CN102659919B

CN102659919B - 一种硼替佐米的合成方法

Info

Publication number: CN102659919B
Application number: CN201210161428.5A
Authority: CN
Inventors: 冯乙巳; 章丰丰; 徐中秋; 乔文龙; 郑波; 程月
Original assignee: Hefei University of Technology
Current assignee: Hefei University of Technology
Priority date: 2012-05-23
Filing date: 2012-05-23
Publication date: 2016-03-30
Anticipated expiration: 2032-05-23
Also published as: CN102659919A

Abstract

本发明公开了一种硼替佐米的合成方法，是以异戊醛为起始原料，以(R)-叔丁基亚磺酰胺作为手性试剂，通过缩合脱水反应生成(R,E)-2-甲基-N-(3-甲基亚丁基)丙烷-2-亚磺酰胺，然后与频哪醇二硼进行亲核加成反应生成(R)-1-N-叔丁基亚磺酰基-3-甲基丁烷-1-频哪醇硼酯，接着在酸性条件下水解得到频哪醇-(R)-1-氨基-3-甲基丁烷-1-硼酯的盐酸盐，随后在偶联剂存在下与(S)-3-苯基-2-(吡嗪-2-甲酰胺基)丙酸进行反应，并在异丁基硼酸的作用下进行水解生成最终产物硼替佐米。本发明使用易得到的(R)-叔丁基亚磺酰胺作为手性诱导试剂，使得到中间体对映体纯度较高，最终得到的原料药品质较好。

Description

一种硼替佐米的合成方法

一、技术领域

本发明涉及一种抗癌药物的制备方法，具体地说是一种硼替佐米的合成方法。

二、背景技术

硼替佐米（bortezomib）是一种二肽基硼酸化合物，作为一种新型高效专一的蛋白酶抑制剂，最早是由美国MillenniumPharmaceuticals公司研发，并于2003年5月19获得FDA的批准，以Velcade商品名上市销售，为注射剂。随后在英国、瑞士、冰岛、澳大利亚、马来西亚和中国等国家陆续上市，主要用于治疗复发性和难治性多发性骨髓瘤。随着大量医学工作者的不断研究发现，硼替佐米不仅仅在治疗复发性和难治性多发性骨髓瘤有很好的疗效，研究还表明其对多种其他人类肿瘤细胞都显示出具有细胞毒性。在欧美临床应用表明，它对于其他实体瘤的治疗，例如在治疗淋巴瘤、宫颈瘤、肝细胞癌、急性白血病以及骨髓增生异常综合症等治疗都有明显疗效，因此硼替佐米正在成为肿瘤治疗的重要药物。

在中国硼替佐米还没有进行新药申报和自主生产的药厂，只有进口冻干制剂，同时由于硼替佐米原料药合成条件苛刻以及原料昂贵更是导致在国内的价格居高不下。这也是我国国内对硼替佐米进行研究的必要性和重要性的的主要原因之一，而且目前已有的研究资料已经表明硼替佐米作为一种蛋白酶体抑制剂在血液病肿瘤的靶向治疗中已经表现出积极的作用，其应用于其它实体瘤的治疗研究，也必将为我们指出一条新的抗癌之路。

硼替佐米的化学名称是[(1R)-3-甲基-1-[[(2S)-1-氧代-3-苯基-2-[(吡嗪碳酰)氨基]丙基]氨基]丁基]硼酸，其结构式如下：

已报道的合成路线主要有：

WO2009004350专利的路线为：

该路线使用2-甲基丙烷硼酸作为原料，与手性配体(1S,2S,3R,5S)-(+)-2,3-蒎烷二醇进行缩合反应生成硼酸酯；再在二异丙基氨基锂和无水氯化锌体系下，进行氯亚甲基的插入反应，接着进行胺基的亲核取代，构型进行反转，再脱掉三甲基硅基，生成R构型的手性胺重要中间体；最后在偶联剂条件下，与L-苯丙氨酸和吡嗪酸的缩合物进行反应，再在酸性条件下进行硼酯基的水解，得到最终产物硼替佐米。该合成路线所用的手性试剂(1S,2S,3R,5S)-(+)-2,3-蒎烷二醇价格非常昂贵，生成成本较高；第二步的插氯亚甲基化反应和第三步的胺基化反应都需要在零下70℃下进行，反应条件苛刻，且反应收率较低。综合考虑该合成路线成本较高，反应条件苛刻，收率较低，不适合工业化生成。

