CN102858159B - 化合物 - Google Patents

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Abstract

公开了式（I）的化合物和治疗代谢性疾病的方法。

Description

化合物
技术领域
本发明涉及可用于治疗和预防代谢性疾病，包括糖尿病（I型和II型），肥胖和相关疾病的化合物，而且还包括制备化合物，含有所述化合物的药物组合物的方法，以及这类化合物的治疗用途。
背景技术
全世界超过二亿人患有糖尿病。世界卫生组织估计，2005年有110万人死于糖尿病，预计在2005年到2030年之间全世界由于糖尿病的死亡将增加一倍。能有效治疗糖尿病的新化合物可以挽救数以百万计的人的生命。
糖尿病是指导致机体无法有效地调节血糖水平的代谢疾病。所有糖尿病病例中约90％是2型糖尿病的结果，而剩下的10％是1型糖尿病，妊娠糖尿病和成人隐匿性自身免疫糖尿病（LADA）的结果。所有形式的糖尿病都导致血糖水平升高，如果长期不治疗，可以增加大血管（心脏疾病，中风，其它形式的心血管疾病）和微血管[肾功能衰竭（肾病），糖尿病性视网膜病变导致的失明，神经损害（糖尿病神经病变）]并发症的风险。
1型糖尿病，也称为少年或胰岛素依赖型糖尿病（IDDM），可发生于任何年龄，但最常见的诊断是在儿童，青少年或年轻成年人。1型糖尿病由产生胰岛素的β细胞的自身免疫性破坏引起，导致不能产生足够的胰岛素。胰岛素通过促进血糖运输到细胞用于提供能量来控制血糖水平。胰岛素产生不足将导致细胞内葡萄糖摄取的降低，并导致血流中葡萄糖的蓄积。细胞内可用葡萄糖的缺乏最终将导致1型糖尿病症状的发作：多尿（尿频），烦渴（口渴），常有饥饿感，体重减轻，视力变化，和疲劳。在诊断出患有1型糖尿病的5-10年内，患者产生胰岛素的胰腺β细胞被完全破坏，身体不能再产生胰岛素。因此，1型糖尿病患者需要每天给予胰岛素来度过余生。
2型糖尿病，也称为非胰岛素依赖型糖尿病（NIDDM）或成人发作型糖尿病，发生于胰腺产生胰岛素不足和/或组织变得对正常或高水平的胰岛素抵抗（胰岛素抵抗），导致过高的血糖水平。多种因素可导致胰岛素抵抗，包括长期升高的血糖水平，遗传，肥胖，缺乏体力活动，和年龄的增长。与1型糖尿病不同，2型糖尿病的症状更加突出，并且因此，疾病可能未被诊断，直到数年后在45岁左右的成年人中的峰值发病。不幸的是，儿童2型糖尿病的发病率在增加。
2型糖尿病治疗的主要目标是实现和维持血糖的控制，以降低微血管（糖尿病性神经病变，视网膜病变或肾病）和大血管并发症（心脏疾病，中风，其它形式的心血管疾病）的风险。美国糖尿病协会（ADA）和欧洲糖尿病研究协会（EASD）目前治疗2型糖尿病的指导方针[Diabetes Care, 2008, 31 (12), 1]概述了生活方式的调整，包括减轻体重和增加身体活动作为2型糖尿病管理的一个主要治疗方法。然而，这种方法的单独使用在大多数患者的第一年中失败，导致医生随着时间的推移开出处方药物。ADA和EASD推荐可降低肝葡萄糖产生的二甲双胍作为1a级药物；然而，显著数量的服用二甲双胍的患者可出现胃肠道副作用，在罕见的情况下，可能出现致命性乳酸中毒。推荐的1b级药物种类包括磺脲类（其通过调节钾通道的活性刺激胰腺胰岛素的分泌），和外源性胰岛素。虽然这两种药物迅速而有效地降低血糖水平，胰岛素需要每天注射1-4次，这两种药剂可能会导致不想要的体重增加和可能的致命性低血糖。2a级的推荐包括较新的药剂如噻唑烷二酮类药物（TZDs吡格列酮和罗格列酮），其提高肌肉，肝脏和脂肪对胰岛素的敏感性，以及GLP-1类似物，其加强餐后血糖介导的胰岛β细胞的胰岛素分泌。尽管TZDs表现出强劲，持久的血糖水平控制，副作用包括体重增加，水肿，妇女的骨折，加重充血性心力衰竭，以及缺血性心血管事件风险的潜在增加。GLP-1类似物也有效地控制血糖水平，但是，此类药物需要注射并且许多患者抱怨恶心。最近增加到2级药物清单的是DPP-4抑制剂，其像GLP-1类似物一样，提高血糖介导的β细胞的胰岛素分泌。不幸的是，DPP-4抑制剂只能中等程度地控制血糖水平，并且DPP-4抑制剂的长期安全性仍然需要可靠的确认。其它较少开方的治疗2型糖尿病的药物包括α-葡萄糖苷酶抑制剂，格列奈类（glinides）和支链淀粉（amylin）类似物。显然，2型糖尿病患者需要具有改善的疗效、耐用性和副作用的新的药物。
GLP-1和GIP是肽，称为肠降血糖素，分别由L和K细胞分泌，在摄入营养物质后从胃肠道进入血流。这一重要的生理反应充当营养物质（葡萄糖/脂肪）的浓度在胃肠道与其它外周器官之间的主要的信号转导机制。分泌以后，两种循环肽在胰腺β细胞都发出信号以增强葡萄糖刺激的胰岛素分泌，其反过来控制血流中的葡萄糖浓度（见：Diabetic Medicine 2007, 24(3), 223; Molecular and Cellular Endocrinology 2009, 297(1-2), 127; Experimental and Clinical Endocrinology & Diabetes 2001, 109(Suppl. 2), S288）。
肠降血糖素激素GLP-1和GIP与2型糖尿病之间的关联已经被广泛的探索。大多数研究表明，2型糖尿病与GLP-1分泌的后天缺陷以及GIP功能有关（见Diabetes 2007, 56(8), 1951 和 Current Diabetes Reports 2006, 6(3), 194）。由于其被蛋白酶DPP-4快速降解，外源性GLP-1用于治疗2型糖尿病患者受到严重限制。多修饰肽已经被设计为DPP-4抵抗的GLP-1模拟物并显示比内源性GLP-1更长的半衰期。具有该性质，已被证明对治疗2型糖尿病高度有效的药剂包括艾塞那肽（exenatide）和利拉鲁肽（liraglutide），然而，这些药剂需要注射。抑制DPP-4的口服药剂，如西他列汀（sitagliptin），维达列汀（vildagliptin）和沙格列汀（saxagliptin），提高完整的GLP-1并中等程度地控制循环的葡萄糖水平（见Pharmacology & Therapeutics 2010, 125(2), 328; Diabetes Care 2007, 30(6), 1335; Expert Opinion on Emerging Drugs 2008, 13(4), 593）。增加GLP-1分泌的新的口服药物对于2型糖尿病的治疗是理想的。
已经表明胆汁酸可以提高胃肠道的肽分泌。胆汁酸在每餐后从胆囊释放进入小肠以促进营养物质，特别是脂肪，脂质，和脂溶性维生素的消化。胆汁酸也可通过核受体（FXR，PXR，CAR，VDR）和G-蛋白偶联受体TGR5充当调节胆固醇体内平衡，能量和葡萄糖体内平衡的激素（见：Nature Drug Discovery 2008, 7, 672; Diabetes, Obesity and Metabolism 2008, 10, 1004）。TGR5是GPCRs视紫红质样亚家族（A类）的成员之一，在肠道，胆囊，脂肪组织，肝脏和中枢神经系统的选择区域表达。TGR5被多种胆汁酸激活，石胆酸和脱氧胆酸是最有效的激活剂（Journal of Medicinal Chemistry 2008, 51(6), 1831）。脱氧胆酸和石胆酸均增加肠内分泌STC-1细胞系的GLP-1分泌，部分通过TGR5（Biochemical and Biophysical Research Communications 2005, 329, 386）。合成的TGR5激动剂INT-777已被证明在小鼠体内增加肠道GLP-1的分泌（Cell Metabolism 2009, 10, 167）。已经显示胆汁盐促进血管灌注大鼠结肠模型中结肠L细胞的GLP-1分泌（Journal of Endocrinology 1995, 145(3), 521），以及血管灌注大鼠回肠模型中GLP-1，肽YY（PYY）和神经降压素的分泌（Endocrinology 1998, 139(9), 3780）。在人类中，向乙状结肠输注脱氧胆酸盐产生血浆PYY和肠高血糖素浓度的迅速和显著的剂量反应性增加（Gut 1993, 34(9), 1219）。增加回肠和结肠的胆汁酸或胆汁盐浓度的药剂将增加肠肽的分泌，包括，但不限于，GLP-1和PYY。
胆汁酸从肝脏中的胆固醇合成，然后进行羧酸与牛磺酸和甘氨酸的胺官能团的结合。结合胆汁酸被分泌到胆囊并在此积累，直到进餐被消耗。进食后，胆囊收缩并将其内容物清空进入十二指肠，在那里结合胆汁酸促进胆固醇，脂肪和脂溶性维生素在近端小肠的吸收（见：Frontiers in Bioscience 2009, 14, 2584; Clinical Pharmacokinetics 2002, 41(10), 751; Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition 2001, 32, 407）。结合胆汁酸继续流经小肠直到回肠末端，在那里90％通过顶端钠依赖性胆汁酸转运蛋白（ASBT，也被称为iBAT）被重吸收到肠细胞。剩下的10％在末端回肠和结肠被肠内细菌去结合为胆汁酸，其中5％接着在结肠被动地重吸收，剩下的5％在粪便中排出体外。在回肠被ASBT重吸收的胆汁酸然后运送到门静脉用于再循环至肝脏。这一高度调节的过程，称为肝肠循环，对身体总胆汁酸池的整体维持是重要的，因为肝脏中合成的胆汁酸的量相当于在粪便中被排泄的胆汁酸的量。ASBT抑制剂对胆汁酸重吸收的药理学破坏导致结肠和粪便中的胆汁酸浓度的增加，生理后果是增加肝胆固醇转化成胆汁酸，以补偿粪便胆汁酸的损失。许多制药公司已经将这种机制作为降低血脂异常/高胆固醇血症患者血清胆固醇的一项策略（见：Current Medicinal Chemistry 2006, 13, 997）。重要的是，ASBT抑制剂介导的结肠胆汁酸/盐浓度的增加也会增加肠道的GLP-1，PYY，GLP-2，和其它肠肽激素的分泌。因此，ASBT抑制剂可用于治疗2型糖尿病，1型糖尿病，血脂异常，肥胖，短肠综合征，慢性特发性便秘，肠易激综合征（IBS），克罗恩病和关节炎。
某些1,4-硫氮杂 类已被公开，例如，在WO 94/18183和WO 96/05188中。据说这些化合物可用作回肠胆汁酸再摄取抑制剂（ASBT）。
发明概述
简单地说，在一个方面，本发明公开了式I化合物
其中R1是H, Cl, Br, N(CH3)2,或甲氧基;
R2是H或OH;
每个R3独立地是C1-6烷基;
X是CH2, C(O),或CH=CH;
Q是C0-6烷基;
R4是OH, SO3H, CO2H, PO3H2, CONR5R5, NR5R5; 或NHC(O)CH2NR5R5;
每个R5独立地是H, OH, C1-6烷基, C0-6烷基CO2H, C0-6烷基SO3H, C0-6烷基PO3H2, C(O)C0-6烷基CO2H, C(O)C0-6烷基SO3H, C(O)C0-6烷基PO3H2, 或CH(R7)C0-6烷基CO2H; 和
R7是C0-6烷基CO2H, C0-6烷基OH, C0-6烷基SO3H, 或 C0-6烷基PO3H2。
在另一个方面，本发明公开了式Ⅰ化合物的药学上可接受的盐。
在另一个方面，本发明公开了包含式I化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。
在另一个方面，本发明公开了一种用于治疗或预防人类代谢性疾病，包括糖尿病（I型和II型），肥胖及相关病症的方法，其包括给予式I化合物或其药学上可接受的盐。
发明详述
优选地，R1是甲氧基。
优选地，R2是H。
优选地，每个R3独立地是C2-4烷基。最优选地，每个R3独立地是乙基或正丁基。
当R3基团不同时，它们所键合的碳原子是手性的。在那些手性化合物中，在该碳原子上的优选的立体化学为R构型。
未取代的苯环所键合的碳原子是手性的。在该碳原子上的优选的立体化学为R构型。
优选地，X是CH2或C(O)。最优选地，X是CH2。
优选地，Q是C0-2烷基。最优选地，Q是C0烷基（即不存在）。
优选地，R4是PO3H2或NR5R5。最优选地，R4是NR5R5。
优选地，一个R5是H和另一个是OH，甲基，C1-4烷基CO2H, C0-2烷基SO3H, C1-2烷基PO3H2, C(O)CO2H, C(O)C1-2烷基SO3H, C(O)C1-2烷基PO3H2, 或 CH(R7)C0-1烷基CO2H。最优选地，一个R5是H和另一个是CH2CO2H，CH2SO3H，CH2CH2SO3H，或CH(R7)C0-1烷基CO2H。
优选地，R7是C0-1烷基CO2H或C0-2烷基SO3H。最优选地，R7是C0-1烷基CO2H。
如本文所用，“烷基”可以是直链或支链烷基，除非另有明确表示。
对合适的药学上可接受的盐的综述，参见，例如，Berge et al, J. Pharm, Sci., 66, 1-19, 1977。在一个实施方案中，酸加成盐选自盐酸盐，氢溴酸盐，氢碘酸盐，硫酸盐，硫酸氢盐，硝酸盐，磷酸盐，磷酸氢盐，乙酸盐，苯甲酸盐，琥珀酸盐，糖酸盐（saccharate），富马酸盐，马来酸盐，乳酸盐，柠檬酸盐，酒石酸盐，葡糖酸盐，右旋樟脑磺酸盐，甲磺酸盐，乙磺酸盐，苯磺酸盐，对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐。在一个实施方案中，碱加成盐包括金属盐（如钠，钾，铝，钙，镁和锌盐）和铵盐（如异丙胺，二乙胺，二乙醇胺盐）。其它的盐（如三氟乙酸盐和草酸盐）可以用于制备式 (I)化合物及其药学上可接受的盐，也包含在本发明的范围之内。酸和碱加成盐可以由熟练的化学家通过在适当的溶剂中以适当的酸或碱处理式 (I)化合物，然后结晶和过滤来制备。
治疗或预防代谢性疾病的方法，可以包括单独给予本发明的化合物或盐作为单一疗法。本发明的化合物和盐也可以与其它治疗剂组合使用。用于与本发明的化合物和盐组合使用的合适药剂包括，例如，胰岛素敏感性增强剂，葡萄糖吸收抑制剂，双胍类，胰岛素分泌促进剂，或二甲双胍。
实施例
本发明化合物可通过各种方法，包括公知的标准合成方法制备。说明性的一般合成方法如下所述，然后在工作实施例中制备本发明的具体化合物。
在下面描述的所有流程中，在必要时按照合成化学的一般原则在敏感或反应性基团使用保护基团。保护基团根据有机合成的标准方法操作（T.W. Green和P.G.M. Wuts, (1991) Protecting Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, 关于保护基团通过引用结合到本文中）。在化合物合成的方便阶段使用对本领域技术人员显而易见的方法除去这些基团。过程，以及反应条件和它们的执行顺序的选择应与本发明的化合物的制备一致。本发明的化合物可以由本领域技术人员根据流程1到9容易地制备。
如流程1中所示，几个关键中间体可以从(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7,8-二(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂1,1-二氧化物制备（Brieaddy, L.E. WO9605188, 1996）。路易斯酸介导的去甲基化反应后通过与三氟甲磺酸酐反应得到中间体三氟甲磺酸酯（A）。A与一氧化碳和钯催化剂在MeOH中反应得到酯中间体（B）。A在氰化物和钯催化剂的存在下反应得到中间体腈（C），其被二异丁基氢化铝（DiBAL-H）还原得到中间体醛（D），或在钯和酸的存在下进行氢化得到氨甲基中间体（E）。
本发明的化合物可以如流程2制备。中间体醛（D）与取代胺置于还原胺化条件下，然后如有必要，通过酸，碱或官能化（氧化）脱保护，得到8-氨甲基实施例（F）。或者，将中间体（E）用氯烷基酰氯（chloroalkyl acid chloride）酰化，然后与各种亲核试剂包括亚硫酸盐，亚磷酸盐，氢氧化物，和取代胺进行反应，然后如果需要的话，保护基团脱保护，得到酰化的8-氨甲基实施例（F）。制备本发明8-氨甲基化合物的第三种和第四种方法涉及中间体（E）在碱或多聚甲醛存在下与官能化溴化物和亚磷酸三乙酯（triethylphospite）反应得到其它取代的8-氨甲基化合物（F）。
本发明的化合物可以如流程3制备。酯中间体（B）在碱性条件下进行皂化得到羧酸（G），然后在取代胺的存在下将其置于标准的酰胺偶合条件，得到酰胺实施例（H）。酯中间体（B）也可用DiBAL-H还原为醇（I），然后将其转化为溴化物（J）。溴化物（J）与各种亲核试剂（亚硫酸盐，亚磷酸盐，氢氧化物，胺）反应，然后如有必要，脱保护得到实施例（K）。
本发明的化合物可以如流程4从三氟甲磺酸酯中间体（A）制备。将中间体（A）进行Heck反应得到不饱和酯（L），将其皂化为不饱和酸（M）。酯（L）置于氢化条件下，随后皂化得到酸（N）。与取代胺通过标准酰胺形成反应得到酰胺实施例（O）。用甲硼烷还原酸（N）然后进行甲磺酰化或溴化形成得到化合物（P），其与各种亲核试剂（氰化物，亚磷酸二乙酯，氢氧化物，亚硫酸盐）反应，然后如有必要，水解，氧化，或脱保护得到实施例（Q）。
本发明的化合物可以如流程5制备。中间体醛（D）转化为不饱和膦酸酯（R），然后将其用TMSBr脱保护，得到不饱和膦酸实施例（S）。膦酸酯（R）进行氢化，然后用TMSBr脱保护，得到饱和膦酸实施例（T）。
本发明的化合物可以如流程6制备。化合物J（来自流程3）被氧化为N-羟基衍生物，与亚磷酸三乙酯反应随后脱保护，得到N-羟基实施例（U）。
中间体腈（C）被​​氧化然后腈被还原为醛（V），然后将其在还原性胺化条件下与取代的胺反应，得到实施例（W）。化合物X（如流程2制备）被氧化，还原，并脱保护得到N-羟基实施例（Y）。
本发明的化合物可以如流程7所示制备。中间体腈（C）被​​氧化为亚胺，然后用DiBAL-H还原为醛，其进行硼烷还原，与磷酸三乙酯反应，和脱保护得到C(5) b-苯基实施例（AA）。化合物Z被戴斯-马丁氧化剂氧化，然后将其在还原性胺化条件下与取代的胺反应，然后如有必要，脱保护得到额外的实施例（BB）。
本发明的化合物可以如流程8所示制备。正亮氨酸转化为乙基酯，然后用苯甲醛亚胺化和碘丁烷烷基化得到中间体化合物（CC）。亚胺水解（hydroylsis）后用LAH还原并形成硫酸酯得到氨基硫酸酯中间体（DD）。2-溴-1,4-二(甲氧基)苯用苯甲酰氯酰化，然后通过选择性脱甲基化得到中间体苯酚。酰化然后Newman-Kwart重排得到中间体（EE）。（EE）的一釜脱保护和使用氨基硫酸酯（DD）烷基化得到产品（FF）。分子内环化得到亚胺，然后钯-介导的羰基化得到酯中间体，其使用LAH还原得到中间体（GG）。亚胺被还原，然后硫化物氧化得到中间体（HH）。（HH）向本发明实施例（II和JJ）的转化可以分别根据流程2和3所述的化学作用来完成。
本发明的化合物可以如流程9所示制备。(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7,8-二(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂1,1-二氧化物 (Brieaddy, L.E. WO9605188, 1996) 脱甲基化，然后通过三氟甲磺酸酯的形成和钯-介导的胺化得到衍生物（KK）。脱甲基化，三氟甲磺酸酯形成，和钯-介导的氰化反应得到腈（LL）。用DiBAL-H还原腈得到醛（MM），然后将其在还原性胺化条件下与取代的胺反应，和如有必要，脱保护得到实施例（NN）。
缩略语
HATU 1,1,3,3-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
DCM 二氯甲烷
DCE 1,2-二氯乙烷
DIPEA 二异丙基乙胺
DME 1,2-二甲氧基乙烷
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
Et2O 乙醚
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
H 小时
HOAc 醋酸
MeCN 乙腈
MeOH 甲醇
MTBE 甲基叔丁基醚
NMP N-甲基吡咯烷酮
PhH 苯
PhME 甲苯
THF 四氢呋喃。
I. 中间体的制备
中间体 1a 和 1b：(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-醇-1,1-二氧化物(1a) 和(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-8-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-7-醇 1,1-二氧化物(1b)
方法1：(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7,8-双(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂1,1-二氧化物（200g，479mmol）（如Brieaddy, L.E. WO9605188, 1996制备）的DCE（1L）溶液用HCl（g）饱和，然后用氯化铝（200g，1.5mol）在一份里处理。将反应混合物搅拌，同时缓慢冷却至室温，然后搅拌2.5小时。将反应混合物在剧烈搅拌下加入冰-水混合物中。两相混合物用1N HCl（~200mL）处理，搅拌30分钟后相分离。分离出有机相，用稀HCl（1.5 L H2O/~200mL 1N HCl）洗涤两次，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩至干，得到7-OH和8-OH产物的区域异构体的混合物（185g，458mmol，收率​​96％），为白色泡沫状。1H-NMR显示是7/8-苯酚各自为47:53的混合。该区域异构体通过手性色谱法[固定相 (CSP)-纤维素 三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯）聚合物固定在硅胶（CHIRALPAK IC®，20微米，20cm×25cm）上，DCM和异丙醇（98/2 v/v）为流动相]进行分离，得到中间体1a和1b：
中间体1b（较快洗脱的峰）：(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-8-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-7-醇 1,1-二氧化物（86.3g，白色固体，纯度= 98.2％）： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.74 (t, J=7.0 Hz, 3 H), 0.79 (t, J=7.4 Hz, 3 H), 0.94 - 1.28 (m, 4 H), 1.30 - 1.53 (m, 2 H), 1.64 - 1.81 (m, 1 H), 1.91 - 2.10 (m, 1 H), 2.45 (d, J=9.8 Hz, 1 H), 3.04 (d, J=14.8 Hz, 1 H), 3.49 (d, J=14.8 Hz, 1 H), 3.80 (s, 3 H), 5.85 (d, J=10.0 Hz, 1 H), 6.06 (s, 1 H), 7.19 - 7.52 (m, 6 H), 9.93 (s, 1 H)。
中间体1a（较慢洗脱的峰）：(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-醇 1,1-二氧化物（72.5克），为白色固体： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.75 (t, J=7.1 Hz, 3 H), 0.79 (t, J=7.5 Hz, 3 H), 0.95-1.28 (m, 4 H), 1.31-1.53 (m, 2 H), 1.64-1.76 (m, 1 H), 1.98-2.10 (m, 1 H), 2.43 (d, J=9.8 Hz, 1 H), 3.06 (d, J=14.8 Hz, 1 H), 3.42 (s, 3 H), 3.49 (d, J=14.8 Hz, 1 H), 5.85 (d, J=9.8 Hz, 1 H), 6.04 (s, 1 H), 7.24-7.35 (m, 1 H), 7.35-7.48 (m, 5 H), 9.72 (s, 1 H)。
方法2：将搅拌着的(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7,8-双(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂1,1-二氧化物（1250g，2.99mol）的1,2-二氯乙烷（6L）溶液在室温下用HCl气体饱和（在此步骤期间内部温度上升至39℃）。在达到39℃后继续HCl气体鼓泡通过该溶液5分钟。在外部冷却下将氯化铝（1250g，9.37mol）在40分钟内分批加入，同时保持反应温度在38-42℃之间。将反应混合物搅拌2小时，然后慢慢倾入10kg的冰/水中。两个额外批次的1250g和500g的(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7,8-双(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂1,1-二氧化物用氯化铝和HCl以类似的方式进行处理。将三个冰/水骤冷的反应混合物（理论混合7.19摩尔）合并，并进行相分离。用CH2CI2（3 L）萃取水相，用水（3×4 L）洗涤合并的有机层并浓缩直到产物开始结晶。用庚烷稀释该混合物，并在搅拌下老化。通过过滤收集沉淀物，在空气中干燥2天，然后在真空烘箱中在55℃下干燥48小时，得到(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-醇 1,1-二氧化物和(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-8-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-7-醇 1,1-二氧化物约9:8的混合物（2.8kg）。根据方法1中的步骤纯化混合物得到1235克的(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-醇 1,1-二氧化物，为白色固体。
方法3：将(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7,8-双(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂1,1-二氧化物（11.1kg，26.58mol）的DCE（69.7kg）溶液用水（0.48kg，26.67mol）处理，然后将温度调节至35℃-40℃。向溶液中加入草酰氯（3.4kg，26.78mol），并搅拌三十分钟。然后将该溶液依次加入三氯化铝（3.6kg，26.9mol；3.6kg，26.9mol；1.8kg，13.4mol；1.8kg，13.4mol；0.9kg，6.8mol），两次加入之间间隔30分钟。在35℃-40℃搅拌该反应混合物，直至反应完成。通过将反应溶液缓慢加入水（119kg）中淬灭反应。分离有机相，然后进一步用水（60kg）萃取两次，用饱和氯化钠溶液（30kg）萃取一次。产物混合物的二氯乙烷溶液浓缩至最终质量39kg。此溶液用作方法1中所述的制备色谱的进料溶液。
含有所需产物的级分被部分的浓缩至约12L的体积。然后将该溶液通过常压蒸馏进一步浓缩至80℃的内锅温度。冷却后，发生结晶。最初的浆状物用水（6-12L）稀释，并搅拌2小时。通过过滤收集产物，用水（4L）洗涤，然后在60℃下真空干燥至恒重。从上面的步骤，得到4.1kg（10.22mol）的(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-8-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-7-醇 1,1-二氧化物（中间体1b）和3.9kg（9.72mol）的(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-醇 1,1-二氧化物（中间体1a）。
重复利用中间体1b制备(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7,8-双(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂1,1-二氧化物：将（(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-8-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-7-醇 1,1-二氧化物（4.1kg 10.22mol）的丙酮（19.7kg）溶液用碳酸钾（3.84kg）进行处理，并调整至25℃-30℃。加入甲基碘（5.84kg，41.14mol），反应保持在25℃-30℃，直至完成。反应物通过蒸馏浓缩至~8L的总体积，然后加入二氯乙烷（31kg）。反应物用水（20.8kg）萃取两次，并进行再一次二氯乙烷（26kg）添加。产物溶液浓缩至~23L，以形成如前述方法3所述的适合再脱保护为中间体1a和1b的溶液。
中间体 2：三氟甲磺酸(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基酯
方法1：在30分钟内向氮气下冷却至0℃的(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-醇 1,1-二氧化物（105g，26mmol）和吡啶（27.3 mL，34mmol）的DCM溶液中缓慢地加入三氟甲磺酸酐（57.1 mL，34mmol），同时保持内部温度在5-10℃之间。加料完成后，将该反应物搅拌，直到TLC和LCMS表明已完全转化为产物。将H2O（250 mL）缓慢地加入到混合物中，并将该混合物搅拌10分钟，之后分层。水相用DCM额外萃取一次，合并的有机相用10％HCl，盐水洗涤，然后干燥（Na2SO4），过滤，并浓缩至一半体积。加入己烷直至溶液变得混浊，结晶开始发生。然后将固体从溶液中过滤，得到标题化合物（134.6g，95％），为白色固体，其可不经进一步纯化而使用： 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 0.76-0.96 (m, 6 H), 1.03-1.40 (m, 4 H), 1.40-1.67 (m, 4 H), 1.77-1.97 (m, 1 H), 2.10-2.28 (m, 1 H), 3.07 (d, J=14.8 Hz, 1 H), 3.48 (d, J=14.9 Hz, 1 H), 3.62 (s, 3 H), 6.09 (s, 1 H), 6.34 (s, 1 H), 7.32-7.50 (m, 5 H), 7.96 (s, 1 H); ES-LCMS m/z 536 (M+H)+。
方法2：将吡啶（441 mL，5.45mol）加入到搅拌着的(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-醇 1,1-二氧化物（1099g，2.72mol）在叔丁基甲基醚（16 L）的混悬液中，冷却至15℃。将纯的（neat）三氟甲磺酸酐（1076g，3.81mol）在45分钟内逐滴加入，同时保持反应温度在14-16℃。加料之后，将反应混合物在室温下搅拌2小时。缓慢加入水（6L），并将混合物快速搅拌15分钟。分离各层，有机相用1：1水/盐水（5L）洗涤，用MgSO4干燥并过滤。将滤液浓缩以除去大多数的叔丁基甲基醚（约13-14 L被除去）。将所得的浆液过滤，并用庚烷洗涤滤饼。滤饼进一步在40℃下真空干燥过夜，得到三氟甲磺酸(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)- 1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基酯，为灰白色固体（1342g）。从母液中得到第二批产品（63g）。合并后的产量为1405g。
方法3：在25℃向反应器中加入2.75kg（6.8mol）的(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-醇-1,1-二氧化物，19.9kg的1,4-二噁烷，1.08kg（13.6mol）的吡啶，并在该温度下搅拌直至溶解。然后将溶液冷却至约10℃，随后三氟甲磺酸酐（2.8kg，9.9mol）以使内部温度为约5-15℃的速率加入。将反应混合物在此温度下搅拌约45分钟。然后，将夹套温度升高至约25℃，将反应物在该温度下搅拌，直到完成。然后将甲苯（16.3kg）和10％盐水（8.3 L）加入到反应器中，并且混合物在另外静置5分钟前搅拌至少5分钟。除去水层。加入水（8.3kg），并且混合物在静置至少10分钟前搅拌约5分钟。除去水层，重复用水洗涤。除去水层后，有机层通过真空蒸馏减少到约11 L。加入庚烷（18.8kg），并再次通过真空蒸馏将总体积减少至约14 L。另外加入4kg的庚烷，将混合物缓慢冷却至约5℃过夜。通过过滤收集产物，并用庚烷（3.6 Kg和4.0kg）洗涤两次。滤饼在N2层下拉干（pull dry），然后在真空中（~60℃）干燥得到3.47kg（95％）的三氟甲磺酸(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)- 1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基酯。
中间体 3：(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-羧酸甲酯 1,1-二氧化物
向含有三氟甲磺酸(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)- 1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基酯（0.103g，0.192mmol）和Pd2(dba)3（0.011g，0.012mmol），dppf（0.013g，0.024mmol），和三乙胺（0.040 mL，0.288mmol）的DMF（1 mL）溶液的反应管中鼓泡一氧化碳气体15分钟。加入无水甲醇（0.039 mL，0.962mmol），然后在一氧化碳环境下密封反应容器并加热至70℃过夜。将反应物冷却至室温，并用Et2O稀释内容物，然后倾入H2O中。分层，水相用Et2O额外萃取一次，合并的有机相用盐水洗涤，干燥（Na2SO4），过滤，并浓缩。粗物质在硅胶上用己烷/ EtOAc色谱分离，得到标题化合物（0.080g，91％），为白色固体： 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 0.75-0.96 (m, 6 H), 0.99-1.36 (m, 4 H), 1.36-1.59 (m, 5 H), 1.86 (ddd, J=14.4, 12.0, 4.4 Hz, 1 H), 2.07-2.23 (m, 1 H), 3.02 (d, J=14.8 Hz, 1 H), 3.45 (d, J=14.9 Hz, 1 H), 3.57 (s, 3 H), 3.86 (s, 3 H), 6.08 (s, 1 H), 6.27 (s, 1 H), 7.29-7.48 (m, 5 H), 8.52 (s, 1 H); ES-LCMS m/z 446 (M+H)+。
中间体 4：(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-羧酸 1,1-二氧化物
将H2O（0.333 mL），MeOH（0.333 mL），和THF（1 mL）与LiOH（0.013g，0.310 mmol）一起加入到(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-羧酸甲酯 1,1-二氧化物（0.046g，0.103mmol）中，混合物在室温下搅拌2小时以水解为苯甲酸。将rxn混合物浓缩至一半体积，然后加入6N盐酸。混合物用EtOAc（2X）萃取，用盐水洗涤，干燥（Na2SO4），过滤，并在真空下浓缩，得到标题化合物（0.039克，86％）： 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 0.67-0.99 (m, 6 H), 0.99-1.64 (m, 7 H), 1.87 (t, J=11.8 Hz, 1 H), 2.08-2.29 (m, 1 H), 3.09 (d, J=14.8 Hz, 1 H), 3.46 (d, J=14.9 Hz, 1 H), 3.70 (br. s., 3 H), 6.11 (br. s., 1 H), 6.33 (br. s., 1 H), 7.30-7.60 (m, 5 H), 8.73 (br. s., 1 H); ES-LCMS m/z 432 (M+H)+。
中间体 5：[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲醇
在0℃氮气下向(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-羧酸甲酯 1,1-二氧化物（0.275g，0.617mmol）的DCM（2 mL）溶液中加入1M的DiBAL-H甲苯溶液（1.3mL，1.30mmol）。将反应物温热至室温并搅拌1.5 h，然后加入MeOH再加入H2O。将反应混合物浓缩，然后再溶解在EtOAc中。分层，水层用EtOAc额外萃取一次，然后合并的有机相用盐水洗涤，干燥（Na2SO4），过滤，并浓缩。在硅胶上使用己烷/ EtOAc的色谱法，得到标题化合物（0.238g，91％）： 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 0.76-0.93 (m, 6 H), 1.04-1.36 (m, 6 H), 1.36-1.59 (m, 6 H), 1.76-1.93 (m, 1 H), 2.05-2.24 (m, 2 H), 3.02 (d, J=14.8 Hz, 1 H),3.42 (d, J=14.8 Hz, 1 H), 3.54 (s, 3 H), 4.65 (qd, J=13.2, 6.3 Hz, 2 H), 6.07 (br. s., 1 H), 6.17 (s, 1 H), 7.29-7.50 (m, 5 H), 8.03 (s, 2 H) ; ES-LCMS m/z 418 (M+H)+。
中间体 6：(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲腈-1,1-二氧化物
