CN104258404A - 疫苗冻干保护剂、冻干水痘减毒活疫苗及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
疫苗冻干保护剂、冻干水痘减毒活疫苗及其制备方法，属于疫苗生产制备工艺领域，解决了现有水痘疫苗疫苗冻干保护剂含有明胶，或者虽然去除了明胶但是含有右旋糖酐且有的仍含有人血白蛋白，从而使疫苗的用药安全仍存在潜在隐患的问题。该疫苗冻干保护剂含有海藻糖、谷氨酸钠、尿素、L-精氨酸、199培养基，不含有明胶、右旋糖酐、人血白蛋白等大分子过敏原性成分，细菌内毒素含量低；采用上述保护剂制备的水痘疫苗，内毒素含量及牛血清白蛋白和抗生素残留量低且稳定性良好，安全有效，要点是细胞传代后直接感染，感染后次日进行洗换并换以无血清维持液，操作简单，成本低，有利于细胞病变的整齐均匀形成，并能够大幅度降低牛血清白蛋白残留量。
Description
技术领域
本发明属于疫苗生产制备工艺技术领域，具体涉及一种疫苗冻干保护剂、冻干水痘减毒活疫苗及其制备方法。
背景技术
水痘(Varicella，chickenpox)，是一种儿童期常见的高度传染性疾病，主要通过空气飞沫和接触传播，初次感染恢复后，普遍存在潜伏感染，潜伏病毒的再激活可引起带状疱疹。水痘临床特征表现为全身皮肤粘膜成批出疹，斑丘疹、丘疹、疱疹和结痂同时存在，96％的病例有明显的临床症状，隐性感染仅占4％，在北半球的温带地区，易感者家庭密切接触的继发感染率接近90％。水痘的危害还表现在常伴有严重的并发症，最常见的并发症是继发皮肤感染，其次是脑炎、肺炎和心肌炎。对于在年幼时未接触过水痘及免疫缺陷的个体感染水痘，病情会比较严重或产生严重并发症，成人感染水痘后因并发症死亡是儿童的30～40倍。
水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zostervirus，VZV)是引起水痘及带状疱疹这两种疾病的病原体，VZV只有一个血清型，人是该病毒的唯一自然宿主。水痘对儿童及社会的危害不容忽视，但对于VZV感染目前还没有特效的药物治疗，水痘-带状疱疹免疫球蛋白和抗疱疹病毒药物十分昂贵，所以使用水痘减毒活疫苗进行普遍的儿童免疫接种已成为世界各国降低乃至切断水痘流行的重要手段及趋势。
目前水痘疫苗还存在着一些急需解决的问题。国内上市的水痘疫苗最初都含有明胶和人血白蛋白，保护剂中的人血白蛋白，由于其是大分子蛋白质，在少部分人群中也会引起过敏反应，并且其作为血液制品，在生物安全性等方面还存在着诸多的隐患；另外大多数对水痘疫苗的接种过敏反应是由疫苗中作为保护剂的明胶所致，保护剂中的明胶成分也是疫苗内毒素的主要来源，可导致接种者产生发热反应，所以从保护剂中去除明胶已经成为业界共识，如公开号为CN101537186 A的中国专利公开了一种不含明胶的疫苗冻干保护剂，公开号为CN102657870A的中国专利公开了一种无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂，都是以水痘疫苗作为制备实施例的，并且都采用了右旋糖酐作为明胶的替代品。但是，右旋糖酐本身是一种强有力的抗原，它存在于食糖中，并且在正常人的肠道里发现了可产生右旋糖酐的细菌。少部分人虽然从未接受过右旋糖酐的治疗，而循环中却存在着多糖的沉淀素，这就是为什么首次用药就能出现变态反应的原因。低分子右旋糖酐(如右旋糖酐40)过敏反应可在用药后半小时、几分钟甚至几秒钟内发生,来势凶猛，抢救难度大，用药量几滴到几毫升即可发生过敏性休克反应，甚至死亡。低分子右旋糖酐过敏反应的发生率为0.03％～4.70％，其过敏致死发生率较青霉素高2～4倍。在因抢救无效死亡的右旋糖酐过敏病例中，因过敏性休克引起的死亡占有相当大的比例。据国家药品不良反应监测中心发布的药品不良反应信息通报第3期中警惕“右旋糖酐40与过敏性休克”显示：右旋糖酐40、低分子右旋糖酐引起的可疑不良反应主要有皮疹、肺水肿、肾功能衰竭、过敏性休克等，其中过敏性休克53例，死亡10例。可见右旋糖酐的危险程度远远大于明胶，甚至接近于青霉素，已经上市的使用右旋糖酐作为保护剂的水痘疫苗制品，不良反应率均有一定程度的升高。现有的水痘疫苗冻干制品或含有明胶、或含有人血白蛋白，或采用右旋糖酐替代了明胶，但至少含有上述三种成分中的一种。因此，迫切需要研制出一种无右旋糖酐、无明胶、无人血白蛋白的疫苗冻干保护剂及冻干水痘减毒活疫苗。
