CN102690802B - 一种右旋糖酐酶产生菌的发酵培养基及其培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种右旋糖酐酶产生菌的发酵培养基及其培养方法，所述发酵培养基含有下列重量组分：蛋白胨0.2-0.5%，K2HPO40.3-0.5%，KCl0.01-0.02%，FeSO40.001-0.002%，花生饼粉0.1-0.5%，右旋糖酐2.5-3.0%，余量为井水；本发明通过向右旋糖酐酶产生菌的发酵培养基加入适量的花生饼粉，以花生饼粉为迟效氮源生长菌体，以右旋糖酐为产酶诱导剂，显著提高右旋糖酐酶的发酵水平，酶活单位最高增幅达45%，具有操作性强，投入低产出高的优点。
Description
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域，特别是涉及提高酶活单位的一种右旋糖酐酶产生菌的发酵培养基及其培养方法。
背景技术
右旋糖酐酶是新的酶种，可以把右旋的糖酐催化分解为葡萄糖或寡糖的酶，是一种蛋白质。右旋糖酐酶在医药工业、食品工业都有重要的用途。右旋糖酐酶的研究对于龋齿的防治进而开发龋齿疫苗具有重要意义；右旋糖酐酶可以用于药用右旋糖酐的生产，并且可以用于制备葡聚糖凝胶药物缓释体系；在制糖工业中，可改善糖产品的滤过性，增加糖的回收率，降低黏度，因此该产品市场前景广阔。现有右旋糖酐酶产生菌发酵培养基的发酵水平和发酵酶活单位都较低，酶活单位＜500u/ml。
发明内容
本发明的目的在于提供一种右旋糖酐酶产生菌的发酵培养基及其培养方法，显著提高右旋糖酐酶的酶活单位，酶活单位的最高增幅达45%。
本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的：
一种右旋糖酐酶产生菌的发酵培养基，按重量比计，包含：蛋白胨0.2-0.5%，K2HPO4 0.3-0.5%，，KCl 0.01-0.02%，FeSO4 0.001-0.002%，花生饼粉0.1-0.5%，右旋糖酐2.5-3.0%，余量为井水。
所述发酵培养基的优选配方为：按重量比计，包含：蛋白胨0.3%，K2HPO4 0.4%，，KCl 0.015%，FeSO4 0.0015%，花生饼粉0.2%，右旋糖酐2.8%，余量为井水。
所述的右旋糖酐酶产生菌为棘孢青霉菌。
一种右旋糖酐酶产生菌的培养方法，包括以下步骤：
（1）将沙土孢子接种于斜面培养基，温度28℃、湿度40-60%、培养5—6天；
（2）将成熟的斜面孢子接入摇瓶种子培养基，温度28℃、湿度40-60%、转速220—240RPM培养40—60小时；
（3）将摇瓶种子按1%的接种量接种于种子罐培养，28℃培养40—60小时小时；
（4）按1%的接种量将步骤（3）的种子液接种于上述右旋糖酐酶产生菌的发酵培养基中，28℃培养120-150小时结束发酵。
发明人在研究提高右旋糖酐酶酶活单位的过程中发现，向右旋糖酐酶产生菌的发酵培养基加入适量的花生饼粉，可明显提高右旋糖酐酶的酶活单位。经过大量实验证实，添加重量比0.2%的花生饼粉，酶活单位增幅最为明显，本发明以花生饼粉为迟效氮源，以右旋糖酐为产酶诱导剂，显著提高右旋糖酐酶的发酵水平，酶活单位最高增幅达45%。具有操作性强，投入低产出高的优点。
具体实施方式
以下结合具体实施例，进一步说明不同浓度花生饼粉对右旋糖酐酶生物合成的影响，使用的右旋糖酐酶产生菌为棘孢青霉菌，所使用的比例均为重量百分比，右旋糖酐酶的酶活单位采用DNS法进行检测。
在本发明的实施例中，发酵培养基的配方范围：蛋白胨0.2-0.5%，K2HPO4 0.3-0.5%，，KCl 0.01-0.02%，FeSO4 0.001-0.002%，花生饼粉0.1-0.5%，右旋糖酐2.5-3.0%，余量为井水。
实施例1
添加花生饼粉的发酵培养基配方1：蛋白胨0.5%，K2HPO4 0.5%，，KCl 0.02%，FeSO4 0.002%，花生饼粉0.1%，右旋糖酐3.0%，余量为井水。
不含花生饼粉发酵培养基对照组1：蛋白胨0.5%，K2HPO4 0.5%，，KCl 0.02%，FeSO4 0.002%，右旋糖酐3.0%，余量为井水。
以50L发酵罐进行两组小试实验，将沙土孢子接种于斜面培养基，温度28℃、湿度40-60%、培养5—6天；将成熟的斜面孢子接入摇瓶种子培养基，温度28℃、湿度40-60%、转速220—240RPM培养40—60小时；将摇瓶种子按1%的接种量接种于种子罐培养，28℃培养40—60小时；按1%的接种量接种于发酵培养基中，28℃培养120-150小时结束发酵。