方法1：将三氟甲磺酸(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基酯（0.535g，1.0mmol），Pd2(dba)3（0.055g，0.06mmol），DPPF（0.066g，0.12mmol），锌粉（0.004g，0.06mmol）和Zn(CN)2（0.117g，0.99mmol）的DMF（10mL）溶液在室温氮气流中搅拌15分钟。将反应加热至80℃，并搅拌8小时。将混合物冷却至室温后，在真空下除去DMF，加入Et2O，有机物用2N的NH4OH（水溶液）洗涤，随后用盐水洗涤。将有机物干燥（Na2SO4），过滤，并浓缩。将残余物用己烷/ EtOAc研磨，通过过滤收集白色固体，得到标题化合物（0.386克，92％）： 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 0.73-0.97 (m, 6 H), 0.98-1.62 (m, 8 H), 1.77-1.92 (m, 1 H), 2.08-2.24 (m, 1 H), 3.01 (d, J=14.9 Hz, 1 H), 3.45 (d, J=14.9 Hz, 1H), 3.62 (s, 3 H), 6.08 (br. s., 1 H), 6.26 (s, 1 H), 7.32-7.49 (m, 5 H), 8.28 (s, 1 H); ES-LCMS m/z 413 (M+H)+。
方法2：向三氟甲磺酸(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基酯（1.346kg，2.51mol）的DMF（2.5 L）溶液中加入Zn(CN)2（440g，3.75mol），通过向混合物中通N2将搅拌的混合物脱气60分钟。加入水（25 mL），并继续脱气30分钟。加入DPPF（14.5g，26.16mmol）和Pd2(dba)3（10.5g，11.47mmol），将反应混合物加热到80-85℃持续脱气。在此温度下反应2小时后，判断反应完成。将反应混合物冷却至60℃后加入甲苯（500 mL），并将该混合物搅拌过夜，冷却至室温。加入甲苯（8L），混合物用水（4×2L）洗涤。将有机相用MgSO4干燥并过滤，滤液与PL-BnSH树脂（460g，以除去重金属杂质）搅拌3天。通过过滤除去树脂，浓缩滤液直到产物的结晶随后出现。加入庚烷（12L），并通过过滤收集所得固体，用庚烷洗涤。将该白色固体在真空下进一步干燥，得到(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲腈 1,1-二氧化物（1.010kg）。
方法3：三氟甲磺酸(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基酯（2160g，4.05摩尔）和氰化锌（266g，2.23摩尔）被放置在一个反应​​器中，然后加入水（1084mL）和N-甲基吡咯烷酮（10830mL）。内容物被置于氮气中然后抽真空3次。将反应加热至100℃，并用乙酸钯（4.8g，0.02mol）和1,1'-双（二苯基膦基）二茂铁（15.7g，0.03摩尔）在NMP（50mL）中的浆料处理。将反应​​立即用在NMP（50mL）中的聚甲基氢硅氧烷（PMHS，22克）处理，并保持在100℃下约一小时，此时HPLC分析表明反应完全。将反应​​冷却至约35℃，用水（8685g），氢氧化铵（1958g）和乙醇（17130g）制成的溶液处理约10分钟。将所得浆料加热至约80℃以溶解。在​​约60分钟内将溶液冷却至20℃，并保持在20℃下约90分钟。滤出固体，用50％乙醇/水（4330mL）制成的溶液洗涤，之后是庚烷（4300mL）洗涤，并拉干。固体在50℃的真空烘箱中干燥得到(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲腈 1,1-二氧化物（1482g，89％）。
中间体 7：(3R,5R)-8-(溴甲基)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-1,1-二氧化物
将咪唑（0.153g，0.563mmol）溶解于DCM（2mL）中，并将该溶液冷却至0℃。加入三苯基膦（0.295g，1.126mmol），然后是溴（0.058mL，1.126mmol）。[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲醇（0.235g，0.563mmol）的DCM（1mL）溶液在0℃下缓慢加入。反应在0℃下搅拌2小时，然后加入Na2SO3（水溶液），并将得到的混合物分离。将有机层干燥（Na2SO4），通过硅胶垫过滤，浓缩得到浓的油状物，静置后固化得到标题化合物（0.265g，84％）： 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 0.73-0.95 (m, 6 H), 1.02-1.36 (m, 5 H), 1.38-1.65 (m, 5 H), 1.76-1.92 (m, 1 H), 2.08-2.23 (m, 1 H), 3.02 (d, J=14.8 Hz, 1 H), 3.43 (d, J=14.8 Hz, 1 H), 3.57 (s, 3 H), 4.38-4.56 (m, 2 H), 6.06 (s, 1 H), 6.16 (s, 1 H), 7.28-7.45 (m, 5 H), 8.05 (s, 1 H); LC-MS m/z 480 (M+H)+, LC-MS 482 (M+H+2) +。
中间体 8：(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-4-羟基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲腈 1,1-二氧化物
使用m-CPBA（2.51g，11.20mmol）在22℃搅拌下处理溶解在DCM（100mL）中的(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲腈 1,1-二氧化物（6.00g，14.54mmol）3小时。加入另外的m-CPBA（0.77g，3.44mmol），并将该混合物再搅拌2小时。将反应混合物用10％的Na2SO3处理，然后剧烈搅拌1小时。分离有机层，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩至干。残余物在330g硅胶上通过10％至60％EtOAc /己烷洗脱纯化，得到回收的腈原料（1.33g，3.23mmol，产率22.2％）和所需的(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-4-羟基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲腈 1,1-二氧化物（不纯）（1.99g，31.9％产率）： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.78 (t, J=7.1 Hz, 3 H), 0.85 (t, J=7.2 Hz, 3 H), 1.05-1.37 (m, 4 H), 1.38-1.51 (m, 1 H), 1.57-1.70 (m, 1 H), 1.78-1.89 (m, 1 H), 2.01-2.12 (m, 1 H), 3.40-3.53 (m, 2 H), 3.56 (s, 3 H), 6.28 (s, 1 H), 6.39 (s, 1 H), 7.34-7.58 (m, 5 H), 8.16 (s, 1 H), 8.26 (s, 1 H)。
中间体 9：(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛 1,1-二氧化物
方法1：在0℃搅拌下将溶解于DCM（150mL）的(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲腈 1,1-二氧化物（7.42g，17.99mmol）用1M DiBAL-H的甲苯溶液（36.0mL，36.0mmol）处理1小时，此时间后LCMS表明转化完全。将反应混合物倒入冰/ 1N盐酸的混合物中，并剧烈搅拌1小时。分离有机相，用MgSO4干燥，过滤，浓缩得到黄色固体。将粗产物溶解在80 mL热EtOAc中，加入250 mL己烷，直到混浊。混合物缓慢冷却至室温，然后在冰浴中冷却。滤出所得的沉淀物，用冷的20％EtOAc /己烷洗涤，在空气中干燥，得到(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛 1,1-二氧化物（4.00g，产率53.5％），为白色晶状固体。将母液浓缩至干，残余物在120g硅胶上通过20％至40％EtOAc /己烷洗脱纯化，得到额外的产物，为白色固体： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.74 (t, J=7.0 Hz, 3 H) 0.81 (t, J=7.4 Hz, 3 H) 0.96-1.29 (m, 4 H) 1.33-1.54 (m, 2 H) 1.68-1.81 (m, 1 H) 2.01-2.13 (m, 1 H) 2.80 (d, J=9.8 Hz, 1 H) 3.13 (d, J=15.0 Hz, 1 H) 3.58 (s, 3 H) 3.63 (d, J=15.0 Hz, 1 H) 5.98 (d, J=9.8 Hz, 1 H) 6.27 (s, 1 H) 7.32-7.40 (m, 1 H) 7.40-7.49 (m, 4 H) 8.23 (s, 1 H) 10.27 (s, 1 H); LC-MS (ES+) m/z 416.3 [M+H]。
方法2：1.5 M的Dibal-H甲苯溶液（1.467 L，2.20mol）在50分钟内加入到搅拌着的(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲腈 1,1-二氧化物（673.3g，1.63mol）的CH2Cl2（3.3L）溶液中，同时保持反应温度低于0℃。将反应混合物搅拌30分钟，冷却至-10℃。在1.25小时内非常缓慢加入1 M HCl（8L）将反应混合物淬灭，同时保持反应温度低于+15℃（小心：最初500 mLHCl的加入非常放热！）。加入甲苯（7L），并将该混合物搅拌3小时。除去水相，将有机层用1M HCl（5L）洗涤。将合并的水层用CH2Cl2（2.5L）萃取，CH2Cl2层和CH2Cl2/甲苯层合并，并用10％ Na2CO3（5L）洗涤，MgSO4干燥，过滤并部分浓缩，直到形成稠浆。用庚烷（2-3倍体积）稀释该淤浆，并搅拌老化15分钟。通过过滤收集固体并用庚烷洗涤。将滤饼在空气中干燥3小时，然后在真空烘箱中50℃，干燥过夜，得到为白色固体的(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛 1,1-二氧化物（533g）。
方法3：将(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛 1,1-二氧化物（2402g，5.82mol）和甲苯（20714g）添加到反应器中，并在40℃下搅拌以形成溶液。然后将溶液冷却至约-35℃，用DiBAL-H（1.5 M在甲苯中，4472g，7.85摩尔）溶液处理，同时保持内部温度低于-30℃。反应在约-30℃下搅拌一小时直到完成，然后通过缓慢加入1 N HCl溶液（约40kg）直至pH1.0来将反应淬灭。将反应温热至约30℃下，搅拌1小时。停止搅拌，分离下层水层，将有机物用1N HCl溶液（每次7200mL）洗涤两次，同时保持温度约40℃。合并水层，并用甲苯（4126g）反洗。将合并的有机层用饱和氯化钠水溶液（9000mL）洗涤，然后减压下蒸发至约12升。进一步在大气压力下蒸发溶剂至最终体积约7升并用庚烷（16420g）处理。将内容物冷却至约15℃，并搅拌大约两小时。手动破碎固体，用庚烷（2×3260g）从反应器中漂洗，并通过过滤收集。收集到的固体物质再用庚烷（3180g）洗涤，然后在50℃下干燥，得到(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛 1,1-二氧化物（2128g，88％）。
中间体 10：3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-4-羟基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸二甲酯
(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-4-羟基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛 1,1-二氧化物（298mg，0.691mmol）和3-氨基戊二酸二甲酯（181mg，1.036mmol）（如Journal of the American Chemical Society 2005, 127, 247制备）合并于DCM（4 mL），并搅拌30分钟。反应混合物用NaHB(OAC)3（293mg，1.381mmol）处理并在22℃下搅拌16小时，此时间后LCMS显示反应完全。混合物用DCM稀释，用H2O洗涤两次，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩至干。残余物在40g硅胶上通过20％至100％EtOAc /己烷洗脱纯化，得到3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-4-羟基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸二甲酯（304mg，0.515mmol，产率74.5％），为琥珀色油状物：LC-MS (ES+) m/z 591.3 [M+H]。
中间体 11：{(E)-2-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]乙烯基}膦酸二乙酯
用NaH（83mg，2.075mmol，60％的在油中的分散液）在22℃搅拌下处理溶解于THF（7 mL）的甲烷二基双（膦酸）四乙基酯（645mg，2.24mmol）30分钟。加入(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛 1,1-二氧化物（300mg，0.722mmol），并将该混合物在环境温度下搅拌1小时，此时间后LCMS表明转化完全。混合物用H2O淬灭，在EtOAc和盐水之间分配，分离各相。将有机相用MgSO4干燥，过滤，并浓缩至油状物。残余物在40g硅胶上通过40％至100％EtOAc /己烷洗脱纯化，得到为透明油状物的{(E)-2-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]乙烯基}膦酸二乙酯（342mg，收率​​86％）：LC-MS (ES+) m/z 550.4 [M+H]。
中间体 12：N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-L-胱氨酸二甲酯
(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛 1,1-二氧化物（231mg，0.556mmol）和L-胱氨酸二甲酯（95mg，0.278mmol）合并于DCM（8mL）中，在室温下用TEA（0.077mL，0.556mmol）处理1小时。加入NaHB(OAC)3（295mg，1.390mmol），反应混合物搅拌16小时。将混合物在DCM和饱和NaHCO3之间分配，分离各相。用DCM萃取水相，合并有机相，用MgSO4干燥，过滤并浓缩为透明油状物。将粗材料在40g硅胶上通过20％至100％EtOAc /己烷洗脱纯化，得到N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-L-胱氨酸二甲酯（167mg，产率45.0％）：1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.67-0.88 (m, 12 H) 0.96-1.29 (m, 8 H) 1.32-1.53 (m, 4 H) 1.66-1.80 (m, 2 H) 2.00-2.13 (m, 2 H) 2.54 (d, J=10.0 Hz, 2 H) 2.57-2.70 (m, 2 H) 2.93-3.13 (m, 6 H) 3.42 (s, 7 H) 3.46-3.78 (m, 13 H) 5.94 (d, J=9.6 Hz, 2 H) 6.07 (s, 2 H) 7.26-7.36 (m, 2 H) 7.37-7.46 (m, 8 H) 7.87-8.01 (m, 2 H); LC-MS (ES+) m/z 668.22 [M+H]。
中间体 13：N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-L-蛋氨酸 1,1-二甲基乙酯
L-蛋氨酸 1,1-二甲基乙酯（218mg，0.902mmol）在DCM（3 mL）中的浆料用TEA（126μΙ，0.902mmol）室温处理15分钟，此时间后加入(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛 1,1-二氧化物（250mg，0.602mmol），并将混合物搅拌1小时。加入NaHB(OAC)3（255mg，1.203mmol），在室温下将反应混合物搅拌过夜，此时间后LCMS表明转化为所需产物。混合物在DCM和盐水之间分配，并分离各相。用DCM萃取水相，合并的有机相用MgSO4干燥，过滤，并浓缩到澄清的油状物。残余物在40g硅胶上通过20％至60％EtOAc /己烷洗脱纯化，得到为白色固体的N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-L-蛋氨酸 1,1-二甲基乙酯（270mg，产率74％）： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.75 (t, J=7.0 Hz, 3 H) 0.80 (t, J=7.4 Hz, 3 H) 0.98-1.28 (m, 4 H) 1.36 (s, 9 H) 1.38-1.53 (m, 2 H) 1.65-1.85 (m, 3 H) 2.03 (s, 3 H) 2.03-2.13 (m, 1 H) 2.33-2.43 (m, 1 H) 2.53 (br. s., 2 H) 2.55 (d, J=4.3 Hz, 1 H) 3.03 (d, J=14.8 Hz, 1 H) 3.09-3.17 (m, 1 H) 3.43 (s, 3 H) 3.52 (d, J=14.8 Hz, 1 H) 3.62 (br. s., 2 H) 5.93 (d, J=9.6 Hz, 1 H) 6.07 (s, 1 H) 7.25-7.36 (m, 1 H) 7.36-7.47 (m, 4 H) 7.94 (s, 1 H); LC-MS (ES+) m/z 605.3 [M+H]。
中间体 14：(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-4-羟基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛 1,1-二氧化物
溶解于DCM（25mL）中的(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-4-羟基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲腈 1,1-二氧化物（1.99g，4.64mmol）用1 M的DIBAL-H/甲苯（5.34mL，5.34mmol）滴加处理，在0℃下搅拌1小时。加入第二份的1 M DIBAL-H（5.34mL，5.34mmol），并将该混合物再在0℃搅拌2小时，此时间后LCMS表明转化为产品。向混合物中加入1 N HCl（10mL），将混合物剧烈搅拌16小时。分离有机相，水相用DCM萃取三次。合并有机层，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩至干。残余物在40g硅胶上通过10％至50％的EtOAc /己烷洗脱纯化，得到(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-4-羟基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛 1,1-二氧化物（1.42g，产率70.9％），为白色泡沫体： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.78 (t, J=7.1 Hz, 3 H), 0.85 (t, J=7.3 Hz, 3 H), 1.02-1.38 (m, 4 H), 1.38-1.52 (m, 1 H), 1.56-1.73 (m, 1 H), 1.78-1.91 (m, 1 H), 2.01-2.15 (m, 1 H), 3.39-3.51 (m, 2 H), 3.55 (s, 3 H), 6.31 (s, 1 H), 6.38 (s, 1 H), 7.32-7.75 (m, 5 H), 8.20 (s, 1 H), 8.22 (s, 1 H), 10.26 (s, 1 H). LC-MS (ES+) m/z 432.2 [M+H]。
中间体 15：{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}胺
向(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲腈 1,1-二氧化物（468mg，1.134mmol）和10％钯-碳（60.4mg，0.567mmol）的乙醇（20mL）溶液的混合物中加入盐酸（0.279mL，3.40mmol），在40 psi下氢化过夜，然后过滤并浓缩。经HPLC（用0.05％TFA-H2O和0.05％TFA-MeCN的MeCN / H2O洗脱）纯化残余物，得到为白色固体的标题化合物（621mg，79％，TFA盐）： 1H NMR (CDCl3) δ ppm 8.07 - 8.46 (br.s, 2H), 7.98 (s, 1H), 7.31 - 7.57 (m, 5H), 6.27 (s, 1H), 6.17 (s, 1H), 4.12 - 4.27 (m, 1H), 3.98 - 4.12 (m, 1H), 3.55 (s, 3H), 3.38 - 3.48 (m, 1H), 3.29 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 2.14 - 2.38 (m, 1H), 1.80 - 1.99 (m, 1H), 1.44 - 1.75 (m, 2H), 1.14 - 1.38 (m, 3H), 0.97 - 1.15 (m, 1H), 0.90 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.82 (t, J = 6.8 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 417 (M+H)+。
中间体 16：N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-2-氯乙酰胺
向{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}胺（50mg，0.120mmol）的冰冷的DCM（6mL）溶液中加入吡啶（0.097mL，1.20mmol）和氯乙酰氯（0.048mL，0.60mmol）。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后在减压下浓缩，得到浅黄色油状物。粗的标题化合物（55mg，92％）不经进一步纯化而使用： 1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.27 - 7.45 (m, 5H), 6.91 - 7.13 (m, 1H), 6.17 (s, 1H), 6.05 (s, 1H), 4.44 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 4.05 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 3.53 (s, 3H), 3.37 (s, 1H), 3.02 (s, 2H), 2.09 - 2.24 (m, 1H), 1.69 - 1.90 (m, 1H), 0.99 - 1.60 (m, 6H), 0.86 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.80 (t, J = 7.0 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 494 (M+H)+。
中间体 17：(2E)-3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]-2-丙烯酸乙酯
在密封管中，三氟甲磺酸(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基酯（3.5g，6.53mmol）的DMF（30mL）溶液用三乙胺（4.55mL，32.7mmol），其次是丙烯酸乙酯（3.56mL，32.7mmol）和双（三苯基膦）氯化钯（Ⅱ）（0.459g，0.653mmol）处理。在120℃下将反应混合物搅拌过夜，冷却至室温，并在H2O和EtOAc之间分配。用饱和盐水洗涤有机层，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩。在硅胶上纯化（EtOAc：己烷= 1：6至2:1），得到为白色固体的标题化合物（3.06g，94％）： 1H NMR (CDCl3): δ ppm 8.21 (s, 1H), 7.85 (d, J = 16.2 Hz, 1H), 7.30 - 7.48 (m, 5H), 6.56 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.19 (s, 1H), 6.06 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 4.18 - 4.30 (m, 2H), 3.55 (s, 3H), 3.44 (d, J = 14.9 Hz, 1H), 3.02 (d, J = 14.9 Hz, 1H), 2.08 - 2.26 (m, 1H), 1.76 - 1.93 (m, 1H), 1.38 - 1.54 (m, 3H), 1.28 - 1.35 (m, 3H), 1.03 - 1.21 (m, 2H), 0.88 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.81 (t, J = 7.0 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 486 (M+H)+。
中间体 18​​：3-氨基戊二酸二乙酯
向β-谷氨酸（500mg，3.40mmol）的EtOH（10 mL）溶液中逐滴加入亚硫酰氯（0.992mL，13.59mmol）。在室温下搅拌反应混合物过夜，并减压浓缩。残余物在DCM和饱和碳酸钾溶液之间分配。将有机层用饱和盐水洗涤，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩，得到为无色油状物的标题化合物（702mg，97％）：11H NMR (CDCl3) δ ppm 4.04 - 4.27 (m, 4H), 3.46 - 3.74 (m, 1H), 2.24 - 2.60 (m, 4H), 1.09 - 1.29 (m, 6H)。
中间体 19：(3R,5R)-8-(3-溴丙基)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂 1,1-二氧化物
向3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]-1-丙醇（84.2mg，0.189mmol）的THF（5 mL）溶液中加入三苯基膦（99mg，0.378mmol）和四溴化碳（125mg，0.378mmol）。将反应混合物在室温下过夜搅拌，并在H2O和DCM之间分配。用盐水洗涤有机层，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩。用硅胶进行纯化（EtOAc：己烷= 10:90~50:50），得到为透明油状物的标题化合物（78mg，80％）： ES-LCMS m/z 508 (M+H)+。
中间体 20：甲磺酸3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙基酯
向3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]-1-丙醇（250mg，0.561mmol）的冰冷的DCM（10mL）溶液中加入三乙胺（0.235mL，1.683mmol）和甲磺酰氯（0.048mL，0.617mmol）。将反应混合物在室温下过夜搅拌，并在H2O和DCM之间分配。用饱和盐水洗涤有机层，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩得到标题产物（280mg，91％），为浅黄色固体：1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.82 (s, 1H), 7.27 - 7.52 (m, 5H), 6.11 (s, 1H), 6.01 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.04 - 4.26 (m, 2H), 3.47 (s, 3H), 3.31 - 3.43 (m, 1H), 2.85 - 3.07 (m, 4H), 2.46 - 2.78 (m, 4H), 1.73 - 2.27 (m, 4H), 1.35 - 1.61 (m, 4H), 0.97 - 1.34 (m, 8H), 0.86 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.80 (t, J = 6.8 Hz, 3H)。
中间体 21：4-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丁腈
向甲磺酸3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙基酯（90mg，0.172mmol）的DMSO（5mL）溶液中加入氰化钠（16.84mg，0.344mmol）。将反应混合物在60℃下搅拌过周末，并在H2O和EtOAc之间分配。将有机层用饱和盐水洗涤，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩。用硅胶进行纯化（EtOAc：己烷= 10:90至1：1）得到标题化合物（76mg，95％），为白色固体： 1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.81 (s, 1H), 7.26 - 7.48 (m, 5H), 6.12 (s, 1H), 6.02 (s, 1H), 3.40 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 3.01 (d, J = 14.6 Hz, 1H), 2.64 - 2.80 (m, 2H), 2.29 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.08 - 2.21 (m, 1H), 1.75 - 1.98 (m, 3H), 1.37 - 1.51 (m, 2H), 0.99 - 1.35 (m, 4H), 0.86 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.80 (t, J = 7.0 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 455 (M+H)+。
中间体 22：(3R,5R)-8-(溴甲基)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,-二氢-1,4-苯并硫氮杂-4(5H)-醇 1,1-二氧化物
在0℃搅拌下将溶解于DCM（20 mL）的(3R,5R)-8-(溴甲基)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基--2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂 1,1-二氧化物（627mg，1.305mmol）用m-CPBA（292mg，1.305mmol）处理1小时，此时间后LCMS表明已完全转化为产物。在剧烈搅拌下将反应混合物用10％的Na2SO3处理15分钟，用DCM稀释，将有机相分离，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩至干。残余物在40g硅胶上通过DCM洗脱纯化，得到(3R,5R)-8-(溴甲基)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,-二氢-1,4-苯并硫氮杂-4(5H)-醇 1,1-二氧化物（621mg，收率​​96％），为白色泡沫体： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.79 (t, J=7.1 Hz, 3 H), 0.85 (t, J=7.3 Hz, 3 H), 1.04-1.37 (m, 4 H), 1.37-1.49 (m, 1 H), 1.58-1.71 (m, 1 H), 1.77-1.89 (m, 1 H), 2.01-2.14 (m, 1 H), 3.36-3.44 (m, 2 H), 3.45-3.55 (m, 3 H), 4.69 (s, 2 H), 6.15 (s, 1 H), 6.35 (s, 1 H), 7.30-7.72 (m, 5 H), 7.98 (s, 1 H), 8.10 (s, 1 H); LC-MS (ES+) m/z 496.1, 498.1 [M+H]。
中间体 23：{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-4-羟基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}膦酸二乙酯
溶解于甲苯（10 mL）的(3R,5R)-8-(溴甲基)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,-二氢-1,4-苯并硫氮杂-4(5H)-醇 1,1-二氧化物（171mg，0.344mmol）用亚磷酸三乙酯（1.189 mL，6.80mmol）处理，然后加热回流16小时。用H2O洗涤反应混合物，用MgSO4干燥，过滤并浓缩至干。通过RP-HPLC纯化残余物（30×150毫米，C18 5μm H2O Sunfire柱；MeCN+0.05％TFA 和 H2O+0.05％TFA用作溶剂系统；15％至100％），得到{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-4-羟基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}膦酸二乙酯（48.5mg，25.4％产率），为透明油状物： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6)δ ppm 0.79 (t, J=6.6 Hz, 3 H), 0.82-0.93 (m, 3 H), 1.04-1.71 (m, 12 H), 1.91-2.02 (m, 1 H), 2.02-2.13 (m, 1 H), 3.13-3.28 (m, 2 H), 3.29-3.40 (m, 2 H), 3.41 (s, 3 H), 3.95 (m, J=7.2, 7.2, 7.2, 7.2, 2.5 Hz, 4 H), 6.12 (s, 1 H), 6.28-6.38 (m, 1 H), 7.31-7.39 (m, 1 H), 7.42 (t, J=7.4 Hz, 2 H), 7.46-7.60 (m, 2 H), 7.82 (d, J=1.8 Hz, 1 H), 7.99-8.08 (m, 1 H); LC-MS (ES+) m/z 554.31 [M+H]。
中间体 24：[({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}亚氨基)二甲烷二基]双(膦酸)四乙酯
{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}胺（155mg，0.37mmol）和对甲苯磺酸（催化剂）在甲苯（20mL）中混合，并浓缩至干，共沸除去任何残余的H2O。加入多聚甲醛（11.2mg，0.37mmol）和甲苯（5 mL），将混合物在剧烈搅拌下在75℃加热30分钟，此时间后加入亚磷酸二乙酯（0.048mL，0.37mmol）中加入。30分钟后，将THF（20mL）加入到混合物中，所得均相反应混合物在75℃下搅拌过夜。将混合物浓缩至干，并通过RP-HPLC（酸性条件下30 X 150 Sunfire柱；MeCN+0.05％TFA 和 H2O+0.05％TFA用作溶剂系统；10分钟内30％至100％，100％至100％12分钟）纯化，得到[({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}亚氨基)二甲烷二基]双(膦酸)四乙酯（49.7mg，18.6％产率），为黄色油状物； LC-MS (ES+) m/z 717.4 [M+H]。
中间体 25：[({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)甲基]膦酸二乙酯
{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}胺（45.8mg，0.110mmol）与多聚甲醛（3.47mg，0.110mmol）和亚磷酸二乙酯（0.014 mL，0.11mmol）在THF（4 mL）中混合，在75℃搅拌16小时，此时间后所有溶剂都消失，LCMS显示<20％的转换。THF被替换，另外加入亚磷酸二乙酯（0.043 mL，0.330mmol），将混合物在75℃另外加热24小时，此时间后LCMS显示~50％的转化。加入另外的亚磷酸二乙酯（0.150mL，1.16mmol），并继续加热24小时，此时间后LCMS表明70％的完成。另外加入多聚甲醛（1.651mg，0.055mmol），并继续加热24小时，此时间后LCMS表明起始原料已完全转化为单和二取代的产物。将混合物浓缩至干，并在24g硅胶上通过0到20％的MeOH/DCM洗脱纯化，得到所需的[({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)甲基]膦酸二乙酯（36.3mg，58.3％产率），为澄清的油状物：LC-MS (ES+) m/z 567.30 [M+H]。