发明内容
为了解决现有水痘疫苗疫苗冻干保护剂含有明胶，或者虽然去除了明胶但是含有右旋糖酐，并且有的配方中仍含有人血白蛋白，从而使疫苗的用药安全仍存在潜在隐患的问题，本发明提供一种无明胶、无右旋糖酐、无人血白蛋白的疫苗冻干保护剂和采用该保护剂制备的冻干水痘减毒活疫苗及其制备方法。
本发明为解决技术问题所采用的技术方案如下：
本发明的疫苗冻干保护剂，该保护剂配方中各成分及其终浓度以g/l计为：海藻糖50～100g/l、谷氨酸钠5～15g/l、尿素2～8g/l、L-精氨酸2g/l、199培养基9.9g/l，该保护剂中不含有明胶、人血白蛋白和右旋糖酐。所述海藻糖的终浓度以g/l计优选为75g/l；所述谷氨酸钠的终浓度以g/l计优选为10g/l；所述尿素的终浓度以g/l计优选为5g/l。
本发明的疫苗冻干保护剂的制备方法为：按照海藻糖50～100g/l、谷氨酸钠5～15g/l、尿素2～8g/l、L-精氨酸2g/l、199培养基9.9g/l的比例称取各物质，充分溶解于适量灭菌注射用水后，定容，采用1N盐酸调节PH值至7.2～7.4，除菌过滤，即得；置于2～8℃条件保存备用，有效期12个月。
本发明还提供了一种冻干水痘减毒活疫苗，它是由冻干水痘减毒活疫苗原液、上述的疫苗冻干保护剂制备而成。
本发明还提供了上述冻干水痘减毒活疫苗的制备方法，包括以下步骤：
(1)毒种采用Oka株水痘病毒，培养基质采用2BS株人胚肺二倍体细胞；
(2)采用2BS细胞培养液对2BS株人胚肺二倍体细胞进行连续传代，培养温度37℃，培养扩增至不超过41代；所述2BS细胞培养液为PH值7.2～7.3、含12～18％小牛血清的MEM生长液；
(3)直接感染法：待2BS株人胚肺二倍体细胞生长至丰满单层后，在原2BS细胞培养液中按0.05～0.1MOI直接加入Oka株水痘病毒感染2BS株人胚肺二倍体细胞，同时加入碳酸氢钠溶液调节PH值至7.2～7.3，置于36℃培养；
(4)感染后24小时，倾去2BS细胞培养液，用相当于二倍以上2BS细胞培养液的Hank's液洗涤2BS株人胚肺二倍体细胞表面，以去除牛血清，并换以不含有任何血清成分的无血清MEM维持液，置于36℃继续培养；
(5)当2BS株人胚肺二倍体细胞病变程度达到+++以上时，倾去无血清MEM维持液，采用0.03～0.05％的EDTA溶液消化2BS株人胚肺二倍体细胞，在2～8℃下以3000rpm的转速离心8～10分钟，弃上清液，保留沉淀物，向沉淀物中加入疫苗冻干保护剂重悬，收集含有水痘病毒的细胞，抽样做无菌检查后，置于-70℃保存；
(6)将步骤(5)经无菌检查合格的含有水痘病毒的细胞悬液合并，在2～8℃下以30KHZ的超声波频率进行连续流超声破碎，流速控制在1000～1500ml/min，经澄清过滤后得冻干水痘减毒活疫苗原液，抽样做原液检定后，置于-70℃保存；
(7)冻干水痘减毒活疫苗原液检定合格后，根据病毒滴度加入与步骤(5)中相同的疫苗冻干保护剂进行适度的稀释，成为疫苗半成品，并立即分装冻干，即制成冻干水痘减毒活疫苗；
步骤(5)和步骤(7)中，所述疫苗冻干保护剂的各成分及其终浓度为：海藻糖50～100g/l、谷氨酸钠5～15g/l、尿素2～8g/l、L-精氨酸2g/l、199培养基9.9g/l，该保护剂中不含有明胶、人血白蛋白和右旋糖酐。
步骤(4)中，所述不含有任何血清成分的无血清MEM维持液中各成分及其终浓度为：谷氨酰胺0.3g/l、碳酸氢钠2.4～3.2g/l、MEM培养基9.4g/l；按照比例称取以上物质，充分溶解于适量灭菌注射用水后，定容，除菌过滤，即得。
