CN102731628A - 一种制备罗莫肽的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种全液相片段缩合制备罗莫肽的方法，应用本方法制备罗莫肽操作简便，原料易得，所得产物纯度高，便于纯化，收率较高，生产成本较低，适于大量生产。本发明还提供了一系列新的中间体化合物，这些中间体化合物均是采用本发明的制备方法过程中制备得到的。

Description

一种制备罗莫肽的方法
技术领域
本发明涉及一种制备罗莫肽的方法，应用本方法制备罗莫肽操作简便，原料易得，所得产物纯度高，便于纯化，收率较高，生产成本较低，适于大量生产。
背景技术
罗莫肽(romurtide)，化学名为N2-(N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-异谷氨酰胺)-N6-硬脂酰-L-赖氨酸(N2-[N2-[N-(N-acetylmuramoyl)-L-alanyl]-D-αglutaminyl]-N6-(1-oxooctadecyl)-L-Lysine)，又称为DJ-7041，MDP-LYS-L18，Muroctasin，Nopia，CA登记号为[78113-36-7]，具有如下化学结构式：
Figure BDA0000152965250000011
罗莫肽是一种胞壁酰二肽(MDP)类衍生物，属于集落刺激因子激动剂。其主要作用机理为，通过细胞因子网络的活性，诱导集落刺激因子分泌，促进骨髓中造血干细胞的增殖与分化，从而使外周血液中的白细胞和血小板增多，升高辅助性T细胞活性，激活中性粒细胞和巨噬细胞功能，增强对感染的非特异性抵抗力，增强抗生素的疗效。罗莫肽于1991年在日本上市，用于肿瘤病人的辅助治疗，由于其作用独特，应用前景十分广阔。
有关罗莫肽的合成文献可见US4317771和EP002367，其均采用全液相合成，其路线是以氨基酸为起始原料，首先用叔丁氧羰-L-丙氨酸(1)与D-异谷氨酰胺-r-苄酯(2)在N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)/二环己基碳二亚胺(DCC)作用下生成保护二肽BOC-Ala-D-iso-Gln(OBzl)(3)，用Pd/C催化氢化得脱苄基保护二肽BOC-Ala-D-iso-Gln(OH)(4)，与N6-苄氧羰基-L-赖氨酸苄酯(5)在氯甲酸乙酯和三乙胺作用下缩合生成保护三肽BOC-Ala-D-iso-Gln-Lys(Z)-OBzl(6)，用三氟乙酸脱去BOC保护基得中间体Ala-D-iso-Gln-Lys(Z)-OBzl(7)，后者与1-苄基-4，6-O-苯亚甲基-N-乙酰胞壁酸[(B1，B4，6-NAcMur或保护胞壁酸(8)]在(HOSu)/(DCC)作用下生成保护胞壁酰三肽B1，B4，6-NAcMur-Ala-D-iso-Gln-Lys(Z)-OBzl(9)，用乙酸处理脱去4，6-O-苯亚甲基得到部分保护化合物B1-NAcMur-Ala-D-iso-Gln-Lys(Z)-OBzl(10)，进而催化氢化得N-(N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-异谷氨酰胺基)-L-赖氨酸(11)(化学式NAcMur-Ala-D-iso-Gln-Lys)；后者与硬脂酸的N-羟基-降冰片烯-2，3-二甲酰亚胺酯反应得罗莫肽。CN200910155724则采用固、液相结合的合成方法，先用固相合成Fmoc-Ala-iso-Gln(Trt)-Lys(Boc)-Wang，后与保护胞壁酸(8)缩合得保护胞壁酰三肽，用K试剂切割Wang树脂所得产物与硬脂酸反应生成罗莫肽。以上方法合成罗莫肽时均是先制备胞壁酰三肽而后与硬脂酸反应，我们按文献方法多次合成罗莫肽，均发现由于活性反应基团除氨基外，还有三个羟基，因而产物中副产物多，所得终产物纯度不高(附图1-2)，难于纯化；并且中间体胞壁酰三肽经十几步反应生成，因而难得和昂贵，再与硬脂酸反应消耗较多，以胞壁酸计收率降低，生产成本过高。
因此，现有技术需要一种操作简便，所得产物纯度高(附图3)，便于纯化，避免了重要中间体胞壁酰三肽的消耗，收率较高，成本较低，适于工业化生产的制备罗莫肽的方法。
发明内容
本发明的发明人经过大量创造性劳动后，提供了一种新的合成罗莫肽的方法。该方法与文献方法完全不同的合成策略，避免了文献报道的因胞壁酸三肽与硬脂酸反应时产生多重产物的可能性，所得终产物纯度高，彻底解决了现有技术制备该化合物不易纯化问题；同时胞壁酸与硬脂酰三肽直接反应，避免了难得贵重的重要中间体胞壁酰三肽的消耗，收率较高，成本较低，适于工业化生产。
以保护R1-D-iso-Gln-(OR2)为原料，脱去R1后与R3-L-丙氨酸在Hobt/DCC存在下缩合生成R3-L-Ala-D-iso-Gln-(OR2)，后者脱去R2保护基得到二肽R3-L-Ala-D-iso-Gln-(OH)；以保护赖氨酸为原料，与硬脂酸在DCC，Hobt/DCC，或者亚硫酰氯存在下缩合生成CH3(CH2)16CO-Lys(R4)-OR5二肽片段，脱去R4后得CH3(CH2)16CO-Lys-OR5；R3-L-Ala-D-iso-Gln-(OH)与CH3(CH2)16CO-Lys-OR5在Hobt/DCC存在下缩合生成四肽R3-L-Ala-D-iso-Gln-〔Lys(OR5)-CO(CH2)16CH3〕(III)，脱去保护基R3得L-Ala-D-iso-Gln-〔Lys(OR5)-CO(CH2)16CH3〕，L-Ala-D-iso-Gln-〔Lys(OR5)-CO(CH2)16CH3〕与保护胞壁酸缩合生成B1，B4，6-NAcMur-Ala-D-iso-Glu-〔Lys(OR5)-CO(CH2)16CH3〕，脱去保护基生成罗莫肽。其中，脱保护基的方法包括采用酸、碱或氢化的方法脱保护基。
进一步地，本发明提供全液相片段缩合法制备罗莫肽的方法采用的是，以保护R1-D-iso-Gln-OR2为原料，脱去R1与R3-L-丙氨酸在1-羟基苯并三唑(Hobt)/DCC存在下缩合生成R3-L-Ala-D-iso-Gln-(OR2)(II)，后者在Pd/C催化下进行氢化反应，得到二肽R3-L-Ala-D-iso-Gln-(OH)(III)；以保护赖氨酸Lys(R4)-OR5为原料，与硬脂酸反应生成CH3(CH2)16CO-Lys(R4)-OR5(IV)二肽片段，脱去R4得CH3(CH2)16CO-Lys-OR5(V)；III与V在Hobt/DCC存在下缩合生成四肽R3-L-Ala-D-iso-Gln-〔Lys(OR5)-CO(CH2)16CH3〕(VI)，(VI)脱去保护基R3得L-Ala-D-iso-Gln-〔Lys(OR5)-CO(CH2)16CH3〕(VII)，(VII)与保护胞壁酸缩合生成保护罗莫肽，脱去保护基得到罗莫肽。
本发明提供的罗莫肽制备方法包括以下步骤：
a)以R1-D-iso-Gln(OR2)为原料，用酸或碱脱去保护基而后得D-iso-Gln(OR2)(I)。
b)(I)与R3-L-丙氨酸在Hobt/DCC存在下缩合生成R3-L-Ala-D-iso-Gln-(OR2)(II)。
c)(II)在Pd/C催化下进行氢化或锌-乙酸进行反应，脱去保护基R2，得到R3-L-Ala-D-iso-Gln-(OH)(III)。
d)以L-Lys(R4)-OR5为原料，与硬脂酸在DCC法，Hobt/DCC或者亚硫酰氯的存在下缩合生成CH3(CH2)16CO-Lys(R4)-OR5(IV)。
e)CH3(CH2)16CO-Lys(R4)-OR5(IV)在酸或碱溶液中脱去R4，得到CH3(CH2)16CO-Lys-OR5(V)。
f)中间体R3-L-Ala-D-iso-Gln-(OH)(III)在Hobt/DCC存在下，与CH3(CH2)16CO-Lys-OR5(V)进行缩合生成R3-L-Ala-D-iso-Gln-Lys(OR5)-CO(CH2)16CH3(VI).