CN101812026专利的路线为：

该合成路线使用3-甲基丁醛作为起始原料，与手性试剂(R)-1-苯乙胺进行反应生成对应的醛亚胺；接着与双联频哪醇硼酸酯进行亲核加成反应，生成(R)-3-甲基-N-((R)-1-苯乙基)-1-胺基-丁基-频哪醇硼酸酯；再在Pd/C作为催化剂，加压加热条件下与氢气进行催化加氢还原反应，生成相应的R构型的手性胺关键中间体；该中间体再与L-苯丙氨酸和2-吡嗪酸进行缩合反应，最后与2-甲基丙硼酸进行硼酸化反应，最终生成目标产物硼替佐米。该合成路线在以往的路线的基础上进行了改进，采用了较廉价的3-甲基丁醛作为原料，降低了反应成本；但是选用(R)-1-苯乙胺作为手性试剂产物的ee值（对映体过量）较低，不能够得到较多纯净的单一构型的化合物，而且催化加氢需要使用Pd/C作为催化剂，催化剂价格较贵，反应条件需要加热加压对工业设备要求高。综合考虑该合成路线，虽然在以前的基础上进行了改进，但是仍然有不足的地方，需要进行改进。

三、发明内容

本发明旨在提供一种硼替佐米的合成方法，所要解决的技术问题是提高产品的收率和纯度。

本发明解决技术问题采用如下技术方案：

本发明硼替佐米的合成方法，是以异戊醛（3-甲基丁醛）为起始原料，以具有单一手性构型的(R)-叔丁基亚磺酰胺作为手性试剂，通过缩合脱水反应生成(R,E)-2-甲基-N-(3-甲基亚丁基)丙烷-2-亚磺酰胺；然后(R,E)-2-甲基-N-(3-甲基亚丁基)丙烷-2-亚磺酰胺与频哪醇二硼进行亲核加成反应生成(R)-1-N-叔丁基亚磺酰基-3-甲基丁烷-1-频哪醇硼酯，接着在酸性条件下水解得到频哪醇-(R)-1-氨基-3-甲基丁烷-1-硼酯的盐酸盐；所述频哪醇-(R)-1-氨基-3-甲基丁烷-1-硼酯的盐酸盐在偶联剂存在下与(S)-3-苯基-2-(吡嗪-2-甲酰胺基)丙酸进行反应，并在异丁基硼酸的作用下对硼酯基进行水解生成最终产物硼替佐米。

本发明硼替佐米的合成方法的具体步骤如下：

a、以异戊醛（3-甲基丁醛）和(R)-叔丁基亚磺酰胺作为起始原料，在溶剂和催化剂的存在下于20-80℃进行脱水缩合反应12-24小时生成(R,E)-2-甲基-N-(3-甲基亚丁基)丙烷-2-亚磺酰胺（中间体1），其中异戊醛和(R)-叔丁基亚磺酰胺的摩尔比为3:1-1:1，所述催化剂选自有机金属钛催化剂、路易斯酸催化剂或无机铯催化剂，催化剂的添加量为所述(R)-叔丁基亚磺酰胺摩尔量的5-20%；

b、将步骤a制备的(R,E)-2-甲基-N-(3-甲基亚丁基)丙烷-2-亚磺酰胺与频哪醇二硼（又称联硼酸频哪醇酯或双戊酰二硼）在溶剂、催化剂和有机碱的存在下于氮气气氛中20-80℃进行加成反应12-48小时，生成(R)-1-N-叔丁基亚磺酰基-3-甲基丁烷-1-频哪醇硼酯（中间体2）；其中(R,E)-2-甲基-N-(3-甲基亚丁基)丙烷-2-亚磺酰胺与频哪醇二硼的摩尔比为1：1-1：1.5；所述催化剂为Cu/氮杂环卡宾催化剂，由过渡金属铜盐和咪唑盐复配得到，使用咪唑盐来作为氮杂环卡宾的供体，过渡金属铜盐与咪唑盐的摩尔比为1：1-1：2，催化剂的用量为(R,E)-2-甲基-N-(3-甲基亚丁基)丙烷-2-亚磺酰胺摩尔量的5-20%；

