糖尿病患者的血糖不具影响，本发明不但效果显著而且克服了某些药物存在的患者药前高血糖药后低血糖的弊端。
Description
【技术领域】
本发明涉及中医药领域，尤其说明了白背三七或含有其总黄酮、萜类、甾醇成分的提取物具有特异性的降血糖药物作用。
【背景技术】
目前随着生活水平的提高，饮食结构外环境的改变，糖尿病的发病率有逐年增高的趋势。高血糖是糖尿病的最基本的病理特征，也是引起糖尿病一些慢性并发症的重要原因，逆转糖尿病的高血糖状态和治愈它减轻患者痛苦和国家负担一直是国内外学者和政府所关注。由于口服降糖药的副作用及长期注射胰岛引起的胰岛素依赖性，使得人们迫切需要在新的领域，如中药中寻找合适的降糖药物，因此从中药中筛选糖尿病的治疗药物是近年来广大中医药工作者的热点。
虽然某些植物性药物对糖尿病人有一定的治疗效果，但都不能完全依靠它们来实现有效的控制血糖。
发明人在治疗糖尿病的植物性药物方面也做了很多探究，在多种明显有效的植物性药物对比中发现菊科植物Gynura divaricata(L.)DC.白背三七即白子菜的植物具有优异的治疗糖尿病/降血糖的药物作用。
白背三七传统的功用是清热消炎，止血祛瘀。治百日咳、肺结核、风湿痛、骨折、创伤出血，痈肿疮疖等。
白背三七含有粗蛋白和氨基酸、钾、Vc、Ve、β-胡萝卜素和粗纤维、粗脂肪、灰份。
最近报道白背三七含有亚硝酸，因此不要盲目地将白背三七作为一种 普通蔬菜来食用。
发明人在给出本发明之前未见有人对其进行成分鉴定，发明人初步鉴定并作出了含有总黄酮类、花色苷、萜、甾醇类成分的白背三七提取物具有降血糖作用的药效结论，给出了本项发明。
【发明内容】
本发明所要解决的是一种治疗糖尿病及其并发症的药物技术方案，该药物的特征在于；
a)菊科植物白背三七Genera divaricata(L.)DC.及其茎叶完全提取物的制剂，
b)含有白背三七及其茎叶中提取的总黄酮类成分的制剂，
c)含有白背三七及其茎叶中提取的总黄酮、萜、甾醇类成分的制剂，
d)含有白背三七及其茎叶中提取的总黄酮、花色苷、苷类和萜、甾醇类成分的制剂。
发明人还给出了一种含有白背三七提取物成分的复方药物制剂，它在于下列的成分、成分比组成。
白背三七其茎叶的完全提取物或从其中提取含有总黄酮、萜、甾醇、花色苷、苷类成分的混合物1-20份：银杏果1-5份，在于糖尿病药物中用途。
银杏果既是中药白果，属银杏科植物Ginkgo biloba 1.的种子。
白背三七中含有多个有效物质是治疗糖尿病/高血糖症的活性成分，它 具有综合协同药物作用，其中一个的例子是白背三七或其同科植物红凤菜的花色苷、苷类成分它具有改善糖尿病患者视力障碍。
本发明的优点还在于白背三七及其含有总黄酮和萜、甾醇类有效部位的混合物，它作为一种治疗糖尿病的药物，对血糖的影响具特异性；它对正常人或已处于正常范围值的糖尿病患者的血糖不具影响，本发明的物质克服了现有技术中的某些降血糖药物患者服用后出现低血糖反映的弊端。
从试药对动物模型由链脲佐菌素、四氧嘧啶所致的高血糖具有明显的降糖作用，这点可以肯定本发明的物质；含有总黄酮、萜、甾醇类成分的白背三七提取物对胰岛-β细胞损伤/坏死性所致的高血糖/糖尿病人具有保护或修复对胰岛--β细胞损伤的功能。因为，链脲佐菌素为一种广谱抗菌素，具有抗菌、抗肿瘤和致糖尿病的作用，对实验动物的胰岛β细胞具有高度选择性毒性作用，引起胰岛细胞损伤。四氧嘧啶是一种特异性胰岛--β细胞毒剂，可选择性地破坏胰岛-β细胞，引起细胞坏死和损伤而致糖尿病。
