CN102766576B - 一种基于酿造功能导向的微生物组合方法及组合菌剂在白酒工业中的应用 - Google Patents

一种基于酿造功能导向的微生物组合方法及组合菌剂在白酒工业中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了基于酿造功能导向的微生物组合方法及组合菌剂在白酒工业中的应用,属于生物工程技术领域。本发明基于白酒酿造的基本功能,将来自于白酒酿造环境中具有相应功能的微生物,进行复配组合,并将其用于白酒酿造生产中,所生产的白酒的品质以及出酒率均得到稳定与提高。所述酿造功能包括产醇、产酯、产挥发酸、产特征香、产糖化酶和蛋白酶;及其相关酵母、霉菌和细菌。本发明突出的优点是白酒中的醇、挥发酸及酯,以及白酒的特征香、丰满度、细腻感、甜度、舒适感都提高。该组合菌剂可应用于各种酿造酒工业中,对于酿造酒高效、高品质的规模化生产具有重要的意义。

Description

一种基于酿造功能导向的微生物组合方法及组合菌剂在白酒工业中的应用
技术领域
本发明涉及基于酿造功能导向的微生物组合方法,以及将组合的菌剂在酿酒工业领域中的应用。属于生物工程技术领域。
背景技术
酿造酒行业是我国的优势民族传统制造业,也是食品工业的重要组成部分。2011年酿造酒行业产量达到7103.46万千升,生产总值6699.24亿元,占到食品工业总产值的8.6%左右。因此酿造酒行业的发展对于我国食品行业甚至国民经济的发展都具有重要的意义。
中国白酒是酿造酒的典型代表。首先,白酒生产属于一类多菌种共同作用的自然发酵过程,但是目前,对白酒酿造过程的规律的认识并不是很清楚。仍然存在很多问题:白酒发酵中哪些是对发酵具有重要作用的功能微生物,它们对白酒酿造的贡献如何?其次,中国白酒的酿造属于典型的自然发酵的过程,需要依靠自然富集过程去获得环境中的各种功能微生物进行发酵,但是这种依靠大自然的发酵过程受环境的影响非常大,因此随着季节等环境因素的变化,并不一定总能够有效稳定的从环境中富集到所需要的各种功能微生物,因此白酒生产面临的最大难题就是生产品质不稳定性、生产效率低的问题。因此,只有解决上述问题,才能促进中国白酒稳定性的规模化生产,从而促进中国白酒产业健康快速的发展。
在白酒酿造过程中,由于所用的酿造原料中主要为淀粉及蛋白质等大分子物质,它们只有被降解为小分子后才能被其它微生物所利用,因此酿造过程首先由特定微生物产生降解酶,生成小分子营养物质后,其它微生物利用这些可利用的营养进行生长与代谢,产生乙醇以及其它复杂的风味成分。
中国白酒风味成分十分复杂,尽管白酒中乙醇和水的含量占到白酒总量的98%左右,其余的微量成分只占2%左右,但是这仅占2%的微量成分中含有上千种不同的成分,它们对白酒的风味起到重要贡献。通过分析测定,上述微量成分主要包含若干类:醇类、脂类、挥发酸类、以及某些特征香等类型。因此根据白酒的成分组成以及酿造过程的特征,我们将白酒酿造中的功能划分为产降解酶、产醇(包括乙醇和其它醇类)、产酯、产挥发酸、产特征香等功能。这些相关功能都是与微生物具有重要的联系。其中降解酶的产生主要是由特定霉菌产生;乙醇以及其它醇、挥发酸、酯等物质的产生主要与特定酵母有关;特征香主要由特定细菌产生。因此,针对白酒酿造的基本功能,基于对白酒功能相关微生物的认识,将上述特定功能微生物进行复配组合。
目前仅有提升白酒酿造风味构建的混合细菌的报道,该报道中所用的微生物包括波茨坦短芽胞杆菌、嗜热梭菌、枯草芽孢杆菌、类芽胞杆菌、琥珀酸嗜热梭菌、短短芽胞杆菌。但是这些微生物全部为细菌类,而且它们均购于美国或德国的菌种保藏中心,而非来自于白酒酿造本土环境中筛选所得,并且这些细菌对白酒具有哪些特定的风味贡献也并不是很清楚。本发明能够对重要功能微生物进行系统性的、有针对性的富集,能够使白酒风味更加平衡,而且使质量和产量同时得到明显提高,最终有效提高白酒生成的稳定性,促进白酒的规模化发展。
发明内容
(1)要解决的技术问题