中间体 26：[(3R,5S)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲醇
步骤1：向(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲腈 1,1-二氧化物（2.37g，5.74mmol）的冰冷的DCM溶液（50mL）中加入DDQ（1.956g，8.62mmol）。将反应混合物温热至室温并搅拌72小时。将反应混合物在H2O和DCM之间分配。用饱和盐水洗涤有机层，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩。用硅胶进行纯化（EtOAc /己烷= 1：4到3:1），然后使用硅胶（MeOH：DCM = 0:100至5:95）进一步纯化，得到(3R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3-二氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲腈 1,1-二氧化物（1.42g，59％），为白色固体： 1H NMR (CDCl3) δ ppm 8.27 (s, 1H), 7.60 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 7.44 - 7.54 (m, 1H), 7.35 - 7.45 (m, 2H), 6.77 (s, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.63 - 3.86 (m, 3H), 1.02 - 1.76 (m, 8H), 0.89 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.83 (t, J = 6.8 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 411 (M+H)+。
步骤2：向(3R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3-二氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲腈 1,1-二氧化物（1.32g，3.22mmol）的冰冷DCM（30mL）溶液中逐滴加入DIBAL-H（6.43mL，6.43mmol）的1 M甲苯溶液。将反应混合物在室温下搅拌2小时，用1N盐酸溶液处理，并搅拌1小时，随后分层。用DCM萃取水层，用H2O，饱和盐水洗涤合并的有机层，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩，得到(3R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3-二氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1-二氧化物（1.0g，75％），为白色固体： 1H NMR (CDCl3) δ ppm 10.48 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 7.59 - 7.68 (m, 2H), 7.43 - 7.52 (m, 1H), 7.34 - 7.43 (m, 2H), 6.80 (s, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.63 - 3.83 (m, 2H), 0.99 - 1.36 (m, 5H), 0.88 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 0.82 (t, J = 7.0 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 414 (M+H)+。
步骤3：向(3R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3-二氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1-二氧化物（720mg，1.741mmol）的THF（20mL）溶液中逐滴加入硼烷-THF复合物（3.48 mL，1M的THF溶液，3.48mmol）。将反应混合物搅拌过夜，然后在40℃下额外搅拌24小时。将反应混合物冷却至室温，用MeOH淬灭，搅拌30分钟，并在减压下浓缩。加入MeOH数次，并在减压下蒸发。用硅胶进行纯化（EtOAc：己烷= 20:80至50:50），得到为白色固体的标题化合物（306mg，42％）： 1H NMR (CDCl3) δ ppm 8.05 (s, 1H), 7.30 - 7.53 (m, 5H), 6.18 (s, 1H), 6.08 (br. s., 1H), 4.53 - 4.82 (m, 2H), 3.56 (s, 3H), 3.43 (d, J = 14.9 Hz, 1H), 3.08 (d, J = 14.9 Hz, 1H), 2.38 (dd, J = 14.7, 7.4 Hz, 1H), 2.14 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 1.71 - 1.87 (m, 1H), 1.44 - 1.57 (m, 2H), 1.09 - 1.42 (m, 5H), 0.91 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 0.79 (t, J = 7.2 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 418 (M+H)+。
中间体 27：[(3R,5S)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1-二氧化物
向[(3R,5S)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲醇（460mg，1.102mmol）的DCM（10mL）溶液中加入戴斯-马丁氧化剂（491mg，1.157mmol）。将反应混合物在室温下搅拌2小时，并通过硅胶垫过滤。将滤液在减压下浓缩，得到为白色固体的标题化合物（391mg，收率​​85％）： 1H NMR (CDCl3) δ ppm 10.35 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 7.33 - 7.52 (m, 5H), 6.30 (s, 1H), 6.13 (s, 1H), 3.63 (s, 3H), 3.47 (d, J = 14.9 Hz, 1H), 3.08 (d, J = 14.9 Hz, 1H), 2.40 (dd, J = 14.9, 7.4 Hz, 1H), 1.83 (dd, J = 14.9, 7.4 Hz, 1H), 1.11 - 1.47 (m, 5H), 0.91 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 0.78 (t, J = 7.4 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 416 (M+H)+。
中间体 28：2-氨基-2-丁基己烷基硫酸氢酯（2-amino-2-butylhexanesyl hydrogen sulfate）
步骤1：向0℃搅拌着的正亮氨酸（100g，762mmol）乙醇（715mL）浆料中加入亚硫酰氯（58.4mL，800mmol），历时1小时并维持温度<5℃。将反应缓慢温热至25℃并搅拌过夜。将该溶液在65℃下加热3小时，然后减压浓缩，在50℃高真空下干​​燥15小时后，得到正亮氨酸乙酯盐酸盐（149g，761mmol，产率100％），为白色固体。
步骤2：正亮氨酸乙酯盐酸盐（149g，761mmol）在DCM（1352mL）中的浆料在25℃下用MgSO4（92g，761mmol）处理，接着在1小时内滴加TEA（223mL，1599mmol）。搅拌1小时后，30分钟内通过加料漏斗加入苯甲醛（77mL，761mmol），然后加入另外的MgSO4（92g，761mmol）。浆料在25℃下搅拌60小时，然后过滤，用DCM洗涤。将滤液在真空下浓缩，然后用MTBE研磨。过滤该混合物，并用MTBE洗涤固体。将滤液在真空下浓缩，得到浅黄色油状物（> 95％产率）。
步骤3：NaH（16.53g，413mmol）在DMF（293mL）中的混合物在25℃下搅拌10分钟，然后冷却至0℃，此时N-(苯基亚甲基)正亮氨酸乙酯（81.8g，331mmol）的DMF（58.5mL）溶液通过套管以滴加的方式加入。将反应温热至25℃，并搅拌2小时。将碘丁烷（44.6mL，364mmol）的DMF（29.3mL）溶液通过套管加入，并将rxn混合物在25℃下搅拌20小时。将反应倾入饱和NH4Cl（250mL）和MTBE（250mL），然后搅拌10分钟。分层，并用MTBE（1×）萃取水层。将合并的有机层干燥（MgSO4），过滤，并真空浓缩，以> 95％产率得到黄色油状物。
步骤4：用1N HCl（444mL，444mmol）处理纯的(neat）2-丁基-N-(苯基亚甲基)正亮氨酸乙酯（112.3g，370mmol），并在25℃下搅拌30分钟。用己烷（2×200mL）洗涤该反应，然后将水层冷却至0℃，并用3N和6N NaOH的组合调至pH = 12。用MTBE（4倍）萃取该含水混合物，然后将合并的有机层用盐水洗涤，干燥（MgSO4），过滤，并在真空下浓缩，得到2-丁基正亮氨酸乙酯（74g，产率93％），为黄色油状物。
步骤5：在25℃下，在30分钟内通过加料漏斗用2M的LAH（86mL，172mmol）处理2-丁基正亮氨酸乙酯（37g，172mmol）的THF（275mL）溶液。将反应混合物加热至65℃，搅拌2小时，然后搅拌过夜的同时允许降至室温。将反应冷却至0℃，然后依次用H2O（7.82mL），15％ NaOH（7.82mL），和H2O（23.5mL）处理。将混合物搅拌2小时，然后过滤，用THF洗涤。将滤液在真空下浓缩，得到2-氨基-2-丁基-1-己醇（29.8g，> 95％的产率），为浓的黄色油状物，静置后固化。
步骤6：在EtOAc（454mL）中的2-氨基-2-丁基-1-己醇（62.8g，362mmol）溶液在25℃下用氯磺酸（29.1mL，435mmol）处理。将反应加热至40℃，并搅拌3小时，然后冷却至25℃。浓的混合物在冰箱中放置过夜，然后过滤，用冷的EtOAc洗涤。干燥该固体，以> 50％的产率得到为白色固体的2-氨基-2-丁基己烷基硫酸氢酯： 1H NMR (D2O) δ ppm 3.92 (s, 2H), 1.42 - 1.65 (m, 4H), 1.02 - 1.25 (m, 8H), 0.72 (t, J = 6.7 Hz, 6H)。
中间体 29：S-[5-溴-4-(甲氧基)-2-(苯基羰基)苯基]二乙基硫代氨基甲酸酯
步骤1：在5℃下在1小时内向2-溴-1,4-双(甲氧基)苯（203g，934mmol）和苯甲酰氯（125mL，1074mmol）的DCM（800mL）溶液中加入三氟甲磺酸（83mL，934mmol）。将反应混合物温热至室温，然后缓慢地加热至温和回流并搅拌48小时。将反应混合物冷却，加入甲醇（20mL），并继续搅拌30分钟。将反应混合物倾入冰水中，搅拌1小时。分离各层，有机相用H2O洗涤，用MgSO4干燥，并浓缩为橙色固体。加入MTBE（500mL），并将该混合物搅拌过夜。将所得固体过滤，用1:1 MTBE /己烷漂洗，在空气中干燥，得到[4-溴-2,5-双(甲氧基)苯基](苯基)甲酮（210.6g，70％），为浅灰色固体：1H NMR (DMSO-d6) δ ppm 7.68 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.62 (t, J = 8.0 Hz, 1H), 7.48 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 7.42 (s, 1H), 7.07 (s, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.59 (s, 3H)。
步骤2：将[4-溴-2,5-双(甲氧基)苯基](苯基)甲酮（290g，0.903mol）的DCM（1.5 L）溶液在1小时内逐滴加入到搅拌的1 M BCl3的DCM（1.13 L，1.13mol）溶液中，同时保持反应温度低于5℃。将反应混合物在等于或低于0℃下搅拌30分钟，然后在10℃下30分钟内缓慢加入MeOH（500mL）淬灭。在15℃下30分钟内加入2N HCl（1L）。分离各层，有机相通过旋转蒸发器浓缩至约500mL，然后用己烷稀释。将得到的黄色晶体通过过滤收集，在空气中干燥，得到[4-溴-2-羟基-5-(甲氧基)苯基](苯基)甲酮（258g，93％）： 1H NMR (CDCl3) δ ppm 11.67 (s, 1H), 7.64 - 7.72 (m, 2H), 7.59 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.51 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 7.33 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 3.71 (s, 3H)。
步骤3：将固体叔丁醇钾（116g，1.03mol）分批加入到搅拌的[4-溴-2-羟基-5-(甲氧基)苯基](苯基)甲酮（253.33g，0.825mol）的DMF（800 mL）溶液中，同时保持内部温度低于20℃。保持搅拌冷却15分钟，直到内部温度约为0℃。除去冷却浴，并继续搅拌30分钟，升温至6℃的内部温度。然后，N,N-二乙基硫代氨基甲酰氯（150g，0.99mol）的DMF（300mL）溶液在5分钟内以缓慢液流加入。然后将得到的黑色混合物加热至60℃并保持3小时。用MTBE（1.5升）和H2O（1.5升）稀释该混合物，然后快速搅拌。分离各层，并用MTBE（1.5升）萃取水相。将合并的有机层用0.2N NaOH（2×1.5升）洗涤，并用盐水（1升）洗涤一次。暗红色的有机相用MgSO4干燥，过滤并浓缩至1 L的稠浆，用庚烷抛光（chasing）。通过过滤收集固体，用庚烷洗涤，空气干燥，得到O-[5-溴-4-(甲氧基)-2-(苯基羰基)苯基]二乙基硫代氨基甲酸酯（301.3g，86％），为浅橙色固体：1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.81 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.52 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.36 - 7.45 (m, 3H), 7.00 (s, 1H), 3.86 (s, 3H), 3.63 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.22 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.06 (q, 6H)。
步骤4：将搅拌着的O-[5-溴-4-(甲氧基)-2-(苯基羰基)苯基]二乙基硫代氨基甲酸酯（301g，0.71mol）在二苯醚（1L）中的混合物在1小时内逐渐加热到215℃的内部温度，并在此温度下保持3.5小时。深色溶液冷却至100℃，用Darco G-60（20g）处理。将混合物在搅拌下进一步冷却至70℃，并通过硅藻土过滤，用庚烷洗涤。用庚烷（4升）稀释滤液，冷却至5℃，并在30分钟内老化到0℃。通过倾析除去上清液，剩余的固体用己烷研磨。剩余的固体溶解在DCM中，在真空中浓缩为固体，将其用己烷研磨，并通过过滤收集。将该物质在高真空下干燥，得到S-[5-溴-4-(甲氧基)-2-(苯基羰基)苯基]二乙基硫代氨基甲酸酯（224g，74％），为暗灰色固体： 1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.72 - 7.82 (m, 3H), 7.52 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.39 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 6.90 (s, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.15-3.29 (br. s., 2H), 3.02-3.15 (br. s., 2H), 0.68 - 1.09 (m, 6H)。
中间体 30：[2-[(2-氨基-2-丁基己烷基)硫代]-4-溴-5-(甲氧基)苯基](苯基)甲酮
S-[5-溴-4-(甲氧基)-2-(苯基羰基)苯基]二乙基硫代氨基甲酸酯（中间体29）（15g，35.5mmol）的EtOH（75 mL）的混悬液用6M KOH（23.68 mL，142mmol）处理，然后加热回流3小时。用额外的乙醇（200 mL）稀释反应，然后在70℃下加热15小时。浓缩该反应至浓的暗红色油状物。在一个单独的烧瓶中，2-氨基-2-丁基己烷基硫酸氢酯（9.90g，39.1mmol）溶解于H2O（25 mL），然后加热至85℃，随后通过吸管加入苯硫酚盐的H2O溶液。剩余的苯硫酚盐以最少的EtOH和H2O转移。将反应混合物在85℃下搅拌15小时，然后冷却至室温。将反应倾入H2O，并用DCM（3X）萃取。用盐水洗涤合并的有机层，干燥（MgSO4），过滤，并在真空下浓缩，得到浓的红色油状物。残余物通过硅胶色谱使用含1％NH4OH的DCM / MeOH（30分钟内梯度从100/0％至90:10）纯化，得到[2-[(2-氨基-2-丁基己烷基)硫代]-4-溴-5 - (甲氧基)苯基](苯基)甲酮（16.3g，产率96％），为浓的红色油状物： 1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.76 - 7.83 (m, 3H), 7.60 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.47 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 6.84 (s, 1H), 3.88 (s, 3H), 2.81 (s, 2H), 0.78 - 1.55 (m, 18H); LC-MS (ES+) m/z 478.2 [M+H], 480.2 [M+H]。
中间体 31：[2-[(2-氨基-2-丁基己烷基)硫代]-4-溴-5-(甲氧基)苯基](苯基)甲酮
[2-[(2-氨基-2-丁基己烷基)硫代]-4-溴-5-(甲氧基)苯基](苯基)甲酮（16.3g，34.1mmol）的甲苯（341mL）溶液用柠檬酸（0.327g，1.703mmol）处理，然后加热回流15小时。反应装入一个Dean-Stark分水器，然后在130℃下加热10小时，此时另外加入柠檬酸（325mg）。继续在130℃搅拌15小时，然后加入额外的柠檬酸（100mg），在130℃下继续搅拌10小时。反应在真空下浓缩，然后通过SiO2色谱法使用己烷：EtOAc（100:0至80:20）为洗脱剂纯化，得到8-溴-3,3-二丁基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3-二氢-1,4-苯并硫氮杂（10g，产率63.7％），为静置时固化为褐色固体的油状物： 1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.79 (s, 1H), 7.53 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.30 - 7.44 (m, 3H), 6.59 (s, 1H), 3.71 (s, 3H), 3.23 (s, 2H), 1.16 - 1.66 (m, 12H), 0.86 (t, J = 7.2 Hz, 6H); LC-MS (ES+) m/z 460.2 [M+H], 462.2 [M+H]。
中间体 32：3,3-二丁基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3-二氢-1,4-苯并硫氮杂-8-羧酸甲酯
一氧化碳鼓泡通过8-溴-3,3-二丁基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3-二氢-1,4-苯并硫氮杂（中间体31）（10g，21.72mmol），Pd(OAc)2（0.488g，2.172mmol）和dppp（0.896g，2.172mmol）在DMSO（71.6mL）中的混合物达15分钟。用MeOH（3.51mL，87mmol）和TEA（4.54mL，32.6mmol）处理反应混合物，然后在70℃下加热3小时，此时间后另外加入甲醇（3.51mL，87mmol）。继续在CO气氛下加热39小时。用MTBE稀释反应混合物，然后通过硅藻土塞子过滤，用MTBE洗涤。将滤液倾入H2O中，然后用MTBE（1×）萃取分离的水层。合并的有机层用盐水洗涤，干燥（MgSO4），过滤，并在真空下浓缩。残余物通过SiO2色谱法使用己烷：EtOAc（100:0至60:40）为洗脱剂纯化，得到3,3-二丁基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3-二氢-1,4-苯并硫氮杂-8-羧酸甲酯（收率86％），为浅橙色油状物：1H NMR (CDCl3) δ ppm 8.01 (s, 1H), 7.53 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 7.30 - 7.44 (m, 3H), 6.69 (s, 1H), 3.93 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 3.22 (s, 2H), 1.14 - 1.65 (m, 12H), 0.86 (t, J = 7.2 Hz, 6H); LC-MS (ES+) m/z 440.3 [M+H]。
中间体 33：[3,3-二丁基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3-二氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲醇
在25℃下用2M LAH的THF（13.99mL，28.0mmol）溶液以滴加的方式处理3,3-二丁基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3-二氢-1,4-苯并硫氮杂-8-羧酸甲酯（8.2g，18.65mmol）的THF（34.0mL）的溶液。将反应搅拌15分钟，然后用H2O（1.1mL），15％的NaOH（1.1mL），和H2O（3.4mL）淬灭。搅拌30分钟后，将反应通过硅藻土垫过滤，用THF洗涤。将滤液在真空下浓缩，得到[3,3-二丁基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3-二氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲醇（7.7g，产率100％）：1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.49 - 7.59 (m, 3H), 7.30 - 7.42 (m, 3H), 6.58 (s, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.22 (s, 2H), 1.13 - 1.65 (m, 12H), 0.86 (t, J = 7.2 Hz, 6H); LC-MS (ES+) m/z 412.3 [M+H]。
中间体 34：[3,3-二丁基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲醇
在25℃下用1M BH3的THF（20.58mL，20.58mmol）溶液以滴加的方式处理[3,3-二丁基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3-二氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲醇（7.7g，18.71mmol）的THF（51.1mL）溶液，然后将反应搅拌2小时。用MeOH（30mL）将反应淬灭，然后在减压下浓缩，得到粗的白色泡沫状物。残余物通过SiO2色谱法使用6:1 /己烷：EtOAc到2:1 /己烷：EtOAc的梯度纯化，得到未反应的起始原料和产物的混合物（各自约85:15）。将该物质再置于相同的条件下，并以类似的方式纯化，得到含有5-10％的亚胺的[3,3-二丁基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲醇（6.56g，产率85％）： 1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.50 (s, 1H), 7.24 - 7.47 (m, 5H), 6.09 (s, 1H), 5.78 (s, 1H), 4.59 (d, J = 3.1 Hz, 2H), 3.49 (s, 3H), 2.76 (d, J = 14.2 Hz, 1H), 2.50 (d, J = 14.2 Hz, 1H), 2.01 - 2.24 (m, 2H), .08 - 1.72 (m, 10H), 0.90 (t, J = 6.9 Hz, 3H), 0.85 (t, J = 7.2 Hz, 3H); LC-MS (ES+) m/z 414.3 [M+H]。
中间体 35：[3,3-二丁基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲醇
[3,3-二丁基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲醇（6.56g，15.86mmol）的TFA（52.4mL）溶液，在25℃下用30％ H2O2（3.24mL，31.7mmol）处理，将rxn搅拌1小时。在冰浴中冷却后，加入H2O（300mL）和THF（120 mL），接着加入15％的NaOH，然后是6N NaOH，直至溶液达到pH12。搅拌1小时后，加入10％的Na2SO3（60 mL）溶液，并将该溶液搅拌直至鼓泡停止。反应以DCM处理，分离各层。水层用DCM（2X）萃取，然后将合并的有机层用盐水洗涤，干燥（MgSO4），过滤，并在真空下浓缩。残余物通过SiO2色谱使用DCM /甲醇梯度（100:0~95:5）纯化，得到[3,3-二丁基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲醇（6.7g，产率95％），为白色固体。该物质包含10-15％的亚胺： 1H NMR (CDCl3) δ ppm 8.05 (s, 1H), 7.29 - 7.49 (m, 5H), 6.19 (s, 1H), 6.08 (br. s., 1H), 4.56 - 4.76 (m, 2H), 3.56 (s, 3H), 3.44 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 3.07 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 2.05 - 2.30 (m, 1H), 1.85 (m, 1H), 1.02 - 1.64 (m, 10H), 0.91 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 0.84 (t, J = 7.0 Hz, 3H); LC-MS (ES+) m/z 446.3 [M+H]。
中间体 36：3,3-二丁基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1-二氧化物
[3,3-二丁基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲醇（415mg，0.931mmol）的DCM（9313 μL）溶液在25℃下用戴斯-马丁氧化剂（415mg，0.978mmol）处理，并搅拌1小时。用薄的SiO2垫过滤反应，用EtOAc洗涤，然后将滤液在真空下浓缩得到白色固体。残留物通过SiO2色谱使用己烷/ EtOAc梯度纯化，得到3,3-二丁基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1-二氧化物（310mg，收率​​75％），为白色固体： 1H NMR (CDCl3) δ ppm 10.35 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 7.32 - 7.56 (m, 5H), 6.30 (s, 1H), 6.13 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 3.63 (s, 3H), 3.47 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 3.05 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 2.12 - 2.29 (m, 1H), 1.78 - 1.92 (m, 1H), 1.03 - 1.61 (m, 10H), 0.91 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 0.82 (t, J = 7.1 Hz, 3H); LC-MS (ES+) m/z 444.2 [M+H]。
中间体 37：{[3,3-二丁基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}膦酸二乙酯
步骤1：咪唑（306mg，4.49mmol）的DCM（2.7mL）溶液在0℃用三苯基膦（589mg，2.244mmol），然后是Br2（116μΙ，2.244mmol）处理。搅拌5分钟后，缓慢加入[3,3-二丁基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲醇（中间体35）（500mg，1.122mmol）的DCM（2.7mL）溶液，然后反应在0℃下搅拌2小时。将反应用10％Na2SO3水溶液处理，分离各层，并用DCM萃取水层。将合并的有机层干燥（Na2SO4），通过SiO2垫过滤，并在真空下浓缩，得到8-(溴甲基)-3,3-二丁基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂 1,1-二氧化物（571mg，> 99％产率）。
步骤2：在25℃下用亚磷酸三乙酯（295μΙ，1.684mmol）处理8-(溴甲基)-3,3-二丁基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂 1,1-二氧化物（571mg，1.123mmol）的甲苯（5.3mL）溶液，然后加热回流18小时。反应在真空下浓缩至油状物，然后通过SiO2色谱使用4:1/EtOAc:己烷到100％EtOAc纯化，得到{[3,3-二丁基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}膦酸二乙酯（285mg，产率44.9％）：1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.99 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.29 - 7.68 (m, 5H), 6.16 (s, 1H), 6.06 (br. s., 1H), 3.95 - 4.18 (m, 4H), 3.53 (s, 3H), 3.43 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 3.15 - 3.26 (m, 2H), 3.04 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 2.09 - 2.30 (m, 1H), 1.79 - 1.94 (m, 1H), 1.04 - 1.63 (m, 16H), 0.92 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 0.83 (t, J = 7.1 Hz, 3H); LC-MS (ES+) m/z 566.4 [M+H]。
中间体 38：三氟甲磺酸(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-8-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-7-基酯
溶解于DCM（300mL）中的(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-8-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-7-醇 1,1-二氧化物（9.24g，22.90mmol）和吡啶用溶解于DCM（80mL）中的三氟甲磺酸酐（4.64mL，27.5mmol）通过在冰浴中搅拌、冷却下滴加处理。将反应混合物温热至室温并搅拌1小时，此时间后LCMS显示转化完全。将反应混合物用稀HCl洗涤两次，用MgSO4干燥，过滤并浓缩为橙色泡沫体： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.75 (t, J=7.0 Hz, 3 H), 0.81 (t, J=7.3 Hz, 3 H), 0.94 - 1.29 (m, 4 H), 1.47 (q, J=7.3 Hz, 2 H), 1.67 - 1.80 (m, 1 H), 1.95 - 2.07 (m, 1 H), 2.80 (d, J=9.6 Hz, 1 H), 3.27 (d, J=15.2 Hz, 1 H), 3.76 (d, J=15.2 Hz, 1 H), 3.99 (s, 3 H), 5.86 (d, J=9.6 Hz, 1 H), 6.34 (s, 1 H), 7.27 - 7.52 (m, 5 H), 7.79 (s, 1 H)。
中间体 39：(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-N,N-二甲基-8-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-7-胺1,1-二氧化物
三氟甲磺酸(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-8-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-7-基酯（5.57g，10.40mmol），Pd2(dba)3（0.286g，0.312mmol），2-联苯基-二-叔丁基膦（0.372g，1.248mmol）和K3PO4（2.318g，10.92mmol）合并于1,2-二甲氧基乙烷（DME）（10mL）中，并搅拌10分钟，同时用N2吹扫。加入2M二甲胺的THF（40mL，80mmol）溶液，并将该混合物在100℃的油浴中加热16小时，此时间后随着显著的苯酚形成LCMS表明>90％的转化。将反应混合物通过硅藻土过滤，并将滤液浓缩至干。在DCM和NaHCO3水溶液之间分配残余物，分离有机相，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩至干。残余物在330g硅胶上通过20％至40％的EtOAc /己烷洗脱纯化，得到(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-N,N-二甲基-8-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-7-胺1,1-二氧化物（3.12g，7.25mmol，产率69.7％），为白色固体： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.68 - 0.87 (m, 6 H), 0.96 - 1.29 (m, 4 H), 1.33 - 1.54 (m, 2 H), 1.64 - 1.83 (m, 1 H), 2.00 - 2.12 (m, 1 H), 2.46 (d, J=10.0 Hz, 1 H), 2.53 (s, 6 H), 3.06 (d, J=14.6 Hz, 1 H), 3.51 (d, J=14.6 Hz, 1 H), 3.82 (s, 3 H), 5.85 (d, J=9.8 Hz, 1 H), 5.94 (s, 1 H), 7.26 - 7.34 (m, 1 H), 7.34 - 7.46 (m, 5 H); LC-MS (ES+) m/z 431.33 [M+H]。
中间体 40：(3R,5R)-3-丁基-7-(二甲基氨基)-3-乙基-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-醇1,1-二氧化物
溶解于DCM（100mL）中的(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-N,N-二甲基-8-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-7-胺1,1-二氧化物（5.25g，12.19mmol）用氯化铝（6.50g，48.8mmol）在23℃处理2小时，此时间后，LCMS表明转化完全，但形成了明显的副产物。该混合物用冰H2O骤冷，并将该混合物剧烈搅拌15分钟。将该混合物用DCM萃取4次，合并的有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩至干。水相的pH用6N NaOH调节至13，将混合物用DCM萃取4次，合并的有机物用MgSO4干燥，过滤并浓缩至干。将pH 1的提取物（1.47g）和pH 13的提取物（1.01g）合并，并在220g硅胶上通过15％至45％EtOAc /己烷洗脱纯化，得到(3R,5R)-3-丁基-7-(二甲基氨基)-3-乙基-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-醇1,1-二氧化物（1.76g，4.22mmol，产率34.7％），为褐色玻璃状物。1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.69 - 0.83 (m, 6 H), 0.96 - 1.28 (m, 4 H), 1.31 - 1.54 (m, 2 H), 1.65 - 1.77 (m, 1 H), 2.00 - 2.12 (m, 1 H), 2.38 (d, J=9.8 Hz, 1 H), 3.04 (d, J=14.8 Hz, 1 H), 3.33 (s, 6 H), 3.45 (d, J=14.8 Hz, 1 H), 5.80 (d, J=9.8 Hz, 1 H), 5.89 (s, 1 H), 7.23 - 7.33 (m, 1 H), 7.33 - 7.52 (m, 5 H), 9.81 (s, 1 H). LC-MS (ES-) m/z 415.18 [M-1]; LC-MS (ES+) m/z 417.20 [M+H]。