g)R3-L-Ala-D-iso-Gln-〔Lys(OR5)-CO(CH2)16CH3〕(VI)用酸或碱溶液脱去保护基得L-Ala-D-iso-Gln-〔Lys(OR5)-CO(CH2)16CH3〕(VII)。
h)中间体L-Ala-D-iso-Gln-〔Lys(OR5)-CO(CH2)16CH3〕(VII)与胞壁酸在Hobt/DCC存在下进行缩合，生成保护罗莫肽(VIII)。
i)B1，B4，6-NAcMur-Ala-D-iso-Glu-〔Lys(OR5)-CO(CH2)16CH3〕在Pd/C催化下进行氢化或Zn/乙酸存在下脱去保护基生成罗莫肽。
其中，R1为Fmoc，Adoc，Aoc，Z，BOC，Trt，Bpoc，Ddz，Ibc，Dpp，Mz，Doc，Dpc，2Cz，4Cz，4Nz，Paz，Dobz，Inc，Iec，Tcc，Msc，For，Tfa，Pht，Tos，Nps；R2为Dpm，Mob，Pmb，Tmb，Bzl，Nb，Tms，But，Ptm，Am，Me，Ph，Pic，Pnc等；R3与R1相同或不同，可以选自Fmoc，Adoc Aoc，Z，BOC，Trt，Bpoc，Ddz，Ibc，Dpp，Mz，Doc，Dpc，2Cz，4Cz，4Nz，Paz，Dobz，Inc，Iec，Tcc，Msc，For，Tfa，Pht，Tos，Nps；R4与R1、R3相同或不同，可以选自为Fmoc，Adoc，Aoc，Z，BOC，Trt，Bpoc，Ddz，Ibc，Dpp，Mz，Doc，Dpc，2Cz，4Cz，4Nz，Paz，Dobz，Inc，Iec，Tcc，Msc，For，Tfa，Pht，Tos，Nps等；R5与R2相同或不同，可以选自Dpm，Mob，Pmb，Tmb，Bzl，Nb，Tms，But，Ptm，Am，Me，Ph，Pic，Pnc等。
本发明制备方法中，所述酸可以选自但不限于HCl/三氟乙醇，2-50％TFA的CH2Cl2或稀醋酸溶液，HBr/乙酸溶液，BTFA，CF3SO3H，FSO3H，HF，H2-Pd于液氨中，Zn于稀醋酸中，HCl二氧六环溶液，冷的三氟乙酸，稀的甲磺酸等；优选是HCl二氧六环溶液，冷的三氟乙酸；所述的碱为常用的碱，例如可以是但不限于水合肼，六氢吡啶，氨基钠、甲基吗啉或二乙胺等；优选为六氢吡啶，水合肼；氢化条件为H2/Pd-C、PdO或Pd(OH)，Zn于稀醋酸中。
步骤a)的反应中，所使用的溶剂选自N，N-二甲基甲酰胺，N，N-二乙基乙酰胺，二甲亚砜，二氯甲烷，二氧六环。优选溶剂为N，N-二甲基甲酰胺，二氯甲烷，二氧六环。其中的酸为HCl/三氟乙醇，2-5％TFA的CH2Cl2或稀醋酸溶液，HBr/乙酸溶液，BTFA，CF3SO3H，FSO3H，HF，H2-Pd于液氨中，Zn于稀醋酸中，HCl二氧六环溶液，冷的三氟乙酸，稀的甲磺酸等；其中的碱为常用的碱，水合肼，六氢吡啶，氨基钠；反应时间为2-4小时，优选2.5-3.5小时，反应温度为-5℃-30℃，优选10-20℃，最优选13-17℃。
b)反应中使用的溶剂选自N，N-二甲基甲酰胺，N，N-二乙基乙酰胺，二甲亚砜，二氯甲烷，二氧六环等溶剂。优选溶剂为N，N-二甲基甲酰胺，二氯甲烷，二氧六环。氨基酸∶DCC∶Hobt的摩尔比为1∶(1-2)∶(1-2)，优选1∶(1-1.5)∶(1-1.5)，最优选1∶(1-1.1)∶(1-1.3)，反应温度为-5℃-40℃，优选0-20℃，最优选5-10℃，反应时间2-10小时，优选5-9小时，最优选6-8小时。
c)反应中使用的溶剂选自N，N-二甲基甲酰胺，N，N-二乙基乙酰胺，二甲亚砜，二氯甲烷，乙酸，甲醇，乙醇等。优选溶剂为N，N-二甲基甲酰胺，甲醇，乙醇等溶剂。反应温度为0-40℃，优选10-30℃，最优选13-20℃，反应时间2-10小时，优选4-9小时，最优选4-8小时。
d)反应中使用的溶剂为N，N-二甲基甲酰胺，N，N-二乙基乙酰胺，二甲亚砜，三氯甲烷，二氯甲烷等，优选溶剂为N，N-二甲基甲酰胺，二氯甲烷；硬脂酸∶DCC∶Hobt的摩尔比为1∶(1-2)∶(1-2)，优选1∶(1-1.5)∶(1-1.5)，最优选1∶(1-1.2)∶(1-1.3)，反应温度为0-40℃，优选5-25℃，最优选10-15℃，反应时间4-10小时，优选5-9小时，最优选6-8小时。
e)反应中使用的溶剂选自N，N-二甲基甲酰胺，N，N-二乙基乙酰胺，二甲亚砜，二氯甲烷，二氧六环等溶剂。优选溶剂为N，N-二甲基甲酰胺，二氯甲烷；其中的酸为HCl/三氟乙醇，2-5％TFA的CH2Cl2或稀醋酸溶液，HBr/乙酸溶液，BTFA，CF3SO3H，F SO3H，HF，H2-Pd于液氨中，Zn于稀醋酸中，HCl二氧六环溶液，冷的三氟乙酸，稀的甲磺酸等；优选为HCl二氧六环溶液，冷的三氟乙酸；其中的碱为常用的碱，水合肼，六氢吡啶，氨基钠；优选为六氢吡啶，水合肼；反应时间为2-4小时，优选2.5-3.5小时；反应温度为0-30℃，优选10-20℃，最优选10-15℃。
f)反应中(III)与(V)投料摩尔比为1∶(1-1.5)，优选1∶(1-1.2)，最优选1∶(1-1.05)。(III)∶DCC∶Hobt的摩尔比为1.5∶(1-1.5)∶(1-1.5)，优选1.5∶(1-1.3)∶(1-1.4)，最优选1.5∶(1-1.2)∶(1-1.3)。反应温度为-5℃-30℃，优选0-20℃，最优选10-17℃；反应溶剂为N，N-二甲基甲酰胺，N，N-二乙基乙酰胺，二甲亚砜，二氯甲烷，DMF，三氯甲烷，四氢呋喃等，优选溶剂为二氯甲烷，DMF。反应时间为5-24小时，优选12-22小时，最优选15-20小时；优选温度为10-40℃，优选15-30℃，最优选20-25℃。
g)反应中使用的溶剂选N，N-二甲基甲酰胺，N，N-二乙基乙酰胺，二甲亚砜，二氯甲烷，二氧六环等溶剂。优选溶剂为N，N-二甲基甲酰胺，二氯甲烷，二氧六环等；其中的酸为HCl/三氟乙醇，2-5％TFA的CH2Cl2或稀醋酸溶液，HBr/乙酸溶液，BTFA，CF3SO3H，F SO3H，HF，H2-Pd于液氨中，Zn于稀醋酸中，HCl二氧六环溶液，冷的三氟乙酸，稀的甲磺酸等；优选为2-5％TFA的CH2Cl，HCl二氧六环溶液；其中的碱为常用的碱，水合肼，六氢吡啶，氨基钠等；优选为水合肼，六氢吡啶；反应时间为2-4小时，优选2.5-3.5小时；反应温度为0-30℃，优选10-20℃，最优选13-17℃。
h)反应中，(VII)与B1，B4，6-NAcMur投料摩尔比为1∶(1-1.5)，优选1∶(1-1.2)，最优选1∶(1-1.05)。(VII)∶DCC∶Hobt的摩尔比为1.5∶(1-1.5)∶(1-1.5)，优选1.5∶(1-1.3)∶(1-1.4)，最优选1.5∶(1-1.2)∶(1-1.3)；反应温度为0-40℃，优选15-30℃，最优选20-25℃；反应时间10-24小时，优选12-22小时，最优选15-20小时。胞壁酸选自不同保护基中间体，或者游离胞壁酸也可以直接反应。