本发明要解决的一个技术问题是提供了基于酿造功能导向的微生物组合方法,以及将该法制造的组合菌剂在酿酒工业中的应用。
(2)本发明的技术方案
基于酿造功能导向的微生物组合方法,在酿造过程中将具有相应酿造功能的微生物菌剂进行复配组合使用,酿造功能包括产醇、产酯、产酸、产特征香、产淀粉酶和蛋白酶,使酿造酒产生相应的以及复合的酿造功能。
具有白酒酿造相应功能的微生物为:
产醇酵母:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CGMCC No.4747、拜尔接合酵母(Zygosaccharomyces bailii)CGMCC No.4745、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)CGMCC No.4744。
产酯酵母:异常毕赤酵母(Pichia anomala)CGMCC No.4740、少孢酵母(Kazachstania exigua)CGMCC No.4748。
产酸酵母:东方伊萨酵母(Issatchenkia orientalis)CGMCC No.4741、膜醭毕赤酵母(P. Membranifaciens)CGMCC No.4751。
上述菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。在申请号2011101224203“利用风味定向技术筛选中国白酒酿造中的β-大马酮产生菌株及其应用”中公开,公开号CN102242072A,公开日2011年11月16日。
拜尔接合酵母(Zygosaccharomyces bailii)CGMCC No.4745在申请号2011101223982“中国酱香型白酒生产中高产乙醇低产杂醇油的酵母的筛选与应用”中公开,公开号CN102226255A,公开日2011年10月26日。
产淀粉酶和蛋白酶的霉菌:白曲霉(Aspergillus kawachii)CGMCC No.6263、米曲霉(Aspergillus oryzae CGMCC No.6264)。
产特征香的细菌:地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)CGMCC No.3961、解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGMCC No.6262。
上述菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
将上述各类相应功能的微生物中的一株或若干株的组合应用。
上述各类功能微生物菌剂的制作方法,为液体或固态菌剂的制作方法。
功能酵母菌剂的制作方法:
液体酵母菌剂培养基1 (g/L):酵母膏10,蛋白胨20,葡萄糖20,蒸馏水配制,1×105Pa 灭菌20 min。液体酵母菌剂培养基2:以白酒酿造所用的原料为培养基成分,原料选用高粱、大麦、小麦、豌豆、麸皮及其各种不同比例的混合配方制取液体种子培养基,制作方式为:原料样品经粉碎后,与水按1︰1~4(w/v)的比例混合后,蒸煮1~5h,冷却后加入糖化酶10~50单位/g原料,于40~80℃保持2~10h,过滤、离心所得滤液,调节糖度为10~15oBx,调节pH为4~6。
液体酵母菌剂培养方法,接一环酵母菌体于液体酵母菌剂培养基1或2中,30℃培养24h。
固体酵母菌剂培养基1:选用高粱、大麦、小麦、豌豆、麸皮及其各种不同比例的混合配方制取固体种子培养基,制作方式为:原料样品经粉碎后,与水按1︰0.5~2(w/v)的比例混合后,80~100℃蒸煮30min。
固体酵母菌剂培养基2:在新鲜酒糟加入0.1~1mol/L NaOH溶液调节酸度为0~5;
固体酵母菌剂培养方法:接一环酵母菌体于液体酵母菌剂培养基1或2中,30℃培养24h后,以10%接种比例接种于固体酵母菌剂培养基1或2中,30℃培养24~36h。
功能细菌菌剂的制作方法:
液体细菌菌剂培养基1 (g/L):牛肉膏5,蛋白胨10,NaCl 5,蒸馏水配制,pH 7.0,1×105Pa 灭菌20 min。液体细菌菌剂培养基2:以白酒酿造所用的原料为培养基成分,原料选用高粱、大麦、小麦、豌豆、麸皮及其各种不同比例的混合配方制取液体种子培养基,制作方式为:原料样品经粉碎后,与水按1︰1~4(w/v)的比例混合后,蒸煮1-5h,冷却后加入糖化酶10~50单位/g原料,于40~80℃保持2~10h,过滤、离心所得滤液,调节糖度为10~15oBx,调节pH为4~7。
液体细菌菌剂培养方法,接一环细菌菌体于液体细菌菌剂培养基1或2中,37℃培养24h。
固体细菌菌剂培养基1:选用高粱、大麦、小麦、豌豆、麸皮及其各种不同比例的混合配方制取固体种子培养基,制作方式为:原料样品经粉碎后,与水按1︰0.5~2(w/v)的比例混合后,80~100℃蒸煮30min。
固体细菌菌剂培养基2:在新鲜酒糟加入0.1~1mol/L NaOH溶液调节酸度为0~5;
固体细菌菌剂培养方法:接一环细菌菌体于液体细菌菌剂培养基1或2中,37℃培养24h后,以10%接种比例接种于固体细菌菌剂培养基1或2中,37℃培养24-36h。
功能霉菌菌剂的制作方法:
固体霉菌菌剂培养基1:选用高粱、大麦、小麦、豌豆、麸皮及其各种不同比例的混合配方制取固体种子培养基,制作方式为:原料样品经粉碎后,与水w/v按1︰0.5~2的比例混合后,80~100℃蒸煮30min。
固体霉菌菌剂培养基2:在新鲜酒糟加入0.1-1mol/L NaOH溶液调节酸度为0~5;
固体霉菌菌剂培养方法:接一环霉菌菌体于固体霉菌菌剂培养基1或2中,30℃培养2~3h。
按照上述培养方法制作得到的各类功能菌剂的细胞数量,酵母总活菌数达到106~1010CFU/g,细菌总活菌数达到107-109CFU/g,霉菌孢子总数106~109个/g。
上述各类微生物菌剂的组合方法,是酵母:细菌:霉菌细胞数量为10︰1~100︰1~10,其中产醇酵母:产酯酵母:产酸酵母细胞数量比为10︰1~100︰1~100。上述各菌按数量比进行搅拌混合。
基于酿造功能导向的微生物组合方法的应用,是在各种酿造酒工业中的应用。将各类微生物菌剂按总量0.2~5%(v/w、w/w)接入到酿造过程中的糟醅或醪糟中,提高白酒中的醇、挥发酸及酯,同时白酒的特征香、丰满度、细腻感、甜度、舒适感都提高。
本发明的有益效果:本发明突出的优点是使白酒生产效率提高、品质稳定性加强,对于白酒高效、高品质的规模化生产,以及走向纯种式发酵具有重要的意义。该组合菌剂可应用于各种酿造酒工业中。本发明能够对重要功能微生物进行系统性的、有针对性的富集,能够使白酒风味更加平衡与突出,而且使质量和产量同时得到明显提高,最终有效提高白酒生成的品质稳定性与生产效率,促进白酒的规模化发展。
生物材料样品保藏:
酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CGMCC No.4747、
拜尔接合酵母(Zygosaccharomyces bailii)CGMCC No.4745、
粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)CGMCC No.4744;
异常毕赤酵母(Pichia anomala)CGMCC No.4740、
少孢酵母(Kazachstania exigua)CGMCC4748;
东方伊萨酵母(Issatchenkia orientalis)CGMCC No.4741、
膜醭毕赤酵母(P. Membranifaciens)CGMCC No.4751;
白曲霉(Aspergillus kawachii)CGMCC No.6263、
米曲霉(Aspergillus oryzae)CGMCC No.6264;
地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)CGMCC No.3961、