中间体 41：三氟甲磺酸(3R,5R)-3-丁基-7-(二甲基氨基)-3-乙基-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基酯
在22℃下向(3R,5R)-3-丁基-7-(二甲氨基)-3-乙基-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-醇1,1-二氧化物（1.24g，2.98mmol）的DCM（10mL）溶液中加入吡啶（0.602mL，7.44mmol），然后是三氟甲磺酸酐（0.603mL，3.57mmol），并将该反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用H2O洗涤两次，将有机层分离，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩至干。残余物在330g硅胶上通过DCM洗脱进行纯化，得到三氟甲磺酸(3R,5R)-3-丁基-7-(二甲基氨基)-3-乙基-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基酯（1.42g，2.59mmol，收率​​87％），为白色泡沫状；LC-MS (ES+) m/z 549.17 [M+H]。
中间体 42：(3R,5R)-3-丁基-7-(二甲基氨基)-3-乙基-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲腈1,1-二氧化物
溶解于DMF（5 mL）的三氟甲磺酸(3R,5R)-3-丁基-7-(二甲基氨基)-3-乙基-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基酯（1.42g，2.59mmol）与二氰基锌（0.456g，3.88mmol），Pd2(dba)3（0.012g，0.013mmol），和DPPF（0.016g，0.028mmol）合并，并用N2吹扫。将该混合物在80℃下加热16小时，此时间后LCMS表明～25％的转化。N2吹扫该反应混合物1小时，加入另外的二氰基锌（0.456g，3.88mmol），Pd2(dba)3（0.036g，0.039mmol），和DPPF（0.050g，0.091mmol），并将该混合物用N2额外吹扫30分钟。将所得混合物在80℃下加热40小时，此时间后LCMS表明形成了显著的副产物。将混合物在EtOAc / H2O之间进行分配，并通过硅藻土过滤。分离有机相，用H2O和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩至干。残余物在120g硅胶上通过20％至100％的EtOAc /己烷洗脱纯化，得到(3R,5R)-3-丁基-7-(二甲基氨基)-3-乙基-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲腈1,1-二氧化物（被苯酚污染）（340mg，0.799mmol，产率30.9％：LC-MS (ES-) m/z 424.18 [M-1], LC-MS (ES+) m/z 426.35 [M+H]。
中间体 43：(3R,5R)-3-丁基-7-(二甲基氨基)-3-乙基-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1-二氧化物
溶解于甲苯（5 mL）中的(3R,5R)-3-丁基-7-(二甲基氨基)-3-乙基-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲腈1,1-二氧化物（340mg，0.799mmol）用1M的DIBAL-H的甲苯溶液（0.919 mL，0.919mmol）在0℃处理，并搅拌1小时。将混合物温热至室温并搅拌过夜，此时间后LCMS表明~20％的转化。加入另外的1M的DIBAL-H（131mg，0.919mmol），将反应混合物在室温下搅拌2小时，此时间后LCMS表明> 80％的转化。将反应混合物用DCM稀释，并用1N HCl淬灭。分离各相，水相用DCM萃取两次。合并有机物，用MgSO4干燥，过滤并浓缩至干。残余物在40g硅胶上通过20％至40％的EtOAc /己烷洗脱进行纯化，得到(3R,5R)-3-丁基-7-(二甲基氨基)-3-乙基-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1-二氧化物（40mg，0.093mmol，11.7％产率）： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.74 (t, J=6.9 Hz, 3 H), 0.80 (t, J=7.4 Hz, 3 H), 0.93 - 1.27 (m, 4 H), 1.29 - 1.55 (m, 2 H), 1.64 - 1.82 (m, 1 H), 2.01 - 2.21 (m, 1 H), 2.64 - 2.73 (m, 1 H), 2.75 (s, 6 H), 3.06 (d, J=14.8 Hz, 1 H), 3.56 (d, J=14.6 Hz, 1 H), 5.85 - 5.93 (m, 1 H), 6.04 (s, 1 H), 7.26 - 7.52 (m, 5 H), 8.21 (s, 1 H), 9.94 (s, 1 H)。
中间体 44：(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-N-甲基-N,7-双(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲酰胺1,1-二氧化物
向(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-羧酸 1,1-二氧化物（中间体4.174mg，0.403mmol）的N,N-二甲基甲酰胺（5mL）的溶液中加入N，O-二甲基羟基胺盐酸盐（59.0mg，0.605mmol），DIEA（0.282mL，1.613mmol）和HATU（307mg，0.806mmol）。该反应混合物在室温下搅拌过夜，然后在H2O和EtOAc之间分配。将有机层用饱和盐水洗涤，干燥，过滤，并减压浓缩。通过SiO2色谱法（EtOAc：Hex= 1：3至3:1）纯化得到标题化合物（168mg，95％纯，83％），为浅黄色油状物：ES-LCMS m/z 475 (M+H)+。
中间体 45：{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]亚甲基}丙二酸二乙酯
向(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛 1,1-二氧化物（中间体9，109mg，0.262mmol）的甲苯（3mL）的溶液中加入丙二酸二乙酯（0.048mL，0.315mmol）和哌啶（0.013mL，0.131mmol）。反应混合物在100℃下搅拌过夜，冷却至室温，并在减压下浓缩。通过SiO2色谱法纯化（EtOAc/Hex= 10:90~80:20）得到为浅黄色油状物的标题化合物（146mg，90％纯，90％）：ES-LCMS m/z 558 (M+H)+。
中间体 46：
向丙二酸二乙酯（0.096mL，0.628mmol）的乙醇（3mL）溶液中加入乙醇钠（0.254mL，0.681mmol）。将反应混合物在室温下搅拌20分钟，用{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]亚甲基}丙二酸二乙酯（中间体45，146mg，0.262mmol）的乙醇（2 mL）溶液处理。将反应混合物在室温下搅拌过夜，用乙酸酸化至pH3-4，并部分地在减压下浓缩以在减压下除去有机溶剂。将残余物在水和二氯甲烷之间分配。用饱和盐水洗涤有机层，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩。用硅胶进行纯化（EtOAc：Hex= 1：5至2:1），得到为无色油状物的标题化合物（78，120mg，84％纯，53％）： 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.97 (s, 1H), 7.26 - 7.48 (m, 5H), 6.08 (s, 1H), 5.97 (s, 1H), 4.43 (br s, 1H), 4.04 - 4.20 (m, 6H), 3.86 - 4.03 (m, 4H), 3.37 (d, J = 14.9 Hz, 1H), 2.90 (d, J = 14.9 Hz, 1H), 2.07 - 2.23 (m, 2H), 2.04 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 1.74 - 1.90 (m, 1H), 1.34 - 1.54 (m, 2H), 1.17 - 1.27 (m, 8H), 0.97 - 1.10 (m, 6H), 0.66 - 0.92 (m, 6H); ES-LCMS m/z 718 (M+H)+。
中间体 47：3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]羰基}氨基)戊二酸二甲酯
向(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-羧酸 1,1-二氧化物（中间体4，100mg，0.232mmol）的二氯甲烷（5 mL）溶液中加入DIPEA（0.202 mL，1.159mmol）和HATU（88mg，0.232mmol）。将反应混合物在室温下搅拌20分钟，然后加入3-氨基戊二酸二甲酯（81mg，0.463mmol），并在室温下搅拌过夜。然后将反应混合物在水和二氯甲烷之间分配。用饱和盐水洗涤有机层，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩。在硅胶上用MeOH：DCM = 0:100~10:90纯化，得到标题化合物（212mg，63％纯，98％）：ES-LCMS m/z 589 (M+H)+。
中间体 48：3-氨基戊二酸二甲酯
将(2Z)-3-氨基-2-戊烯二酸二甲酯（613g，3.54mol）在搅拌下部分加入TFA（3.15 L）中，同时在外部冷却下保持反应温度低于30℃。大部分固体溶解后，1M的BH3-THF（1.53 L，1.53mol）在1小时内逐滴加入，同时保持反应温度在18-21℃之间。将反应混合物冷却至10℃，并在5分钟内逐滴加水（500 mL）淬灭，同时保持反应温度在10-15℃之间。反应在室温下搅拌30分钟，然后过滤。浓缩滤液以除去大部分的TFA，将得到的物质溶解在CH2Cl2（4L）中。在室温下将CH2Cl2的溶液缓慢加入搅拌的K3PO4（3kg）水（3L）溶液，混合物快速搅拌10分钟。分离各层，并用CH2Cl2（2L）萃取水相。合并的CH2Cl2层用MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到3-氨基戊二酸二甲酯（568g），为金色液体： 1H NMR (DMSO-d6) δ ppm 3.56 (s, 6 H), 3.35 (m, 1 H), 2.42 (dd, J=16Hz, J=5.3 Hz, 2 H), 2.29 (dd, J=16 Hz, J=8 Hz, 2 H), 1.93 (br s, 2 H)。
中间体49：3-氨基戊二酸二甲酯（醋酸盐）
3-氨基戊二酸二甲酯（568g，3.24mol）的叔丁基甲基醚（2.3L）溶液在冰浴中冷却，逐滴加入冰醋酸（195，3.24mol），同时保持反应温度在约15℃。将所得混合物用少量所需的结晶产物接种，并搅拌90分钟，冷却至5℃。将所得的沉淀物通过过滤收集，并用1：1叔丁基甲基醚/庚烷洗涤。滤饼在真空下干燥，得到3-氨基戊二酸二甲酯的醋酸盐，为灰白色固体（640g）：1H NMR (DMSO-d6) δ ppm 5.30 (br s, 3 H), 3.56 (s, 6 H), 3.36 (m, 1 H), 2.44 (dd, J=16, J=5, 2 H), 2.31 (dd, J=16, J=8, 2 H), 1.86 (s, 3 H)。
中间体 50：3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸二甲酯
将冰醋酸（420g，6.99mol）加入到搅拌着的(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛 1,1-二氧化物（857g，2.06mol）在i-ProAc（8L）中的混合物中，接着加入3-氨基戊二酸二甲酯的醋酸盐（645g，2.74mol）。三乙酰氧基硼氢化钠（656g，3.09mol）在45分钟内分批加入，同时保持反应温度低于22℃。1小时后，将反应混合物用水（8L）和10％ Na2CO3（8L）洗涤。将有机相用MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸二甲酯（1.2kg），为油状物： 1H NMR (DMSO-d6) δ ppm 7.90 (s, 1 H), 7.42-7.34 (m, 4 H), 7.34-7.26 (m, 1 H), 6.04 (s, 1 H), 5.91 (d, J=9.87 Hz, 1 H), 3.67-3.53 (m, 3 H), 3.55 (s, 3 H), 3.54 (s, 3 H), 3.50 (d, J=15 Hz, 1 H), 3.40 (s, 3 H), 3.23 (m, 1 H), 3.01 (d, J=15 Hz, 1 H), 2.58-2.39 (m, 4 H), 2.03 (m, 1 H), 2.16 (br s, 1 H), 1.76-1.66 (m, 1 H), 1.50-1.30 (m, 2 H), 1.27-0.96 (m, 4 H), 0.77 (t, J=7.5 Hz, 3 H), 0.73 (t, J=7.0 Hz, 3 H)。
II．本发明化合物的制备
实施例 1：3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]羰基}氨基)-2,2-二甲基丙酸
步骤1：在0ºC向(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-羧酸-1,1-二氧化物（0.025g，0.058mmol）和3-氨基-2,2-二甲基丙酸乙酯（如US-2,370,015中所述的制备）（0.009g，0.064mmol）的DMF溶液（0.5 mL）中先后加入HATU（0.024g，0.064mmol）和DIEA（0.012 mL，0.070mmol）。将反应​​搅拌10分钟，然后温热至室温。1小时后，反应浓缩至一半体积，并加入H2O（3 mL）。过滤沉淀物并干燥，然后无需进一步纯化用在下一步骤中。
步骤2：该物质溶解于THF（0.500 mL），将H2O（0.250 mL）与过量的LiOH（7mg，0.174mmol）一起加入。反应在室温下搅拌3小时，然后浓缩。残余物通过硅胶色谱用DCM/MeOH纯化，得到标题化合物（0.020g，63％）： 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.71 (s, 1 H) 8.13 (br. s., 1 H) 7.27-7.52 (m, 5 H) 6.21 (br. s., 1 H) 6.08 (br. s., 1 H) 3.31-3.70 (m, 7 H) 3.11 (br. s., 1 H) 2.18 (br. s., 1 H) 1.83 (br. s., 1 H) 0.99-1.65 (m, 12 H) 0.71-0.96 (m, 6 H); LC-MS m/z 531 (M+H)+。
实施例 2：({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]羰基}氨基)甲磺酸
以与实施例1步骤1类似的方式，通过HATU酰胺偶合，使用氨基甲磺酸（0.013g，0.116mmol）和(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-羧酸-1,1-二氧化物（50mg，0.12mmol）制备，得到标题化合物（45mg，73％）： 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.47 (s, 1 H) 8.28 (partially resolved t, J=5.72 Hz, 1 H) 7.47 (d, J=3.62 Hz, 5 H) 6.29 (br. s., 1 H) 6.02 (br. s., 1 H) 3.43-4.72 (m, 6 H + H2O) 3.22 (br. s., 1 H) 2.14 (br. s., 1 H) 1.80 (br. s., 1 H) 1.45 (br. s., 2 H) 0.93-1.32 (m, 5 H) 0.63-0.93 (m, 6 H); ES-LCMS m/z 525 (M+H)+。
实施例 3：2-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]羰基}氨基)乙磺酸三氟乙酸盐
以与实施例1步骤1类似的方式，通过HATU酰胺偶合，使用牛磺酸（0.014g，0.116mmol）和(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-羧酸-1,1-二氧化物（0.050g，0.116mmol）制备。通过RP-HPLC（30x150 H2O Sunfire C18柱），使用含有0.1％TFA的、8分钟内10-100％梯度的MeCN/H2O为流动相纯化，得到标题化合物（0.015g，19％）： 1H NMR (400 MHz, MeOH-d 4) δ ppm 8.74 (s, 1 H) 7.48-7.72 (m, 5 H) 6.68 (s, 1 H) 6.47 (s, 1 H) 4.02 (d, J=15.83 Hz, 1 H) 3.75-3.83 (m, 2 H) 3.72 (s, 3 H) 3.55 (d, J=15.83 Hz, 1 H) 2.91-3.02 (m, 2 H) 2.77 (br. s., 1 H) 2.13 (br. s., 2 H) 1.66 (s, 1 H) 1.43 (d, J=6.55 Hz, 3 H) 1.02 (partially resolved t, J=7.48 Hz, 4 H) 0.91 (t, J=7.13 Hz, 3 H); ES-LCMS m/z 539 (M+H)+。
实施例 4：2,2'-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]羰基}亚氨基)二乙酸盐酸盐
以与实施例1类似的方式，通过HATU酰胺偶合，使用二乙基亚氨基乙酸酯（0.022g，0.116mmol）和(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-羧酸-1,1-二氧化物（0.050g，0.116mmol）制备，然后通过LiOH（10mg，0.24mmol）水解条件，得到标题化合物（0.045g，63％）： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.76 (br. s., 2 H) 7.73 (s, 1 H) 7.22-7.60 (m, 5 H) 6.15 (s, 1 H) 5.97 (br. s., 1 H) 4.15 (br. s., 2 H) 3.86 (br. s., 2 H) 3.01-3.53 (m, 4 H + H2O) 2.08 (br. s., 1 H) 1.66-1.91 (m, 1 H) 0.95-1.63 (m, 7 H) 0.64-0.92 (m, 6 H); ES-LCMS m/z 547 (M+H)+。
实施例 5：[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲磺酸​​三氟乙酸盐
向(3R,5R)-8-(溴甲基)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-1,1-二氧化物（0.100g，0.21mmol）的1,4-二噁烷（1 mL）溶液中加入亚硫酸钠（131mg，1.04mmol）H2O（1 mL）溶液。将混合物在搅拌下回流过夜，然后在真空下浓缩，将粗反应混合物用1N HCl洗涤。倾出上清液，留下白色胶状固体，将其用DCM和己烷研磨，通过过滤收集得到固体。使用Agilent pre-HPLC（C18预装柱，MeCN,H2O/0.1％TFA作为流动相）进行纯化，得到标题化合物（83mg，66％），为三氟乙酸盐： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 8.17 (br. s., 1 H) 7.59 (br. s., 5 H) 6.33 (br. s., 2 H) 3.14-4.46 (m, 6 H + H2O) 2.02 (br. s., 2 H) 1.60 (br. s., 1 H) 1.33 (br. s., 3 H) 0.62-1.13 (m, 7 H); ES-LCMS m/z 482 (M+H)+。
实施例 6：{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}膦酸盐酸盐
步骤1：以与实施例5类似的方式，通过烷基化反应，使用亚磷酸三乙酯（0.352 mL，2.01mmol）和(3R,5R)-8-(溴甲基)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂 1,1-二氧化物（0.920g，1.92mmol）的甲苯（10 mL）溶液制备。
步骤2：从前一步骤得到的膦酸酯溶解在2mL 6N盐酸和1mL EtOH，然后加热回流6小时。将反应冷却，然后浓缩。将残余物溶解在EtOH中，然后浓缩，得到标题化合物（0.86g，85％），为盐酸盐： 1H NMR (400 MHz, MeOH-d 4) δ ppm 8.04 (d, J=2.34 Hz, 1 H) 7.57 (s, 5 H) 6.46 (s, 1 H) 6.36 (s, 1 H) 3.79 (d, J=15.51 Hz, 1 H) 3.58 (s, 3 H) 3.45 (d, J=15.51 Hz, 1 H) 3.16-3.25 (m, 1 H) 2.99-3.12 (m, 2 H) 2.68 (br. s., 1 H) 1.97 (dd, J=14.15, 7.12 Hz, 2 H) 1.64 (dd, J=14.15, 7.32 Hz, 1 H) 1.23-1.46 (m, 3 H) 0.98 (t, J=7.41 Hz, 4 H) 0.89 (t, J=6.88 Hz, 3 H); ES-LCMS m/z 482 (M+H)+。
实施例 7：2,2'-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}亚氨基)二乙酸盐酸盐
步骤1：向(3R,5R)-8-(溴甲基)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-1,1-二氧化物（77mg，0.16mmol）的MeCN溶液中加入二乙基亚氨二乙酸（33 m，0.18mmol）。将反应混合物在65℃下加热4小时，然后冷却并浓缩至浓的油状物。在硅胶上使用己烷/ EtOAc进行色谱法，得到透明油状物。
步骤2：H2O和THF与LiOH（15mg，0.36mmol）一起加入到步骤1的产品中，并将该混合物在室温下搅拌2小时以水解二乙酸。将rxn混合物浓缩至一半体积，加入1 N盐酸酸化反应内容物，然后有机物用DCM萃取2次。用盐水洗涤合并的有机物，干燥（Na2SO4），过滤，并浓缩。残余物用（DCM/EtOAc）研磨，过滤，并干燥。该物质再溶解于DCM/EtOAc /MeOH，然后浓缩成固体，并保持在N2中过夜干燥。得到为盐酸盐呈白色固体的标题化合物（45mg，47％2步）： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.36 (br. s., 2 H) 8.03 (s, 1 H) 7.16-7.55 (m, 5 H) 6.09 (s, 1 H) 5.95 (br. s., 1 H) 3.81 (br. s., 2 H) 3.16-3.59 (m, 26 H) 3.07 (d, J=14.83 Hz, 1 H) 2.51 (br. s., 14 H) 2.08 (br. s., 1 H) 1.75 (br. s., 1 H) 0.98-1.56 (m, 8 H) 0.62-0.90 (m, 6 H); ES-LCMS m/z 533 (M+H)+。
实施例 8：(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲酰胺-1,1-二氧化物
将(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲腈-1,1-二氧化物（38mg，0.092mmol）和K2CO3（25mg，0.184mmol）的DMSO（1 mL）溶液冷却至0℃，逐滴加入30％w/w H2O2（0.016 mL，0.153mmol）。将所得的混合物温热至室温，然后搅拌2小时。加入H2O，然后所得到的沉淀过滤并干燥，得到标题化合物（40mg，95％）： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.81 (s, 1 H) 6.51-6.76 (m, 5 H) 5.58 (s, 1 H) 5.31 (s, 1 H) 2.85 (s, 3 H) 2.74 (d, J=14.92 Hz, 1 H) 2.36 (d, J=14.92 Hz, 1 H) 1.87 (s, 2 H) 1.41-1.55 (m, 1 H) 0.96-1.13 (m, 1 H) 0.75-0.91 (m, 1 H) 0.61-0.75 (m, 1 H) 0.25-0.59 (m, 4 H) 0.13 (t, J=7.37 Hz, 3 H) 0.03 (t, J=6.82 Hz, 3 H); ES-LCMS m/z 431 (M+H)+。
实施例 9：(2E)-3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]-2-丙烯酸铵盐
向(2E)-3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]-2-丙烯酸乙酯（300mg，0.618mmol）在1：1：1 THF /MeOH/ H2O的混合物（15 mL）中的溶液加入氢氧化锂（74.0mg，3.09mmol），将得到的反应混合物在室温下搅拌过夜。在减压下浓缩反应混合物以除去有机溶剂。将所得的水层，用1N盐酸酸化至pH1，然后用DCM萃取水层。有机层用H2O，饱和盐水洗涤，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩。用HPLC（用含有0.5％NH3-H2O 的MeCN/ H2O洗脱）纯化，得到标题化合物（201mg，65％，为铵盐），呈白色固体： 1H NMR (MeOH-d4): δ ppm 8.06 (s, 1H), 7.27 - 7.48 (m, 5H), 6.30 (s, 1H), 6.06 (s, 1H), 4.26 (s, 2H), 3.65 (s, 1H), 3.58 (s, 3H), 3.49 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 3.07 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 2.52 - 2.76 (m, 4H), 2.11 - 2.28 (m, 1H), 1.69 - 1.84 (m, 1H), 1.56 (s, 1H), 1.42 (s, 1H), 1.04 - 1.33 (m, 4H), 0.87 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.78 (t, J = 6.8 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 458 (M+H)+。
实施例 10：3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酸
步骤1：将(2E)-3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]-2-丙烯酸乙酯（0.27g，0.556mmol）和10％的Pd/C（0.012g）在EtOH（10 mL）中的混合物在室温下在1个大气压的氢气气氛中氢化过夜。将反应混合物通过硅藻土过滤，并用EtOH洗涤。将滤液在减压下浓缩，得到3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酸乙酯（182mg，57％），为透明油状物：ES-LCMS m/z 488 (M+H)+。
步骤2：向3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酸乙酯（172mg，0.353mmol）在1：1：2的THF /MeOH/ H2O的混合物（12 mL）中的溶液中加入氢氧化锂（84mg，3.53mmol）。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后在减压下部分浓缩以除去有机溶剂。然后将所得的水层用1N盐酸酸化至pH1-2，并用DCM萃取。用饱和盐水洗涤有机层，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩得到为白色固体的标题化合物（149mg，87％）： 1H NMR (CDCl3): δ ppm 7.85 (s, 1H), 7.41 (d, J = 7.0 Hz, 5H), 5.97 - 6.32 (m, 2H), 3.50 (s, 3H), 3.41 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 2.78 - 2.95 (m, 2H), 2.48 - 2.66 (m, 2H), 2.09 - 2.39 (m, 1H), 1.77 - 1.97 (m, 1H), 1.13 - 1.38 (m, 5H), 0.98 - 1.14 (m, 1H), 0.88 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.81 (t, J = 7.0 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 458 (M-H)-。
实施例 11：3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]-N-(甲基磺酰基)丙酰胺
向3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酸（50mg，0.109mmol）在2:1的DCM/THF混合物（6 mL）中的溶液中加入EDC（25.03mg，0.131mmol），DMAP（15.95mg，0.131mmol）和甲磺酰胺（12.42mg，0.131mmol）。将反应混合物在室温下过夜搅拌，并在H2O和DCM之间分配。用饱和盐水洗涤有机层，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩。用HPLC（用含有0.05％TFA-H2O和0.05％TFA-MeCN的MeCN/H2O洗脱）纯化，得到标题化合物（25mg，34％，TFA盐），为白色固体： 1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.84 (s, 1H), 7.44 - 7.65 (m, 5H), 6.61 (s, 2H), 6.39 (s, 1H), 3.84 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 3.55 (s, 3H), 3.43 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 3.27 (s, 3H), 3.05 - 3.20 (m, 1H), 2.73 - 2.85 (m, 1H), 2.46 - 2.67 (m, 2H), 2.25 - 2.39 (m, 1H), 2.06 - 2.20 (m, 1H), 1.69 - 1.96 (m, 2H), 1.26 - 1.48 (m, 3H), 0.94 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.86 (t, J = 7.0 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 537 (M+H)+。
实施例 12：3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]-N-羟基丙酰胺
向3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酸（50.1mg，0.109mmol）的THF（5 mL）溶液中加入EDC（41.8mg，0.218mmol），DMAP（39.9mg，0.327mmol）和羟胺盐酸盐（37.9mg 0.545mmol）。反应混合物在室温下搅拌过夜，并在减压下浓缩。残留物在H2O和DCM之间分配，用饱和盐水洗涤有机层，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩。用HPLC纯化（用含有0.05％TFA-H2O和0.05％TFA-MeCN的MeCN/H2O洗脱），得到为白色固体的标题化合物（24mg，35％，TFA盐）：1H NMR (CDCl3): δ ppm 7.74 - 7.85 (m, 1H), 7.40 - 7.68 (m, 5H), 6.60 (s, 1H), 6.39 (s, 1H), 3.84 (d, J = 15.4 Hz, 1H), 3.51 - 3.63 (m, 3H), 3.46 (d, J = 15.4 Hz, 1H), 2.84 - 3.05 (m, 1H), 2.45 - 2.79 (m, 2H), 2.23 - 2.42 (m, 1H), 1.69 - 2.23 (m, 4H), 1.28 - 1.52 (m, 3H), 0.92 - 1.13 (m, 4H), 0.76 - 0.92 (m, 3H); ES-LCMS m/z 475 (M+H)+。
实施例 13：({3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酰基}氨基)甲磺酸
向3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酸（50mg，0.109mmol）在2:1的DCM/THF混合物（6mL）中的溶液中加入EDC（62.6mg，0.326mmol），DMAP（39.9mg，0.326mmol）和EDC（62.6mg，0.326mmol）。反应混合物在室温下搅拌过夜，然后在H2O和DCM之间分配。用饱和盐水洗涤有机层，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩。用HPLC（用含有0.05％TFA-H2O和0.05％TFA-MeCN的MeCN/H2O洗脱）纯化，得到为白色固体的标题化合物（11.4mg，18％，TFA盐）：1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.85 (s, 1H), 7.35 - 7.77 (m, 5H), 6.51 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 3.85 (d, J = 15.2 Hz, 2H), 3.67 (s, 3H), 3.21 - 3.50 (m, 2H), 2.92 (br. s., 1H), 2.58 - 2.80 (m, 2H), 2.12 - 2.52 (m, 2H), 1.69 - 1.97 (m, 2H), 1.31 (m, 3H), 0.63 - 0.99 (m, 6H); ES-LCMS m/z 553 (M+H)+。
实施例 14：N-{3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酰基}甘氨酸
步骤1：向3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酸（50mg，0.109mmol）的DCM（4 mL）溶液中加入DIPEA（0.095 mL，0.544mmol），HATU（124mg，0.326mmol）和甘氨酸甲酯盐酸盐（19.39mg，0.218mmol）。反应混合物在室温下搅拌过夜，然后在H2O和DCM之间分配。用饱和盐水洗涤有机层，干燥（Na2SO4)，过滤，并在减压下浓缩。在硅胶上（MeOH：DCM = 0:100〜10:90）纯化，得到N-{3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酰基}甘氨酸甲酯（45mg，76％），为透明油状物：ES-LCMS m/z 531 (M+H)+。
步骤2：向N-{3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酰基}甘氨酸甲酯（43mg，0.081mmol）在2:1:1的THF/MeOH/H2O混合物（8 mL）中的溶液中加入氢氧化锂（1.941mg，0.081mmol）。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后部分浓缩以除去有机溶剂。将所得的水层用H2O稀释，用1N的盐酸酸化至pH1。水层用DCM萃取。用饱和盐水洗涤有机层，干燥（Na2SO4)，过滤，并在减压下浓缩。在硅胶上纯化（MeOH：DCM = 0:100至10:90），得到标题产物（21mg，47％），为白色固体： 1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.83 (s, 1H), 7.31 - 7.62 (m, 5H), 6.02 - 6.37 (m, 3H), 3.89 (br. s., 2H), 3.49 (s, 3H), 3.34 - 3.44 (m, 1H), 3.14 - 3.33 (m, 1H), 3.02 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 2.70 - 2.90 (m, 1H), 2.27 - 2.66 (m, 3H), 1.76 - 1.96 (m, 1H), 0.49 - 0.93 (m, 13H); ES-LCMS m/z 515 (M-H)-。