所述有机碱选自叔丁醇钠、叔丁醇钾或叔丁醇锂，添加量为咪唑盐摩尔量的1.5-2.5倍；

c、将步骤b制备的(R)-1-N-叔丁基亚磺酰基-3-甲基丁烷-1-频哪醇硼酯置于溶剂中在酸性条件下于20-50℃进行水解反应1-3小时，生成频哪醇-(R)-1-氨基-3-甲基丁烷-1-硼酯的盐酸盐（中间体3）；所述酸性条件是指加入氯化氢的有机溶液，氯化氢添加的摩尔量与(R)-1-N-叔丁基亚磺酰基-3-甲基丁烷-1-频哪醇硼酯的摩尔量之比为1：1-1：1.5；

d、将步骤c制备的频哪醇-(R)-1-氨基-3-甲基丁烷-1-硼酯的盐酸盐与(S)-3-苯基-2-(吡嗪-2-甲酰胺基)丙酸置于溶剂中在缩合剂存在下于20-80℃反应10-36小时，生成频哪醇-N-(2-吡嗪羰基)-L-苯丙氨酸-L-亮氨酸硼酯（中间体4）；其中频哪醇-(R)-1-氨基-3-甲基丁烷-1-硼酯的盐酸盐与(S)-3-苯基-2-(吡嗪-2-甲酰胺基)丙酸的摩尔比为1：1-1：5；所述缩合剂选自HBTU(苯并三氮唑-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯)、HATU(2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯)、TBTU（O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸）、HOBt（1-羟基苯并三唑）或HOAt（1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑），其中缩合剂的添加量是频哪醇-(R)-1-氨基-3-甲基丁烷-1-硼酯的盐酸盐摩尔量的10-30%。

e、将步骤d制备的频哪醇-N-(2-吡嗪羰基)-L-苯丙氨酸-L-亮氨酸硼酯置于溶剂中并加入异丁基硼酸，用盐酸调pH值5-6，于20-80℃酸化反应16-36小时，生成目标产物[(1R)-3-甲基-1-[[(2S)-1-氧代-3-苯基-2-[(吡嗪碳酰)氨基]丙基]氨基]丁基]硼酸；其中频哪醇-N-(2-吡嗪羰基)-L-苯丙氨酸-L-亮氨酸硼酯与异丁基硼酸的摩尔比1：3-1：8。

步骤a中所述催化剂选自钛酸四乙酯、钛酸四丁酯、硫酸铜、硫酸镁、碳酸铯或硫酸镁与脱水催化剂PPTS(4-甲基苯磺酸吡啶鎓)的复配物。

所述催化剂选自硫酸镁与脱水催化剂PPTS(4-甲基苯磺酸吡啶鎓)的复配物，硫酸镁与脱水催化剂PPTS的摩尔比为10-20:1，可以避免副产物的生成。

步骤a中所述溶剂选自四氢呋喃、甲醇、甲腈、乙腈、二氯甲烷、二氯乙烷、正己烷或甲苯。

所述溶剂选自二氯甲烷，使用二氯甲烷的产率最高。

步骤b中所述过渡金属铜盐选自氯化亚铜、溴化亚铜、碘化亚铜、氰化亚铜、氯化铜、溴化铜或醋酸铜；所述咪唑盐选自1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)咪唑四氟硼酸盐、1,3-双(2,6-二异丙基苯基)咪唑四氟硼酸盐、1,3-双环己基咪唑四氟硼酸盐、1,3-双叔丁基咪唑四氟硼酸盐、1,3-双(2,4,6-三甲基苯基)咪唑盐酸盐、1,3-双(2,6-二异丙基苯基)咪唑盐酸盐、1,3-双环己基咪唑盐酸盐或1,3-双叔丁基咪唑盐酸盐。