步骤(7)中，所述冻干采用低温真空冷冻干燥法，半成品分装、装箱结束后，冷冻干燥箱预冷冻至-45～-50℃，使制品温度达到-40℃以下保持至少2个小时，开启真空进入第一阶段干燥即升华干燥，真空控制设定为5Pa±1Pa，导热油温度先设定为-15℃，维持8个小时，之后导热油温度设定为-10℃，维持5个小时，当产品温度上升到导热油出口温度且冻干箱和凝结器的压力接近并维持不变时，在此基础上再维持1小时，以彻底去除制品中的冰晶，之后进入第二阶段干燥即解析干燥，导热油初始温度设定为45℃，制品温度控制在32～35℃，维持10个小时后冻干结束，即制成冻干水痘减毒活疫苗。
本发明有益效果是：
1、本发明的意义在于研究不含有明胶、不含有人血白蛋白、不含有右旋糖酐的新一代冻干保护剂，主要用于水痘疫苗的冻干，因为不含有大分子过敏原性成分，使疫苗更加安全，不易发生过敏反应。
2、冻干水痘减毒活疫苗的制备方法，其制备过程中采用了直接感染法，简化了工艺步骤、易于操作、节省原材料、减少操作污染，感染后次日就可以洗换，节省了时间，细胞病变(CPE)广泛整齐。该制备方法的要点是：待2BS细胞生长至丰满单层后，在原细胞培养液中按0.05～0.1MOI直接加入Oka株水痘毒种感染细胞，同时加入碳酸氢钠溶液调节PH值至7.2～7.3，置于36℃培养；感染后24小时，倾去培养液，用二倍以上原培养液量的Hank's液洗涤细胞表面，以去除牛血清，并换以不含有任何血清成分的无血清MEM维持液，置于36℃继续培养，直至病毒收获。
3、通过上述方法制备的冻干水痘减毒活疫苗，具有牛血清白蛋白残留量低、抗生素残留量低、病毒滴度稳定、不含有大分子过敏原性成分，疫苗安全有效等优势。
具体实施方式
以下通过实施例和对照实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例1 制备疫苗冻干保护剂
按照海藻糖75g/l、谷氨酸钠10g/l、尿素5g/l、L-精氨酸2g/l、199培养基9.9g/l的比例称取各物质，充分溶解于适量灭菌注射用水后，定容，采用1N盐酸调节PH值至7.3，除菌过滤，即得；置于2～8℃条件保存备用，有效期12个月。
实施例2 制备疫苗冻干保护剂
按照海藻糖50g/l、谷氨酸钠15g/l、尿素8g/l、L-精氨酸2g/l、199培养基9.9g/l的比例称取各物质，充分溶解于适量灭菌注射用水后，定容，采用1N盐酸调节PH值至7.2，除菌过滤，即得；置于2～8℃条件保存备用，有效期12个月。
实施例3 制备疫苗冻干保护剂
按照海藻糖100g/l、谷氨酸钠5g/l、尿素2g/l、L-精氨酸2g/l、199培养基9.9g/l的比例称取各物质，充分溶解于适量灭菌注射用水后，定容，采用1N盐酸调节PH值至7.4，除菌过滤，即得；置于2～8℃条件保存备用，有效期12个月。
实施例4 制备冻干水痘减毒活疫苗
冻干水痘减毒活疫苗的制备方法具体为：
(1)毒种采用Oka株水痘病毒，培养基质采用2BS株人胚肺二倍体细胞；
(2)采用2BS细胞培养液对2BS株人胚肺二倍体细胞进行连续传代，培养温度37℃，培养扩增至41代；所述2BS细胞培养液为PH值7.2、含12％小牛血清的MEM生长液；
(3)直接感染法：待2BS株人胚肺二倍体细胞生长至丰满单层后，在原2BS细胞培养液中按0.75MOI直接加入Oka株水痘病毒感染2BS株人胚肺二倍体细胞，同时加入碳酸氢钠溶液调节PH值至7.2，置于36℃培养；
(4)感染后24小时，倾去2BS细胞培养液，用相当于二倍以上2BS细胞培养液的Hank's液洗涤2BS株人胚肺二倍体细胞表面，以去除牛血清，并换以不含有任何血清成分的无血清MEM维持液，置于36℃继续培养；
上述不含有任何血清成分的无血清MEM维持液中各成分及其终浓度为：谷氨酰胺0.3g/l、碳酸氢钠2.8g/l、MEM培养基9.4g/l；按照比例称取以上物质，充分溶解于适量灭菌注射用水后，定容，除菌过滤，即得。
(5)当2BS株人胚肺二倍体细胞病变程度达到+++以上时，倾去无血清MEM维持液，采用0.03％的EDTA溶液消化2BS株人胚肺二倍体细胞，在2～8℃下以3000rpm的转速离心8分钟，弃上清液，保留沉淀物，向沉淀物中加入由实施例1制备的疫苗冻干保护剂重悬，收集含有水痘病毒的细胞，抽样做无菌检查后，置于-70℃保存；
(6)将步骤(5)经无菌检查合格的含有水痘病毒的细胞悬液合并，在2～8℃下以30KHZ的超声波频率进行连续流超声破碎，流速控制在1000～1500ml/min，经澄清过滤后得冻干水痘减毒活疫苗原液，抽样做原液检定后，置于-70℃保存；