解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGMCC No.6262;
白曲霉(Aspergillus kawachii)M90,已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,简称CGMCC,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,保藏编号CGMCC No.6263,保藏日期2012年6月21日。
米曲霉(Aspergillus oryzae)M92,已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,简称CGMCC,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,保藏编号CGMCC No.6264,保藏日期2012年6月21日。
解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)B2,已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,简称CGMCC,地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所,保藏编号CGMCC No.6262,保藏日期2012年6月21日。
附图说明
图1:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CGMCC No 4747的电镜照片
图2:异常毕赤酵母(Pichia anomala)CGMCC No 4740的电镜照片
图3:东方伊萨酵母(Issatchenkia orientalis)CGMCC No 4741的电镜照片
图4:地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)CGMCC No 3961的电镜照片
图5:白曲霉(Aspergillus kawachii)CGMCC No 6263的菌落照片
图6:采用组合微生物菌剂生产的白酒GC/MS图谱。
具体实施方式
实施例1:不同类型的微生物的功能
产醇酵母:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CGMCC No 4747产乙醇43.8g/L、其它高级醇82.6g/L;拜尔接合酵母(Zygosaccharomyces bailii)CGMCC No 4745产乙醇32.8g/L、其它高级醇22.6g/L;粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)CGMCC No 4744产乙醇40.1g/L,其它高级醇12.6 g/L。
产酯酵母:异常毕赤酵母(Pichia anomala)CGMCC No 4740产酯215.2 mg/L;少孢酵母(Kazachstania exigua)CGMCC No 4748产酯31.8 mg/L。
产挥发酸酵母:东方伊萨酵母(Issatchenkia orientalis)CGMCC No 4741产酸510.4mg/L;膜醭毕赤酵母(P. Membranifaciens)CGMCC No 4751产酸128.2 mg/L。
产淀粉酶和蛋白酶的霉菌:白曲霉(Aspergillus kawachii)CGMCC No 6263产糖化酶1120U/g、酸性蛋白酶活力1830 U/g;米曲霉(Aspergillus oryzae)CGMCC No 6264产糖化酶1200U/g、酸性蛋白酶活力1830 U/g。