实施例 15：2-({3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酰基}氨基)乙磺酸三氟乙酸盐
向3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酸（50mg，0.109mmol）在2:1的DCM/THF混合物（6 mL）的溶液中加入EDC（25.03mg，0.131mmol），DMAP（15.95mg，0.131mmol）和牛磺酸（16.34mg，0.131mmol）。反应混合物在室温下搅拌过夜，然后在水和DCM之间分配。用饱和盐水洗涤有机层，干燥（Na2SO4)，过滤，并在减压下浓缩。用HPLC（用含有0.05％TFA-H2O和0.05％TFA-MeCN的MeCN/H2O洗脱）纯化，得到标题化合物（4.6mg，7％，TFA盐），为白色固体： 1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.40 - 8.17 (m, 6H), 6.59 (br. s., 1H), 6.46 (br. s., 1H), 5.79 - 6.18 (m, 1H), 3.05 - 4.00 (m, 7H), 1.68 - 2.97 (m, 12H), 1.34-1.38 (m, 3H), 0.62 - 1.12 (m, 6H); ES-LCMS m/z 567 (M+H)+。
实施例 16：N-{3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酰基}-2-甲基丙氨酸
步骤1：向3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酸（50mg，0.109mmol）的DCM（4 mL）溶液中加入DIPEA（0.057 mL，0.326mmol），HATU（62.0mg，0.163mmol）和α-氨基异丁酸甲酯盐酸盐（20.05mg，0.131mmol）。将反应混合物在室温下搅拌过夜，并在水和DCM之间分配。用饱和盐水洗涤有机层，干燥（Na2SO4)，过滤，并在减压下浓缩。在硅胶上纯化（MeOH：DCM = 0:100至10:90），得到N-{3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酰基}-2-甲基丙氨酸甲酯（56.8mg，89％），为透明油状物：ES-LCMS m/z 559 (M+H)+。
步骤2：向N-{3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酰基}-2-甲基丙氨酸甲酯（54mg，0.097mmol）在2:1:1的THF/MeOH/H2O混合物（8 mL）中的溶液中加入氢氧化锂（23.15mg，0.966mmol）。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后减压浓缩以除去有机溶剂。将所得的水层用H2O稀释，用1N的盐酸酸化至pH为1。水层用DCM萃取。用饱和盐水洗涤有机层，干燥（Na2SO4)，过滤，并在减压下浓缩。在硅胶上纯化（MeOH：DCM = 0:100至10:90），得到标题化合物（40mg，72％），为白色固体： 1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.82 (s, 1H), 7.29 - 7.55 (m, 5H), 6.11 (s, 1H), 6.01 (s, 1H), 5.87 (s, 1H), 3.48 (s, 3H), 3.38 (d, J = 14.8 Hz, 2H), 3.06 (d, J = 14.8 Hz, 2H), 2.84 - 2.99 (m, 3H), 2.78 (s, 1H), 2.37 - 2.55 (m, 2H), 2.17 (br. s., 1H), 1.83 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 1.51 (s, 3H), 1.48 (s, 3H), 1.00 - 1.34 (m, 9H), 0.86 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.80 (t, J = 7.1 Hz, 4H); ES-LCMS m/z 545 (M+H)+。
实施例 17：3-({3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酰基}氨基)戊二酸三氟乙酸盐
步骤1：向3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酸（100mg，0.218mmol）的DCM（6 mL）溶液中加入DIPEA（0.190 mL，1.088mmol）和HATU（165mg，0.435mmol）。将反应混合物在室温下搅拌20分钟，然后用3-氨基戊二酸二乙酯（66.3mg，0.326mmol）处理。反应混合物在室温下搅拌过夜，然后在减压下浓缩。在硅胶上纯化（EtOAc：己烷=1：3至3:1），得到3-({3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酰基}氨基)戊二酸二乙酯（137mg，96％），为无色油状物： ES-LCMS m/z 645 (M+H)+。
步骤2：向3-({3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酰基}氨基)戊二酸二乙酯（137mg，0.212mmol）在1：1：1的THF/MeOH/H2O混合物（6 mL）的溶液中加入氢氧化锂（25.4mg，1.062mmol）。将反应混合物在室温下搅拌过夜，用乙酸酸化至pH为3-4，并在减压下浓缩。通过RP-HPLC（用含有0.05％TFA-H2O和0.05％TFA-MeCN的MeCN/H2O洗脱）纯化，得到标题产物（92mg，60％，TFA盐），为白色固体：1H NMR (MeOH-d4) δ ppm 7.90 (s, 1H), 7.48 - 7.62 (m, 5H), 6.44 (s, 1H), 6.37 (s, 1H), 4.33 - 4.48 (m, 1H), 3.81 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 3.57 (s, 3H), 3.46 (d, J = 15.6 Hz, 2H), 2.78 - 3.03 (m, 2H), 2.60 - 2.75 (m, 1H), 2.48 - 2.58 (m, 4H), 2.37 - 2.46 (m, 2H), 1.86 - 2.13 (m, 2H), 1.49 - 1.67 (m, 1H), 1.33-1.39 (m, 3H), 0.96 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.87 (t, J = 7.0 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 589 (M+H)+。
实施例 18：2,2'-({3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酰基}亚氨基)二乙酸
步骤1：向3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酸（50mg，0.109mmol）在2:1的DCM/THF混合物（6 mL）中的溶液中加入DMAP（39.9mg，0.326mmol），EDC（62.6mg，0.326mmol）和2,2'-亚氨基二乙酸二乙酯（41.2mg，0.218mmol）。反应混合物在室温下搅拌过夜，然后在水和DCM之间分配。用饱和盐水洗涤有机层，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩。用硅胶（EtOAc：己烷= 10:90至50:50）进行纯化，得到2,2'-({3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酰基}亚氨基)二乙酸二乙酯（44.8mg，65％），为透明油状物：ES-LCMS m/z 631 (M+H)+。
步骤2：向2,2'-({3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酰基}亚氨基)二乙酸二乙酯（44.8mg，0.071mmol）在1：1：1的THF/MeOH/H2O混合物（9 mL）中的溶液中加入氢氧化锂（85mg，3.55mmol）。将反应混合物在室温下搅拌过夜，用1N盐酸酸化至pH为1，并在减压下浓缩。通过HPLC（用含有0.05％TFA-H2O和0.05％TFA-MeCN的MeCN/H2O洗脱）纯化，得到标题产物（23mg，53％，TFA盐），为白色固体：1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.84 (s, 1H), 7.61 - 7.75 (m, 2H), 7.37 - 7.59 (m, 3H), 6.54 (br. s., 1H), 6.42 (s, 1H), 3.96 - 4.25 (m, 2H), 3.72 - 3.88 (m, J = 8.6 Hz, 2H), 3.23 - 3.70 (m, 11H), 2.97 - 3.13 (m, 1H), 2.50 - 2.95 (m, 2H), 2.31 - 2.48 (m, J = 14.1 Hz, 1H), 1.69 - 2.09 (m, 3H), 0.55 - 1.45 (m, 8H); ES-LCMS m/z 575 (M+H)+。
实施例 19：3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]-1-丙醇
向3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙酸（100mg，0.218mmol）的冰冷的THF（5 mL）溶液中加入硼烷-THF复合物（0.653 mL，0.653mmol）。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后滴加MeOH淬灭。将反应混合物搅拌30分钟，然后在减压下浓缩。将残留物吸收于MeOH并再次在减压下蒸发。残余物用硅胶纯化（MeOH：DCM = 0:100至10:90），得到为无色油状物的标题化合物（96mg，94％）： 1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.84 (s, 1H), 7.26 - 7.48 (m, 5H), 6.11 (s, 1H), 6.01 (s, 1H), 3.58 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.48 (s, 3H), 3.40 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 3.00 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 2.56 - 2.75 (m, 2H), 2.02 - 2.25 (m, 1H), 1.69 - 1.92 (m, 3H), 0.99 - 1.52 (m, 14H), 0.86 (t, J = 7.3 Hz, 3H), 0.80 (t, J = 7.0 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 446 (M+H)+。
实施例 20：3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]-1-丙磺酸
向(3R,5R)-8-(3-溴丙基)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂 1,1-二氧化物（70mg，0.138mmol）在1：1的EtOH/H2O混合物（10 mL）中的溶液中加入亚硫酸钠（868mg，6.88mmol）。将反应混合物搅拌回流过夜，冷却至室温，部分在减压下浓缩以除去有机溶剂。然后将水层用1N盐酸酸化至pH为1。水层用DCM萃取。用饱和盐水洗涤合并的有机层，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩。在硅胶上纯化（MeOH：DCM = 0:100至20:80），得到为白色固体的标题化合物（27.2mg，38％）： 1H NMR (CDCl3) δ ppm (br. s., 1H), 7.16 - 7.60 (m, 5H), 6.06 (br. s., 2H), 2.33 - 3.63 (m, 14H), 0.47 - 2.26 (m, 12H); ES-LCMS m/z 510 (M+H)+。
实施例 21：{3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙基}膦酸三氟乙酸盐
第1步：向亚磷酸二乙酯（119mg，0.859mmol）的THF（5 mL）的溶液中加入氢化钠（27.5mg，0.687mmol）。将反应混合物搅拌30分钟，然后滴加3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙基甲磺酸酯（90mg，0.172mmol）的THF（5 mL）。反应混合物在室温下搅拌过夜，然后在减压下浓缩。残余物在1N盐酸和EtOAc之间分配。用饱和盐水洗涤有机层，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩。用硅胶（EtOAc：己烷= 10:90至100:0）进行纯化，得到{3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙基}膦酸二乙酯（55mg，53％），为白色固体：ES-LCMS m/z 566 (M+H)+。
步骤2：向{3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙基}膦酸二乙酯（50mg，0.088mmol）的DCM（5 mL）溶液中加入溴代三甲基甲硅烷（0.115 mL，0.884mmol）。反应混合物在室温下搅拌过夜，然后在减压下浓缩。通过RP-HPLC（用含有0.05％TFA-H2O和0.05％TFA-MeCN的MeCN/H2O洗脱）纯化，得到标题化合物（25mg，43％，TFA盐），为白色固体： 1H NMR (MeOH-d4) δ ppm 7.90 (s, 1H), 7.39 - 7.60 (m, 5H), 6.42 (s, 1H), 6.32 (s, 1H), 3.79 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 3.55 (s, 3H), 3.37 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 2.73 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.51 - 2.66 (m, 1H), 1.75 - 2.10 (m, 4H), 1.48 - 1.72 (m, 3H), 1.20 - 1.45 (m, 3H), 0.99 - 1.13 (m, 1H), 0.95 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.86 (t, J = 7.0 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 510 (M+H)+。
实施例 22：2-({3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙基}氨基)乙磺酸三氟乙酸盐
向3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丙基甲磺酸酯（90mg，0.172mmol）的DMF（5mL）溶液中加入碳酸钾（238mg，1.719mmol）和牛磺酸（108mg，0.859mmol）。反应混合物在60℃下搅拌过夜，冷却至室温，用1N盐酸酸化至pH1，并在减压下浓缩。通过RP-HPLC（用含有0.05％TFA-H2O和0.05％TFA-MeCN的MeCN/H2O洗脱）纯化，得到为白色固体的标题化合物（22mg，15％，TFA盐）： 1H NMR (MeOH-d4) δ ppm 7.42 - 7.65 (m, 5H), 6.48 (s, 1H), 6.34 (s, 1H), 3.77 (d, J = 15.4 Hz, 1H), 3.58 (s, 3H), 3.47 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 2.95 - 3.12 (m, 4H), 2.51 - 2.88 (m, 3H), 1.84 - 2.11 (m, 4H), 1.54 - 1.69 (m, 7.4 Hz, 1H), 1.23 - 1.45 (m, 3H), 1.00 - 1.10 (m, 1H), 0.95 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.87 (t, J = 6.8 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 553 (M+H)+。
实施例 23：4-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丁酸三氟乙酸盐
将4-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丁腈（40mg，0.088mmol）和37％盐酸（4 mL）的混合物在100℃下搅拌过夜，冷却至室温，并在减压下浓缩。加入MeOH将残余物转移到烧瓶中，并在减压下浓缩该溶液。通过RP-HPLC（用含有0.05％TFA-H2O和0.05％TFA-MeCN的MeCN/H2O洗脱）纯化，得到痕量所需的酸。多数为酸的甲酯，其在过量氢氧化锂的存在下被水解。通过RP-HPLC（含有0.05％TFA的MeCN/H2O）纯化，得到为白色固体的标题化合物（10mg，18％，TFA盐）： 1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.87 (s, 1H), 7.41 - 7.65 (m, 5H), 6.59 (s, 1H), 6.32 (s, 1H), 3.65 (d, J = 15.6 Hz, 1H), 3.45 (d, J = 15.4 Hz, 1H), 2.83 - 2.97 (m, 1H), 2.40 - 2.66 (m, 2H), 2.26 - 2.38 (m, 1H), 1.62 - 2.25 (m, 5H), 1.26 - 1.47 (m, 3H), 0.96 (t, J = 7.4 Hz, 4H), 0.86 (t, J = 7.0 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 474 (M+H)+。
实施例 24：4-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丁酰胺三氟乙酸盐
向4-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]丁腈（40mg，0.088mmol）的DMSO（4 mL）溶液中加入碳酸钾（48.6mg，0.352mmol）。将反应烧瓶浸入冰冷却的H2O浴中，逐滴加入过氧化氢（0.449 mL，4.40mmol）。将反应混合物温热至室温并搅拌2小时。加入H2O，并通过过滤收集固体。通过RP-HPLC（用含有0.05％TFA-H2O和0.05％TFA-MeCN的MeCN/H2O洗脱）纯化，得到为白色固体的标题化合物（32mg，58％，TFA盐）： 1H NMR (MeOH-d4) δ ppm 7.76 (s, 1H), 7.25 - 7.51 (m, 5H), 6.17 (s, 1H), 6.01 (s, 1H), 3.40 - 3.55 (m, 4H), 3.06 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 2.48 - 2.69 (m, 2H), 2.07 - 2.29 (m, 3H), 1.67 - 1.91 (m, 3H), 1.49 - 1.64 (m, 1H), 1.35 - 1.48 (m, 1H), 0.99 - 1.34 (m, 5H), 0.86 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.78 (t, J = 6.8 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 475 (M+H)+。
实施例 25：N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}甘氨酸
步骤1：向(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛 1,1-二氧化物（8.35g，20.09mmol）的DCE（300mL）溶液中加入甘氨酸1,1-二甲基乙酯（3.95g，30.1mmol）和乙酸（5.75mL，100mmol）。反应混合物在室温下搅拌1小时，然后用NaHB(OAc)3（10.65g，50.2mmol）处理。反应混合物在室温下搅拌1小时，然后用碳酸钠水溶液处理，并搅拌1小时。分离各层，水层用DCM萃取。合并的有机层用H2O，饱和盐水洗涤，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩。用硅胶进行纯化（EtOAc /己烷= 20:80至60:40），得到N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}甘氨酸1,1-二甲基乙酯（8.0g，71％），为白色固体； 1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.98 (s, 1H), 7.30 - 7.48 (m, 5H), 6.17 (s, 1H), 6.08 (s, 1H), 3.78 (s, 2H), 3.54 (s, 3H), 3.43 (d, J = 14.9 Hz, 1H), 3.29 (d, J = 2.0 Hz, 2H), 3.03 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 2.10 - 2.24 (m, 1H), 1.78 - 1.92 (m, 2H), 1.39 - 1.57 (m, 12H), 1.03 - 1.38 (m, 5H), 0.90 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.84 (t, J = 7.0 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 531 (M+H)+。
步骤2：向N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}甘氨酸1,1-二甲基乙酯（6.7g，12.62mmol）在1,4-二噁烷（5mL）的混合物中加入在1,4-二噁烷（95mL，379mmol）中的4N 氯化氢。反应混合物在室温下搅拌16小时然后浓缩。将残留物吸收于H2O（200mL），并将该溶液用乙酸调节至pH4-5。白色沉淀物通过过滤收集。加入乙腈，并将该混合物加热回流以溶解所有的固体，冷却至室温并存储2天，无结晶。然后将该溶液在减压下蒸发，直至固体从溶液中沉淀出来。然后将混合物加热以溶解所有的固体，然后静置30分钟。通过多次过滤收集固体，合并，并在50℃下高真空干​​燥3小时，得到为白色固体的标题化合物（5.0g，82％）： 1H NMR (MeOH-d4) δ ppm 8.06 (s, 1H), 7.25 - 7.50 (m, 5H), 6.30 (s, 1H), 6.06 (s, 1H), 4.22 (s, 2H), 3.58 (s, 3H), 3.50 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 3.42 (s, 2H), 3.08 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 2.12 - 2.31 (m, 1H), 1.67 - 1.86 (m, 1H), 1.49 - 1.64 (m, 1H), 1.34 - 1.48 (m, 1H), 1.01 - 1.34 (m, 4H), 0.87 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.78 (t, J = 6.8 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 475 (M+H)+。
实施例 26：3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸
方法1，步骤1：向(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1 二氧化物（683mg，1.644mmol）的1,2-二氯乙烷（20mL）溶液中加入3-氨基戊二酸二乙酯（501mg，2.465mmol）和乙酸（0.188mL，3.29mmol）。该反应混合物在室温下搅拌1小时，然后用NaHB(OAc)3（697mg，3.29mmol）处理。然后将反应混合物在室温下搅拌过夜，并用碳酸钾水溶液淬灭。用DCM萃取该混合物。用H2O，饱和盐水洗涤合并的有机层，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩，得到3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸二乙酯（880mg，88％），为浅黄色油状物： MS-LCMS m/z 603 (M+H)+。
方法1，步骤2：向3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸二乙酯（880mg，1.460mmol）在1：1：1的THF/MeOH/H2O混合物（30mL）中的溶液中加入氢氧化锂（175mg，7.30mmol）。反应混合物在室温下搅拌过夜，然后在减压下浓缩。加入水和MeCN以溶解残余物。将该溶液用乙酸酸化至pH 4-5，部分在减压下浓缩以除去MeCN，并静置30分钟。通过过滤收集白色沉淀物并在50℃下减压干燥过夜，得到为白色固体的标题化合物（803mg，100％）： 1H NMR (MeOH-d4) δ ppm 8.05 (s, 1H), 7.27 - 7.49 (m, 5H), 6.29 (s, 1H), 6.06 (s, 1H), 4.25 (s, 2H), 3.60 - 3.68 (m, 1H), 3.58 (s, 3H), 3.47 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 3.09 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 2.52 - 2.73 (m, 4H), 2.12 - 2.27 (m, 1H), 1.69 - 1.84 (m, 1H), 1.48 - 1.63 (m, 1H), 1.05 - 1.48 (m, 5H), 0.87 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.78 (t, J = 7.0 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 547 (M+H)+。
方法2：将3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸二甲酯（~600g）在THF（2.5L）和MeOH（1.25L）中的溶液在冰浴中冷却，在20分钟内滴加NaOH（206g，5.15mol）的水溶液（2.5L）（10-22℃的反应温度）。搅拌20分钟后，将溶液浓缩（以除去THF/MeOH），并用浓HCl酸化至pH约4。在搅拌下老化沉淀产物，过滤收集并在空气中干燥过夜。第二批600g 3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸二甲酯以类似的方式皂化。将合并的粗产物（~2mol理论值）悬浮于CH3CN（8L）和水（4L），并将搅拌的混合物加热至65℃。形成的溶液在2小时内冷却至10℃，同时用所需结晶产物的真实样品引晶几次。将所得的浆料于10℃搅拌2小时，并通过过滤收集固体。用水洗涤滤饼并在空气中干燥过夜。进一步在55℃下于真空烘箱中干燥至恒重，得到3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸的晶体，为白色固体（790g）。
方法3：(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1 二氧化物（1802克，4.336摩尔）和3-氨基戊二酸二甲酯（1334克，5.671摩尔）在iPrOAc（13.83kg）中制成浆料。向反应器提供氮气气氛。在20℃下向浆料中加入冰醋酸（847mL，14.810摩尔），并搅拌该混合物直至观察到完全溶解。接着在超过7分钟的时间内将三乙酰氧基硼氢化钠固体（1424克，6.719摩尔）加入反应。将反应保持在20℃下共3小时，此时间样品的LC分析表明(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1 二氧化物的完全消耗。接着，将水（20.36kg）和盐水（4.8kg）加入到反应器中。将反应器的内容物搅拌10分钟，然后静置10分钟。底部的水层然后被除去并做废物处理。将预先制备的10％（wt/wt）的碳酸氢钠水溶液（22.5L）加入到反应器中。将内容物搅拌10分钟，然后静置10分钟。底部的水层然后被除去并做废物处理。向反应器中加入第二次洗涤的10％（wt/wt）碳酸氢钠水溶液（22.5L）。将反应器中的内容物搅拌10分钟，静置10分钟。底部的水层然后被除去并做废物处理。然后将反应器的内容物在真空蒸馏下减少至油状。向油中加入THF（7.15kg）和MeOH（3.68kg）。将反应器的内容物加热至55℃，并剧烈搅拌直至观察到完全溶解。然后将反应器的内容物冷却至25℃，随后加入先前制备的NaOH水溶液[6.75kg的水和2.09kg的NaOH（50％（wt）（wt）溶液）]并冷却夹套。在添加NaOH溶液的过程中将反应器的内容物保持在42℃以下。在添加NaOH之后将温度再调整至25℃，HPLC分析表明反应完全之前，将反应搅拌75分钟。将庚烷（7.66kg）加入到反应器中，将内容物搅拌10分钟，然后静置10分钟。用一个干净的Nalgene瓶收集水层。庚烷层从反应器中除去并做废物处理。然后将水溶液返回到反应器中，反应器准备真空蒸馏。在真空蒸馏过程中收集约8.5升馏出物。释放反应器的真空，将内容物的温度再调整至25℃。在40分钟内将1N HCl溶液（30.76kg）加入到反应器中。将所得的浆料在25℃下搅拌10小时，然后在2小时内冷却至5℃。浆料在5℃下保持4小时，然后将产物通过真空过滤收集在滤罐中。然后将滤饼用冷水（5°C）（6kg）洗涤。产物滤饼在真空下于滤罐中空气干燥约72小时。然后将产物转移到三个干燥托盘，并在真空烘箱中在50℃下干燥79小时。然后，真空烘箱的温度提高到65℃，持续另外的85小时。将产物一次卸载得到2568g（93.4％产率）中间体级别的3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸，为灰白色固体。
中间体级别的3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸（4690g）在70℃下溶解于冰乙酸（8850g）和纯化水（4200g）的混合物中。将所得溶液通过5微米增泽过滤器转移，同时保持温度高于30℃。将反应器和过滤器用冰醋酸（980g）和纯化水（470g）的混合物漂洗。将溶液温度调节到50℃。将过滤的纯化水（4230g）加入到该溶液中。然后将混浊的溶液用结晶的3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸（10g）接种。保持温度在50℃，以控制的速率（在130分钟内11030g）将过滤的纯化水加入到浆料中。以更快的控制的速率（在100分钟内20740g）将另外的过滤的纯化水加入到浆料中。最后向浆料中加入过滤的纯化水（3780g）。然后将该浆料在135分钟内以线性速率冷却至10℃。通过鲨鱼皮滤纸过滤该固体以除去母液。滤饼然后用过滤的乙酸乙酯（17280g）冲洗，然后通过过滤除去洗涤液。所得的湿滤饼分离装入托盘，并在50℃下真空干燥23小时。然后将温度提高到60℃继续干燥额外的24小时，得到结晶的3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸（3740g，产率79.7％），为白色固体。
向结晶的3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸（3660g）和过滤的纯化水（3.6L）的浆料中加入过滤的冰醋酸（7530g）。将温度升高到60℃，并观察到充分的溶解。将温度降低至55℃，过滤，并用纯化水（3.2L）处理。然后溶液用结晶的3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸（18g）接种，得到浆料。过滤的纯化水以控制的速率（140分钟内9L）加入到浆料中。然后以更快的控制的速率（190分钟内18L）将另外的过滤的纯化水加入到浆料中。然后将该浆料在225分钟内以线性速率冷却至10℃。通过鲨鱼皮滤纸过滤该固体以除去母液。滤饼然后用过滤的纯化水（18L）冲洗，通过过滤除去洗涤液。所得的湿滤饼分离装入托盘，并在60℃下真空干燥18.5小时，得到结晶的3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸（3330g，产率90.8％），为白色固体，将其用于如下总结的结晶度分析。
实施例 27：N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-L-天冬氨酸三氟乙酸盐
步骤1：向(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1 二氧化物（33mg，0.079mmol）的1,2-二氯乙烷（3mL）溶液中加入L-天冬氨酸二甲酯（12.80mg，0.079mmol）和NaHB(OAc)3（33.7mg，0.159mmol）。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后用碳酸钾水溶液处理。分离各层，水层用DCM萃取。用H2O，饱和盐水洗涤合并的有机层，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩。通过RP-HPLC（用含有0.05％TFA-H2O和0.05％TFA-MeCN的MeCN/H2O洗脱）纯化两次，得到N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-L-天冬氨酸二甲酯（21mg，46％），为无色油状物：ES-LCMS m/z 561 (M+H)+。
步骤2：向N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-L-天冬氨酸二甲酯（21mg，0.037mmol）在1：1：1的THF/MeOH/H2O混合物（3mL）的溶液中加入氢氧化锂（17.94mg，0.749mmol）。将反应混合物在室温下搅拌过夜，用三氟乙酸处理，并浓缩至1mL。通过RP-HPLC（用含有0.05％TFA-H2O和0.05％TFA-MeCN的MeCN/H2O洗脱）纯化，得到标题化合物（25.4mg，89％，TFA盐），为白色固体：1H NMR (MeOH-d4) δ ppm 8.10 (s, 1H), 7.32 - 7.56 (m, 5H), 6.40 (s, 1H), 6.17 (s, 1H), 4.38 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 4.19 (dd, J = 6.8, 4.3 Hz, 1H), 3.55 - 3.66 (m, 4H), 3.23 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 2.88 - 3.13 (m, 2H), 2.38 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 1.79 - 1.95 (m, 1H), 1.62 - 1.77 (m, 1H), 1.42 - 1.58 (m, 1H), 1.03 - 1.40 (m, 4H), 0.91 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.81 (t, J = 6.8 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 533 (M+H)+。
实施例 28：N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-D-天门冬酸三氟乙酸盐
步骤1：向(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1 二氧化物（33mg，0.079mmol）的1,2-二氯乙烷（3mL）溶液中加入D-天冬氨酸二甲酯（12.80mg，0.079mmol）和NaHB(OAc)3（33.7mg，0.159mmol）。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后用碳酸钾水溶液处理。分离各层，水层用DCM萃取。用H2O，饱和盐水洗涤合并的有机层，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩。通过RP-HPLC（含有0.05％TFA的MeCN/H2O）纯化，得到N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-D-天冬氨酸二甲酯（22mg，48％），为无色油状物：ES-LCMS m/z 561 (M+H)+。