i)氢化反应中，催化剂为RanyNi或者Pd/C，催化剂的量为保护罗莫肽(VII)的50％-100％，优选60％-90％，最优选75-85％。反应溶剂为乙酸，甲醇，DMF，优选为乙酸，甲醇。Zn/乙酸存在下脱保护时Zn的摩尔数为保护罗莫肽的10倍。溶剂为乙酸甲醇混合溶剂。
本发明的具体合成路线图如下：
Figure BDA0000152965250000071
其中R1为Fmoc，Adoc，Aoc，Z，BOC，Trt，Bpoc，Ddz，Ibc，Dpp，Mz，Doc，Dpc，2Cz，4Cz，4Nz，Paz，Dobz，Inc，Iec，Tcc，Msc，For，Tfa，Pht，Tos，Nps；R2为Dpm，Mob，Pmb，Tmb，Bzl，Nb，Tms，But，Ptm，Am，Me，Ph，Pic，Pnc等；R3为Fmoc，Adoc，Aoc，Z，BOC，Trt，Bpoc，Ddz，Ibc，Dpp，Mz，Doc，Dpc，2Cz，4Cz，4Nz，Paz，Dobz，Inc，Iec，Tcc，Msc，For，Tfa，Pht，Tos，Nps；其中的酸为HCl/三氟乙醇，2-50％TFA的CH2Cl2或稀醋酸溶液，HBr/乙酸溶液，BTFA，CF3SO3H，FSO3H，HF，H2-Pd于液氨中，Zn于稀醋酸中，HCl二氧六环溶液，冷的三氟乙酸，稀的甲磺酸等；其中的碱为常用的碱，水合肼，六氢吡啶，氨基钠等。
Figure BDA0000152965250000081
其中R4为Fmoc，Adoc，Aoc，Z，BOC，Trt，Bpoc，Ddz，Ibc，Dpp，Mz，Doc，Dpc，2Cz，4Cz，4Nz，Paz，Dobz，Inc，Iec，Tcc，Msc，For，Tfa，Pht，Tos，Nps等；R5为Dpm，Mob，Pmb，Tmb，Bzl，Nb，Tms，But，Ptm，Am，Me，Ph，Pic，Pnc等；其中的酸为HCl/三氟乙醇，2-5％TFA的CH2Cl2或稀醋酸溶液，HBr/乙酸溶液，BTFA，CF3SO3H，FSO3H，HF，H2-Pd于液氨中，Zn于稀醋酸中，HCl二氧六环溶液，冷的三氟乙酸，稀的甲磺酸等；其中的碱为常用的碱，水合肼，六氢吡啶，氨基钠等。
Figure BDA0000152965250000091
其中的酸为HCl/三氟乙醇，2-5％TFA的CH2Cl2或稀醋酸溶液，HBr/乙酸溶液，BTFA，CF3SO3H，FSO3H，HF，H2-Pd于液氨中，Zn于稀醋酸中，HCl二氧六环溶液，冷的三氟乙酸，稀的甲磺酸等；其中的碱为常用的碱，水合肼，六氢吡啶，氨基钠等。
Figure BDA0000152965250000101
进一步地，本发明还提供了一系列新的中间体化合物，这中间体化合物均是采用本发明的制备方法过程中制备得到的。包括：
式A结构的中间体，具体结构如下：
式A
Figure BDA0000152965250000111
R2选自Dpm，Mob，Pmb，Tmb，Bzl，Nb，Tms，But，Ptm，Am，Me，Ph，Pic，Pnc等；R3为Fmoc，Adoc，Aoc，Z，BOC，Trt，Bpoc，Ddz，Ibc，Dpp，Mz，Doc，Dpc，2Cz，4Cz，4Nz，Paz，Dobz，Inc，Iec，Tcc，M sc，For，Tfa，Pht，Tos，Nps等。式A特别优选以下结构的化合物：
Figure BDA0000152965250000112
式B结构的中间体，具体结构如下：
Figure BDA0000152965250000113
式B
Figure BDA0000152965250000121
其中R3选自Fmoc，Adoc，Aoc，Z，BOC，Trt，Bpoc，Ddz，Ibc，Dpp，Mz，Doc，Dpc，2Cz，4Cz，4Nz，Paz，Dobz，Inc，Iec，Tcc，Msc，For，Tfa，Pht，Tos，Nps等。式B特别优选是以下结构的化合物：
Figure BDA0000152965250000122
式C结构的中间体化合物，具体结构如下：
Figure BDA0000152965250000123
式C
其中R4选自Fmoc，Adoc，Aoc，Z，BOC，Trt，Bpoc，Ddz，Ibc，Dpp，Mz，Doc，Dpc，2Cz，4Cz，4Nz，Paz，Dobz，Inc，Iec，Tcc，Msc，For，Tfa，Pht，Tos，Nps等；R5选自D pm，Mob，Pmb，Tmb，Bzl，Nb，Tms，But，Ptm，Am，Me，Ph，Pic，Pnc等。
式D结构的中间体化合物，具有以下结构
Figure BDA0000152965250000131
式D
Figure BDA0000152965250000132
其中R4选自Fmoc，Adoc，Aoc，Z，BOC，Trt，Bpoc，Ddz，Ibc，Dpp，Mz，Doc，Dpc，2Cz，4Cz，4Nz，Paz，Dobz，Inc，Iec，Tcc，Msc，For，Tfa，Pht，Tos，Nps等；R5选自Dpm，Mob，Pmb，Tmb，Bzl，Nb，Tms，But，Ptm，Am，Me，Ph，Pic，Pnc等。式D特别优选以下化合物：
式E结构的中间体化合物，具体结构如下：
Figure BDA0000152965250000141
式E
R5选自Dpm，Mob，Pmb，Tmb，Bzl，Nb，Tms，But，Ptm，Am，Me，Ph，Pic，Pnc等。式E特别优选以下化合物：
Figure BDA0000152965250000143
式F结构的中间体化合物，具体结构如下：
Figure BDA0000152965250000144
式F
Figure BDA0000152965250000151
其中R3选自Fmoc，Adoc，Aoc，Z，BOC，Trt，Bpoc，Ddz，Ibc，Dpp，Mz，Doc，Dpc，2Cz，4Cz，4Nz，Paz，Dobz，Inc，Iec，Tcc，Msc，For，Tfa，Pht，To s，Nps等；R5选自Dpm，Mob，Pmb，Tmb，Bzl，Nb，Tms，But，Ptm，Am，Me，Ph，Pic，Pnc等。式F特别优选以下化合物：
Figure BDA0000152965250000161
式G结构的中间体化合物，具体结构如下：
式G
R5选自Dpm，Mob，Pmb，Tmb，Bzl，Nb，Tms，But，Ptm，Am，Me，Ph，Pic，Pnc等。式G特别优选以下化合物：
Figure BDA0000152965250000172
式H结构的中间体化合物，具体结构如下：
Figure BDA0000152965250000181