产特征香的细菌:通过感官品评地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)CGMCC No 3961、解淀粉芽胞杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)CGMCC No 6262为产特征香的菌株。
实施例2:组合菌剂在白酒生产中的应用
功能微生物菌剂的制作方式
功能酵母菌剂的制作方式:
液体酵母菌剂培养基:麸皮经粉碎后,与水w/v按1︰1~4的比例混合后,蒸煮1-5h,冷却后加入糖化酶10~50单位/g原料,于40~80℃保持2~10h,过滤、离心所得滤液,调节糖度为10~15oBx,调节pH为4~6。
液体酵母菌剂培养方式,接一环酵母菌体于液体培养基中,30℃培养24h。
固体酵母菌剂培养基:高梁样品经粉碎后,与水w/v按1︰0.5~2的比例混合后,80~100℃蒸煮30min。
固体酵母菌剂培养方式:接一环酵母菌体于液体酵母菌剂培养基中,30℃培养24h后,以10%接种比例接种于固体酵母菌剂培养基中,30℃培养24-36h。
功能细菌菌剂的制作方式:
液体细菌菌剂培养基:麸皮经粉碎后,与水w/v按1︰1~4的比例混合后,蒸煮1-5h,冷却后加入糖化酶10~50单位/g原料,于40~80℃保持2~10h,过滤、离心所得滤液,调节糖度为10~15oBx,调节pH为4~7。
液体细菌菌剂培养方式,接一环细菌菌体于液体细菌菌剂培养基中,37℃培养24h。
固体细菌菌剂培养基:高梁经粉碎后,与水w/v按1︰0.5~2的比例混合后,80~100℃蒸煮30min。
固体细菌菌剂培养方式:接一环菌体于液体细菌菌剂培养基中,37℃培养24h后,以10%接种比例接种于固体细菌菌剂培养基中,37℃培养24~36h。
功能霉菌菌剂的制作方式:
固体霉菌菌剂培养基:在新鲜酒糟加入0.1-1mol/L NaOH溶液调节酸度为0~5;
固体霉菌菌剂培养方式:接一环霉菌菌体于固体霉菌菌剂培养基中,30℃培养2~3h。
功能菌剂在白酒生产中的应用
将酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae CGMCC No 4747)(产醇酵母)、异常毕赤酵母(Pichia anomala CGMCC No 4740)(产酯酵母)、东方伊萨酵母(Issatchenkia orientalis CGMCC No 4741)(产挥发酸酵母)、地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis CGMCC No 3961)(产特征香细菌)、白曲霉(Aspergillus kawachii CGMCC No 6263)(产糖化酶和蛋白酶的霉菌)分别按照上述培养条件培养后微生物总活菌数达到108CFU/g、108CFU/g、108CFU/g、109CFU/g、108个/g。
将上述微生物按照细胞数量1︰1︰1︰10︰1的比例进行混合后,共同加入到芝麻香型白酒生产的堆积酒醅中,堆积40h后,入池发酵30天,收集蒸馏酒,测定出酒率为31%,比未应用组合微生物生产白酒的出酒率高8%。同时对酒进行风味测定和感官品评,结果如下表1和表2。白酒中的醇、挥发酸及酯明显提高,同时白酒的特征香、丰满度、细腻感、甜度、舒适感都提高。此应用连续生产3排,结果均一致。
表1 添加菌液对芝麻香型白酒头段酒的风味成分影响(μg/L)
  未使用菌剂 使用组合微生物菌剂 提高幅度(%)
酯类 4927010 6797490 38.0
醇类 1306740 1821050 39.4
挥发酸类 300150 424110 41.3
醛酮类 20180 21720 7.6
芳香环类 36818 89046 141.9
苯酚类 656 846 29.0
吡嗪类 131 175 33.6
表2 组合微生物菌剂感官品评描述
样品 应用微生物 品评描述
1 未使用菌剂 香味偏清,空杯留香短
2 使用组合微生物菌剂 清酱协调,味甜舒适,空杯留香持久,带酱味,细腻感较好,甜度较强,酒体丰满