在另一方面是；肾上腺素是促进体内糖元分解及糖酵解，抑制胰岛素分泌；静脉注射葡萄糖是属于外源性增加体内糖含量，这些都是对胰腺β细胞无直接毒害作用，而是对抗胰岛素作用而引起高血糖，本发明的药物对其仅呈弱降糖趋势，说明该药物是有选择性降糖作用的。
白背三七全草中提取含有总黄酮和萜、甾醇类混合物可制备为目前临床中最常见的各个剂型，并可添加任何药学上可接受的辅剂或载体。
【实施例】
本发明对白背三七及其茎叶可运用多种现有技术手段对其进行提取。但，本发明可以以以下的方法从白背三七及其茎叶中提取总黄酮、萜、苷、 甾醇类的有效部位。
以下是本发明能够解决预期效果的实施说明
实施例一白背三七及其茎叶的有效部位提取
实施例二有效部位混合物的动物药效实验
实施例三有效部位混合物的制备
实施例四临床治疗例
实施例一白背三七及其茎叶有效部位的提取。
步骤1；水提醇沉淀法(水醇法)
1)白背三七全草干品5公斤，粉碎。先以适量的水为溶剂并加温对其提取，过滤药渣，煎剂浓缩至1∶1，备用。
2)取上物加是其5倍量的含45％、60％、75％梯度的乙醇，静置沉淀先后用不同浓度的乙醇交替处理除去白背三七煎剂中的无效成分；鞣质、蛋白质、淀粉、粘液质、油脂、脂溶性色素、树脂及部分糖类等杂质，即得白背三七乙醇滤清液1/3ml。
步骤2：
1)取上部分乙醇滤清液1000ml加入适量浓度为1.5％的KOH和5％的NaHCO3，搅拌后静置30分钟。
2)在滤清液中加入75％乙醇冷藏、回收乙醇，再浓缩、冷藏、滤过得滤液；在滤液中调整乙醇浓度至80％，再经冷藏、滤过得滤清液后回收乙醇得浓缩液。
3)将浓缩液干燥后，得白背三七的提取物总黄酮、萜类、甾醇55g。
4)运用高压液相色谱仪测定，色谱柱：Spherisorb S100DS1(25cm×4.6 cm)、流动相：甲醇/乙方烷一醋酸/0.1摩尔炭酸氢钠(pH2.2)＝62/18/22、温度：32.5℃、紫外线：580nm、流速：1.5ml/min，测定白背三七提取物中约含77％的黄酮、萜类、甾醇，其中总黄酮类成分约占43％。
实施例二白背三七提取物总黄酮、萜类、甾醇药效实验(以下简称总黄酮)
1、总黄酮对正常动物血糖的影响
健康小鼠36只，随机分为三组：空白对照组、阳性药胰岛素注射液100u/kg给药组，胰岛素每天静脉注射给药一次，总黄酮加生理盐水60mg/kg灌胃给药连续给药五天。末次给药前将小鼠饥饿12小时，末次给药后20分钟将小鼠断头处死，取血，分离血清，以血糖试剂盒测血糖含量。
表1可见，胰岛素注射液组对正常动物有降糖作用，总黄酮对正常的小鼠血糖含量无明显影响。
表1总黄酮对正常小鼠血糖的影响(x±s)
与模型对照组**p＜0.01，*p＜0.05
与空白对照组△△p＜0.01，△p＜0.05(以下各表均同)
2总黄酮对链脲佐菌素致高血糖动物模型的影响
取健康小鼠48只，随机取12只作为空白对照组，其余小鼠均静脉注射链脲佐菌素200mg/kg，次日将这36只小鼠随机分为三组：模型对照组，阳性药胰岛素注射液100u/kg给药组，总黄酮给药组灌胃，每天给药一次， 连续给药五天。末次给药前将小鼠饥饿12小时，末次给药后20分钟，将小鼠断头处死，取血，分离血清，以血糖试剂盒测血糖含量。