R5选自Dpm，Mob，Pmb，Tmb，Bzl，Nb，Tms，But，Ptm，Am，Me，Ph，Pic，Pnc等。式H特别优选以下化合物：
术语
在本发明中，所涉及术语具有以下含义。
Figure BDA0000152965250000192
Figure BDA0000152965250000201
Figure BDA0000152965250000211
附图说明
【图1】采用现有技术(US4317771)制备罗莫肽纯化前的HPLC图
【图2】采用现有技术(EP002367)制备罗莫肽纯化前的HPLC图
【图3】采用本发明的方法制备罗莫肽纯化前的HPLC图
具体实施方式
实施例一
Fmoc-Ala-D-iso-Gln(ONb)的制备
将Boc-D-iso-Glu(ONb)11.7g(30.0mmol)置于500ml茄形瓶中，加入2N盐酸二氧六环溶液80ml，溶解后马上析出固体，室温(23℃)搅拌反应1h。减压除去溶剂，加入二氯甲烷反复抽干三次。加入100ml四氢呋喃，固体不溶，加入MM(N-甲基吗啉)3.43g，备用。
将Fmoc-Ala 9.33g(30.0mmol)置于500ml茄形瓶中，加入100ml二氯甲烷，溶解，冰浴10分钟。搅拌，加入HOB 4.25g(31.5mmol)(溶于15mlDMF)，加入DCC 6.50g(31.6mmol)，冰浴反应1h，有固体析出。将备用液加入，维持冰浴反应2h，撤去冰浴，室温(23℃)反应过夜。过滤，滤除固体，加入200ml二氯甲烷，有不溶物，滤除，用二氯甲烷洗固体，合并滤液，用饱和盐水、10％柠檬酸、饱和碳酸氢钠，饱和盐水各洗三次，硫酸钠干燥，TLC检测。条件：二氯甲烷∶甲醇＝30∶1。滤除干燥剂，水浴减压除去溶剂，加入石油醚，研磨，滤集固体，石油醚洗1次，无水乙醚洗1次，晾干，得类白色固体Fmoc-Ala-D-iso-Gln(ONb)16.65g，产率96.5％。测定其熔点为150-152℃。MS：577.6(M+1)，1HNMR(ppm)(CDCl3)8.07(2H，d)，8.0(2H，s)，7.84(2H，d)，7.55(2H，d)，7.38(2H，t)，7.32(2H，d)，728(2H，d)，6.0(2H，s)，4.73.0(1H，s)，4.42(1H，m)，3.74(1H，m)，2.35(2H，s)，2.18(4H，m)，1.28(3H，t)。
TLC检测条件：二氯甲烷∶甲醇＝30∶1，Rf值为0.5，(碘显色，荧光显色254nm)。主斑点纯度大于95％。
实施例二
Boc-Ala-D-iso-Gln(OBZL)的制备
将Boc-D-iso-Gln(OBZL)11.4g(30.0mmol)置于500ml茄形瓶中，加入2N盐酸二氧六环溶液80ml，溶解后马上析出固体，室温(13℃)搅拌反应1h。减压除去溶剂，加入二氯甲烷反复抽干三次。加入100ml二氯甲烷，固体不溶，加入MM(N-甲基吗啉)3.43g，备用。
将Boc-Ala 6.41g(33.8mmol)置于500ml茄形瓶中，加入100ml二氯甲烷，溶解，冰浴10分钟。搅拌，加入HOBt 4.8g(35.6mmol)(溶于15mlDMF)，加入DCC7.33g(35.6mmol)，冰浴反应1h，有固体析出。将备用液加入，维持冰浴反应2h，撤去冰浴，室温(13℃)反应过夜。减压除去溶剂，得固体，加入400ml乙酸乙酯，有不溶物，滤除，用乙酸乙酯洗固体，合并滤液，用饱和盐水、10％柠檬酸、饱和碳酸氢钠，饱和盐水各洗三次，硫酸钠干燥，TLC检测。(条件：二氯甲烷∶甲醇＝19∶1)。滤除干燥剂，30℃水浴减压除去溶剂，有固体析出，当还有少量溶剂时停止，加入石油醚，冰浴1h，滤集固体，石油醚洗1次，无水乙醚洗1次，晾干，得Boc-Ala-D-iso-Gln(OBZL)，其为类白色固体12.65g，产率91.6％。熔点135-140℃。
MS：430.24(M+Na)，1HNMR(ppm)(CDCl3)：
8.01(2H，s)，7.14(2H，t)，7.07(1H，t)，7.06(2H，d)，6.0(2H，s)，4.71.0(1H，s)，4.45(1H，m)，3.74(1H，m)，2.35(2H，s)，2.18(2H，m)，2.07(2H，t)，1.48(3H，t).1.40(9H，s)。
TLC检测条件：二氯甲烷∶甲醇＝19∶1，Rf值为0.45，(碘显色，荧光显色254nm)。TLC没有发现杂质斑点。
实施例三
Fmoc-Lys(OBzl)-CO(CH2)16CH3的制备
将硬脂酸20.8g(0.245mol)置于2L茄形瓶中，加200ml N，N-二乙基乙酰胺，加入HOBT 11.16g(0.083mol)，冰水浴，加入DCC 17.93g(0.083mol)，冰水浴反应2h。加入Fmoc-Lys(OBzl)对甲苯磺酸盐41g溶液(先用300mlN，N-二乙基乙酰胺溶解，冰浴，30分钟后加入NMM 6.85ml)，冰浴搅拌反应2h，自然升至室温，反应过夜。减压除去N，N-二乙基乙酰胺，加入800ml二氯甲烷溶解，滤除不溶物，有机相用水洗3次，饱和碳酸氢钠、水、10％柠檬酸，水各洗三次，硫酸镁干燥过夜。
减压除去二氯甲烷，固体用乙酸乙酯400ml加热溶解，滤除不溶物，滤液程冻状，过滤，用乙酸乙酯洗2次，干燥，得37g Fmoc-Lys(OBzl)-CO(CH2)16CH3，产率：80.7％。MS 725(M+1)；1HNMR(ppm)(CDCl3)：8.0(2H，d)，8.0(1H，s)，7.84(2H，d)，7.55(2H，d)，7.38(2H，t)，7.32(2H，d)，7.28(2H，d)，7.19(5H，m)，6.0(2H，s)，5.34(2H，s)，4.81(1H，s)，4.42(1H，m)，3.74(1H，s)，2.45(2H，t)，1.90(2H，t)，1.57(2H，m)，1.55(2H，t)，1.33(2H，m)，1.29(30H，m)，0.96(3H，t)。
TLC条件：二氯甲烷∶甲醇＝10∶0.18，Rf值为0.65，(碘显色，荧光显色254nm)。TLC没有发现杂质斑点。
实施例四
Boc-Lys(ONb)-CO(CH2)16CH3的制备