Claims (6)

1.基于酿造功能导向的微生物菌剂组合方法,其特征在于在酿造过程中将具有相应酿造功能的微生物制成菌剂进行复配组合使用,使酿造酒产生相应的酿造功能;
所述酿造功能为产醇、产酯、产挥发酸、产特征香、产糖化酶和蛋白酶;
所述的具有相应酿造功能的微生物为:
产醇酵母:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CGMCC No.4747;
产酯酵母:异常毕赤酵母(Pichia anomala)CGMCC No.4740;
产酸酵母:东方伊萨酵母(Issatchenkia orientalis)CGMCC No.4741;
产糖化酶和蛋白酶的霉菌:白曲霉(Aspergillus kawachii)CGMCC No.6263;
产特征香的细菌:地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)CGMCC No.3961;
上述菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。
2.根据权利要求1所述的基于酿造功能导向的微生物菌剂组合方法,其特征在于酵母︰细菌︰霉菌细胞数量比为10︰1~100︰1~10,其中产醇酵母︰产酯酵母︰产酸酵母数量比为10︰1~100︰1~100;各微生物按细胞数量比进行搅拌混合。
3.如权利要求1所述的基于酿造功能导向的微生物菌剂组合方法的应用,其特征在于在各种酿造酒工业中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于将各类微生物菌剂按总量0.2%~5% v/w或w/w 接入到酿造过程中的糟醅或醪糟中,提高白酒中的醇、挥发酸及酯的含量。
5.权利要求1中的微生物菌剂的制作方法,其特征在于为液体或固体菌剂的制作方法;
(a)功能酵母菌剂的制作方法:
液体酵母菌剂培养基1 以g/L计:酵母膏10,蛋白胨20,葡萄糖20,蒸馏水配制,1×105Pa 灭菌20 min;
液体酵母菌剂培养基2:以白酒酿造所用的原料为培养基成分,原料选用高粱、大麦、小麦、豌豆、麸皮或各种不同比例的混合配方制取液体种子培养基,制作方式为:原料样品经粉碎后,按原料︰水为1︰1~4  w/v的比例混合后,蒸煮1~5h,冷却后加入糖化酶10~50单位/g原料,于40~80℃保持2~10h,过滤、离心所得滤液,调节糖度为10~15oBx,调节pH为4~6;
液体酵母菌剂培养方式,接一环酵母菌体于液体酵母菌剂培养基1或2中,30℃培养24h;
固体酵母菌剂培养基1:选用高粱、大麦、小麦、豌豆、麸皮或各种不同比例的混合配方制取固体种子培养基,制作方式为:原料样品经粉碎后,按原料︰水为1︰0.5~2  w/v的比例混合后,80~100℃蒸煮30min;
固体酵母菌剂培养基2:在新鲜酒糟加入0.1~1mol/L NaOH溶液调节酸度为0~5;
固体酵母菌剂培养方式:接一环酵母菌体于液体酵母菌剂培养基1或2中,30℃培养24h后,以10%接种比例接种于固体酵母菌剂培养基1或2中,30℃培养24~36h;
(b)功能细菌菌剂的制作方式:
液体细菌菌剂培养基1  以g/L计:牛肉膏5,蛋白胨10,NaCl 5,蒸馏水配制,pH 7.0,1×105Pa灭菌20 min;
液体细菌菌剂培养基2:以白酒酿造所用的原料为培养基成分,原料选用高粱、大麦、小麦、豌豆、麸皮或各种不同比例的混合配方制取液体种子培养基,制作方式为:原料样品经粉碎后,按原料︰水为1︰1~4  w/v的比例混合后,蒸煮1-5h,冷却后加入糖化酶10~50单位/g原料,于40~80℃保持2~10h,过滤、离心所得滤液,调节糖度为10~15oBx,调节pH为4~7;
液体细菌菌剂培养方式,接一环细菌菌体于液体细菌菌剂培养基1或2中,37℃培养24h;
固体细菌菌剂培养基1:选用高粱、大麦、小麦、豌豆、麸皮或各种不同比例的混合配方制取固体种子培养基,制作方式为:原料样品经粉碎后,按原料︰水为1︰0.5~2  w/v的比例混合后,80~100℃蒸煮30min;
固体细菌菌剂培养基2:在新鲜酒糟加入0.1~1mol/L NaOH溶液调节酸度为0~5;
固体细菌菌剂培养方式:接一环细菌菌体于液体细菌菌剂培养基1或2中,37℃培养24h后,以10%接种比例接种于固体细菌菌剂培养基1或2中,37℃培养24~36h;
(c)功能霉菌菌剂的制作方式:
固体霉菌菌剂培养基1:选用高粱、大麦、小麦、豌豆、麸皮或各种不同比例的混合配方制取固体种子培养基,制作方式为:原料样品经粉碎后,按原料︰水为1︰0.5~2  w/v的比例混合后,80~100℃蒸煮30min;
固体霉菌菌剂培养基2:在新鲜酒糟加入0.1-1mol/L NaOH溶液调节酸度为0~5;
固体霉菌菌剂培养方式:接一环霉菌菌体于固体霉菌菌剂培养基1或2中,30℃培养2~3h。
6.根据权利要求5所述的微生物菌剂的制作方法,其特征在于各类功能微生物菌剂的细胞数量,酵母总活菌数达到106~1010CFU/g,细菌总活菌数达到107~109CFU/g,霉菌孢子总数106~109个/g。
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Assignee: Henan Yang Shao Wine Co., Ltd

Assignor: Jiangnan University

Contract record no.: 2017320000112

Denomination of invention: Brewing function oriented microbe combination method and application of combination bacterium in liquor-making industry

Granted publication date: 20140326

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Assignor: Jiangnan University

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Denomination of invention: Brewing function oriented microbe combination method and application of combination bacterium in liquor-making industry

Granted publication date: 20140326

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