表2结果可见，同空白对照组比较，链脲佐菌素模型组小鼠血糖明显升高，而阳性药胰岛素注射液及总黄酮组均能明显降低小鼠血糖含量，说明胰岛素注射液、总黄酮对链脲佐菌素致高血糖模型动物有降糖作用。
表2.总黄酮对链脲佐菌素致小鼠血糖升高的影响(x±s)
3总黄酮对四氧嘧啶所致的高血糖动物模型的影响
取健康小鼠48只，随机取12只作为空白对照组，其余小鼠均静脉注射四氧嘧啶80mg/kg，将日将这36只小鼠随机分为三组：模型对照组，阳性药胰岛素注射液100u/kg给药组，总黄酮给药组。(给药方法同上)每天给药一次，连续给药五天。末次给药前将小鼠饥饿12小时，末次给药后20分钟，将小鼠断头处死，取血，分离血清，以血糖试剂盒测血糖含量。
表3结果可知，同空白对照组比较，注射四氧嘧啶小鼠血糖明显升高，而胰岛素注射液及试药总黄酮、完全提取物剂量均能明显降低小鼠血糖含量，说明胰岛素注射液、总黄酮对四氧嘧啶所致高血糖模型动物有降糖作用。
表3.总黄酮对四氧嘧啶致小鼠血糖升高的影响(x±s)
4总黄酮对肾上腺素所致高血糖动物模型的影响
取健康小鼠48只，空白对照组12只，余随机分为三组：模型对照组，阳性药胰岛素注射夜100u/kg给药组，总黄酮给药组。(给药方法同上)连续给药三天，末次给药前将小鼠饥饿12小时，末次给药后30分钟，除空白对照组外，其余各组动物均腹腔注射肾上腺素注射液100μg/kg，20分钟后将小鼠断头处死，取血，分离血清，用血糖试剂盒测血糖含量。
表4结果可见，同空白对照组比，注射肾上腺素液组小鼠血糖明显升高，胰岛素注射液能明显降低小鼠血糖含量，总黄酮组对小鼠血糖含量影响不大，说明胰岛素注射液与总黄酮对不同的高血糖模型动物降糖作用不一致。
表4总黄酮对肾上腺素致小鼠血糖升高的影响(x±s)
5总黄酮对外源性葡萄糖升高血糖动物模型的影响
取健康小鼠48只，随机分为四组：空白对照组，模型对照组，阳性药胰岛素注射液100u/kg给药组，试药总黄酮给药组。
每天静脉注射给药一次，(给药方法同上)连续给药五天。末次给药前将小鼠饥饿12小时，末次给药后30分钟，除空白对照组外，其余各组动物均静脉注射葡萄糖2g/kg(10ml/kg)，20分钟后将小鼠断头处死，取血， 分离血清，以血糖试剂盒测血糖含量。
表5结果可知，同空白对照组，外源性注射葡萄糖可使小鼠血糖明显升高，而阳性药胰岛素注射液能明显降低小鼠血糖含量，说明胰岛素注射液与总黄酮对外源性葡萄糖致高血糖模型动物的降糖作用同表4。
表5总黄酮外源性葡萄糖小鼠血糖升高的影响(x±s)-
6总黄酮对链脲佐菌素糖尿病小鼠肝糖元的影响
取健康小鼠48只，随机取12只作为空白对照组，其余小鼠均静脉注射链脲佐菌素200mg/kg(10ml/kg)次日将这36只小鼠随机分为三组：模型对照组，阳性药胰岛素注射液115u/kg给药组，总黄酮三个给药组。分别按组别静脉注射给药，每天组药一次，连续给药五天。末次给药前将小鼠饥饿12小时，末次给药后30分钟，将小鼠断头处死，取肝脏，用肝糖元试剂盒测小鼠肝糖元含量。
表6总黄酮对链脲佐菌素致高血糖小鼠肝糖元含量的影响(x±s)
试验结果
白背三七提取物总黄酮试药对小鼠正常的血糖无明显影响。对外源性 葡萄糖和由肾上腺素所致小鼠血糖的升高也呈弱降低趋势；对四氧嘧啶和链脲佐菌素所致的糖尿病小鼠高血糖有显著得降低作用；有使实验性糖尿病小鼠肝糖元升高的趋势；实验说明含有白背三七提取物总黄酮和萜类、甾醇的试药对链脲佐菌素和四氧嘧啶对选择性地破坏胰岛-β细胞引起细胞坏死/损伤而致高血糖/糖尿病具有保护胰岛-β细胞的降糖作用。