(7)冻干水痘减毒活疫苗原液检定合格后，根据病毒滴度加入由实施例1制备的疫苗冻干保护剂进行适度的稀释，成为疫苗半成品，并立即分装冻干，冻干采用低温真空冷冻干燥法，半成品分装、装箱结束后，冷冻干燥箱预冷冻至-45℃，使制品温度达到-40℃以下保持2.5个小时，开启真空进入第一阶段干燥即升华干燥，真空控制设定为5Pa±1Pa，导热油温度先设定为-15℃，维持8个小时，之后导热油温度设定为-10℃，维持5个小时，当产品温度上升到导热油出口温度且冻干箱和凝结器的压力接近并维持不变时，在此基础上再维持1小时，以彻底去除制品中的冰晶，之后进入第二阶段干燥即解析干燥，导热油初始温度设定为45℃，制品温度控制在32～35℃，维持10个小时后冻干结束，即制成冻干水痘减毒活疫苗。
实施例5 制备冻干水痘减毒活疫苗
冻干水痘减毒活疫苗的制备方法具体为：
(1)毒种采用Oka株水痘病毒，培养基质采用2BS株人胚肺二倍体细胞；
(2)采用2BS细胞培养液对2BS株人胚肺二倍体细胞进行连续传代，培养温度37℃，培养扩增至41代；所述2BS细胞培养液为PH值7.3、含15％小牛血清的MEM生长液；
(3)直接感染法：待2BS株人胚肺二倍体细胞生长至丰满单层后，在原2BS细胞培养液中按0.05MOI直接加入Oka株水痘病毒感染2BS株人胚肺二倍体细胞，同时加入碳酸氢钠溶液调节PH值至7.3，置于36℃培养；
(4)感染后24小时，倾去2BS细胞培养液，用相当于二倍以上2BS细胞培养液的Hank's液洗涤2BS株人胚肺二倍体细胞表面，以去除牛血清，并换以不含有任何血清成分的无血清MEM维持液，置于36℃继续培养；
上述不含有任何血清成分的无血清MEM维持液中各成分及其终浓度为：谷氨酰胺0.3g/l、碳酸氢钠3.2g/l、MEM培养基9.4g/l；按照比例称取以上物质，充分溶解于适量灭菌注射用水后，定容，除菌过滤，即得。
(5)当2BS株人胚肺二倍体细胞病变程度达到+++以上时，倾去无血清MEM维持液，采用0.04％的EDTA溶液消化2BS株人胚肺二倍体细胞，在2～8℃下以3000rpm的转速离心9分钟，弃上清液，保留沉淀物，向沉淀物中加入由实施例2制备的疫苗冻干保护剂重悬，收集含有水痘病毒的细胞，抽样做无菌检查后，置于-70℃保存；
(6)将步骤(5)经无菌检查合格的含有水痘病毒的细胞悬液合并，在2～8℃℃下以30KHZ的超声波频率进行连续流超声破碎，流速控制在1000～1500ml/min，经澄清过滤后得冻干水痘减毒活疫苗原液，抽样做原液检定后，置于-70℃保存；
(7)冻干水痘减毒活疫苗原液检定合格后，根据病毒滴度加入由实施例2制备的疫苗冻干保护剂进行适度的稀释，成为疫苗半成品，并立即分装冻干，冻干采用低温真空冷冻干燥法，半成品分装、装箱结束后，冷冻干燥箱预冷冻至-48℃，使制品温度达到-40℃以下保持2个小时，开启真空进入第一阶段干燥即升华干燥，真空控制设定为5Pa±1Pa，导热油温度先设定为-15℃，维持8个小时，之后导热油温度设定为-10℃，维持5个小时，当产品温度上升到导热油出口温度且冻干箱和凝结器的压力接近并维持不变时，在此基础上再维持1小时，以彻底去除制品中的冰晶，之后进入第二阶段干燥即解析干燥，导热油初始温度设定为45℃，制品温度控制在32～35℃，维持10个小时后冻干结束，即制成冻干水痘减毒活疫苗。
实施例6制备冻干水痘减毒活疫苗
冻干水痘减毒活疫苗的制备方法具体为：
(1)毒种采用Oka株水痘病毒，培养基质采用2BS株人胚肺二倍体细胞；
(2)采用2BS细胞培养液对2BS株人胚肺二倍体细胞进行连续传代，培养温度37℃，培养扩增至41代；所述2BS细胞培养液为PH值7.3、含18％小牛血清的MEM生长液；
(3)直接感染法：待2BS株人胚肺二倍体细胞生长至丰满单层后，在原2BS细胞培养液中按0.1MOI直接加入Oka株水痘病毒感染2BS株人胚肺二倍体细胞，同时加入碳酸氢钠溶液调节PH值至7.2，置于36℃培养；
