CN102657870A - 一种无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂，由右旋糖酐（40）、蔗糖、乳糖、甘露醇、甘氨酸、精氨酸、谷氨酸钠、尿素、199综合培养基等构成保护剂，本发明不含动物源性组分，并且使疫苗的内毒素含量大幅降低，极大地降低了对人体的刺激性及危害性，赋予疫苗更好的安全性、稳定性；同时本发明的保护剂由于未使用诸如海藻糖等价格昂贵的原材料，因此具有成本低的优势，更适合于产业化。

Description

一种无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂

技术领域

本发明公开一种无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂，不含动物源性组分，用于疫苗冻干保护，属于疫苗生产技术领域。

背景技术

    预防性疫苗的应用使常见流行性传染病得到了有效的控制，使得上述传染性疾病的发病率和死亡率大幅降低。但是，在疫苗的流通领域中发现，疫苗的储存、运输和临床使用过程中，存在诸如稳定性差、有效期短、不良反应率高以及潜在的隐性危害等问题。随着生物科技的飞速发展及对不良反应诱因的深入研究，发现很多问题与疫苗的保护剂和佐剂有直接的关系，尤其是冻干产品中保护剂的组成物。首先，组成物中明胶或明胶的衍生物能直接引起被接种者的变态反应。1993年，Kelso等报道，有些孩子对MMR联合疫苗过敏是由于疫苗中的明胶在被接种者机体内产生抗明胶分子的IgE抗体所致。明胶既可以引起细胞介导免疫反应，也可以引起非细胞介导免疫反应；另外，明胶也是细菌内毒素的主要来源，可导致人体产生发热反应。其次，组成物中人血白蛋白虽然源于检测合格的健康人血，但是由现在检测技术水平的限制，可影响某些病原体的检测如肝炎方面等，由此可能对疫苗造成隐性污染，最终对被接种者造成潜在的危害。因此必须开发无明胶、人血白蛋白的冻干保护剂。

现有疫苗产品的冻干保护剂多数是以明胶、人血白蛋白以及部分糖类为主要成分。随着国家对疫苗质量要求的逐步提高，行业中对保护剂中去除明胶或人血白蛋白意愿更加迫切。

发明内容

本发明公开一种无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂，解决了动物源性组分可能对疫苗造成隐性污染问题。

本发明的无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂，以下主要物质在冻干制品中的终浓度（g/l）为：

右旋糖酐（40）10-60、蔗糖 10-60、乳糖10-50、甘露醇5-30、甘氨酸5-20、精氨酸1-10、谷氨酸钠1-10、尿素1-10、199综合培养基1-50。

本发明所述无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂，以下主要物质在冻干制品中的优选终浓度（g/l）为：

右旋糖酐（40）50、蔗糖 50、乳糖 20、甘露醇 10、甘氨酸 10、精氨酸 1.85、谷氨酸钠 9.2、尿素 4.6、199综合培养基 2。

本发明所提供的冻干保护剂的渗透压在300 - 450m0sm范围内。

本发明所提供的冻干保护剂pH在7.2-7.8范围内。

本发明所提供的冻干保护剂的保存条件为2-8℃或室温条件。

本发明所述无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂的制备方法，其特征在于：

按比例称取以上物质充分溶解于适量灭菌注射用水后，然后定容，测定渗透压并在300-450mosm范围内，同时用1N盐酸调整pH并在7.2-7.8范围内，最后除菌过滤，既得。

本发明的积极效果在于：保护剂不含动物源性组分，并且使疫苗的内毒素含量大幅降低，极大地降低了对人体的刺激性及危害性，赋予疫苗更好的安全性、稳定性；同时本发明的保护剂由于未使用诸如海藻糖等价格昂贵的原材料，因此具有成本低的优势，更适合于产业化。

具体实施方式                                                                                                         

实施例1

称取以下物质（g/l）为：右旋糖酐（40）50、蔗糖 50、乳糖 20、甘露醇 10、甘氨酸 10、精氨酸 1.85、谷氨酸钠 9.2、尿素 4.6、199综合培养基 2，将上述物质充分溶解于适量灭菌注射用水后，然后定容，测定渗透压并在300-450mosm范围内，同时用1N盐酸调整pH并在7.2-7.8范围内，最后除菌过滤，既得。    

实施例2

称取以下物质（g/l）为：右旋糖酐（40）20、蔗糖 30、乳糖 10、甘露醇 5、甘氨酸 5、精氨酸 1.85、谷氨酸钠 9.2、尿素 4.6、199综合培养基 2，将上述物质充分溶解于适量灭菌注射用水后，然后定容，测定渗透压并在300-450mosm范围内，同时用1N盐酸调整pH并在7.2-7.8范围内，最后除菌过滤，既得。

实施例3

称取以下物质（g/l）为：右旋糖酐（40）60、蔗糖 60、乳糖 25、甘露醇 15、甘氨酸 15、精氨酸 1.85、谷氨酸钠 9.2、尿素 4.6、199综合培养基 2，将上述物质充分溶解于适量灭菌注射用水后，然后定容，测定渗透压并在300-450mosm范围内，同时用1N盐酸调整pH并在7.2-7.8范围内，最后除菌过滤，既得。

对照实施例

称取以下物质（g/l）为：蔗糖70g/l、明胶8g/l、人血白蛋白10g/l、精氨酸0.5g/l、谷氨酸钠3g/l、尿素0.5g/l、199综合培养基1g/l，将上述物质充分溶解于适量灭菌注射用水后，然后定容，测定渗透压并在300-450mosm范围内，同时用1N盐酸调整pH并在7.2-7.8范围内，最后除菌过滤，既得。