实施例三白背三七提取物总黄酮、萜类、甾醇胶囊的制备
取用实施例一方法提取的充分干燥后粉碎的白背三七提取物总黄酮、萜类、甾醇60克，加适量淀粉，装入2#胶囊，每颗约含白背三七提取物总黄酮、萜类、甾醇75±5mg，服法；日/3次，次/1颗，饭前后温水送服。
实施例四临床治疗实例
发明人以本发明药物共试治19位患者，男性7位，女性12位，年龄40-50岁8位，50岁以上11位。确诊时间4-11年不等，患者前后曾到过多家医院求治使用过多种药物如甲苯磺丁脲、胰岛素、优降糖、达美康、胰岛素、苯乙双胍及中草药，始终效果不理想，部分患者服药后出现低糖反映。
现见部分患者存在视力障碍、体表溃疡等并发症。
发明人用上述药物对19位患者进行给药治疗，每位患者服药至每一星期进行血糖测量。
结果示：患者在服药前最低血糖值146mg/dl，最高220mg/dl，平均186mg/dl。现与用药前比较降幅在7-10mg/dl的6位，11-15mg/dl的10位、 15mg/dl以上的3位，平均由原来的186mg/dl降至163mg/dl。
第二周：由原平均血糖值163mg/dl，现127mg/dl。
第三周：由原平均血糖值127mg/dl，现113mg/dl，处于正常血糖值120mg/dl以下的患者12位，高于正常血糖值(120mg/dl)，5-10mg/dl的7位，但无或轻微的症状表现。
第四周；19位患者中15患者的血糖处于89--117mg/dl的正常值，四大典型症状消失或基本消失及并发症明显减轻，其余4位患者最低血糖值是122mg/dl，最高血糖值130mg/dl，四大典型症状不明显，并发症明显减轻。
第四周-八周后；19位患者最低血糖值82mg/dl，最高血糖值103mg/dl，四大典型症状及并发症消失，且进食正常人的日常食物后对血糖值不影响。
Claims (4)
1.一种对胰岛—β细胞损伤性所致的高血糖/糖尿病具有治疗作用的药物，其特征在于由白背三七提取物总黄酮、萜类、甾醇组成，其中，
按照如下步骤提取白背三七提取物总黄酮、萜类、甾醇：
1）白背三七全草干品5公斤，粉碎，以适量的水为溶剂并加温对其提取，过滤药渣，煎剂浓缩至1:1备用；
2）取上物加是其5倍量的含45%、60%、75%梯度的乙醇，静置沉淀，先后用不同浓度的乙醇交替处理除去白背三七煎剂中的无效成分；鞣质、蛋白质、淀粉、粘液质、油脂、脂溶性色素、树脂及部分糖类等杂质，即得白背三七乙醇滤清液；
3）取白背三七乙醇滤清液1000ml加入适量浓度的1.5%的KOH和5%的NaHCO3，搅拌后静置30分钟；
4）在滤清液中加入75%乙醇冷藏、回收乙醇，在浓缩、冷藏、滤过得滤液；在滤液中调整乙醇浓度至80%，再经冷藏、滤过得滤清液后回收乙醇得浓缩液；
5）将浓缩液干燥后，得白背三七的提取物总黄酮、萜类、甾醇55g。
2.一种对胰岛—β细胞损伤性所致的高血糖/糖尿病具有治疗作用的药物，其特征在于是由白背三七提取物总黄酮、萜类、甾醇干燥后粉碎，与淀粉混合组成的胶囊，其中，
按照如下步骤提取白背三七提取物总黄酮、萜类、甾醇：
1）白背三七全草干品5公斤，粉碎，以适量的水为溶剂并加温对其提取，过滤药渣，煎剂浓缩至1:1备用；