(4)感染后24小时，倾去2BS细胞培养液，用相当于二倍以上2BS细胞培养液的Hank's液洗涤2BS株人胚肺二倍体细胞表面，以去除牛血清，并换以不含有任何血清成分的无血清MEM维持液，置于36℃继续培养；
上述不含有任何血清成分的无血清MEM维持液中各成分及其终浓度为：谷氨酰胺0.3g/l、碳酸氢钠2.4g/l、MEM培养基9.4g/l；按照比例称取以上物质，充分溶解于适量灭菌注射用水后，定容，除菌过滤，即得。
(5)当2BS株人胚肺二倍体细胞病变程度达到+++以上时，倾去无血清MEM维持液，采用0.04％的EDTA溶液消化2BS株人胚肺二倍体细胞，在2～8℃下以3000rpm的转速离心10分钟，弃上清液，保留沉淀物，向沉淀物中加入由实施例3制备的疫苗冻干保护剂重悬，收集含有水痘病毒的细胞，抽样做无菌检查后，置于-70℃保存；
(6)将步骤(5)经无菌检查合格的含有水痘病毒的细胞悬液合并，在2～8℃℃下以30KHZ的超声波频率进行连续流超声破碎，流速控制在1000～1500ml/min，经澄清过滤后得冻干水痘减毒活疫苗原液，抽样做原液检定后，置于-70℃保存；
(7)冻干水痘减毒活疫苗原液检定合格后，根据病毒滴度加入由实施例3制备的疫苗冻干保护剂进行适度的稀释，成为疫苗半成品，并立即分装冻干，冻干采用低温真空冷冻干燥法，半成品分装、装箱结束后，冷冻干燥箱预冷冻至-50℃，使制品温度达到-40℃以下保持2个小时，开启真空进入第一阶段干燥即升华干燥，真空控制设定为5Pa±1Pa，导热油温度先设定为-15℃，维持8个小时，之后导热油温度设定为-10℃，维持5个小时，当产品温度上升到导热油出口温度且冻干箱和凝结器的压力接近并维持不变时，在此基础上再维持1小时，以彻底去除制品中的冰晶，之后进入第二阶段干燥即解析干燥，导热油初始温度设定为45℃，制品温度控制在32～35℃，维持10个小时后冻干结束，即制成冻干水痘减毒活疫苗。
对照实施例1
本实施例按照已经公开的公开号为CN101537186A的中国专利申请，使用不含明胶但含人血白蛋白和右旋糖酐的疫苗冻干保护剂制备冻干水痘减毒活疫苗(按照该专利的相对优选的制备实施例2实施)，具体步骤为：
(1)取MRC-5株人二倍体细胞进行扩增传代，细胞传代比例为1：2，以PH7.2、添加10％小牛血清的MEM细胞培养基为细胞传代用培养基；
(2)37℃下，培养3天扩增传代至33代；
(3)待MRC-5株人二倍体细胞形成均匀、致密的单层细胞后，更换PH7.4、含2％小牛血清的MEM培养基维持液，在培养瓶内按毒种与细胞接种比例1：90加入水痘病毒Oka株感染细胞；
(4)当MRC-5细胞出现75％以上典型病变时，倒去原维持液，用相当于原维持液2倍体积以上的PBS缓冲液洗涤细胞表面，洗去牛血清；
(5)加入疫苗液收获细胞培养物，所述疫苗液为含有20g/1人血清白蛋白、50g/1蔗糖、10g/1海藻糖、20g/1右旋糖酐70、10g/1谷氨酸钠、9g/1尿素和0.5g/1精氨酸的199综合培养基；
(6)将细胞培养物经-70℃以下冻融、20KHZ超声破碎细胞、经澄清过滤后，即为冻干原液；
(7)在所述冻干原液内加入15g/1的甘露醇制成半成品，冰浴下分装于西林瓶内，进行冻干。
对照实施例2
本实施例按照已经公开的公开号为CN102657870A的中国专利申请，使用不含明胶及人血蛋白但含右旋糖酐成分的疫苗冻干保护剂制备冻干水痘减毒活疫苗，具体步骤为：
(1)以人胚肺二倍体细胞为培养基质，制备水痘病毒培养物，以适量的保护剂与水痘病毒培养物混合，此混合物经-70℃以下冻融、超声破碎细胞、过滤收集上清液，即为原液；
上述保护剂，以下主要物质在冻干制品中的按照优选终浓度(g/1)为:右旋糖酐(40)50、蔗糖50、乳糖20，甘露醇10、甘氨酸10、精氨酸1.85、谷氨酸钠9.2、尿素4.6、199综合培养基2；
(2)原液按每人份0.58ml的装量分装于西林瓶中，经半加塞后置于冻干箱内，准备冻干；
(3)按步骤2所得的疫苗在冻干箱内预冻至-45℃并在此温度保温2小时，然后抽真空至0.lmbar，同时隔板升温至-28℃开始一次升华，于33℃控温15小时，即完成冻干。
将按照上述实施例4、5和6以及对照实施例1、2制备的冻干水痘减毒活疫苗进行检定结果比较，结果如下表所示：