将硬脂酸12.4g(50mmol)置于2L茄形瓶中，加700mlDMF，加入HOBT 8.1g(60.0mmol)，冰水浴，加入DCC 12.36g(60.0mmol)，冰水浴反应2h。加入Boc-Lys(ONb)18.6g(50.0mmol)溶液(先用500mlDMF溶解)，冰浴搅拌反应2h，反应液中有少许固体析出，成冻状，自然升至室温，反应过夜。减压除去DMF，加入800ml二氯甲烷溶解，滤除不溶物，有机相用水洗3次，饱和碳酸氢钠、水、10％柠檬酸，水各洗三次，硫酸镁干燥过夜。减压除去二氯甲烷，固体用乙酸乙酯400ml加热溶解，滤除不溶物，滤液程冻状，过滤，用乙酸乙酯洗2次，干燥，得28.3g Boc-Lys(ONb)-CO(CH2)16CH3，产率：90.9％。MS 652.1(M+1)；1HNMR(ppm)(CDCl3)：8.12(2H，d)，8.0(2H，s)，7.45(2H，d)，5.34(2H，s)，4.42(1H，m)，3.20(2H，t)，2.18(2H，m)，1.90(2H，m)，1.57(2H，m)，1.55(2H，t)，1.33(2H，m)，1.29(30H，m)，1.21(9H，s)0.96(3H，t)。
TLC条件：二氯甲烷∶甲醇＝10∶0.18，Rf值为0.6，(碘显色，荧光显色254nm)。TLC没有发现杂质斑点。
实施例五
Lys(ONb)-CO(CH2)16的制备
将Boc-Lys(ONb)-CO(CH2)16CH3 24.57g(38.8mmol)置于2L茄形瓶中，加入50％三氟乙酸/二氯甲烷溶液300ml，全溶，室温搅拌反应2h。减压除去溶剂，得固体，用乙醚洗涤固体三次。晾干，将此固体悬浮于200ml二氯甲烷中，加入40mlN-甲基吗啡啉，搅拌半小时，过滤，浓缩至干，加入石油醚搅拌，得白色固体，滤集固体，真空干燥得19.1g Lys(ONb)-CO(CH2)16，产率96.1％。MS 574(M+Na)；1HNMR(ppm)(CDCl3)；8.12(2H，d)，8.0(1H，s)，7.45(2H，d)，5.34(2H，s)，4.42(1H，m)，3.20(2H，t)，2.18(2H，m)，2.01(2H，d)1.90(2H，m)，1.57(2H，m)，1.55(2H，t)，1.33(2H，m)，1.29(30H，m)，0.96(3H，t)。
TLC条件：二氯甲烷∶甲醇＝10∶0.2，Rf值为0.35，(碘显色，荧光显色254nm)。主斑点纯度大于95％
实施例六
Lys(OBzl)-CO(CH2)16CH3的制备
将Fmoc-Lys(OBzl)-硬脂酸49.17g置于2L茄形瓶中，加入25％哌啶/二氯甲烷溶液600ml，全溶，室温搅拌反应2h。减压除去溶剂，得固体，用乙酸乙酯洗至无Fmoc。晾干，真空干燥得31.5g Lys(OBzl)-CO(CH2)16CH3，产率92.26％。MS 507(M+1)；1HNMR(ppm)(CDCl3)；8.0(1H，s)，7.19(5H，m)，5.34(2H，s)，3.42(1H，m)，3.20(2H，t)，2.18(2H，m)，1.90(2H，m)，1.57(2H，m)，1.55(2H，t)，1.33(2H，m)，1.29(30H，m)，0.96(3H，t)。
TLC条件：二氯甲烷∶甲醇＝10∶0.2，Rf值为0.3，(碘显色，荧光显色254nm)。主斑点纯度大于95％。
实施例七
Fmoc-Ala-D-iso-Gln的制备
Fmoc-Ala-D-iso-Glu(ONb)29.8g(50.0mmol)置于1L茄形瓶中，加入乙酸400ml，完全溶解，控制反应温度在25以下，分批加入Zn份30g，约需4小时，加毕，室温搅拌4小时，过滤，减压除去乙酸，剩余物用300ML二氯甲烷溶解，水洗3次，无水硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩至100ML，加入石油醚50Ml，析出固体，过滤，滤集固体，得白色固体20.8g Fmoc-Ala-D-iso-Gln，收率94.5％。MS 441.7(M+1)；1HNMR(ppm)(CDCl3)：11.0(1H，s)，8.07(2H，d)，8.0(2H，s)，7.84(2H，d)，7.55(2H，d)，7.38(2H，t)，7.28(2H，d)，6.0(2H，s)，4.81(1H，s)，4.71.0(1H，s)，4.46(1H，m)，3.74(1H，m)，2.18(2H，t)，2.06(2H，m)，1.48(3H，d)。
二氯甲烷∶甲醇＝19∶1，Rf值为0.35，(碘显色)。主斑点纯度大于95％。
实施例八
Boc-Ala-D-iso-Gln的制备
Boc-Ala-D-iso-Glu(OBzl)23.8g(58.3mmol)置于1L茄形瓶中，加入甲醇300ml，完全溶解，室温搅拌2小时，减压除去DMF，剩余物用石油醚200ML研磨，过滤，滤集固体，得白色固体20.8gBoc-Ala-D-iso-Gln，收率94.5％。MS317.7(M)；1HNMR(ppm)(CDCl3)：11.0(1H，s)，8.0(2H，s)，6.0(2H，s)，.71.0(1H，s)，4.46(1H，m)，3.74(1H，m)，2.18(2H，t)，2.06(2H，m)，1.48(3H，d)；1.40(9H，s)。
二氯甲烷∶甲醇＝19∶1，Rf值为0.15，(碘显色)。TCL没有发现杂质斑点。
实施例九
Fmoc-Ala-D-iso-Gln-[Lys(ONb)-CO(CH2)16CH3]的制备
将Fmoc-Ala-D-iso-Gln6.22.2g(50.0mmol)置于1L茄形瓶中，加入300ml二氯甲烷和DMF 100ml全溶，冰浴。加入HOBT 7.10g(52.5mmol)，DCC11.08g(57.3mmol)冰浴反应2h。加入Lys(ONb)-CO(CH2)16CH326.7g(50.1mmol)，加入100mlDMF溶解，维持冰浴反应2h，自然升至室温，全溶，反应过夜。反应液为冻状，减压除去溶剂得固体，加入二氯甲烷，加热5分钟，放置，过滤，乙酸乙酯洗三次，二氯甲烷洗三次，石油醚洗三次，晾干得白色44.6g Fmoc-Ala-D-iso-Gln-[Lys(ONb)-CO(CH2)16CH3]。收率92.0％。MS1014.6(M+Na)；1HNMR(ppm)(DMSO-d6)：8.07(2H，d)，8.0(4H，s)，7.84(2H，d)，7.55(2H，d)，7.38(2H，t)，7.32(2H，d)，7.28(2H，d)，6.0(2H，s)，4.81(1H，s)，4.71.0(1H，s)，4.53(1H，m)，4.45(1H，m)3.71(2H，s)，3.20(2H，m)，2.18(4H，t)，2.07(2H，m)，1.79(2H，m)，1.57(2H，m)，1.48(3H，d).，1.33(2H，m)，1.29(30H，m)，0.96(3H，t)。
二氯甲烷∶甲醇＝10∶1，Rf值为0.65，(碘显色，荧光显色254nm)。主斑点纯度大于95％。
实施例十
Boc-Ala-D-iso-Gln-[Lys(OBzl)-CO(CH2)16CH3]的制备