步骤b中所述溶剂选自四氢呋喃、甲醇、甲腈、乙腈、二氯甲烷、二氯乙烷、正己烷、苯或甲苯；

步骤c中所述溶剂选自甲醇、乙醇、四氢呋喃、异丙醇或二氧六环；

步骤d中所述溶剂选自四氢呋喃、二氯甲烷、二氯乙烷、三氯甲烷、甲醇、乙醇、正己烷或甲苯；

步骤e中所述溶剂选自甲醇、乙醇、四氢呋喃、异丙醇或二氧六环；

本发明硼替佐米的合成路线如下：

与已有技术相比，本发明的有益效果体现在：

1、在硼替佐米原料药的合成路线上有了重大的突破，采用廉价的异戊醛作为原料，大大降低了合成原料成本。

2、使用易得到的手性亚磺酰胺R-叔丁基亚磺酰胺作为手性诱导试剂，使得到中间体对映体纯度（即ee值）较高，最终得到的原料药品质较好。

3、该合成路线的反应条件温和，工艺设备简单，总的收率较高，有利于工业化生产。

四、具体实施方式

实施例1：(R,E)-2-甲基-N-(3-甲基亚丁基)丙烷-2-亚磺酰胺（中间体1）的制备

1.1称取（R）-叔丁基亚磺酰胺12.1g（100mmol）、硫酸镁1.8g（15mmol）和4-甲基苯磺酸吡啶鎓0.37g（1.5mmol）于500mL圆底烧瓶中，再取13mL（120mmol）异戊醛加入烧瓶中，并加入300mL二氯甲烷作为溶剂，室温搅拌反应23h，反应结束后将反应液过滤，滤渣用二氯甲烷洗三遍，保留滤液，在旋转蒸发仪上除掉溶剂，得到粗产物为淡黄色液体。粗产物用柱层析分离法进行提纯（洗脱液为石油醚：乙酸乙酯=5：1），最终得到无色液体即为中间体1。质量为18.2g，收率为95%。

1.2称取（R）-叔丁基亚磺酰胺12.1g（100mmol）于500mL圆底烧瓶中，再抽取50mL钛酸四乙酯和13mL（120mmol）的异戊醛加入烧瓶中，并加入300mL二氯甲烷作为溶剂，室温搅拌反应20h，反应结束后将反应液过滤，滤渣用二氯甲烷洗三遍，保留滤液，在旋转蒸发仪上除掉溶剂，得到粗产物为淡黄色液体。粗产物用柱层析分离法进行提纯（洗脱液为石油醚：乙酸乙酯=5：1），最终得到无色液体即为中间体1。质量为17.1g，收率为90%，ee值大于99.5%。

¹HNMR(CDCl₃,400MHz):δ8.07(t,J=5.3Hz,1H),2.43-2.40(m,2H),2.10-2.04(m,1H),1.21(s,9H),0.98(d,J=5.6Hz,6H);

¹³CNMR(CDCl₃,75MHz):δ169.60,56.71,45.14,26.37,22.58;

FTIR(cm^-1):2918,1625,1090,673.

实施例2：(R)-1-N-叔丁基亚磺酰基-3-甲基丁烷-1-频哪醇硼酯（中间体2）的制备

2.1在氮气保护下，称取频哪醇二硼12.9g（50mmol）、1,3-双环己基咪唑盐酸盐1.3g（5mmol）、氯化亚铜0.5g（5mmol）和叔丁醇钠0.96g（10mmol）于250mL三口圆底烧瓶中，再加入中间体18.8mL（50mmol），并加入150mL苯作为溶剂，室温搅拌反应24h，反应结束后向反应液中加入100mL乙酸乙酯，过滤，保留有机相；有机相再用100mL碳酸氢钠饱和溶液洗涤并分液，水相用乙酸乙酯萃取后合并有机相，用硫酸镁干燥过滤，浓缩，用减活性的硅胶进行柱层析分离（洗脱液为石油醚：乙酸乙酯=10：1），旋干得到无色液体（25℃下为白色固体）即为中间体2。质量为13.1g，收率为82%。