采用DNS法检测酶活单位，不含花生饼粉发酵培养基对照组1的酶活单位为472 u/ml，添加花生饼粉发酵培养基配方1的酶活单位为571 u/ml，酶活单位增幅为21%。
实施例2
添加花生饼粉的发酵培养基配方2：蛋白胨0.3%，K2HPO4 0.4%，，KCl 0.015%，FeSO4 0.0015%，花生饼粉0.2%，右旋糖酐2.8%，余量为井水。
不含花生饼粉发酵培养基对照组2：蛋白胨0.3%，K2HPO4 0.4%，，KCl 0.015%，FeSO4 0.0015%，右旋糖酐2.8%，余量为井水。
以50L发酵罐进行两组小试实验，将沙土孢子接种于斜面培养基，温度28℃、湿度40-60%、培养5—6天；将成熟的斜面孢子接入摇瓶种子培养基，温度28℃、湿度40-60%、转速220—240RPM培养40—60小时；将摇瓶种子按1%的接种量接种于种子罐培养，28℃培养40—60小时；按1%的接种量接种于发酵培养基中，28℃培养120-150小时结束发酵。
采用DNS法检测酶活单位，不含花生饼粉发酵培养基对照组2的酶活单位为455 u/ml，添加花生饼粉发酵培养基配方2的酶活单位为660 u/ml，酶活单位增幅为45%。
实施例3
添加花生饼粉的发酵培养基配方3：蛋白胨0.2%，K2HPO4 0.3%，，KCl 0.01%，FeSO4 0.001%，花生饼粉0.5%，右旋糖酐2.5%，余量为井水。
不含花生饼粉发酵培养基对照组3：蛋白胨0.2%，K2HPO4 0.3%，，KCl 0.01%，FeSO4 0.001%，右旋糖酐2.5%，余量为井水。
以50L发酵罐进行两组小试实验，将沙土孢子接种于斜面培养基，温度28℃、湿度40-60%、培养5—6天；将成熟的斜面孢子接入摇瓶种子培养基，温度28℃、湿度40-60%、转速220—240RPM培养40—60小时；将摇瓶种子按1%的接种量接种于种子罐培养，28℃培养40—60小时；按1%的接种量接种于发酵培养基中，28℃培养120-150小时结束发酵。
采用DNS法检测酶活单位，不含花生饼粉发酵培养基对照组3的酶活单位为436 u/ml，添加花生饼粉发酵培养基配方3的酶活单位为588 u/ml，酶活单位增幅为35%。
结果显示，在发酵培养基中添加0.1-0.5%的花生饼粉，右旋糖酐酶的酶活单位增幅21—45%，随着花生饼粉加入量的逐步提高，右旋糖酐酶的酶活单位开始下降，酶活单位的最高增幅达45%，对应的花生饼粉添加量为0.2%。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制；任何熟悉本领域的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围情况下，都可利用上述揭示的方法和技术内容对本发明技术方案做出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同替换、等效变化及修饰，均仍属于本发明技术方案保护的范围内。
Claims (3)
1.一种右旋糖酐酶产生菌的发酵培养基，其特征在于，按重量比计，包含：蛋白胨0.2-0.5%，K2HPO4 0.3-0.5%，KCl 0.01-0.02%，FeSO4 0.001-0.002%，花生饼粉0.2-0.5%，右旋糖酐2.5-3.0%，余量为井水；
所述的右旋糖酐酶产生菌为棘孢青霉菌。
2.根据权利要求1所述的一种右旋糖酐酶产生菌的发酵培养基，其特征在于，按重量比计，包含：蛋白胨0.3%，K2HPO4 0.4%，KCl 0.015%，FeSO4 0.0015%，花生饼粉0.2%，右旋糖酐2.8%，余量为井水。
3.一种右旋糖酐酶产生菌的培养方法，所述右旋糖酐酶产生菌为棘孢青霉菌，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将沙土孢子接种于斜面培养基，温度28℃、湿度40-60%、培养5—6天；
（2）将成熟的斜面孢子接入摇瓶种子培养基，温度28℃、湿度40-60%、转速220—240rpm培养40—60小时；
（3）将摇瓶种子按1%的接种量接种于种子罐培养，28℃培养40—60小时；
（4）按1%的接种量将步骤（3）的种子液接种于权利要求1所述的发酵培养基中，28℃培养120-150小时结束发酵。
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