将Boc-Ala-D-iso-Gln 12.29g(39.0mmol)置于1L茄形瓶中，加入200mlDMF全溶，冰浴。加入HOBT 5.53g(40.95mmol)，DCC8.88g(40.95mmol)冰浴反应2h。加入Lys(OBzl)-CO(CH2)16CH319.66g(39.0mmol)，加入300ml二氯甲烷溶解，维持冰浴反应2h，自然升至室温，全溶，反应过夜。反应液为冻状，减压除去溶剂得固体，加入乙酸乙酯，加热5分钟，放置，过滤，乙酸乙酯洗三次，二氯甲烷洗三次，石油醚洗三次，晾干。得白色固体25.3g Boc-Ala-D-iso-Gln-[Lys(OBzl)-CO(CH2)16CH3]，收率80.7％。MS 804.6(M+1)；1HNMR(ppm)(DMSO-d6)：8.0(4H，s)，7.14(2H，d)，7.07(1H，dd)，7.06(2H，d)，6.0(2H，s)，4.71.0(1H，s)，4.53(1H，m)，4.45(1H，m)3.71(2H，s)，3.20(2H，m)，2.18(4H，t)，2.07(2H，m)，1.79(2H，m)，1.57(2H，m)，1.48(3H，d).，1.40(9H，s)1.33(2H，m)，1.29(30H，m)，0.96(3H，t)。
二氯甲烷∶甲醇＝10∶1，Rf值为0.4，(碘显色，荧光显色254nm)。TCL没有发现杂质斑点。
实施例十一
Boc-Ala-D-iso-Gln-[Lys(ONb)-CO(CH2)16CH3](保护四肽)的制备
将Boc-Ala-D-iso-Gln6.24.5g(78.0mmol)置于1L茄形瓶中，加入200mlDMF全溶，冰浴。加入HOBT 11.1g(81.1mmol)，DCC 16.7g(81.1mmol)冰浴反应2h。加入Lys(ONb)-CO(CH2)16CH342.2g(80.0mmol)，加入300mlDMF溶解，维持冰浴反应2h，自然升至室温，全溶，反应过夜。反应液为冻状，减压除去溶剂得固体，加入二氯甲烷，加热5分钟，放置，过滤，二氯甲烷洗三次，乙酸乙酯洗三次，石油醚洗三次，晾干得白色固体58.9g Boc-Ala-D-iso-Gln-[Lys(ONb)-CO(CH2)16CH3]，收率88.9％。MS 891.6(M+Na)；1HNMR(ppm)(DMSO-d6)；8.07(2H，d)，8.0(4H，s)，7.32(2H，d)，6.0(2H，s)，4.71.0(1H，s)，4.53(1H，m)，4.45(1H，m)3.71(2H，s)，3.20(2H，m)，2.18(4H，t)，2.07(2H，m)，1.79(2H，m)，1.57(2H，m)，1.48(3H，d).，1.40(9H，s)1.33(2H，m)，1.29(30H，m)，0.96(3H，t)。
二氯甲烷∶甲醇＝10∶1，Rf值为0.6，(碘显色，荧光显色254nm)。TCL没有发现杂质斑点。
实施例十二
Ala-D-iso-Gln-[Lys(OBzl)-CO(CH2)16CH3]的制备
Boc-Ala-D-iso-Gln-[Lys(OBzl)-CO(CH2)16CH3]20g(24.9mmol)溶于300mL 50％三氟乙酸二氯甲烷溶液，室温搅拌3小时，减压除去溶剂和剩余三氟乙酸，剩余物加入二氯甲烷200mL，滴加N-甲基吗啡啉26g，搅拌半小时，过滤，固体用二氯甲烷洗涤三次，得白色Ala-D-iso-Gln-Lys(OBzl)-CO(CH2)16CH3固体17.3g，收率98.8％。MS 704.6(M+1)；1HNMR(ppm)(DMSO-d6)；8.0(3H，s)，7.14(2H，d)，7.07(1H，dd)，7.06(2H，d)，6.0(2H，s)，4.71.0(1H，s)，4.53(1H，m)，4.45(1H，m)3.74(2H，s)，3.20(2H，m)，2.18(4H，t)，2.07(2H，m)，2.01(2H，Br)，1.79(2H，m)，1.57(2H，m)，1.48(3H，d).，1.33(2H，m)，1.29(30H，m)，0.96(3H，t)。
二氯甲烷∶甲醇＝10∶1，Rf值为0.55，(碘显色，荧光显色254nm)。TCL没有发现杂质斑点。
实施例十三
Ala-D-iso-Gln-[Lys(ONb)-CO(CH2)16CH3]的制备
Boc-Ala-D-iso-Gln-[Lys(ONb)-CO(CH2)16CH3]23.5g(27.7mmol)溶于4MHCl/二氧六环溶液，室温搅拌3小时，减压除去溶剂，剩余物加入二氯甲烷250mL，滴加N-甲基吗啡啉30g，搅拌半小时，过滤，固体用二氯甲烷洗涤三次，得白色Ala-D-iso-Gln-[Lys(OBNb)-CO(CH2)16CH3]固体18.3g，收率83.8％。MS 791.6(M+Na)；1HNMR(ppm)(DMSO-d6)：8.07(2H，d)，8.0(3H，s)，7.32(2H，d)，6.0(2H，s)，4.71.0(1H，s)，4.53(1H，m)，4.45(1H，m)3.74(2H，s)，3.20(2H，m)，2.18(4H，t)，2.07(2H，m)，2.01(2H，Br)，1.79(2H，m)，1.57(2H，m)，1.48(3H，d).，1.33(2H，m)，1.29(30H，m)，0.96(3H，t)。
二氯甲烷∶甲醇＝10∶1，Rf值为0.35，(碘显色，荧光显色254nm)。TCL没有发现杂质斑点。
实施例十四
Ala-D-iso-Gln-[Lys(ONb)-CO(CH2)16CH3]的制备
Fmoc-Ala-D-iso-Gln-[Lys(ONb)-CO(CH2)16CH3]26.5g(27.3mmol)溶于300mL 30％哌啶/DMF溶液，室温搅拌3小时，减压除去溶剂，剩余物加入石油醚250mL研磨，倾出石油醚，反复三次，过滤，固体用石油醚洗涤三次，得白色Ala-D-iso-Gln-[Lys(OBNb)-CO(CH2)16CH3]固体19.3g，收率94.4％。MS791.6(M+Na)；1HNMR(ppm)(DMSO-d6)：8.07(2H，d)，8.0(3H，s)，7.32(2H，d)，6.0(2H，s)，4.71.0(1H，s)，4.53(1H，m)，4.45(1H，m)3.74(2H，s)，3.20(2H，m)，2.18(4H，t)，2.07(2H，m)，2.01(2H，Br)，1.79(2H，m)，1.57(2H，m)，1.48(3H，d).，1.33(2H，m)，1.29(30H，m)，0.96(3H，t)。
二氯甲烷∶甲醇＝10∶1，Rf值为0.35，(碘显色，荧光显色254nm)。TCL没有发现杂质斑点。
实施例十五
保护罗莫肽B1，B4，6-NAcMur-Ala-D-iso-Glu-[Lys(OBzl)-CO(CH2)16CH3]的制备