由表中数据可以得出，使用本发明的不含右旋糖酐、不含明胶、不含人血白蛋白的疫苗冻干保护剂制备的水痘疫苗与现有不含明胶但含右旋糖酐的两种疫苗冻干保护剂制备的水痘疫苗相比，在疫苗滴度、热稳定性试验、残余水分含量、内毒素含量等方面均达到或者不亚于后者，但是在牛血清白蛋白残留量和抗生素残留量等方面却有着绝对的优势，这得益于工艺的优化，并且大幅度的降低了成本，同时采用本发明的不含明胶、不含右旋糖酐、不含人血白蛋白的疫苗冻干保护剂制备的冻干水痘减毒活疫苗牛血清白蛋白含量和抗生素含量等有害残余物质非常低，且不含有大分子过敏原性成分，不会出现由于右旋糖酐引起的过敏性休克反应等严重异常反应，极大的提高了疫苗的安全性。
Claims (9)
1.疫苗冻干保护剂，其特征在于，该保护剂中各成分及其终浓度为：海藻糖50～100g/l、谷氨酸钠5～15g/l、尿素2～8g/l、L-精氨酸2g/l、199培养基9.9g/l，该保护剂中不含有明胶、人血白蛋白和右旋糖酐。
2.根据权利要求1所述的疫苗冻干保护剂，其特征在于，该保护剂通过以下方法制备：按照海藻糖50～100g/l、谷氨酸钠5～15g/l、尿素2～8g/l、L-精氨酸2g/l、199培养基9.9g/l的比例称取各物质，充分溶解于适量灭菌注射用水后，定容，采用1N盐酸调节PH值至7.2～7.4，除菌过滤，即得；置于2～8℃条件保存备用，有效期12个月。
3.根据权利要求1所述的疫苗冻干保护剂，其特征在于，所述海藻糖的终浓度为75g/l。
4.根据权利要求1所述的疫苗冻干保护剂，其特征在于，所述谷氨酸钠的终浓度为10g/l。
5.根据权利要求1所述的疫苗冻干保护剂，其特征在于，所述尿素的终浓度为5g/l。
6.冻干水痘减毒活疫苗，其特征在于，它是由冻干水痘减毒活疫苗原液、权利要求1-5任意一项所述的疫苗冻干保护剂制备而成。
7.制备权利要求6所述的冻干水痘减毒活疫苗的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)毒种采用Oka株水痘病毒，培养基质采用2BS株人胚肺二倍体细胞；
(2)采用2BS细胞培养液对2BS株人胚肺二倍体细胞进行连续传代，培养温度37℃，培养扩增至不超过41代；所述2BS细胞培养液为PH值7.2～7.3、含12～18％小牛血清的MEM生长液；
(3)直接感染法：待2BS株人胚肺二倍体细胞生长至丰满单层后，在原2BS细胞培养液中按0.05～0.1MOI直接加入Oka株水痘病毒感染2BS株人胚肺二倍体细胞，同时加入碳酸氢钠溶液调节PH值至7.2～7.3，置于36℃培养；
(4)感染后24小时，倾去2BS细胞培养液，用相当于二倍以上2BS细胞培养液的Hank's液洗涤2BS株人胚肺二倍体细胞表面，以去除牛血清，并换以不含有任何血清成分的无血清MEM维持液，置于36℃继续培养；
(5)当2BS株人胚肺二倍体细胞病变程度达到+++以上时，倾去无血清MEM维持液，采用0.03～0.05％的EDTA溶液消化2BS株人胚肺二倍体细胞，在2～8℃下以3000rpm的转速离心8～10分钟，弃上清液，保留沉淀物，向沉淀物中加入疫苗冻干保护剂重悬，收集含有水痘病毒的细胞，抽样做无菌检查后，置于-70℃保存；
(6)将步骤(5)经无菌检查合格的含有水痘病毒的细胞悬液合并，在2～8℃下以30KHZ的超声波频率进行连续流超声破碎，流速控制在1000～1500ml/min，经澄清过滤后得冻干水痘减毒活疫苗原液，抽样做原液检定后，置于-70℃保存；
(7)冻干水痘减毒活疫苗原液检定合格后，根据病毒滴度加入与步骤(5)中相同的疫苗冻干保护剂进行适度的稀释，成为疫苗半成品，并立即分装冻干，即制成冻干水痘减毒活疫苗；
步骤(5)和步骤(7)中，所述疫苗冻干保护剂的各成分及其终浓度为：海藻糖50～100g/l、谷氨酸钠5～15g/l、尿素2～8g/l、L-精氨酸2g/l、199培养基9.9g/l，该保护剂中不含有明胶、人血白蛋白和右旋糖酐。