步骤2：向N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-D-天冬氨酸二甲酯（22mg，0.039mmol）在1：1：1的THF/MeOH/H2O混合物（3mL）的溶液中加入氢氧化锂（18.79mg，0.785mmol）。将反应混合物在室温下搅拌过夜，用三氟乙酸处理，并减压浓缩。通过RP-HPLC（含有0.05％TFA的MeCN/H2O）纯化，得到标题化合物（10.9mg，37％，TFA盐），为白色固体： 1H NMR (MeOH-d4) δ ppm 8.10 (s, 1H), 7.33 - 7.54 (m, 5H), 6.42 (s, 1H), 6.18 (s, 1H), 4.31 - 4.45 (m, 2H), 4.13 - 4.24 (m, 1H), 3.58 - 3.67 (m, 4H), 2.92 - 3.14 (m, 2H), 1.80 - 1.96 (m, 1H), 1.58 - 1.78 (m, 1H), 1.43 - 1.57 (m, 1H), 1.04 - 1.41 (m, 4H), 0.91 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.83 (t, J = 6.8 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 533 (M+H)+。
实施例 29：N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-N-甲基-β-丙氨酸三氟乙酸盐
步骤1：向(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1 二氧化物（200mg，0.481mmol）的1,2-二氯乙烷（10mL）溶液中加入β-丙氨酸1,1-二甲基乙酯（175mg，0.963mmol）和乙酸（0.276mL，4.81mmol）。搅拌1小时后，NaHB(OAc)3（255mg，1.203mmol）加入到反应混合物中。将反应混合物在室温下搅拌1小时，然后用碳酸钠水溶液处理。分离各层，水层用DCM萃取。用H2O，饱和盐水洗涤合并的有机层，干燥（Na2SO4），过滤，减压下浓缩得到N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-β-丙氨酸1,1-二甲基乙酯（210mg，80％），为油状物：ES-LCMS m/z 559 (M+H)+。
步骤2：向N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-β-丙氨酸1,1-二甲基乙酯（210mg，0.289mmol）中加入4N的氯化氢（3.61mL，在1,4-二噁烷中的4N溶液，14.46mmol）。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后减压浓缩。通过RP-HPLC（含有0.05％TFA的MeCN/H2O）纯化，得到标题化合物（143mg，82％，TFA盐），为白色固体： 1H NMR (CDCl3) δ ppm 8.13 (s, 1H), 7.35 - 7.62 (m, 5H), 6.35 (s, 1H), 6.24 (s, 1H), 4.12 - 4.42 (m, 2H), 3.62 (s, 3H), 3.33 - 3.52 (m, 2H), 3.25 (br. s., 2H), 2.79 (br. s., 2H), 2.35 (br. s., 1H), 1.89 - 2.10 (m, 1H), 1.68 - 1.82 (m, 1H), 1.51 - 1.68 (m, 1H), 1.18 - 1.46 (m, 3H), 1.00 - 1.17 (m, 1H), 0.92 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.86 (t, J = 6.8 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 503 (M+H)+。
实施例 30 和 31：4-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)丁酸三氟乙酸盐和1-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-2-吡咯烷酮三氟乙酸盐
步骤1：向(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1-二氧化物（200mg，0.481mmol）的1,2-二氯乙烷（5mL）溶液中加入4-氨基丁酸甲酯（111mg，0.722mmol）和乙酸（0.276mL，4.81mmol）。将反应混合物在室温下搅拌过夜，用NaHB(OAc)3（255mg，1.203mmol）处理，并搅拌1小时。将反应混合物用碳酸钠水溶液处理，并用DCM萃取。用H2O，饱和盐水洗涤有机层，干燥（Na2SO4），过滤，减压浓缩。用硅胶（EtOAc：己烷= 20:80至60:40）纯化，得到4-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)丁酸（210mg，83％），为浅黄色油状物：ES-LCMS m/z 517 (M+H)+。
步骤2：向4-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)丁酸（210mg，0.406mmol）在1：1：1的THF/MeOH/H2O混合物（3mL）的溶液中加入氢氧化锂（9.73mg，0.406mmol）。将反应混合物在室温下搅拌过夜，并减压浓缩。通过RP-HPLC（用含有0.05％TFA-H2O和0.05％TFA-MeCN的MeCN/H2O洗脱）纯化，得到实施例30（45.6mg，44％）三氟乙酸盐，为白色固体：1H NMR (DMSO-d6) δ ppm 8.67 (br. s., 2H), 8.09 (s, 1H), 7.30 - 7.56 (m, 5H), 6.18 (s, 1H), 5.97 (s, 1H), 4.16 (br. s., 2H), 3.63 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 3.49 (s, 3H), 3.09 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 2.88 - 3.01 (m, 2H), 2.33 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 1.99 - 2.15 (m, 1H), 1.67 - 1.90 (m, 3H), 1.35 - 1.61 (m, 2H), 0.96 - 1.32 (m, 4H), 0.81 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.76 (t, J = 6.6 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 503 (M+H)+ 和实施例31（47.8mg，48％）三氟乙酸盐，为白色固体：1H NMR (DMSO-d6) δ ppm 7.69 (s, 1H), 7.30 - 7.61 (m, 5H), 6.22 (br. s., 1H), 6.04 (br. s., 1H), 4.23 - 4.44 (m, 2H), 3.49 (s, 3H), 2.12 - 2.34 (m, 3H), 1.75 - 2.02 (m, 3H), 1.35 - 1.74 (m, 2H), 1.11 - 1.34 (m, 3H), 0.94 - 1.10 (m, 1H), 0.64 - 0.89 (m, 6H); ES-LCMS m/z 485 (M+H)+。
实施例 32：N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-2-甲基丙氨酸三氟乙酸盐
步骤1：向(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1-二氧化物（200mg，0.481mmol）的1,2-二氯乙烷（300mL）溶液中加入2-甲基丙氨酸甲酯（113mg，0.963mmol）和乙酸（0.138mL，2.406mmol）。将反应混合物在室温下搅拌1小时。加入NaHB(OAc)3（255mg，1.203mmol），反应混合物在室温下搅拌1小时。将碳酸钠水溶液加入反应混合物，然后用DCM萃取。用H2O，饱和盐水洗涤有机层，干燥（Na2SO4），过滤，减压浓缩。用硅胶（EtOAc：己烷= 20:80至60:40）纯化，得到N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-2-甲基丙氨酸甲酯（230mg，91％）：ES-LCMS m/z 517 (M+H)+。
步骤2：向N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-2-甲基丙氨酸甲酯（230mg，0.245mmol）在1：1：1的THF/MeOH/H2O混合物（15mL）的溶液中加入氢氧化锂（5.6mg，0.245mmol）。将反应混合物在室温下搅拌过夜，并部分减压浓缩以除去有机溶剂。将残余物用三氟乙酸酸化。通过RP-HPLC（用含有0.05％TFA-H2O和0.05％TFA-MeCN的MeCN/H2O洗脱）纯化，得到标题化合物（102mg，66％，TFA盐），为白色固体：1H NMR (DMSO-d6) δ ppm 8.10 (s, 1H), 7.28 - 7.55 (m, 5H), 6.18 (s, 1H), 6.00 (s, 1H), 4.14 (d, J = 17.6 Hz, 2H), 3.64 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 3.49 (s, 3H), 3.13 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 2.46 - 2.55 (m, 1H), 2.00 - 2.23 (m, 1H), 1.70 - 1.86 (m, 1H), 1.35 - 1.49 (m, 1H), 0.98 - 1.31 (m, 4H), 0.82 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.77 (t, J = 6.8 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 503 (M+H)+。
实施例 33：[2-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)乙基]膦酸三氟乙酸盐
步骤1：向(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1-二氧化物（50mg，0.120mmol）的1,2-二氯乙烷（3mL）溶液中加入（2-氨基乙基）膦酸二乙酯（109mg，0.602mmol）。将反应混合物搅拌3小时，然后用NaHB(OAc)3（128mg，0.602mmol）处理。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后用H2O和1N盐酸溶液处理。将得到的混合物在减压下浓缩。通过RP-HPLC（用含有0.05％TFA-H2O和0.05％TFA-MeCN的MeCN/H2O洗脱）纯化，得到[2-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)乙基]膦酸二乙酯（70mg，71％），为白色固体：ES-LCMS m/z 581 (M+H)+。
步骤2：向[2-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)乙基]膦酸二乙酯（70mg，0.121mmol）的DCM（3mL）溶液中加入溴代三甲基甲硅烷（0.065mL，0.499mmol）。将反应混合物在室温下搅拌过夜。加入另外的溴代三甲基甲硅烷（0.16mL，1.21mmol）。将反应混合物搅拌过夜，在减压下浓缩，并用H2O处理。通过RP-HPLC（用含有0.05％TFA-H2O和0.05％TFA-MeCN的MeCN/H2O洗脱）纯化，得到标题产物（51mg，55％，TFA盐），为白色固体：1H NMR (MeOH-d4) δ ppm 8.09 (s, 1H), 7.30 - 7.53 (m, 5H), 6.39 (s, 1H), 6.15 (s, 1H), 4.12 - 4.35 (m, 2H), 3.57 - 3.65 (m, 4H), 3.14 - 3.24 (m, 3H), 2.23 - 2.40 (m, 1H), 1.76 - 2.06 (m, 3H), 1.59 - 1.75 (m, 1H), 1.38 - 1.55 (m, 1H), 1.00 - 1.38 (m, 4H), 0.90 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.81 (t, J = 7.0 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 525 (M+H)+。
实施例 34：[2-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)乙基]膦酸氢乙酯三氟乙酸盐
向{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}胺（50mg，0.120mmol）的DMF（4mL）溶液中加入碳酸钾（49.8mg，0.360mmol）和（2-溴乙基）膦酸二乙酯（17.65mg，0.072mmol）。将反应混合物在90℃加热过夜，冷却至室温，减压浓缩。向残余物中加入三氟乙酸，并将该溶液在减压下浓缩。通过RP-HPLC（含0.05％TFA的MeCN/H2O）纯化，得到标题产物（34mg，95％，TFA盐），为白色固体：1H NMR (MeOH-d4) δ ppm 8.04 (s, 1H), 7.27 - 7.59 (m, 5H), 6.38 (s, 1H), 6.04 - 6.21 (m, 2H), 3.88 - 4.24 (m, 4H), 3.50 - 3.68 (m, 4H), 3.16 - 3.35 (m, 3H), 2.20 - 2.49 (m, 1H), 1.78 - 1.95 (m, 1H), 1.60 - 1.75 (m, 1H), 1.41 - 1.58 (m, 1H), 1.01 - 1.36 (m, 7H), 0.89 (t, J = 7.6 Hz, 3H), 0.81 (t, J = 6.8 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 553 (M+H)+。
实施例 35：2-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)乙磺酸铵盐
向{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}胺（100mg，0.240mmol）的DMF（4mL）溶液中加入2-溴乙烷磺酸钠盐（25.3mg，0.120mmol）。将反应混合物在70℃下搅拌过夜，冷却至室温，用三氟乙酸酸化，并在减压下浓缩。通过RP-HPLC（含0.05％TFA的MeCN/H2O）纯化，然后通过RP-HPLC（用水中含有0.5％氢氧化铵的MeCN/H2O洗脱）进一步纯化，得到标题化合物（27.6mg，54％，铵盐），为白色固体：1H NMR (MeOH-d4) δ ppm 8.03 (s, 1H), 7.19 - 7.54 (m, 5H), 6.30 (s, 1H), 6.06 (s, 1H), 4.20 (s, 2H), 3.58 (s, 3H), 3.49 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 3.30 - 3.38 (m, 2H), 2.96 - 3.15 (m, 3H), 2.09 - 2.31 (m, 1H), 1.71 - 1.88 (m, J = 5.1 Hz, 1H), 1.49 - 1.70 (m, 1H), 1.34 - 1.49 (m, 1H), 1.05 - 1.32 (m, 4H), 0.87 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.78 (t, J = 6.6 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 525 (M+H)+。
实施例 36：2,2'-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}亚氨基)二乙磺酸三氟乙酸盐
向{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}胺（25mg，0.060mmol）的DMF（2mL）溶液中加入2-溴乙烷磺酸钠盐（127mg，0.600mmol）。将反应混合物在70℃下搅拌过夜，冷却至室温，用乙酸酸化至pH3-4，并在减压下浓缩。通过RP-HPLC（含0.05％TFA的MeCN/H2O）纯化，得到标题产物（13mg，24％，TFA盐），为白色固体： 1H NMR (MeOH-d4) δ ppm 8.23 (s, 1H), 7.42 - 7.80 (m, 5H), 6.68 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 4.72 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 4.40 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 3.95 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 3.41 - 3.83 (m, 8H), 2.60 - 2.85 (m,1H), 1.85 - 2.27 (m, 2H), 1.57 - 1.80 (m, 1H), 1.22 - 1.53 (m, 3H), 0.71 - 1.17 (m, 7H); ES-LCMS m/z 633 (M+H)+。
实施例 37：2-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)-2-氧代乙磺酸
向N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-2-氯乙酰胺（55mg，0.112mmol）在1：1的乙醇/H2O混合物（6mL）的溶液中添加亚硫酸钠（141mg，1.115mmol）。反应混合物在80℃下搅拌过夜，冷却至室温，用乙酸酸化至pH3-4，并在减压下浓缩。用硅胶（MeOH：DCM = 0:100至30:70）纯化，得到为灰白色固体的标题化合物（32mg，52％）： 1H NMR (MeOH-d4) δ ppm 7.94 (s, 1H), 7.16 - 7.68 (m, 5H), 6.28 (br. s., 1H), 6.06 (br. s., 1H), 4.39 (br. s., 2H), 3.63 - 3.78 (m, 2H), 3.43 - 3.59 (m, 4H), 2.06 - 2.49 (m, 1H), 1.01 - 1.94 (m, 7H), 0.89 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.81 (t, J = 6.6 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 539 (M+H)+。
实施例 38：[2-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]膦酸三氟乙酸盐
步骤1：将N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-2-氯乙酰胺（82mg，0.166mmol）和亚磷酸三乙酯（2.9mL，16.63mmol）的混合物在135℃下搅拌过夜，冷却至室温，并减压下浓缩。[2-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]膦酸二乙酯（99mg，98％）粗品无需进一步纯化在下一个步骤中使用：ES-LCMS m/z 595 (M+H)+。
步骤2：向[2-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]膦酸二乙酯（99mg，0.166mmol）的DCM（5mL）的溶液中加入溴代三甲基甲硅烷（0.065mL，0.499mmol），并将反应混合物在室温下搅拌过夜。加入另外的溴代三甲基甲硅烷（0.216mL，1.66mmol），将反应混合物搅拌过夜。然后将反应混合物在减压下浓缩，并用H2O处理。通过RP-HPLC（含0.05％TFA的MeCN/H2O）纯化，得到为灰白色固体的标题化合物（69mg，63％，TFA盐）：1H NMR (MeOH-d4) δ ppm 8.01 (s, 1H), 7.35 - 7.75 (m, 5H), 6.51 (s, 1H), 6.42 (s, 1H), 4.43 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 4.24 (d, J = 14.1 Hz, 1H), 3.85 (d, J = 15.4 Hz, 1H), 3.66 (br. s., 1H), 3.61 (s, 3H), 2.57 - 2.87 (m, 3H), 1.96 - 2.13 (m, 2H), 1.56 - 1.75 (m, 1H), 1.22 - 1.49 (m, 3H), 0.99 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.89 (t, J = 6.8 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 539 (M+H)+。
实施例 39：N-[2-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]甘氨酸三氟乙酸盐
步骤1：向N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-2-氯乙酰胺（50mg，0.101mmol）的DMF（3mL）溶液中加入碳酸钾（56.1mg，0.406mmol），甘氨酸甲酯盐酸盐（63.7mg，0.507mmol）和碘化钾（67.3mg，0.406mmol）。将反应混合物在60℃下搅拌过夜，冷却至室温，并在H2O和EtOAc之间分配。有机层用饱和盐水洗涤，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩。用硅胶（MeOH：DCM = 0:100至20:80）纯化，得到N-[2-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]甘氨酸甲酯（50mg，90％），为无色油状物：ES-LCMS m/z 546 (M+H)+。
步骤2：向N-[2-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]甘氨酸甲酯（50mg，0.092mmol）在1：1：1的THF/MeOH/H2O混合物（9mL）中的溶液中加入氢氧化锂（54.9mg，2.291mmol）。将反应混合物在室温下搅拌过夜，在减压下浓缩以除去有机溶剂，并用三氟乙酸酸化。通过RP-HPLC（含0.05％TFA的MeCN/H2O）纯化，得到为白色固体的标题化合物（15mg，21％，TFA盐）：1H NMR (MeOH-d4) δ ppm 7.90 (s, 1H), 7.25 - 7.57 (m, 5H), 6.33 (s, 1H), 6.16 (s, 1H), 4.39 (s, 2H), 3.89 (d, J = 5.9 Hz, 3H), 3.61 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 3.55 (s, 3H), 2.27 - 2.49 (m, 1H), 1.79 - 1.98 (m, 1H), 1.62 - 1.79 (m, 1H), 1.42 - 1.58 (m, 1H), 1.17 - 1.38 (m, 3H), 0.99 - 1.17 (m, 1H), 0.90 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.82 (t, J = 6.8 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 532 (M+H)+。
实施例 40：(2-{[2-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]氨基}乙基)膦酸三氟乙酸盐
步骤1：向N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-2-氯乙酰胺（50mg，0.101mmol）的DMF（3mL）溶液中加入碳酸钾（28.0mg，0.203mmol）和(2-氨基乙基)膦酸二乙酯（20.21mg，0.112mmol）。将反应混合物在60℃下搅拌过夜。加入碘化钾（33.7mg，0.203mmol），将反应混合物在60℃搅拌过夜，冷却至室温，并在H2O和EtOAc之间分配。有机层用饱和盐水洗涤，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩。用硅胶（MeOH：DCM = 0:100至20:80）纯化，得到(2-{[2-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]氨基}乙基)膦酸二乙酯（27mg，40％）为无色油状物：ES-LCMS m/z 638 (M+H)+。
步骤2：向(2-{[2-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]氨基}乙基)膦酸二乙酯（25mg，0.039mmol）的DCM（5mL）溶液中加入溴代三甲基甲硅烷（0.102mL，0.784mmol）。将反应混合物在室温下搅拌过夜，减压下浓缩，用1N盐酸酸化。将残余物在减压下浓缩，并通过RP-HPLC（含0.05％TFA的MeCN/H2O）纯化，得到为白色固体的标题化合物（15mg，46％，TFA盐）：1H NMR (MeOH-d4) δ ppm 7.96 (s, 1H), 7.33 - 7.61 (m, 5H), 6.41 (s, 1H), 6.22 (s, 1H), 4.25 - 4.50 (m, 2H), 3.75 - 3.84 (m, 2H), 3.69 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 3.58 (s, 3H), 3.34 (d, J = 15.2 Hz, 1H), 3.05 - 3.22 (m, 2H), 2.42 - 2.65 (m, 1H), 1.71 - 2.02 (m, 4H), 1.51 - 1.69 (m, 1H), 1.14 - 1.44 (m, 4H), 0.97 - 1.14 (m, 1H), 0.92 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.83 (t, J = 6.8 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 582 (M+H)+。
实施例 41：3-{[2-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]氨基}戊二酸三氟乙酸盐
步骤1：向N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-2-氯乙酰胺（55mg，0.112mmol）的DMF（3mL）溶液中加入碳酸钾（61.7mg，0.446mmol）和碘化钾（74.1mg，0.446mmol）。将反应混合物在60℃下搅拌过夜，冷却至室温，并在H2O和EtOAc之间分配。有机层用饱和盐水洗涤，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩。用硅胶（MeOH：DCM = 0:100至10:90）纯化，得到3-{[2-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]氨基}戊二酸二乙酯（75mg，100％），为黄色油状物：ES-LCMS m/z 660 (M+H)+。
步骤2：向3-{[2-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)-2-氧代乙基]氨基}戊二酸二乙酯（73.9mg，0.112mmol）在1：1：1的THF/MeOH/H2O混合物（6mL）中的溶液中加入氢氧化锂（134mg，5.60mmol）。将反应混合物在室温下搅拌过夜，用乙酸酸化，并在减压下浓缩。通过RP-HPLC（含0.05％TFA的MeCN/H2O）纯化，得到为白色固体的标题化合物：1H NMR (MeOH-d4) δ ppm 7.95 (s, 1H), 7.34 - 7.66 (m, 5H), 6.45 (s, 1H), 6.30 (s, 1H), 4.41 (d, J = 3.3 Hz, 2H), 3.82 - 4.00 (m, 3H), 3.74 (d, J = 15.4 Hz, 1H), 3.58 (s, 3H), 3.46 (d, J = 15.4 Hz, 1H), 2.85 (d, J = 5.7 Hz, 3H), 2.45 - 2.72 (m, 2H), 1.77 - 2.11 (m, 2H), 1.49 - 1.72 (m, 1H), 1.24 - 1.45 (m, 3H), 0.97 - 1.13 (m, 1H), 0.93 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.86 (t, J = 6.8 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 604 (M+H)+。
实施例 42：3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)-3-氧代-1-丙磺酸铵盐
步骤1：向{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}胺（150mg，0.233mmol）的DCM（10mL）冰冷的溶液中加入吡啶（0.132mL，1.629mmol）和3-氯丙酰氯（0.045mL，0.465mmol）。将反应混合物在室温下搅拌4小时，然后在水和DCM之间分配。通过硅胶纯化（MeOH：DCM = 0:100至3:97），得到N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-3-氯丙酰胺（105mg，89％），为无色油状物：ES-LCMS m/z 508 (M+H)+。
步骤2：向N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-3-氯丙酰胺（150mg，0.296mmol）在1：1的乙醇/H2O混合物（10mL）的溶液中添加亚硫酸钠（186mg，1.479mmol）。将反应混合物在60℃搅拌过夜，冷却至室温，用乙酸酸化，并在减压下浓缩。通过RP-HPLC（含0.5％NH4OH的Me​​CN/H2O）纯化，得到为白色固体的标题化合物（27mg，15％，氨盐）： 1H NMR (MeOH-d4) δ ppm 8.31 - 8.49 (m, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.13 - 7.55 (m, 5H), 6.20 (s, 1H), 6.04 (s, 1H), 4.18 - 4.37 (m, 2H), 3.51 (s, 3H), 3.44 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 2.95 - 3.11 (m, 3H), 2.57 - 2.73 (m, 2H), 2.08 - 2.31 (m, 1H), 1.67 - 1.85 (m, 1H), 1.48 - 1.66 (m, 1H), 1.32 - 1.46 (m, 1H), 1.03 - 1.32 (m, 4H), 0.86 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.78 (t, J = 6.8 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 553 (M+H)+。
实施例 43：3-({[(3R,5S)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸
步骤1：将(3R,5S)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1-二氧化物（100mg，0.241mmol）和3-氨基戊二酸二甲酯（63.2mg，0.361mmol）在1,2-二氯乙烷（4mL）中的溶液搅拌30分钟，然后用乙酸（0.069mL，1.203mmol）处理。将反应混合物搅拌1小时，用NaHB(OAc)3（102mg，0.481mmol）处理，在室温下搅拌过夜，并用2N碳酸钠水溶液淬灭。搅拌30分钟后，将混合物用DCM萃取。用饱和盐水洗涤有机层，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩。用硅胶（EtOAc/己烷= 1：4至1：1）纯化，得到3-({[(3R,5S)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸二甲酯（92.7mg，67％），为无色油状物： 1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.99 (s, 1H), 7.21 - 7.52 (m, 5H), 6.12 (s, 1H), 6.06 (s, 1H), 3.74 (d, J = 5.3 Hz, 2H), 3.66 (s, 6H), 3.50 (s, 3H), 3.23 - 3.44 (m, 2H), 3.05 (d, J = 14.6 Hz, 1H), 2.56 (d, J = 6.2 Hz, 4H), 2.26 - 2.44 (m, 1H), 1.67 - 1.87 (m, 2H), 1.03 - 1.56 (m, 7H), 0.89 (t, J = 6.6 Hz, 3H), 0.76 (t, J = 7.2 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 575 (M+H)+。
步骤2：向3-({[(3R,5S)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸二甲酯（92mg，0.160mmol）在1：1：1的THF/MeOH/H2O混合物中的溶液中加入氢氧化锂一​​水合物（67.2mg，1.601mmol）。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后在减压下部分浓缩以除去有机溶剂。水相用1N盐酸调节至pH5。经过滤收集白色沉淀并在空气中干燥，得到为白色固体的标题化合物（42mg，45％）： 1H NMR (DMSO-d6) δ ppm 7.94 (s, 1H), 7.41 (d, J = 4.3 Hz, 4H), 7.26 - 7.38 (m, 1H), 6.10 (s, 1H), 5.93 (br. s., 1H), 3.80 (s, 2H), 3.55 (d, J = 14.9 Hz, 1H), 3.08 (d, J = 14.9 Hz, 1H), 2.57 - 2.76 (m, 1H), 2.31 - 2.47 (m, 3H), 2.04 - 2.21 (m, 1H), 1.55 - 1.82 (m, 1H), 1.07 - 1.51 (m, 7H), 0.86 (t, J = 6.6 Hz, 3H), 0.66 (t, J = 7.2 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 547 (M+H)+。
实施例 44：N-{[(3R,5S)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}甘氨酸三氟乙酸盐
步骤1：向(3R,5S)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1-二氧化物（100mg，0.241mmol）的1,2-二氯乙烷（4mL）溶液中加入甘氨酸1,1-二甲基乙酯（47.3mg，0.361mmol）和乙酸（0.069mL，1.203mmol）。将反应混合物在室温下搅拌1小时，用NaHB(OAc)3（102mg，0.481mmol）处理，在室温下搅拌过夜。向反应混合物中加入2M碳酸钠水溶液并用DCM萃取。用饱和盐水洗涤合并的有机层，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩。用硅胶（EtOAc/己烷= 1：4至1：1）纯化，得到N-{[(3R,5S)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}甘氨酸1,1-二甲基乙酯（35.8mg，28.0％），为无色油状物：1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.97 (s, 1H), 7.30 - 7.58 (m, 6H), 6.15 (s, 1H), 6.07 (s, 1H), 3.77 (s, 2H), 3.52 (s, 3H), 3.42 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 3.27 (s, 2H), 3.06 (d, J = 14.7 Hz, 1H), 2.26 - 2.48 (m, 1H), 1.72 - 1.92 (m, 2H), 1.06 - 1.41 (m, 8H), 0.90 (t, J = 6.2 Hz, 3H), 0.78 (t, J = 7.2 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 531 (M+H)+。