以下试验表明本发明冻干保护剂的积极效果：

试验例1

1．以人胚肺二倍体细胞为培养基质，制备水痘病毒培养物，以适量的实施例1配制的保护剂与水痘病毒培养物混合，此混合物经-70℃以下冻融、超声破碎细胞、过滤收集上清液，即为原液。

2. 原液按每人份0.58ml的装量分装于西林瓶中，一部分全加塞保存4℃做疫苗冻干前感染性滴度的检测，另一部分经半加塞后置于冻干箱内，准备冻干。

3. 按步骤2所得的疫苗在冻干箱内预冻至-45℃并在此温度保温2小时，然后抽真空至0.1mbar，同时隔板升温至-28℃开始一次升华，于33℃控温15小时，即完成冻干。

4. 将上述冻干前及冻干后的疫苗分别进行渗透压、水分、内毒素含量、冻干前后滴度下降、2-8℃稳定性、37℃稳定性检测。

试验例2

按照试验例1所提供的方法制备疫苗及冻干并完成留样，所不同的是保护剂采用实施例2配制的保护剂。同时按试验例1所进行的检定项目完成各项检定。

试验例3

按照试验例1所提供的方法制备疫苗及冻干并完成留样，所不同的是保护剂采用实施例3配制的保护剂。同时按试验例1所进行的检定项目完成各项检定。

对照试验例

按照试验例1所提供的方法制备疫苗及冻干并完成留样，所不同的是保护剂采用对照实施例配制的保护剂。同时按试验例1所进行的检定项目完成各项检定。

试验例的检定结果

对上述试验例和对照试验例的疫苗样品分别进行渗透压、水分、内毒素含量、冻干前后滴度下降、2-8℃稳定性、37℃稳定性检测，具体结果如下： 

1.  本发明的保护剂制备的水痘疫苗渗透压指标的评价

将试验例及对照试验例制备的疫苗部分样品按《中国药典》三部附录Ⅴ H提供的方法分别进行渗透压测定。结果表明，本发明的保护剂的疫苗水分均在300-450m0sm范围内，远远低于含明胶及蛋白保护剂的疫苗。结果见下表。

本发明的保护剂制备的水痘疫苗冻干后水分含量的评价

将试验例及对照试验例制备的疫苗部分样品按《中国药典》三部附录Ⅶ D提供的方法分别进行水分测定。结果表明，本发明的保护剂的疫苗水分均小于3%，符合药典要求。结果见下表。

本发明的保护剂制备的水痘疫苗中内毒素含量的评价

将试验例及对照试验例制备的疫苗部分样品按《中国药典》三部附录Ⅻ E提供的方法分别进行内毒素含量测定。结果表明，本发明的保护剂的疫苗水分均小于5 EU/ml，符合药典要求。结果见下表。

 

本发明的保护剂制备的水痘疫苗冻干前后滴度下降评价

将试验例及对照试验例制备的冻干前及冻干后的疫苗部分样品进行病毒滴定，比较滴度变化。结果表明，本发明的保护剂在疫苗冻干前后滴度下降小于0.5 lgpfu/ml。结果见下表。

本发明的保护剂在2-8℃条件下对水痘疫苗保护作用的评价

将试验例及对照试验例制备的疫苗部分样品放置2-8℃，分别于0、1、3、6、12、18、24、30个月进行病毒滴定，比较滴度变化。结果表明，本发明的保护剂的疫苗在2-8℃条件下放置30个月，病毒滴度无明显下降，可以作为水痘疫苗的冻干保护剂。结果见下表。

本发明的保护剂在37℃条件下对水痘疫苗保护作用的评价

将试验例及对照试验例制备的疫苗部分样品放置37℃，分别于0、7、14、21、28、35、42天进行病毒滴定，比较滴度变化。结果表明，本发明的保护剂的疫苗在37℃条件下放置至35天，病毒滴度下降小于0.5 lgpfu/ml，同时下降后的滴度仍在合格范围内。结果见下表。

由上述数据可以看出，本发明的不含明胶、人血白蛋白的疫苗冻干保护剂与现行使用水痘疫苗冻干保护剂（含明胶、人血白蛋白）相比，无论在疫苗稳定性、内毒素含量、水分、渗透压等方面均达到或超过后者。同时本发明的保护剂中不含明胶、人血白蛋白，所以降低了对人体的危害，增加了制品的安全性。

Claims (3)

1.一种无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂，以下主要物质在冻干制品中的终浓度（g/l）为：

右旋糖酐（40）  10-60、蔗糖 10-60、乳糖10-50、甘露醇5-30、甘氨酸5-20、精氨酸1-10、谷氨酸钠1-10、尿素1-10、199综合培养基1-50。

2. 权利要求1所述无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂，以下主要物质在冻干制品中的优选终浓度（g/l）为：

右旋糖酐（40）50、蔗糖 50、乳糖 20、甘露醇 5、甘氨酸 5、精氨酸 1.85、谷氨酸钠 9.2、尿素 4.6、199综合培养基 2。

3. 根据权利要求1或2所述无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂的制备方法，其特征在于：

按比例称取以上物质充分溶解于适量灭菌注射用水后，然后定容，测定渗透压并在300-450mosm范围内，同时用1N盐酸调整pH并在7.2-7.8范围内，最后除菌过滤，既得。