将2.83(6.0mmol)克保护胞壁酸(B1，B4，6-NAcMur)于反应瓶中，加入干燥DMF300毫升溶解，冰浴冷却，加入HOBt 0.89克(6.6mmol)，DCC 1.43g(6.6mmol)，继续冰浴反应2小时后，将Ala-D-iso-Glu-[Lys(OBzl)-CO(CH2)16CH3]4.82(6.0mmol)加至反应瓶中，继续冰浴反应过夜。减压除去溶剂，加入乙酸乙酯析出固体，过滤得白色固体6.3克B1，B4，6-NAcMur-Ala-D-iso-Glu-[Lys(OBzl)-CO(CH2)16CH3]，收率81.8％。MS 1179.1.(M+Na)；1HNMR(ppm)(DMSO-d6)：8.0(4H，s)，7.06-7.25(15H，m)，6.0(2H，s)，5.98(1H，m)，5.53(1H，m)，4.71.0(1H，s)，4.63(2H，s)，4.53(1H，m)，4.45(1H，m)4.43(1H，m)，4.34(1H，m)，4.03(1H，m)，3.96(1H，m)，3.89(1H，m)，3.02(1H，m)，3.81(1H，m)，3.74(2H，s)，3.20(2H，m)，2.18(4H，t)，2.07(2H，m)，2.02(2H，s)，1.79(2H，m)，1.57(2H，m)，1.48(3H，d).，1.39(2H，d)，1.33(2H，m)，1.29(30H，m)，0.96(3H，t)。
二氯甲烷∶甲醇＝10∶1，Rf值为0.75，(碘显色，荧光显色254nm)。TCL没有发现杂质斑点。
实施例十六
保护罗莫肽B1，B4，6-NAcMur-Ala-D-iso-Glu-[Lys(ONb)-CO(CH2)16CH3]的制备
将5.47(11.60mmol)克保护胞壁酸(BHBB S)于反应瓶中，加入干燥DMF500毫升溶解，冰浴冷却，加入HOBt1.73克(12.76mmol)，DCC2.63g(12.76mmol)，继续冰浴反应2小时后，将Ala-D-iso-Glu-[Lys(ONb)-CO(CH2)16CH3]9.84(11.60mmol)加至反应瓶中，继续冰浴反应过夜。减压除去溶剂，加入乙酸乙酯析出固体，过滤得白色固体B1，B4，6-NAcMur-Ala-D-iso-Glu-[Lys(ONb)-CO(CH2)16CH3]11.50克，收率84.8％。MS 1224.1.(M+Na)；1HNMR(ppm)(DMSO-d6)：8.12(2H，d)，8.0(4H，s)，7.45(2H，d)7.06-7.20(10H，m)，6.01(2H，s)，5.98(1H，m)，5.53(1H，m)，4.71.0(1H，s)，4.63(2H，s)，4.53(1H，m)，4.45(1H，m)4.43(1H，m)，4.34(1H，m)，4.03(1H，m)，3.96(1H，m)，3.89(1H，m)，3.02(1H，m)，3.81(1H，m)，3.74(2H，s)，3.20(2H，m)，2.18(4H，t)，2.07(2H，m)，2.02(2H，s)，1.79(2H，m)，1.57(2H，m)，1.48(3H，d)，1.39(2H，d)，1.33(2H，m)，1.29(30H，m)，0.96(3H，t)。
二氯甲烷∶甲醇＝10∶1，Rf值为0.55，(碘显色，荧光显色254nm)。主斑点纯度大于95％。
实施例十七
罗莫肽的制备
将B 1，B4，6-NAcMur-Ala-D-iso-Glu-[Lys(ONb)-CO(CH2)16CH3]10.3克全保护罗莫肽溶于100mL冰乙酸和200mL甲醇的混合溶剂中，分批加入Zn粉33克，常温下反应化6小时，滤去固体，减压除去溶剂，残留物用石油醚研磨，滤集固体，固体用石油醚洗三次，晾干得罗莫肽5.5克。收率95％。MS 888.1.(M+1)；1HNMR(ppm)(DMSO-d6)：8.12(2H，d)，8.0(4H，s)，7.45(2H，d)7.06-7.20(10H，m)，6.01(2H，s)，5.98(1H，m)，5.53(1H，m)，4.71.0(1H，s)，4.63(2H，s)，4.53(1H，m)，4.45(1H，m)4.43(1H，m)，4.34(1H，m)，4.03(1H，m)，3.96(1H，m)，3.89(1H，m)，3.02(1H，m)，3.81(1H，m)，3.74(2H，s)，3.20(2H，m)，2.18(4H，t)，2.07(2H，m)，2.02(2H，s)，1.79(2H，m)，1.57(2H，m)，1.48(3H，d)，1.39(2H，d)，1.33(2H，m)，1.29(30H，m)，0.96(3H，t)。
正丁醇∶水＝4∶1，Rf值为0.65，(碘显色)。主斑点纯度大于95％。
实施例十九
罗莫肽的制备
将B1，B4，6-NAcMur-Ala-D-iso-Glu-[Lys(OBzl)-CO(CH2)16CH3]8.3克全保护罗莫肽溶于100Ml乙酸和200mL甲醇的混合溶剂中，加入钯黑或者Pd(OH)23克常压氢化8小时，滤去催化剂，减压除去溶剂，残留物用石油醚研磨，滤集固体，固体用石油醚洗三次，晾干得罗莫肽5.5克。收率95％。MS 888.1.(M+1)；1HNMR(ppm)(DMSO-d6)5.19(1H，d)，4.28-4.46(4H，m)，3.88(1H，q)，3.86-3.74(3H，m)，3.66(1H，q)，3.51(1H，t)，3.19(2H，t)，2.38(2H，t)，2.18(2H，t)，1.96(3H，s)，1.92-1.23(38H，m)，1.42(3H，d).，1.39(3H，d)，，0.96(3H，t)。
正丁醇∶水＝4∶1，Rf值为0.65，(碘显色)。主斑点纯度大于95％。HPLC分析纯度与TCL一致，纯度为94.8％，经过HPLC一次纯化，罗莫肽的纯度可达98％的药用标准甚至更高的纯度。
实施例十八
罗莫肽的制备
将B1，B4，6-NAcMur-Ala-D-iso-Glu-[Lys(OBzl)-CO(CH2)16CH3]8.3克全保护罗莫肽溶于100Ml DMF和200mL甲醇的混合溶剂中，加入10％Pd-C 3克常压氢化6小时，滤去催化剂，减压除去溶剂，残留物用石油醚研磨，滤集固体，固体用石油醚洗三次，晾干得罗莫肽5.5克。收率95％。MS 888.1.(M+1)；1HNMR(ppm)(DMSO-d6)5.19(1H，d)，4.28-4.46(4H，m)，3.88(1H，q)，3.86-3.74(3H，m)，3.66(1H，q)，3.51(1H，t)，3.19(2H，t)，2.38(2H，t)，2.18(2H，t)，1.96(3H，s)，1.92-1.23(38H，m)，1.42(3H，d).，1.39(3H，d)，，0.96(3H，t).