2）取上物加是其5倍量的含45%、60%、75%梯度的乙醇，静置沉淀，先后用不同浓度的乙醇交替处理除去白背三七煎剂中的无效成分：鞣质、蛋白质、淀粉、粘液质、油脂、脂溶性色素、树脂及部分糖类等杂质，即得白背三七乙醇滤清液；
3）取白背三七乙醇滤清液1000ml加入适量浓度的1.5%的KOH和5%的NaHCO3，搅拌后静置30分钟；
4）在滤清液中加入75%乙醇冷藏、回收乙醇，在浓缩、冷藏、滤过得滤液；在滤液中调整乙醇浓度至80%，再经冷藏、滤过得滤清液后回收乙醇得浓缩液；
5）将浓缩液干燥后，得白背三七的提取物总黄酮、萜类、甾醇55g。
3.一种对胰岛—β细胞损伤性所致的高血糖/糖尿病具有治疗作用的药物，其特征在于由白背三七提取物总黄酮、萜类、甾醇1-20份，银杏果1-5份组成，其中，
按照如下步骤提取白背三七提取物总黄酮、萜类、甾醇：
1）白背三七全草干品5公斤，粉碎，以适量的水为溶剂并加温对其提取，过滤药渣，煎剂浓缩至1:1备用；
2）取上物加是其5倍量的含45%、60%、75%梯度的乙醇，静置沉淀，先后用不同浓度的乙醇交替处理除去白背三七煎剂中的无效成分：鞣质、蛋白质、淀粉、粘液质、油脂、脂溶性色素、树脂及部分糖类等杂质，即得白背三七乙醇滤清液；
3）取白背三七乙醇滤清液1000ml加入适量浓度的1.5%的KOH和5%的NaHCO3，搅拌后静置30分钟；
4）在滤清液中加入75%乙醇冷藏、回收乙醇，在浓缩、冷藏、滤过得滤液；在滤液中调整乙醇浓度至80%，再经冷藏、滤过得滤清液后回收乙醇得浓缩液；
5）将浓缩液干燥后，得白背三七的提取物总黄酮、萜类、甾醇55g。
4.一种白背三七提取物总黄酮、萜类、甾醇在制备治疗胰岛—β细胞损伤性所致的高血糖/糖尿病药物中的应用，其中，
按照如下步骤提取白背三七提取物总黄酮、萜类、甾醇：
1）白背三七全草干品5公斤，粉碎，以适量的水为溶剂并加温对其提取，过滤药渣，煎剂浓缩至1:1备用；
2）取上物加是其5倍量的含45%、60%、75%梯度的乙醇，静置沉淀，先后用不同浓度的乙醇交替处理除去白背三七煎剂中的无效成分：鞣质、蛋白质、淀粉、粘液质、油脂、脂溶性色素、树脂及部分糖类等杂质，即得白背三七乙醇滤清液；
3）取白背三七乙醇滤清液1000ml加入适量浓度的1.5%的KOH和5%的NaHCO3，搅拌后静置30分钟；
4）在滤清液中加入75%乙醇冷藏、回收乙醇，在浓缩、冷藏、滤过得滤液；在滤液中调整乙醇浓度至80%，再经冷藏、滤过得滤清液后回收乙醇得浓缩液；
5）将浓缩液干燥后，得白背三七的提取物总黄酮、萜类、甾醇55g。
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| CN1669564A (zh) * | 2004-03-17 | 2005-09-21 | 闫真 | 一种治疗心脑血管疾病的中药制剂、制备方法及其应用 |
| CN1899342A (zh) * | 2006-07-17 | 2007-01-24 | 浙江杭州鑫富药业股份有限公司 | 一种治疗糖尿病的口服药物及其用途 |
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| 陈贤兴.白背三七草的诱变及抗诱变作用的初步研究.河南科学20 3.2002,20(3),260-262. |
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