8.根据权利要求7所述的制备冻干水痘减毒活疫苗的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述不含有任何血清成分的无血清MEM维持液中各成分及其终浓度为：谷氨酰胺0.3g/l、碳酸氢钠2.4～3.2g/l、MEM培养基9.4g/l；按照比例称取以上物质，充分溶解于适量灭菌注射用水后，定容，除菌过滤，即得。
9.根据权利要求7所述的制备冻干水痘减毒活疫苗的方法，其特征在于，步骤(7)中，所述冻干采用低温真空冷冻干燥法，半成品分装、装箱结束后，冷冻干燥箱预冷冻至-45～-50℃，使制品温度达到-40℃以下保持至少2个小时，开启真空第一阶段干燥即升华干燥，真空控制设定为5Pa±1Pa，导热油温度先设定为-15℃，维持8个小时，之后导热油温度设定为-10℃，维持5个小时，当产品温度上升到导热油出口温度且冻干箱和凝结器的压力接近并维持不变时，在此基础上再维持1小时，以彻底去除制品中的冰晶，之后进入第二阶段干燥即解析干燥，导热油初始温度设定为45℃，制品温度控制在32～35℃，维持10个小时后冻干结束，即制成冻干水痘减毒活疫苗。
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Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104826101A (zh) * | 2015-05-12 | 2015-08-12 | 长春长生生物科技股份有限公司 | 冻干人用狂犬病疫苗及其制备方法 |
| CN104984357A (zh) * | 2015-06-02 | 2015-10-21 | 长春百克生物科技股份公司 | 不含明胶的疫苗保护剂组合物及流感减毒活疫苗 |
| CN106668867A (zh) * | 2016-12-31 | 2017-05-17 | 科兴（大连）疫苗技术有限公司 | 一种不含明胶和人血白蛋白的腮腺炎疫苗冻干保护剂 |
| CN108753736A (zh) * | 2018-05-04 | 2018-11-06 | 上海荣盛生物药业有限公司 | 制取水痘病毒原液的方法及其应用 |
| CN110101864A (zh) * | 2019-05-31 | 2019-08-09 | 辽宁茂康源生物科技有限公司 | 一种无血清人用狂犬病疫苗的保护剂及其应用 |
| CN110585439A (zh) * | 2019-09-30 | 2019-12-20 | 长春生物制品研究所有限责任公司 | 一种改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗稳定剂、疫苗半成品、疫苗成品及其制备方法 |
| CN110917148A (zh) * | 2019-12-20 | 2020-03-27 | 北京民海生物科技有限公司 | 一种无明胶无人血白蛋白的麻腮风联合减毒活疫苗冻干保护剂 |
| CN111849926A (zh) * | 2020-09-07 | 2020-10-30 | 威世药业（如皋）有限公司 | 一种毒种冻干粉储存方法 |
| CN113670914A (zh) * | 2021-08-19 | 2021-11-19 | 青岛易邦生物工程有限公司 | 一种油乳剂灭活疫苗的细菌内毒素检测方法 |
| CN115300621A (zh) * | 2022-08-05 | 2022-11-08 | 上海生物制品研究所有限责任公司 | 水痘-带状疱疹减毒活疫苗制备方法和系统 |
| CN116510025A (zh) * | 2023-04-28 | 2023-08-01 | 长春祈健生物制品有限公司 | 提高水痘病毒疫苗滴度稳定性的冻干保护剂及制备方法 |
| CN117442714A (zh) * | 2023-12-26 | 2024-01-26 | 成都柏奥特克生物科技股份有限公司 | 一种新型水痘减毒活疫苗及其制备方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101537186A (zh) * | 2009-04-30 | 2009-09-23 | 长春百克生物科技有限公司 | 一种不含明胶的疫苗冻干保护剂 |