正丁醇∶水＝4∶1，Rf值为0.65，(碘显色)。主斑点纯度大于95％。HPLC分析纯度与TCL一致，纯度为95.90％(附图3)，经过HPLC一次纯化，罗莫肽的纯度可达98％的药用标准甚至更高的纯度。
对比实施例1
根据罗莫肽的合成文献US4317771和EP002367中实施例的技术方案，采用全液相合成，得到罗莫肽终产品的纯度分别为25.93％(附图1)和14.08％(附图2)，经HPLC三次纯化，得纯度分别为90％和88％的罗莫肽。可以看出，现有技术生产罗莫肽产率低，纯度低，成本高。

Claims (17)

1.光学活性罗莫肽的制备方法，包括以下步骤：以保护R1-D-iso-Gln-(OR2)为原料，脱去R1后与R3-L-丙氨酸在Hobt/DCC存在下缩合生成R3-L-Ala-D-iso-Gln-(OR2)，后者脱去R2保护基得到二肽R3-L-Ala-D-iso-Gln-(OH)；以保护赖氨酸为原料，与硬脂酸在DCC，Hobt/DCC，或者亚硫酰氯存在下缩合生成CH3(CH2)16CO-Lys(R4)-OR5二肽片段，脱去R4后得CH3(CH2)16CO-Lys-OR5；R3-L-Ala-D-iso-Gln-(OH)与CH3(CH2)16CO-Lys-OR5在Hobt/DCC存在下缩合生成四肽R3-L-Ala-D-iso-Gln-〔Lys(OR5)-CO(CH2)16CH3〕(III)，脱去保护基R3得L-Ala-D-iso-Gln-〔Lys(OR5)-CO(CH2)16CH3〕，L-Ala-D-iso-Gln-〔Lys(OR5)-CO(CH2)16CH3〕与保护胞壁酸缩合生成B1，B4，6-NAcMur-Ala-D-iso-Glu-〔Lys(OR5)-CO(CH2)16CH3〕，脱去保护基生成罗莫肽，其中R1选自Fmoc，Adoc，Aoc，Z，BOC，Trt，Bpoc，Ddz，Ibc，Dpp，Mz，Doc，Dpc，2Cz，4Cz，4Nz，Paz，Dobz，Inc，Iec，T cc，Msc，For，Tfa，Pht，Tos，Nps；R2选自Dpm，Mob，Pmb，Tmb，Bzl，Nb，Tms，But，Ptm，Am，Me，Ph，Pic，Pnc；R3与R1相同或不同，选自Fmoc，Adoc，Aoc，Z，BOC，Trt，Bpoc，Ddz，Ibc，Dpp，Mz，Doc，Dpc，2Cz，4Cz，4Nz，Paz，Dobz，Inc，Iec，Tcc，Msc，For，Tfa，Pht，Tos，Nps；R4与R1、R3相同或不同，选自Fmoc，Adoc，Aoc，Z，BOC，Trt，Bpoc，Ddz，Ibc，Dpp，Mz，Doc，Dpc，2Cz，4Cz，4Nz，Paz，Dobz，Inc，Iec，Tcc，Msc，For，Tfa，Pht，Tos，Nps；R5与R2相同或不同，选自Dpm，Mob，Pmb，Tmb，Bzl，Nb，Tms，But，Ptm，Am，Me，Ph，Pic，Pnc。
2.根据权利要求1的制备方法，其采用酸、碱或氢化脱保护基。
3.根据权利要求2的方法，其中的所述的酸为HCl/三氟乙醇，2-50％T FA的CH2Cl2或稀醋酸溶液，HBr/乙酸溶液，BTFA，CF3SO3H，FSO3H，HF，HCl二氧六环溶液，冷的三氟乙酸或稀的甲磺酸；碱为水合肼、六氢吡啶、氨基钠、甲基吗啉或二乙胺；氢化条件为H2/Pd-C、PdO或Pd(OH)，Zn于稀醋酸中。
4.根据权利要求1的方法，包括以下步骤：
a)以R1-D-iso-Gln(OR2)2为原料，用酸或碱脱去保护基而后得D-iso-Gln(OR2)(I)；
b)(I)与R3-L-丙氨酸在Hobt/DCC存在下缩合生成R3-L-Ala-D-iso-Gln-OR2(II)；
c)(II)在Pd/C催化下进行氢化或锌-乙酸进行反应，脱去保护基R2，得到
R3-L-Ala-D-iso-Gln-OH(III)； 
d)以L-Lys(R4)-OR5为原料，与硬脂酸在DCC或Hobt/DCC存在下缩合生成CH3(CH2)16CO-Lys(R4)-OR5(IV)；
e)CH3(CH2)16CO-Lys(R4)-OR5(IV)在酸或碱溶液中脱去R4，得到CH2(CH2)16CO-Lys-OR5(V)；
f)中间体R3-L-Ala-D-iso-Gln-(OH)(III)在Hobt/DCC存在下，与CH3(CH2)16CO-Lys-(R4)-OR5(V)进行缩合生成R3-L-Ala-D-iso-Gln-〔Lys(OR5)-CO(CH2)16CH3〕(VI)；
g)R3-L-Ala-D-iso-Gln-〔Lys(OR5)-CO(CH2)16CH3〕(VI)用酸或碱溶液脱去保护基得L-Ala-D-iso-Gln-〔Lys(OR5)-CO(CH2)16CH3〕(VII)；
h)中间体L-Ala-D-iso-Gln-L-〔Lys(OR5)-CO(CH2)16CH3〕(VII)与胞壁酸在Hobt/DCC存在下进行缩合，生成保护罗莫肽(VIII)；
i)B1，B4，6-NAcMur-Ala-D-iso-Glu-〔Lys(OR5)-CO(CH2)16CH3〕在Pd/C催化下进行氢化或Zn/乙酸存在下脱去保护基生成罗莫肽；
Figure FDA0000152965240000021
Figure FDA0000152965240000031
5.根据权利要求4的方法，其中步骤a)的反应中所使用的溶剂选自N，N-二甲基甲酰胺，N，N-二乙基乙酰胺，二甲亚砜，二氯甲烷，二氧六环。
6.根据权利要求4的方法，其中步骤b)反应中使用的溶剂选自N，N-二甲基甲酰胺，N，N-二乙基乙酰胺，二甲亚砜，二氯甲烷溶剂。
7.根据权利要求4的方法，其中步骤c)反应中使用的溶剂选自N，N-二甲基甲酰胺，N，N-二乙基乙酰胺，二甲亚砜，二氯甲烷，乙酸，甲醇，乙醇。
8.根据权利要求4的方法，其中
步骤d)的反应中使用的溶剂选自N，N-二甲基甲酰胺，N，N-二乙基乙酰胺，二甲亚砜，二氯甲烷。
9.根据权利要求4的方法，其中步骤e)的反应中使用的溶剂选自N，N-二甲基甲酰胺，N，N-二乙基乙酰胺，二甲亚砜，二氯甲烷，二氧六环溶剂。
10.根据权利要求4的方法，其中步骤f)的反应中反应溶剂选自N，N-二甲基甲酰胺，N，N-二乙基乙酰胺，二甲亚砜，二氯甲烷，DMF，三氯甲烷，四氢呋喃。
11.根据权利要求4的方法，其中步骤g)反应中使用的溶剂选自N，N-二甲基甲酰胺，N，N-二乙基乙酰胺，二甲亚砜，二氯甲烷，二氧六环溶剂。
12.根据权利要求4的方法，其中步骤h)反应中，反应溶剂选自DMF，二氯甲烷，四氢呋喃。
13.根据权利要求4的方法，其中步骤i)中催化剂为RanyNi或Pd/C或钯黑或Pd(OH)2， 反应溶剂为乙酸和/或甲醇，DMF。
14.根据以上任一权利要求的制备方法，其合成路线如下：
Figure FDA0000152965240000041
。
15.制备罗莫肽的中间体化合物，选自以下结构：
Figure FDA0000152965240000062
式A
Figure FDA0000152965240000063
式B
Figure FDA0000152965240000064
式C
Figure FDA0000152965240000065
式D
式E 
Figure FDA0000152965240000071
式F
式G
Figure FDA0000152965240000073
式H
R2选自Dpm，Mob，Pmb，Tmb，Bzl，Nb，Tms，But，Ptm，Am，Me，Ph，Pic，Pnc；R3选自Fmoc，Adoc，Aoc，Z，BOC，Trt，Bpoc，Ddz，Ibc，Dpp，Mz，Doc，Dpc，2Cz，4Cz，4Nz，Paz，Dobz，Inc，Iec，Tcc，Msc，For，Tfa，Pht，Tos，Nps；
R3选自Fmoc，Adoc，Aoc，Z，BOC，Trt，Bpoc，Ddz，Ibc，Dpp，Mz，Doc，Dpc，2Cz，4Cz，4Nz，Paz，Dobz，Inc，Iec，Tcc，Msc，For，Tfa，Pht，Tos，Nps； 
R4选自Fmoc，Adoc，Aoc，Z，BOC，Trt，Bpoc，Ddz，Ibc，Dpp，Mz，Doc，Dpc，2Cz，4Cz，4Nz，Paz，Dobz，Inc，Iec，Tcc，Msc，For，Tfa，Pht，Tos，Nps；
R5选自Dpm，Mob，Pmb，Tmb，Bzl，Nb，Tms，But，Ptm，Am，Me，Ph，Pic，Pnc。
16.根据权利要求15的化合物，具有以下结构：
Figure FDA0000152965240000081
Figure FDA0000152965240000101
Figure FDA0000152965240000111
。
17.制备权利要求15或16所述的中间体化合物的方法，包括以下步骤：
Figure FDA0000152965240000121
Figure FDA0000152965240000131
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