2.2在氮气保护下，称取频哪醇二硼12.9g（50mmol）、1,3-双（2,6-二异丙基苯基）咪唑盐酸盐2.1g（5mmol）、氯化亚铜0.5g（5mmol）和叔丁醇钠0.96g（10mmol）于250mL三口圆底烧瓶中，再加入中间体18.75mL（50mmol），并加入150mL苯作为溶剂，室温搅拌反应24h，反应结束后向反应液中加入100mL乙酸乙酯，过滤，保留有机相；有机相再用100mL碳酸氢钠饱和溶液洗涤并分液，水相用乙酸乙酯萃取后合并有机相，用硫酸镁干燥过滤，浓缩，用减活性的硅胶进行柱层析分离（洗脱液为石油醚：乙酸乙酯=10：1），旋干得到无色液体（25℃下为白色固体）即为中间体2。质量为12.7g，收率为80%，ee值为96%。

¹HNMR(400MHz,CDCl₃):δ0.92(dJ=6.7Hz,6H),1.16(s,9H),1.23(s,6H),1.24(s,6H),1.53(m,2H),1.68(m,1H),3.05(m,2H).

¹³CNMR(100MHz,CDCl3):δ22.6,22.7,22.9,24.6,25.1,25.7,41.2,42.6,56.1,84.0.

FTIR(cm^-1):3223,2956,1467,1365,1338,1135,1061,849.

实施例3：频哪醇-(R)-1-氨基-3-甲基丁烷-1-硼酯盐酸盐（中间体3）的制备

3.1称取中间体29.5g（30mmol）于250mL圆底烧瓶中，加入150mL1,4-二氧六环作为溶剂使其完全溶解，再缓慢加入4.0mol/L的氯化氢二氧六环溶液7.5mL（30mmol），室温搅拌反应2h，旋蒸除去溶剂得到固体，固体用乙醚洗三遍，得到白色产物即为中间体3。质量为7.1g，收率为95%。

3.2称取中间体210.0g（31.5mmol）于250mL圆底烧瓶中，加入150mL1,4-二氧六环作为溶剂使其完全溶解，再缓慢加入4.0mol/L的氯化氢二氧六环溶液7.8mL（31.5mmol），室温搅拌反应1.5h，旋蒸除去溶剂得到固体，固体用乙醚洗三遍，得到白色产物即为中间体3。质量为7.2g，收率为92%。

产物的ee值为95%，经手性分离提纯，得到单一构型的中间体3，用于下步反应。

手性提纯步骤为：将所得到的中间体3（1eq）溶解于THF中，并降温至-78℃；再加入叔丁基亚磺酰氯（1eq）和N,N-二异丙基乙胺（4.0eq），混合液在-78℃搅拌反应1.5h；加入N,N-异丙基乙胺（5.0eq）和甲醇（9.0eq）在-78℃下搅拌5min，萃灭反应；停止反应后，加入乙酸乙酯对反应液进行稀释，并依次用1mol/LNaHSO₄溶液和卤水进行水洗，且每次的水相用乙酸乙酯进行萃取两次；合并有机相，用无水MgSO₄干燥过滤浓缩；最后用柱层析进行提纯（其中洗脱液按体积比构成为EtOAc：CH₂Cl₂=1-2：10），即得到单一对映体的中间体3。其中eq表示摩尔量比。

¹HNMR(400MHz,CDCl₃):δ0.90(m,6H),1.25(s,12H),1.56(m,1H),1.74(m,1H),1.86(m,1H),2.87(brs,1H),8.19(brs,2H);

¹³CNMR(100MHz,CDCl₃):δ22.6,22.7,24.8,25.2,36.1(br),38.7,85.1;

FTIR(cm^-1):2961,1352,1252,1137,854,673.