步骤2：N-{[(3R,5S)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}甘氨酸1,1-二甲基乙酯（34mg，0.064mmol）的混合物用在1,4-二噁烷中的4N氯化氢（1.600mL，6.40mmol）处理。反应混合物在室温下搅拌过夜，然后在减压下浓缩。通过RP-HPLC（用含有0.05％TFA-H2O和0.05％TFA-MeCN的MeCN/H2O洗脱）纯化，得到为白色固体的标题化合物（35mg，77％，TFA盐）：1H NMR (DMSO-d6) δ ppm 9.01 - 9.40 (m, 2H), 8.07 (s, 1H), 7.17 - 7.56 (m, 5H), 6.16 (s, 1H), 5.95 (br. s., 1H), 4.10 - 4.31 (m, 2H), 3.84 (br. s., 2H), 3.62 (d, J = 14.3 Hz, 1H), 3.56 - 3.72 (m, 1H), 3.48 (s, 3H), 3.11 (d, J = 14.6 Hz, 1H), 2.09 - 2.26 (m, 1H), 2.07 (s, 1H), 1.62 - 1.84 (m, 1H), 1.00 - 1.56 (m, 6H), 0.86 (t, J = 6.6 Hz, 3H), 0.68 (t, J = 7.0 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 475 (M+H)+。
实施例 45：{[(3R,5S)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}膦酸三氟乙酸盐
步骤1：向咪唑（130mg，1.916mmol）的DCM（5mL）冰冷溶液中加入三苯基膦（251mg，0.958mmol），然后滴加溴（0.049mL，0.958mmol）。缓慢加入[(3R,5S)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲醇（200mg，0.479mmol）的DCM（5mL）溶液。反应混合物在0℃下搅拌2小时。加入亚硫酸钠水溶液，分离所得到的混合物。用DCM萃取水层，干燥（Na2SO4）合并的有机层，过滤并浓缩。使用硅胶（EtOAc/己烷=1：10至1：2）纯化，得到(3R,5S)-8-(溴甲基)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂1,1-二氧化物（149mg，64％），为白色固体：1H NMR (CDCl3) δ ppm 8.06 (s, 1H), 7.28 - 7.54 (m, 5H), 6.17 (s, 1H), 6.07 (s, 1H), 4.38 - 4.62 (m, 2H), 3.58 (s, 3H), 3.44 (d, J = 14.9 Hz, 1H), 3.09 (d, J = 14.9 Hz, 1H), 2.38 (dd, J = 14.9, 7.4 Hz, 1H), 1.81 (dd, J = 14.7, 7.4 Hz, 1H), 1.11 - 1.59 (m, 8H), 0.91 (t, J = 6.6 Hz, 3H), 0.78 (t, J = 7.2 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 482 (M+H)+。
步骤2：向(3R,5S)-8-(溴甲基)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂1,1-二氧化物（149mg，0.310mmol）的甲苯（10mL）溶液中添加亚磷酸三乙酯（0.163mL，0.930mmol）。将反应混合物加热回流过夜，冷却至室温，并在减压下浓缩。用硅胶（EtOAc：己烷= 50:50至100:0）纯化，得到{[(3R,5S)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}膦酸二乙酯（132mg，79％），为澄清的油状物：1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.97 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 7.28 - 7.50 (m, 5H), 6.13 (s, 1H), 6.04 (s, 1H), 3.88 - 4.25 (m, 5H), 3.51 (s, 3H), 3.40 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 3.10 - 3.27 (m, 2H), 3.03 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 2.37 (dd, J = 14.6, 7.4 Hz, 1H), 1.79 (dd, J = 14.6, 7.4 Hz, 1H), 1.41 - 1.58 (m, 2H), 1.10 - 1.40 (m, 12H), 0.89 (t, J = 6.8 Hz, 3H), 0.75 (t, J = 7.2 Hz, 3H)。
步骤3：向{[(3R,5S)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}膦酸二乙酯（132mg，0.246mmol）的DCM（5mL）的冰冷溶液中加入溴代三甲基甲硅烷（0.159mL，1.228mmol）。将反应混合物温热至室温，搅拌过夜，并在减压下浓缩。将残余物在水和DCM之间分配。用饱和盐水洗涤有机层，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩。通过RP-HPLC（用含有0.05％TFA-H2O和0.05％TFA-MeCN的MeCN/H2O洗脱）纯化，得到标题化合物（49mg，32％，TFA盐），为白色固体： 1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.87 (br. s., 1H), 7.31 - 7.70 (m, 5H), 5.95 - 6.46 (m, 2H), 3.46 - 3.62 (m, 3H), 3.20 - 3.43 (m, 2H), 2.38 - 2.90 (m, 2H), 1.76 (br. s., 1H), 1.07 - 1.53 (m, 5H), 0.96 (t, J = 6.6 Hz, 3H), 0.81 (t, J = 7.2 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 482 (M+H)+。
实施例 46：N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-4-羟基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}甘氨酸
(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-4-羟基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1-二氧化物（410mg，0.95mmol）和甘氨酸1,1-二甲基乙酯（187mg，1.43mmol）在DCM（210mL）中合并，并在室温下搅拌30分钟。该混合物用NaHB(OAc)3（403mg，1.90mmol）处理，并将该反应混合物在室温搅拌2天，此时间后LCMS表明转化为所需的产物。混合物在DCM和盐水之间分配，并分离各相。用DCM萃取水相，合并有机相，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩得到透明油状物。残余物在40g硅胶上通过20％至60％EtOAc /己烷洗脱纯化，得到叔丁基酯中间体，为透明油状物： LC-MS (ES+) m/z 547.40 [M+H]。
将中间体溶解于乙醚（20mL）中，并在室温下用4N HCl的二噁烷（20mL，66mmol）溶液处理。将混合物搅拌过夜，此时间后将混合物浓缩至干，并通过RP-HPLC（30×150 Sunfire柱；47.5mL/分钟；MeCN+0.05％TFA和H2O+0.05％TFA）纯化，得到N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-4-羟基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}甘氨酸（306mg，产率65.6％），为白色固体： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.79 (t, J=7.0 Hz, 3 H), 0.86 (t, J=7.3 Hz, 3 H), 1.01-1.53 (m, 5 H), 1.58-1.72 (m, 1 H), 1.78-1.92 (m, 1 H), 1.96-2.15 (m, 1 H), 3.28-3.45 (m, 2 H), 3.45 (s, 3 H), 3.74 (s, 1 H), 3.80-4.31 (m, 4 H), 6.18 (s, 1 H), 6.38 (s, 1 H), 7.33-7.40 (m, 1 H), 7.44 (t, J=7.4 Hz, 2 H), 7.47-7.69 (m, 2 H), 8.04 (s, 1 H), 8.14 (s, 1 H), 9.19 (br. s., 1 H), 9.34 (br. s., 1 H) (观察到一个额外的质子); LC-MS (ES-) m/z 489.4 [M-1]; LC-MS (ES+) m/z 491.3 [M+H]。
实施例 47：(2S)-2-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)-4-(甲磺酰基)丁酸
将溶解于TFA（3.4mL，44.6mmol）的N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-L-蛋氨酸1,1-二甲基乙酯（270mg，0.45mmol）在冰浴中冷却，滴加H2O2（100μL，0.982mmol）处理。混合物温热至22℃搅拌过夜，此时间后LCMS表明已完全转化成所需产物，同时含有非常少量的亚砜杂质。将反应混合物浓缩至干，并通过RP-HPLC纯化得到(2S)-2-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)-4-(甲磺酰基)丁酸（207mg，收率80％），为白色固体： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.75 (t, J=7.0 Hz, 3 H) 0.80 (t, J=7.4 Hz, 3 H) 0.97-1.28 (m, 4 H) 1.32-1.54 (m, 2 H) 1.68-1.80 (m, 1 H) 1.88-2.13 (m, 3 H) 2.59 (d, 1 H) 2.98 (s, 3 H) 3.06 (d, J=14.9 Hz, 1 H) 3.11-3.27 (m, 3 H) 3.44 (s, 3 H) 3.55 (d, J=15.0 Hz, 1 H) 3.66-3.74 (m, 1 H) 3.76-3.86 (m, 1 H) 5.94 (d, J=9.2 Hz, 1 H) 6.10 (s, 1 H) 7.27-7.37 (m, 1 H) 7.37-7.47 (m, 4 H) 8.00 (s, 1 H) (两个质子未观察到);LC-MS (ES+) m/z 581.3 [M+H]。
实施例 48：N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-N-羟基甘氨酸
将溶解于DCM（5mL）的N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}甘氨酸1,1-二甲基乙酯（80mg，0.15mmol）用m-CPBA（33.8mg，0.15mmol）处理，然后在22℃下搅拌16小时。将混合物用DCM稀释，并用10％Na2SO3水溶液搅拌15分钟。分离有机相，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩至干。将残余物在40g硅胶上通过30％至100％EtOAc /己烷洗脱纯化，得到两个没有继续鉴定的单独的产物。使用下面的步骤将这两个产物分别转化为标题化合物。
将溶解于DCM（1.5mL）和MeOH（1.5mL）的第一个产物（35mg，0.064mmol）在22℃下用乙酸（0.011mL，0.20mmol）和NaCNBH4（12mg，0.19mmol）处理2小时，此时间后LCMS表明彻底转化为叔丁酯中间体。加入三氟乙酸（4.95μL，0.064mmol），并将该混合物在22℃下搅拌16小时，此时间后LCMS表明转化为MW = 474和490的产物。将反应混合物浓缩至干，残余物通过RP-HPLC（30×50 Sunfire柱，流速为55mL/分钟；MeCN+0.05％TFA和H2O+0.05％TFA作为洗脱剂使用，8分钟内从10％到100％）纯化，得到N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-N-羟基甘氨酸（18.9mg，60.0％产率）：LC-MS (ES-) m/z 489.2 [M-1]. LC-MS (ES+) m/z 490.9 [M+H]。由于标题化合物的物理性质，该物质的1H NMR不可测定。
第二个产物（15mg，0.028mmol）在相似条件下处理，得到与上述制备的标题化合物相同的标题化合物：LC-MS (ES-) m/z 489.1 [M-1]. LC-MS (ES+) m/z 491.2 [M+H]。
实施例 49：N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-N-甲基甘氨酸铵盐
N-甲基甘氨酸1,1-二甲基乙酯盐酸盐（164mg，0.902mmol）在DCM（3mL）中的浆料在室温下用TEA（0.126mL，0.90mmol）处理15分钟，此时间后加入(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1-二氧化物（250mg，0.60mmol），并将混合物搅拌1小时。加入NaHB(OAc)3（255mg，1.20mmol），并在室温下将反应混合物搅拌16小时，此时间后LCMS表明转化为所需产物。将混合物在DCM和盐水之间分配，并分离各相。用DCM萃取水相，合并有机相，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩为透明油状物。残余物在40g硅胶上通过20％至60％EtOAc/己烷洗脱纯化，得到为白色固体的叔丁基酯中间体（196mg）： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.75 (t, J=7.0 Hz, 3 H) 0.80 (t, J=7.4 Hz, 3 H) 0.97-1.27 (m, 4 H) 1.33-1.55 (m, 2 H) 1.42 (s, 9 H) 1.67-1.79 (m, 1 H) 2.00-2.11 (m, 1 H) 2.26 (s, 3 H) 2.60 (d, J=9.8 Hz, 1 H) 3.06 (d, J=14.8 Hz, 1 H) 3.20 (s, 2 H) 3.42 (s, 3 H) 3.53 (d, J=14.8 Hz, 1 H) 3.57-3.68 (m, 2 H) 5.93 (d, J=9.8 Hz, 1 H) 6.09 (s, 1 H) 7.29-7.37 (m, 1 H) 7.41 (d, J=4.3 Hz, 4 H) 7.95 (s, 1 H)。
将该酯溶解于乙醚（20mL）中，并在室温下用4N HCl的二噁烷（20mL，80mmol）溶液处理。混合物搅拌过夜，此时间后LCMS表明约80％转化为酸。将反应混合物再搅拌24小时，此时间后LCMS表明转化完全。将混合物浓缩至干，并通过RP-HPLC（30×100 XBridge柱；乙腈+0.2％NH4OH和H2O+0.2％NH4OH用作溶剂系统；在8分钟内从10％到70％，100％到100％至10分钟）纯化，得到N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-N-甲基甘氨酸（130mg，产率44.2％）铵盐，为白色固体：1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.75 (t, J=7.0 Hz, 3 H) 0.80 (t, J=7.4 Hz, 3 H) 0.96-1.28 (m, 4 H) 1.32-1.53 (m, 2 H) 1.68-1.80 (m, 1 H) 1.99-2.11 (m, 1 H) 2.30 (s, 3 H) 2.62 (d, J=9.4 Hz, 1 H) 3.07 (d, J=14.9 Hz, 1 H) 3.24 (s, 2 H) 3.42 (s, 3 H) 3.54 (d, J=14.9 Hz, 1 H) 3.69 (s, 2 H) 5.93 (d, J=8.2 Hz, 1 H) 6.10 (s, 1 H) 7.33 (dq, J=8.5, 4.2 Hz, 1 H) 7.41 (d, J=4.3 Hz, 4 H) 7.98 (s, 1 H) (COOH质子未观察到); LC-MS (ES+) m/z 489.3 [M+H]。
实施例 50：3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-4-羟基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸三氟乙酸盐
将溶解于THF（5mL）的3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-4-羟基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸二甲酯（304mg，0.52mmol）在室温下用1M LiOH（5.15mL，5.15mmol）处理，然后剧烈搅拌2小时。将反应混合物浓缩除去THF，剩余的水部分用1N HCl处理，直到该物质产生沉淀（pH=5）。胶状混合物用DCM萃取三次，合并有机物，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩至干。残余物通过RP-HPLC（30×150 Sunfire柱，流速47.5mL/分钟；MeCN+0.05％TFA和H2O+0.05％TFA用作溶剂系统；在10分钟内从10％至80％）纯化，得到3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-4-羟基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸（273.5mg，收率94％），为白色固体。。1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.79 (t, J=7.1 Hz, 3 H), 0.85 (t, J=7.4 Hz, 3 H), 1.06-1.37 (m, 4 H), 1.37-1.50 (m, 1 H), 1.58-1.71 (m, 1 H), 1.78-1.93 (m, 1 H), 2.00-2.14 (m, 1 H), 2.67-2.88 (m, 4 H), 3.16 (s, 1 H), 3.26-3.45 (m, 2 H), 3.46 (s, 3 H), 3.71-3.85 (m, 1 H), 4.26 (br. s., 2 H), 6.16 (s, 1 H), 6.38 (s, 1 H), 7.32-7.40 (m, 1 H), 7.44 (t, J=7.5 Hz, 2 H), 7.46-7.65 (m, 2 H), 8.05 (s, 1 H), 8.16 (s, 1 H), 8.62 (br. s., 2 H), 12.92 (br. s., 2 H) (观察到2个额外的质子). LC-MS (ES-) m/z 561.20 [M-1]。
实施例 51：{2-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]乙基}膦酸双铵盐
溶解于乙醇（20mL）中的{(E)-2-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]乙烯基}膦酸二乙酯（240mg，0.44mmol）用10％钯/碳（46.5mg，0.44mmol）在23℃氢气气室处理过夜。滤去催化剂，将滤液浓缩至干，得到为澄清油状物的中间体膦酸酯。将残余物溶解在DCM（10mL）中，并在23℃搅拌下用溴代三甲基甲硅烷（0.227mL，1.75mmol）处理16小时。将反应混合物浓缩至干，然后用RP-HPLC（30x100 XBridge柱，含有0.2％NH4OH缓冲液的MeCN/H2O，在8分钟内从10至80至100％）纯化，得到{2-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]乙基}膦酸（88mg，40.7％产率）双铵盐，为白色固体：1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.70-0.85 (m, 6 H) 0.97-1.30 (m, 4 H) 1.29-1.64 (m, 4 H) 1.67-1.81 (m, 1 H) 2.00-2.12 (m, 1 H) 2.58 (d, J=9.8 Hz, 1 H) 2.63-2.79 (m, 2 H) 3.05 (d, J=14.9 Hz, 1 H) 3.39 (s, 3 H) 3.50 (d, J=14.9 Hz, 1 H) 5.92 (d, J=9.6 Hz, 1 H) 6.05 (s, 1 H) 7.26-7.36 (m, 1 H) 7.36-7.46 (m, 4 H) 7.65 (s, 1 H) (膦酸质子未观察到); LC-MS (ES+) m/z 496.3 [M+H]。
实施例 52：N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-L-丝氨酸双铵盐
将L-丝氨酸1,1-二甲基乙酯盐酸盐（238mg，1.20mmol）在DCM（8mL）中的浆料用TEA（0.168mL，1.20mmol）在室温下处理15分钟，此时间后加入(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1-二氧化物（250mg，0.60mmol），并将混合物搅拌1小时。加入NaHB(OAc)3（319mg，1.504mmol），并在室温下将反应混合物搅拌16小时。混合物在DCM和盐水之间分配，并分离各相。用DCM萃取水相，合并有机相，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩为透明油状物。残余物在22℃搅拌下用在二噁烷中的4N HCl（10mL，40.0mmol）处理过夜。将反应混合物浓缩至干，然后用RP-HPLC（30x100 XBridge柱，含有0.2％NH4OH缓冲液的MeCN/H2O，在8分钟内从10至70至100％）纯化，得到N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-L-丝氨酸（194mg，产率63.9％）双铵盐，为白色固体： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.75 (t, J=7.0 Hz, 3 H) 0.80 (t, J=7.4 Hz, 3 H) 0.96-1.29 (m, 4 H) 1.32-1.54 (m, 2 H) 1.66-1.82 (m, 1 H) 1.98-2.13 (m, 1 H) 2.62 (d, J=9.6 Hz, 1 H) 3.06 (d, J=15.0 Hz, 1 H) 3.16 (t, J=5.2 Hz, 1 H) 3.45 (s, 3 H) 3.56 (d, J=14.9 Hz, 1 H) 3.65 (qd, J=11.1, 5.2 Hz, 2 H) 3.79-3.94 (m, 2 H) 5.02 (br. s., 1 H) 5.94 (d, J=9.6 Hz, 1 H) 6.10 (s, 1 H) 7.28-7.37 (m, 1 H) 7.37-7.47 (m, 4 H) 8.02 (s, 1 H) (2个可交换的未观察到); LC-MS (ES+) m/z 505.3 [M+H]。
实施例 53：N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-L-胱氨酸双铵盐
溶解于THF（5mL）中的N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-L-胱氨酸二甲酯（167mg，0.25mmol）用1M LiOH（5mL，5.0mmol）处理，然后剧烈搅拌1小时。用1N HCl（5mL）中和该混合物，并浓缩以除去THF。将残留物用DCM萃取两次，合并有机相，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩至干。部分残余物通过RP-HPLC（30×100 XBridge柱；乙腈+0.2％NH4OH和H2O+0.2％NH4OH用作溶剂系统；在8分钟内从10％至70％）纯化，得到N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-L-胱氨酸（20.5mg，0.032mmol，12.81％收率），为白色固体： LC-MS (ES-) m/z 638.25 [M-1]; LC-MS (ES+) m/z 640.27 [M+H]。
实施例 54：{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-4-羟基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}膦酸
溶解于DCM（1mL）的{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-4-羟基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}膦酸二乙酯（48.5mg，0.088mmol）在室温下用溴（三甲基）硅烷（67.1mg，0.44mmol）处理16小时。将反应混合物浓缩至干，然后用RP-HPLC（30×75 Sunfire柱，55mL/分钟；MeCN+0.05％TFA和H2O+0.05％TFA用作溶剂系统；在11分钟内从10％至80％）纯化，得到{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-4-羟基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}膦酸（35.3mg，81％产率），为白色固体： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.79 (t, J=7.3 Hz, 3 H), 0.82-0.94 (m, 3 H), 1.05-1.52 (m, 5 H), 1.55-1.67 (m, 1 H), 1.77-2.02 (m, 1 H), 2.02-2.15 (m, 1 H), 2.83-3.10 (m, 2 H), 3.26-3.43 (m, 2 H), 3.38 (s, 3 H), 3.96 (s, 0 H), 6.09 (s, 1 H), 6.33 (s, 1 H), 7.30-7.38 (m, 1 H), 7.42 (t, J=7.6 Hz, 2 H), 7.45-7.58 (m, 2 H), 7.84 (d, J=2.5 Hz, 1 H), 8.00-8.05 (m, 1 H); LC-MS (ES-) m/z 496-38 [M-1]。LC-MS (ES+) m/z 498.18 [M+H]。
实施例 55：{(E)-2-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]乙烯基}膦酸双铵盐
{(E)-2-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]乙烯基}膦酸二乙酯（95mg，0.173mmol）溶解于DCM（4mL）中，并在22℃搅拌下用溴代三甲基甲硅烷（0.090mL，0.69mmol）处理过夜。将反应混合物浓缩至干，粗产物用RP-HPLC（30x100 XBridge柱，含有0.2％NH4OH缓冲液的MeCN/H2O，在8分钟内从10至50至100％）纯化，得到{(E)-2-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]乙烯基}膦酸（51mg，产率59.8％）双铵盐，为白色固体：1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.76 (t, J=7.0 Hz, 3 H) 0.81 (t, J=7.4 Hz, 3 H) 0.98-1.30 (m, 4 H) 1.31-1.55 (m, 2 H) 1.67-1.81 (m, 1 H) 2.00-2.14 (m, 1 H) 2.65 (d, J=10.2 Hz, 1 H) 3.08 (d, J=14.9 Hz, 1 H) 3.43 (s, 3 H) 3.55 (d, J=14.9 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=10.0 Hz, 1 H) 6.10 (s, 1 H) 6.31 (dd, J=17.4, 13.9 Hz, 1 H) 7.13 (dd, J=19.3, 17.8 Hz, 1 H) 7.28-7.37 (m, 1 H) 7.42 (d, J=4.5 Hz, 4 H) 7.93 (s, 1 H) (未观察到酸性质子)。大耦合常数(17.57 Hz)表明为E异构体; LC-MS (ES+) m/z 494.3 [M+H]。
实施例 56：N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-L-苏氨酸铵盐
将L-苏氨酸1,1-二甲基乙酯（255mg，1.20mmol）在DCM（3mL）中的浆料用TEA（0.168mL，1.20mmol）在室温下处理15分钟，此时间后加入(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1-二氧化物（250mg，0.602mmol），并将混合物搅拌1小时。加入NaHB(OAc)3（255mg，1.20mmol），并将反应混合物搅拌16小时。混合物在DCM和盐水之间分配，并分离各相。用DCM萃取水相，合并有机相，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩得到为透明油状物的中间体酯。残余物用在1,4-二噁烷中的4N HCl（10mL，40.0mmol）室温处理过夜。将混合物浓缩至干，然后用RP-HPLC（30x100 XBridge柱，含有0.2％NH4OH缓冲液的MeCN/H2O，在10分钟内从10至70至100％）纯化，得到N-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-L-苏氨酸（188mg，产率60.2％）铵盐，为白色固体： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.75 (t, J=7.0 Hz, 3 H) 0.80 (t, J=7.4 Hz, 3 H) 0.97-1.28 (m, 4 H) 1.16 (d, J=6.4 Hz, 3 H) 1.33-1.54 (m, 2 H) 1.68-1.79 (m, 1 H) 2.00-2.12 (m, 1 H) 2.59 (d, J=9.8 Hz, 1 H) 2.96 (d, J=4.7 Hz, 1 H) 3.06 (d, J=14.9 Hz, 1 H) 3.44 (s, 3 H) 3.54 (d, J=14.9 Hz, 1 H) 3.67-3.93 (m, 3 H) 5.94 (d, J=9.4 Hz, 1 H) 6.09 (s, 1 H) 7.29-7.37 (m, 1 H) 7.37-7.46 (m, 4 H) 8.03 (s, 1 H) (3个可交换质子未观察到); LC-MS (ES+) m/z 519.3 [M+H]。
实施例 57：1-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-D-脯氨酸铵盐
将D-脯氨酸1,1-二甲基乙酯（206mg，1.20mmol）和(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1-二氧化物（250mg，0.60mmol）在DCM（5mL）中合并，并将混合物搅拌1小时。加入NaHB(OAc)3（319mg，1.50mmol），并将反应混合物在室温下搅拌3天。混合物在DCM和水之间分配，并分离各相。用DCM萃取水相，合并有机相，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩为透明油状物。
残余物用TFA（4mL，51.9mmol）在室温下处理3小时。将反应混合物浓缩至干，然后用RP-HPLC（30x100 XBridge柱；MeCN+0.1％NH4OH和H2O+0.1％NH4OH用作溶剂系统；在8分钟内从10％至70％）纯化，得到1-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-D-脯氨酸铵盐（333mg，产率> 99％），为白色固体： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.75 (t, J=7.0 Hz, 3 H), 0.81 (t, J=7.4 Hz, 3 H), 0.95-1.31 (m, 4 H), 1.34-1.56 (m, 2 H), 1.67-2.14 (m, 5 H), 2.36-2.47 (m, 1 H), 2.58-2.81 (m, 1 H), 3.06 (d, J=15.0 Hz, 1 H), 3.14-3.27 (m, 1 H), 3.35-3.47 (m, 1 H), 3.49 (s, 3 H), 3.62 (d, J=15.0 Hz, 1 H), 4.17-4.30 (m, 1 H), 4.36 (d, J=13.1 Hz, 1 H), 4.50 (d, J=13.1 Hz, 1 H), 5.96 (br. s., 1 H), 6.17 (s, 1 H), 7.31-7.55 (m, 5 H), 8.09 (s, 1 H), 9.84 (br. s., 1 H); LC-MS (ES-) m/z 513.6 [M-1]。LC-MS (ES+) m/z 515.3 [M+H]。
实施例 58：N2 -{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-L-赖氨酸铵盐
将N6 -{[(1,1-二甲基乙基)氧基]羰基}-L-赖氨酸1,1-二甲基乙酯盐酸盐（890mg，2.63mmol）在DCM（10mL）中的浆料用TEA（0.380mL，2.73mmol）在室温下处理15分钟，此时间后加入(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1-二氧化物（600mg，1.444mmol），并将混合物搅拌1小时。加入NaHB(OAc)3（765mg，3.61mmol），并将反应混合物在室温下搅拌16小时。混合物在DCM和盐水之间分配，并分离各相。用DCM萃取水相，合并有机相，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩为透明油状物。残余物用在1,4-二噁烷中的4N HCl（10mL，40.0mmol）在22℃搅拌下处理过夜。将混合物浓缩至干，用RP-HPLC（30x100 XBridge柱，含有0.2％NH4OH缓冲液的MeCN/H2O，在10分钟内从10至80至100％）纯化，得到N2 -{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-L-赖氨酸（297mg，产率37.7％）铵盐，为粉红色泡沫体：1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.75 (t, J=7.0 Hz, 3 H) 0.80 (t, J=7.4 Hz, 3 H) 0.97-1.60 (m, 12 H) 1.67-1.80 (m, 1 H) 1.99-2.14 (m, 1 H) 2.54 (d, J=9.8 Hz, 1 H) 2.64-2.78 (m, 3 H) 3.06 (d, J=14.9 Hz, 1 H) 3.41 (s, 3 H) 3.50 (dd, J=15.0, 9.3 Hz, 2 H) 3.65 (d, J=15.0 Hz, 1 H) 5.94 (d, J=9.6 Hz, 1 H) 6.06 (s, 1 H) 7.32 (dq, J=8.5, 4.2 Hz, 1 H) 7.41 (d, J=4.5 Hz, 4 H) 7.99 (s, 1 H) (4个可交换质子未观察到); LC-MS (ES+) m/z 546.4 [M+H]。
实施例 59：N2 -{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-N6 ,N6 -二甲基-L-赖氨酸铵盐
将N6 ,N6 -二甲基-L-赖氨酸（250mg，1.187mmol）在DCM（3mL）中的浆料用TEA（0.165mL，1.19mmol）在室温下处理15分钟，此时间后加入(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1-二氧化物（250mg，0.60mmol）和THF（3.00mL），并将混合物搅拌1小时。加入NaHB(OAc)3（255mg，1.203mmol），并将反应混合物在室温下搅拌16小时。反应混合物在DCM和H2O之间分配，并分离各相。LCMS表明虽然有机相是醛和醇的混合物，水相显示所需产物的存在。分离水相，并用1M碳酸钠水溶液将pH调节到10。水层用DCM萃取5次，合并有机相，用MgSO4干燥，过滤，浓缩至干得到为棕色油状物的粗产物。粗产物用RP-HPLC（30x100 XBridge柱，含有0.2％NH4OH缓冲液的MeCN/H2O，在10分钟内从10至80至100％）纯化，得到N2 -{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-N6 ,N6 -二甲基-L-赖氨酸铵盐（23.5mg，产率6.8％），为白色固体：1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.75 (t, J=7.0 Hz, 3 H) 0.80 (t, J=7.4 Hz, 3 H) 0.98-1.66 (m, 12 H) 1.68-1.80 (m, 1 H) 1.99-2.09 (m, 1 H) 2.11 (s, 6 H) 2.14-2.23 (m, 2 H) 2.58 (d, J=9.8 Hz, 1 H) 2.99-3.09 (m, 2 H) 3.43 (s, 3 H) 3.54 (d, J=14.9 Hz, 1 H) 3.59-3.83 (m, 2 H) 5.94 (d, J=9.4 Hz, 1 H) 6.09 (s, 1 H) 7.28-7.38 (m, 1 H) 7.38-7.46 (m, 4 H) 8.02 (s, 1 H) (2个可交换质子未观察到); LC-MS (ES+) m/z 574.4 [M+H]。