实施例4：频哪醇-N-(2-哌嗪羰基)-L-苯丙氨酸-L-亮氨酸硼酯（中间体4）的制备

4.1称取中间体35.0g（20mmol）、(S)-3-苯基-2-(吡嗪-2-甲酰胺基)丙酸16.2g（60mmol）和TBTU1.6g（5mmol）于250mL圆底烧瓶中，加入100mL二氯甲烷作为溶剂，先0℃搅拌反应1h，再升温至室温搅拌反应10h，反应结束后，旋蒸除去二氯甲烷，接着加入50mL乙酸乙酯，并依次用去离子水（30mL×2）、1wt%磷酸溶液（30mL×2）、2wt%碳酸钠溶液（30mL×2）和饱和氯化钠溶液（30mL×2）对有机相进行洗涤，且所有的水相都用乙酸乙酯进行萃取，最后合并有机相，并用无水硫酸镁干燥，旋蒸除去溶剂，得到浅黄色泡沫物质即为中间体4，无需处理可直接用于下步反应。质量为8.1g，收率为87%。

4.2称取中间体35.0g（20mmol）、(S)-3-苯基-2-(吡嗪-2-甲酰胺基)丙酸16.2g（60mmol）和HOBt0.8g（6mmol）于250mL圆底烧瓶中，加入100mL二氯甲烷作为溶剂，先0℃搅拌反应1h，再升温至室温搅拌反应8h，反应结束后，旋蒸除去二氯甲烷，接着加入50mL乙酸乙酯，并依次用去离子水（30mL×2）、1wt%磷酸溶液（30mL×2）、2wt%碳酸钠溶液（30mL×2）和饱和氯化钠溶液（30mL×2）对有机相进行洗涤，且所有的水相都用乙酸乙酯进行萃取，最后合并有机相，并用无水硫酸镁干燥，旋蒸除去溶剂，得到浅黄色泡沫物质即为中间体4，无需处理可直接用于下步反应。质量为7.9g，收率为85%。

实施例5：硼替佐米（目标产物）的制备

5.1将中间体44.6g（10mmol）和异丁基硼酸5.1g（50mmol）于250mL两口烧瓶中，并加入100mL甲醇和作为溶剂，降温至0℃，缓慢加入1mol/LHCl溶液15mL调pH值5-6，升温至50℃，搅拌反应24h，反应结束后冷却至室温，分液，水相用乙醚萃取三次，合并有机相；用饱和的碳酸钠溶液洗涤有机相，分液后有机相用无水硫酸镁干燥，旋蒸除去溶剂，得到粗品，最后用柱层析进行分离（洗脱液为石油醚：乙酸乙酯=5：1~2：1，体积比），得到白色固体即为目标产物。质量为3.1g，收率为81%。

5.2将中间体46.9g（15mmol）和2-甲基丙硼酸7.1g（70mmol）于250mL两口烧瓶中，并加入150mL甲醇作为溶剂，降温至0℃，缓慢加入1mol/LHCl溶液20mL调pH值5-6，升温至50℃，搅拌反应20h，反应结束后冷却至室温，分液，水相用乙醚萃取三次，合并有机相；用饱和的碳酸钠溶液洗有机相，分液后，有机相用无水硫酸镁干燥，旋蒸除去溶剂，得到粗品。最后用柱层析进行分离（洗脱液为石油醚：乙酸乙酯=5：1~2：1，体积比），得到白色固体即为目标产物。质量为4.8g，收率为83%。

¹HNMR(400MHz,4:1CD₃CN:D₂O):δ0.77(m,6H),1.23(m,1H),1.32-1.41(m,2H),2.89(m,1H),3.05(m,1H),3.19(m,1H),4.77(m,1H),7.22(m,5H),8.62(s,1H),8.73(s,1H),9.10(s,1H).

¹³CNMR(100MHz,4:1CD₃CN:D₂O):δ22.0,23.6,26.0,38.6,40.3,40.3(br),54.9,127.9,129.5,130.4,137.7,144.5,144.7,145.1,148.7,164.5,172.5.

FTIR(cm^-1):3340,1630,1527,1370,1248,1022.