实施例 60 和 61：[({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}亚氨基)二甲烷二基]双(膦酸)四铵盐和[({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}{[(乙氧基)(羟基)磷酰基]甲基}氨基)甲基]膦酸三铵盐
将溶解于DCM（5mL）中的[({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}亚氨基)二甲烷二基]双(膦酸)四乙酯（100mg，0.14mmol）在23℃用溴(三甲基)硅烷（171mg，1.116mmol）处理过夜。将该混合物浓缩至干，粗产物通过RP-HPLC纯化（碱性条件下的30×100 XBridge柱；MeCN+0.1％NH4OH和H2O+0.1％NH4OH用作溶剂系统；在6分钟内从10％至5​​5％，100％至100％到8分钟），得到[({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}亚氨基)二甲烷二基]双(膦酸)（45.4mg，53.8％产率）四铵盐：1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.75 (t, J=6.9 Hz, 3 H) 0.80 (t, J=7.5 Hz, 3 H) 0.97-1.29 (m, 4 H) 1.32-1.55 (m, 2 H) 1.68-1.81 (m, 1 H) 1.98-2.14 (m, 1 H) 2.58-2.77 (m, 5 H) 3.09 (d, J=14.8 Hz, 1 H) 3.41 (s, 3 H) 3.52 (d, J=15.0 Hz, 1 H) 3.75-3.96 (m, 2 H) 5.94 (d, J=8.6 Hz, 1 H) 6.08 (s, 1 H) 7.25-7.37 (m, 1 H) 7.36-7.49 (m, 4 H) 7.90 (s, 1 H) (未观察到膦酸质子); LC-MS (ES+) m/z 605.2 [M+H])和[({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}{[(乙氧基)(羟基)磷酰基]甲基}氨基)甲基]膦酸（10.8mg，12.2％收率）三铵盐：( 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.75 (t, J=7.0 Hz, 3 H) 0.80 (t, J=7.4 Hz, 3 H) 0.96-1.28 (m, 4 H) 1.08 (t, J=7.0 Hz, 3 H) 1.31-1.54 (m, 2 H) 1.68-1.80 (m, 1 H) 1.99-2.11 (m, 1 H) 2.61-2.79 (m, 5 H) 3.06 (d, J=14.9 Hz, 1 H) 3.41 (s, 3 H) 3.53 (d, J=14.9 Hz, 1 H) 3.64-3.76 (m, 2 H) 3.76-3.93 (m, 2 H) 5.94 (d, J=9.6 Hz, 1 H) 6.08 (s, 1 H) 7.26-7.36 (m, 1 H) 7.36-7.48 (m, 4 H) 7.94 (s, 1 H) (膦酸质子未观察到); LC-MS (ES+) m/z 633.3 [M+H])。
实施例 62：[({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)甲基]膦酸三氟乙酸盐
溶解于DCM（1mL）的[({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)甲基]膦酸二乙酯（36.3mg，0.064mmol）在23℃用溴(三甲基)硅烷（100mg，0.65mmol）处理18小时。将混合物浓缩至干，粗产物通过RP-HPLC（30×75，C18，5μm H2O Sunfire柱；55mL/min；MeCN+0.05％TFA和H2O+0.05％TFA用作溶剂系统；在8分钟内从10至100，100至100到10分钟）纯化，得到[({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)甲基]膦酸（6.0mg，产率18.4％）三氟乙酸盐，为白色玻璃状物： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.75 (t, J=7.0 Hz, 3 H) 0.81 (t, J=7.4 Hz, 3 H) 0.95-1.32 (m, 4 H) 1.33-1.56 (m, 2 H) 1.68-1.80 (m, 1 H) 1.98-2.12 (m, 1 H) 2.63-2.73 (m, 1 H) 3.00-3.13 (m, 2 H) 3.48 (s, 3 H) 3.57-3.66 (m, 2 H) 4.14-4.30 (m, 2 H) 5.86-6.02 (m, 1 H) 6.15 (s, 1 H) 7.31-7.50 (m, 5 H) 8.10 (s, 1 H) (3个可交换质子未观察到)；LC-MS (ES-) m/z 509.5 [M-1]。LC-MS (ES+) m/z 511.2 [M+H]。
实施例 63：1-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-L-脯氨酸铵盐
L-脯氨酸1,1-二甲基乙酯盐酸盐（206mg，1.203mmol）和(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1-二氧化物（250mg，0.60mmol）合并于DCM（5mL），并将该混合物搅拌1小时。加入NaHB(OAc)3（319mg，1.504mmol），并将反应混合物在室温下搅拌16小时。混合物在DCM和盐水之间分配，并分离各相。用DCM萃取水相，合并有机相，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩为透明油状物。残余物用在1,4-二噁烷中的4N盐酸（10mL，40.0mmol）在室温下处理过夜。将反应混合物浓缩至干，并通过RP-HPLC（30×100 XBridge柱；MeCN+0.2％NH4OH和H2O+0.2％NH4OH用作溶剂系统；在8分钟内从10％至70％，100％至100％到10分钟）纯化，得到1-{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}-L-脯氨酸（260mg，84％产率）铵盐，为白色固体：1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.75 (t, J=7.0 Hz, 3 H) 0.80 (t, J=7.4 Hz, 3 H) 0.96-1.29 (m, 4 H) 1.32-1.53 (m, 2 H) 1.64-1.94 (m, 4 H) 1.99-2.16 (m, 2 H) 2.62 (d, J=10.0 Hz, 1 H) 2.98-3.12 (m, 2 H) 3.26-3.37 (m, 2 H) 3.44 (s, 3 H) 3.55 (d, J=15.0 Hz, 1 H) 3.82 (d, J=14.1 Hz, 1 H) 3.89-4.00 (m, 1 H) 5.94 (d, J=9.2 Hz, 1 H) 6.10 (s, 1 H) 7.27-7.37 (m, 1 H) 7.42 (d, J=4.5 Hz, 4 H) 7.99 (s, 1 H) (未观察到COOH质子); LC-MS (ES+) m/z 513.5 [M+H]。
实施例 64：({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)(氧代)乙酸
步骤1：将{[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}胺（77mg，0.19mmol）的DCM（924μL）溶液在0℃用Et3N（56.7μL，0.407mmol），接着是氯(氧代)乙酸甲酯（18.7μL，0.203mmol）处理。将反应​​搅拌30分钟，然后温热至25℃，并另外搅拌1小时。LCMS表明92:8/产品：起始原料。加入另外的酰氯（2μL），然后在25℃下搅拌2小时。反应用DCM和水稀释，分离各层，并用DCM萃取水层（3×）。将合并的有机层干燥（MgSO4），过滤，并在真空下浓缩，得到({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)(氧代)乙酸甲酯（93mg，100％产率），其被用在下一步骤：1H NMR (CDCl3) δ 7.96 (s, 1H), 7.28-7.54 (m, 6H), 6.18 (s, 1H), 6.06 (s, 1H), 4.48 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.54 (s, 3H), 3.41 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 2.96-3.10 (m, 2H), 2.06-2.22 (m, 1H), 1.76-1.90 (m, 1H), 1.03-1.58 (m, 6H), 0.88 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.81 (t, J = 7.0 Hz, 3H); LC-MS (ES+) m/z 503 [M+H]。
步骤2：({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)(氧代)乙酸甲酯（93mg，0.185mmol）在THF（694μL）和H2O（231μL）中的溶液在0℃用1M LiOH水溶液（204μL，0.204mmol）处理。将反应​​在0℃下搅拌60分钟，然后温热至25℃并搅拌1小时。用EtOAc稀释反应，并用稀HCl酸化。分离各层，将水层用EtOAc（3×）萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥（MgSO4），过滤，和在真空下浓缩。残余物用己烷/Et2O研磨，然后通过过滤收集白色固体。得到的({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)(氧代)乙酸（79mg，产率87％）为白色固体： 1H NMR (DMSO-d6) δ ppm 9.37 (br. s., 1H), 7.75 (br. s., 1H), 7.27-7.65 (m, 5H), 6.17 (br. s., 1H), 5.92 (br. s., 1H), 4.16 - 4.38 (m, 2H), 3.48 (m 4H), 3.03 (br s, 1H), 1.95 - 2.26 (m, 1H), 1.62 - 1.88 (m, 1H), 0.94 - 1.61 (m, 6H), 0.46 - 0.95 (m, 6H); LC-MS (ES+) m/z 489 [M+H]。
实施例 65：3-({[3,3-二丁基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸三氟乙酸盐
步骤1：将3,3-二丁基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1-二氧化物（150mg，0.338mmol）和3-氨基戊二酸二甲酯（89mg，0.507mmol）在1,2-二氯乙烷（DCE）（3.36mL）中的溶液用乙酸（19.36μL，0.338mmol）处理，并在25℃下搅拌1小时。将反应用NaHB(OAc)3（71.7mg，0.338mmol）处理，然后搅拌15小时。将反应用另外的NaHB(OAc)3（71.7mg，0.338mmol）处理，然后搅拌4小时。将rxn倒入DCM和10％碳酸钠水溶液中。分离各层，并用DCM（2×）萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥（MgSO4），过滤，并在真空下浓缩。残余物用制备SiO2色谱法通过使用己烷：EtOAc为洗脱剂纯化，得到3-({[3,3-二丁基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸二甲酯（142mg，产率69.7％）。
步骤2：3-({[3,3-二丁基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸二甲酯（140mg，0.232mmol）在THF（1.05mL）和H2O（348μL）中的溶液在25℃下用1N LiOH（929μL，0.929mmol）处理，然后搅拌4小时。在减压下除去THF，然后将残余物冷冻干燥为白色固体。该物质通过RP-HPLC（30×150 mm，C18 5μm H2O Sunfire柱；MeCN+0.05％TFA和H2O+0.05％TFA用作溶剂系统；在10分钟内从10到100％）纯化，得到3-({[3,3-二丁基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸（81mg，产率50.6％）三氟乙酸盐，为白色无定形固体： 1H NMR (DMSO-d6) δ ppm 12.79 (br. s., 1H), 8.75 (br. s., 1H), 8.48 (br. s., 1H), 8.10 (s, 1H), 7.28 - 7.56 (m, 5H), 6.17 (s, 1H), 5.98 (s, 1H), 4.27 (br. s., 2H), 3.69 - 3.80 (m, 1H), 3.62 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 3.49 (s, 3H), 3.10 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 2.62 - 2.89 (m, 4H), 2.07 (br. s., 1H), 1.76 (br. s., 1H), 0.99-1.55 (m, 10H), 0.86 (t, J = 6.6 Hz, 3H), 0.76 (t, J = 6.9 Hz, 3H); LC-MS (ES+) m/z 575.1 [M+H]。
实施例 66：N-{[3,3-二丁基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}甘氨酸三氟乙酸盐
步骤1：将3,3-二丁基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1-二氧化物（150mg，0.338mmol）和甘氨酸1,1-二甲基乙酯（44.4mg，0.338mmol）在1,2-二氯乙烷（DCE）（3.36mL）中的溶液用乙酸（19.36μL，0.338mmol）处理，并在25℃下搅拌1小时。将反应用NaHB(OAc)3（71.7mg，0.338mmol）处理，然后搅拌5小时。加入另外的NaHB(OAc)3（71.7mg，0.338mmol），然后继续在25℃下搅拌4小时。将rxn倒入DCM和10％碳酸钠水溶液中。分离各层，并用DCM（2×）萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥（MgSO4），过滤，并在真空下浓缩。残余物用制备SiO2色谱法通过使用己烷：EtOAc为洗脱剂纯化，得到N-({[3,3-二丁基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}甘氨酸1,1-二甲基乙酯（100mg，产率52.9％）。
步骤2：N-({[3,3-二丁基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}甘氨酸1,1-二甲基乙酯（130mg，0.233mmol）在DCM（2mL）中的溶液在25℃下用过量的在1,4-二噁烷中的4M HCl（3.53mL，116mmol）处理，然后搅拌15小时。将反应在真空中浓缩，然后将残余物用Et2O研磨。通过过滤收集白色固体，然后用RP-HPLC（30×150 mm，C18 5μm H2O Sunfire柱；MeCN+0.05％TFA和H2O+0.05％TFA用作溶剂系统；在10分钟内从10到100％）纯化，得到N-{[3,3-二丁基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}甘氨酸（70mg，产率48.8％）三氟乙酸盐，为无定形白色固体：1H NMR (DMSO-d6) δ ppm 13.72 (br. s., 1H), 8.76 - 9.61 (m, 2H), 8.07 (s, 1H), 7.26 - 7.52 (m, 5H), 6.17 (s, 1H), 5.75 - 6.04 ( br s, 1H), 4.05 - 4.28 (m, 2H), 3.84 (br. s., 2H), 3.63 (d, J = 14.9 Hz, 1H), 3.48 (s, 3H), 3.10 (d, J = 14.9 Hz, 1H), 1.99 - 2.15 (m, 1H), 1.64 - 1.84 (m, 1H), 0.99 - 1.52 (m, 10H), 0.87 (t, J = 6.6 Hz, 3H), 0.75 (t, J = 6.9 Hz, 3H); LC-MS (ES+) m/z 503.1 [M+H]。
实施例 67：{[3,3-二丁基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}膦酸三氟乙酸盐
{[3,3-二丁基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}膦酸二乙酯（200mg，0.354mmol）在DCM（6.9mL）中的溶液在25℃下用TMSBr（213μL，1.640mmol）处理，然后在25℃下搅拌15小时。将反应在真空中浓缩，然后用Et2O/己烷研磨。通过过滤收集白色固体，然后用RP-HPLC（30×150 mm，C18 5μm H2O Sunfire柱；MeCN+0.05％TFA和H2O+0.05％TFA用作溶剂系统；在12分钟内从10到80％）纯化，得到{[3,3-二丁基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}膦酸（60mg，产率27.2％）三氟乙酸盐，为白色固体： 1H NMR (CDCl3) δ ppm 7.87 (br. s., 1H), 7.50-7.73 (m, 5H), 6.58 (s, 1H), 6.50 (s, 1H), 3.89 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 3.61 (s, 3H), 3.34-3.66 (m, 3H), 2.83 - 3.06 (m, 1H), 2.44 - 2.75 (m, 1H), 1.18-2.02 (m, 10H), 0.74 - 1.04 (m, 6H); LC-MS (ES+) m/z 510.4 [M+H]。
实施例 68：N-{[(3R,5R)-3-丁基-7-(二甲基氨基)-3-乙基-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}甘氨酸三氟乙酸盐
(3R,5R)-3-丁基-7-(二甲基氨基)-3-乙基-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1-二氧化物（22mg，0.051mmol）和甘氨酸1,1-二甲基乙酯（33.7mg，0.257mmol）合并于DCM（4mL）中，并在室温下搅拌1小时。混合物用NaHB(OAc)3（76mg，0.359mmol）处理，然后在室温下搅拌2天。反应混合物在DCM和盐水之间分配，并分离各相。用DCM萃取水相，合并有机相，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩为透明油状物。残余物在4g硅胶上通过30％至100％的EtOAc/己烷洗脱纯化，得到为透明油状物的叔丁基酯中间体（18mg，0.033mmol，产率64.2％）。LC-MS (ES+) m/z 544.34 [M+H]。在室温下用在1,4-二噁烷中的4N盐酸（1.283mL，5.13mmol）处理该酯。将混合物搅拌过夜，然后浓缩至干。该物质通过RP-HPLC（30×75 mm Sunfire柱；55mL/分钟；8分钟内MeCN在含0.05％TFA缓冲液的H2O中从10％到100％）纯化，得到N-{[(3R,5R)-3-丁基-7-(二甲基氨基)-3-乙基-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}甘氨酸三氟乙酸盐（17.1mg，0.024mmol，产率46.5％），为透明油状物： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.77 (t, J=7.0 Hz, 3 H), 0.82 (t, J=7.3 Hz, 3 H), 0.94 - 1.30 (m, 4 H), 1.36 - 1.63 (m, 2 H), 1.70 - 1.86 (m, 1 H), 2.02 - 2.20 (m, 1 H), 2.44 (s, 6 H), 3.16 (s, 1 H), 3.56 - 3.80 (m, 1 H), 3.91 (br. s., 2 H), 4.14 - 4.40 (m, 2 H), 5.94 (br. s., 1 H), 6.27 (s, 1 H), 7.16 - 7.65 (m, 5 H), 8.13 (s, 1 H), 9.35 (br. s., 2 H) (未观察到胺质子); LC-MS (ES-) m/z 486.4 [M-1]. LC-MS (ES+) m/z 488.3 [M+H]。
实施例 69：3-({[(3R,5R)-3-丁基-7-(二甲基氨基)-3-乙基-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸双铵盐
(3R,5R)-3-丁基-7-(二甲基氨基)-3-乙基-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲醛1,1-二氧化物（22mg，0.051mmol）和3-氨基戊二酸二甲酯（45.0mg，0.257mmol）合并于DCM（4mL）中，并在室温下搅拌1小时。混合物用NaHB(OAc)3（76mg，0.359mmol）处理，然后在室温下搅拌2天。混合物在DCM和盐水之间分配，并分离各相。用DCM萃取水相，合并有机相，用MgSO4干燥，过滤，并浓缩为透明油状物。残余物在40g硅胶上通过30％至100％的EtOAc/己烷洗脱纯化，得到为透明油状物的中间体二甲酯。LC-MS (ES+) m/z 588.29 [M+H]。该酯溶解在THF（0.5mL）中，并在室温下用1M LiOH（0.513mL，0.513mmol）处理。将该混合物搅拌过夜。混合物浓缩至干，并通过RP-HPLC（30×100 XBridge柱，流速55mL/分钟；8分钟内MeCN在含0.1％ NH4OH缓冲液的H2O中从10％到100％）纯化，得到3-({[(3R,5R)-3-丁基-7-(二甲基氨基)-3-乙基-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]甲基}氨基)戊二酸双铵盐（11.2mg，0.019mmol，产率36.7％），为白色固体：1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 0.75 (t, J=7.1 Hz, 3 H), 0.79 (t, J=7.6 Hz, 3 H), 0.94 - 1.29 (m, 4 H), 1.31 - 1.52 (m, 2 H), 1.65 - 1.82 (m, 1 H), 1.66 - 1.83 (m, 1 H), 1.96 - 2.15 (m, 1 H), 2.26 - 2.40 (m, 4 H), 2.47 (s, 6 H), 2.60 (d, J=9.8 Hz, 1 H), 3.06 (d, J=14.9 Hz, 1 H), 3.16 (t, J=6.2 Hz, 1 H), 3.52 (d, J=15.0 Hz, 1 H), 3.78 (s, 2 H), 5.88 (d, J=9.6 Hz, 1 H), 6.11 (s, 1 H), 7.26 - 7.35 (m, 1 H), 7.35 - 7.48 (m, 4 H), 7.94 (s, 1 H) (未观察到酸质子); LC-MS (ES-) m/z 558.3 [M-1]. LC-MS (ES+) m/z 560.2 [M+H]。
实施例 70：3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]羰基}氨基)戊二酸
向3-({[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]羰基}氨基)戊二酸二甲酯（中间体47，212mg，0.227mmol）在1：1：1的甲醇/水/四氢呋喃混合物（15mL）中的溶液中加入氢氧化锂一​​水合物（28.6mg，0.681mmol）。将反应混合物在室温下搅拌过夜，并在减压下部分浓缩。然后将残余物用1N盐酸调节至pH=2，并在水和二氯甲烷之间分配。用饱和盐水洗涤有机层，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩。用HPLC（中柱：Gilson 845Z 制备系统；Sunfire C18 5μm，30x150 mm；方法：在10分钟内含0.05％TFA的MeCN/H2O从10-100％，45mL/分钟，λ= 220，254nm）纯化，得到为浅黄色固体的标题化合物的TFA盐（61mg，95％纯，38％）： 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.40 - 8.55 (m, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.24 - 7.55 (m, 5H), 6.17 - 6.28 (m, 1H), 5.86 - 6.05 (m, 1H), 4.46 - 4.63 (m, 1H), 3.47 - 3.70 (m, 4H), 3.06 - 3.20 (m, 1H), 2.52 - 2.61 (m, 4H), 1.97 - 2.23 (m, 1H), 1.66 - 1.88 (m, 1H), 1.34 - 1.61 (m, 2H), 0.95 - 1.34 (m, 4H), 0.68 - 0.89 (m, 6H); ES-LCMS m/z 561 (M+H)+。
实施例 71：1-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]乙酮
向(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-N-甲基-N,7-双(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲酰胺1,1-二氧化物（中间体44，160mg，0.337mmol）的冰冷的四氢呋喃（5mL）溶液中加入溴化甲基镁（0.337mL，1.011mmol）。将反应混合物在室温下搅拌1小时，用饱和氯化铵溶液处理，并用EtOAc萃取。用饱和盐水洗涤有机层，干燥（Na2SO4），过滤，并在减压下浓缩。通过SiO2色谱法（MeOH：DCM = 0:100至3:97）纯化，得到为白色固体的标题化合物（78mg，94％纯，50％）：1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.43 (s, 1H), 7.30 - 7.51 (m, 5H), 6.25 (s, 1H), 6.09 (s, 1H), 3.57 (s, 3H), 3.43 (d, J = 14.9 Hz, 1H), 3.00 (d, J = 14.9 Hz, 1H), 2.54 (s, 2H), 2.11 - 2.26 (m, J = 4.1 Hz, 1H), 1.77 - 1.93 (m, 1H), 1.57 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 1.38 - 1.51 (m, 2H), 1.01 - 1.35 (m, 5H), 0.87 (t, J = 7.4 Hz, 3H), 0.81 (t, J = 7.0 Hz, 3H); ES-LCMS m/z 430 (M+H)+。
实施例 72：3-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]戊二酸
将2-[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-1,1-二氧代-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-基]-1,1,3,3-丙烷四羧酸四乙酯（中间体46，120mg，0.167mmol）和37％盐酸（3mL）的混合物在回流下搅拌20小时。LC-MS表明无起始原料剩余，而是三-酸和二-酸的混合物。加入另外的37％盐酸（3mL），将反应混合物加热回流过夜。反应混合物冷却至室温，然后在减压下浓缩。通过HPLC（用含有0.05％TFA-H2O和0.05％TFA-MeCN的MeCN/水洗脱）纯化，得到为白色固体的标题化合物（76mg，95％纯，68％）：1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.14 (br. s., 2H), 7.78 (br. s., 1H), 6.98 - 7.66 (m, 5H), 5.58 - 6.41 (m, 1H), 3.55 - 3.82 (m, 2H), 3.46 (s, 3H), 2.59 (d, J = 7.2 Hz, 4H), 0.95 - 2.26 (m, 7H), 0.68 - 0.92 (m, 6H); ES-LCMS m/z 518 (M+H)+。
实施例 73：2-((3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-甲酰胺基)乙酸
在0℃下向(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7-(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂-8-羧酸 1,1-二氧化物（中间体4，0.025g，0.058mmol）和甘氨酸甲酯盐酸盐（0.008g，0.064mmol）的DMF溶液中先后加入HATU（0.024g，0.064mmol）和DIPEA（0.009g，0.070mmol）。将反应​​搅拌10分钟，然后温热至室温。1小时后，将反应浓缩至一半体积，加入水（3mL）。将沉淀物过滤，干燥，不经继续纯化而使用。该物质溶解在THF（0.500mL）中，先后加入水（0.250mL）和LiOH（0.007g，0.174mmol）。将反应​​在室温下搅拌3小时，然后在真空下浓缩。残余物用SiO2色谱法使用DCM/MeOH进行色谱分离，得到纯度为90％的标题化合物： 1H NMR (400 MHz, MeOH-d 4 ) δ ppm 8.63 (s, 1 H), 7.38 - 7.58 (m, 5 H), 6.46 (br. s., 1 H), 6.20 (br. s., 1 H), 4.04 - 4.21 (m, 2 H), 3.68 (s, 3 H),2.39 (br. s., 1 H), 1.90 (br. s., 1 H), 1.75 (br. s., 1 H), 1.52 (br. s., 1 H), 1.05 - 1.43 (m, 6 H), 0.94 (t, J=7.46 Hz, 3 H), 0.84 (t, J=6.98 Hz, 3 H); ES-LCMS m/z 489 (M+H)+。
测定结晶度的方法：差示扫描量热法分析使用TA Instruments Q1000 DSC来进行。将样品加载到一个非密封的铝盘中，并在氮气吹扫下以10℃/分钟扫描。使用TA Instruments Q5000 TGA进行热重分析。样品装入铂盘，从室温开始以10℃/分钟扫描至分解发生之后。
方法3的实施例26的最终结晶样品显示出在约207℃发生分解。TGA证实，DSC的吸热峰归结于分解，而不是真正的融解。TGA观察到分解前无显著的重量损失（小于0.5％w/w）。
方法3的实施例26的最终结晶样品在粉末X-射线衍射（PXRD）图谱中有以下的显著的衍射峰（数值为以度表示的2θ和在括号中以埃表示的d-间距）：4.9 (18), 5.3 (17), 9.8 (9.0), 12.0 (7.4), 13.2 (6.7), 18.5 (4.8), 19.8 (4.5), 21.1 (4.2)。
通过将样品填充入1毫米的玻璃毛细管得到粉末X-射线衍射扫描。通过使用配备铜X射线管，入射光束椭圆镜和PANalytical X’celerator 检测器的PANalytical X’Pert Pro MPD衍射仪收集PXRD扫描。如有必要，硅粉末（NIST 640b）被用作内标来校正实验的2θ误差。此外，短距离低角度负扫描与短距离低角度正扫描相比较来估计观察到的最低的衍射峰（接近5度的2θ）的2θ误差，以及验证毛细管在X射线束中正确对齐。收集从3.5到90度的2θ衍射数据。填充纯样品的毛细管（没有内标）的单独扫描收集从3.5至50度的2θ。
人 iBAT 抑制的测定方法：在测量吸收到表达回肠胆汁酸协同转运蛋白（iBAT）的细胞中的胆汁酸的准备中，HEK293细胞培养于添加10％FBS的DMEM/F12。运行实验前二十四小时，当细胞覆盖80％至90％时收获细胞。细胞以每孔50,000个接种在聚-d-赖氨酸涂布的板内，加入人iBAT Bacmam病毒，使得每个孔中含有3.67 x 10E6 pfu（73.4 pfu/cell）。每个测定板覆盖有轻松呼吸封（Breathe Easy Seal），并置于培养箱24小时以使转运蛋白表达。
在吸收实验的当天，将10 mM HEPES加入Hank氏平衡盐溶液，并用TRIS（HBSSH）将pH值调节至7.4。通过向室温的HBSSH中加入100 pM [3H]-牛磺胆酸盐和10 μΜ冷的牛磺胆酸盐制备测定缓冲液。单独的洗涤缓冲液通过向HBSSH（~约30mL每测定板）加入10 μΜ冷的牛磺胆酸盐制备，并置于冰上。每个试验化合物从200 μΜ开始，使用100％DMSO，制备8点，3倍稀释度曲线。类似地，从1.8 mM开始，制备了对照化合物[(3R,5R)-3-丁基-3-乙基-7,8-双(甲氧基)-5-苯基-2,3,4,5-四氢-1,4-苯并硫氮杂1,1-二氧化物（Brieaddy, L.E. WO9605188, 1996）]的8点剂量响应曲线。通过向一个v底96孔板中加入3 μL各浓度，然后用177 μL测定缓冲液稀释60倍来创建药物培养板。从培养箱中取出培养板，并使其冷却到室温。培养基通气，每孔用300 μL HBSSH洗涤一次。50 μL的各剂量响应曲线浓度在测定板的各列以三个复孔加入，为对照（测定缓冲液+1.67％DMSO）保留列10，为对照化合物保留列11和12。板在室温下孵育90分钟，然后板通气，然后用300 μL的洗涤缓冲液洗涤1次。将220 μL的Microscint 20加入到各孔中，并将板密封。接下来的一天使用微板闪烁计数器定量[3H]-牛磺胆酸盐在细胞溶胞产物中的量。
使用下面的公式确定每个药物浓度的摄取抑制百分数：100*(1-((T1-C2) / (C1 – C2)))，其中，T1是试验化合物的平均cpm，C1是未添加任何抑制剂时观察到的平均cpm，和C2是存在已知100％抑制吸收的物质（30 uM对照化合物）时观察到的平均cpm。IC50值可以使用下面的公式来生成，y = (Vmax * x^n) / (K^n + x^n)。
本发明的化合物在上述测定中进行了测试，结果汇总于下面，其中每个数字是至少2个数据点的平均值。
化合物 iBAT IC50 (nM)
实施例 1 32
实施例 2 11
实施例 3 2
实施例 4 2540
实施例 5 4
实施例 6 23
实施例 7 145
实施例 8 73
实施例 9 3
实施例 10 17
实施例 11 20
实施例 12 68
实施例 13 167
实施例 14 276
实施例 15 504
实施例 16 731
实施例 17 3330
实施例 18 728
实施例 19 622
实施例 20 4
实施例 21 51
实施例 22 2440
实施例 23 2
实施例 24 73
实施例 25 6
实施例 26 43
实施例 27 47
实施例 28 55
实施例 29 367
实施例 30 1287
实施例 31 407
实施例 32 190
实施例 33 2698
实施例 34 2790
实施例 35 54
实施例 36 365
实施例 37 9
实施例 38 249
实施例 39 619
实施例 40 4670
实施例 41 3330
实施例 42 128
实施例 43 7679
实施例 44 648
实施例 45 1950
实施例 46 2
实施例 47 13
实施例 48 17
实施例 49 41
实施例 50 51
实施例 51 51
实施例 52 59
实施例 53 67
实施例 54 124
实施例 55 131
实施例 56 425
实施例 57 751
实施例 58 1458
实施例 59 3326
实施例 60 3330
实施例 61 3360
实施例 62 3900
实施例 63 8992
实施例 64 6
实施例 65 337
实施例 66 21
实施例 67 52
实施例 68 1
实施例 69 19
实施例 70 100
实施例 71 100
实施例 72 >3000
实施例 73 未测定

Claims (8)

1.化合物
2.化合物
3.权利要求2的化合物，其中所述化合物是晶体。
4.根据任一前述权利要求的化合物的药学上可接受的盐。
5.包含根据任一前述权利要求的化合物或盐的药物组合物。
6.如权利要求1-4中任一项所定义的化合物或盐在制备用于治疗人的代谢性疾病的药物中的用途。
7.权利要求6的用途，其中所述代谢性疾病是糖尿病或肥胖症。
8.权利要求7的用途，其中所述糖尿病是I型糖尿病或II型糖尿病。
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