Claims

1.一种硼替佐米的合成方法，其特征在于按以下步骤制备：

1)称取(R)-叔丁基亚磺酰胺100mmol于500mL圆底烧瓶中，再抽取50mL钛酸四乙酯和120mmol的异戊醛加入烧瓶中，并加入300mL二氯甲烷作为溶剂，室温搅拌反应20h，反应结束后将反应液过滤，滤渣用二氯甲烷洗三遍，保留滤液，在旋转蒸发仪上除掉溶剂，得到粗产物为淡黄色液体；粗产物用柱层析分离法进行提纯，洗脱液为石油醚：乙酸乙酯＝5：1，最终得到无色液体即为中间体1，收率为90％，ee值大于99.5％；

所述中间体1的结构式为：

2)在氮气保护下，称取频哪醇二硼50mmol、1,3-双(2,6-二异丙基苯基)咪唑盐酸盐5mmol、氯化亚铜5mmol和叔丁醇钠10mmol于250mL三口圆底烧瓶中，再加入中间体150mmol，并加入150mL苯作为溶剂，室温搅拌反应24h，反应结束后向反应液中加入100mL乙酸乙酯，过滤，保留有机相；有机相再用100mL碳酸氢钠饱和溶液洗涤并分液，水相用乙酸乙酯萃取后合并有机相，用硫酸镁干燥过滤，浓缩，用减活性的硅胶进行柱层析分离，洗脱液为石油醚：乙酸乙酯＝10：1，旋干得到无色液体即为中间体2，收率为80％，ee值为96％；

所述中间体2的结构式为：

3)称取中间体230mmol于250mL圆底烧瓶中，加入150mL1,4-二氧六环作为溶剂使其完全溶解，再缓慢加入4.0mol/L的氯化氢二氧六环溶液7.5mL，室温搅拌反应2h，旋蒸除去溶剂得到固体，固体用乙醚洗三遍，得到白色产物即为中间体3，收率为95％，产物的ee值为95％，经手性分离提纯，得到单一构型的中间体3，用于下步反应；

所述中间体3的结构式为：

手性提纯步骤为：将所得到的中间体31eq溶解于THF中，并降温至-78℃；再加入叔丁基亚磺酰氯1eq和N,N-二异丙基乙胺4.0eq，混合液在-78℃搅拌反应1.5h；加入N,N-二异丙基乙胺5.0eq和甲醇9.0eq在-78℃下搅拌5min，萃灭反应；停止反应后，加入乙酸乙酯对反应液进行稀释，并依次用1mol/LNaHSO₄溶液和卤水进行水洗，且每次的水相用乙酸乙酯进行萃取两次；合并有机相，用无水MgSO₄干燥过滤浓缩；最后用柱层析进行提纯，其中洗脱液按体积比构成为EtOAc：CH₂Cl₂＝1-2：10，即得到单一对映体的中间体3；

4)称取中间体320mmol、(S)-3-苯基-2-(吡嗪-2-甲酰胺基)丙酸60mmol和TBTU5mmol于250mL圆底烧瓶中，加入100mL二氯甲烷作为溶剂，先0℃搅拌反应1h，再升温至室温搅拌反应10h，反应结束后，旋蒸除去二氯甲烷，接着加入50mL乙酸乙酯并对有机相依次用去离子水30mL洗涤2次、1wt％磷酸溶液30mL洗涤2次、2wt％碳酸钠溶液30mL洗涤2次和饱和氯化钠溶液30mL洗涤2次，且所有的水相都用乙酸乙酯进行萃取，最后合并有机相，并用无水硫酸镁干燥，旋蒸除去溶剂，得到浅黄色泡沫物质即为中间体4，无需处理可直接用于下步反应，收率为87％；

所述中间体4的结构式为：

5)将中间体415mmol和2-甲基丙硼酸70mmol于250mL两口烧瓶中，并加入150mL甲醇作为溶剂，降温至0℃，缓慢加入1mol/LHCl溶液20mL调pH值5-6，升温至50℃，搅拌反应20h，反应结束后冷却至室温，分液，水相用乙醚萃取三次，合并有机相；用饱和的碳酸钠溶液洗有机相，分液后，有机相用无水硫酸镁干燥，旋蒸除去溶剂，得到粗品；最后用柱层析进行分离，洗脱液为石油醚：乙酸乙酯＝5：1～2：1，得到白色固体即为目标产物，收率为83％。