| CN102228687A (zh) * | 2011-06-24 | 2011-11-02 | 浙江普康生物技术股份有限公司 | 不含明胶、人血白蛋白保护剂的冷冻干燥甲型肝炎减毒活疫苗及制备方法 |
| CN102657870A (zh) * | 2012-06-04 | 2012-09-12 | 长春祈健生物制品有限公司 | 一种无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂 |
| CN103721252A (zh) * | 2014-01-08 | 2014-04-16 | 天津津斯特疫苗有限责任公司 | 一种不含明胶的风疹疫苗冻干配方及工艺 |
-
2014
- 2014-09-11 CN CN201410461632.8A patent/CN104258404B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101537186A (zh) * | 2009-04-30 | 2009-09-23 | 长春百克生物科技有限公司 | 一种不含明胶的疫苗冻干保护剂 |
| CN102228687A (zh) * | 2011-06-24 | 2011-11-02 | 浙江普康生物技术股份有限公司 | 不含明胶、人血白蛋白保护剂的冷冻干燥甲型肝炎减毒活疫苗及制备方法 |
| CN102657870A (zh) * | 2012-06-04 | 2012-09-12 | 长春祈健生物制品有限公司 | 一种无明胶及人血蛋白成分的疫苗冻干保护剂 |
| CN103721252A (zh) * | 2014-01-08 | 2014-04-16 | 天津津斯特疫苗有限责任公司 | 一种不含明胶的风疹疫苗冻干配方及工艺 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 石金辉等: "《无明胶保护剂在麻疹风疹联合减毒活疫苗中的应用》", 《中国生物制品学杂志》 * |
Cited By (20)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104826101B (zh) * | 2015-05-12 | 2015-12-09 | 长春长生生物科技股份有限公司 | 冻干人用狂犬病疫苗及其制备方法 |
| CN104826101A (zh) * | 2015-05-12 | 2015-08-12 | 长春长生生物科技股份有限公司 | 冻干人用狂犬病疫苗及其制备方法 |
| CN104984357A (zh) * | 2015-06-02 | 2015-10-21 | 长春百克生物科技股份公司 | 不含明胶的疫苗保护剂组合物及流感减毒活疫苗 |
| US10463741B2 (en) | 2015-06-02 | 2019-11-05 | Changchun Bcht Biotechnology Co. | Non-gelatin vaccine protectant composition and live attenuated influenza vaccine |
| CN106668867A (zh) * | 2016-12-31 | 2017-05-17 | 科兴（大连）疫苗技术有限公司 | 一种不含明胶和人血白蛋白的腮腺炎疫苗冻干保护剂 |
| CN106668867B (zh) * | 2016-12-31 | 2019-08-02 | 科兴（大连）疫苗技术有限公司 | 一种不含明胶和人血白蛋白的腮腺炎疫苗冻干保护剂 |
| CN108753736B (zh) * | 2018-05-04 | 2022-03-01 | 上海荣盛生物药业股份有限公司 | 制取水痘病毒原液的方法及其应用 |
| CN108753736A (zh) * | 2018-05-04 | 2018-11-06 | 上海荣盛生物药业有限公司 | 制取水痘病毒原液的方法及其应用 |
| CN110101864A (zh) * | 2019-05-31 | 2019-08-09 | 辽宁茂康源生物科技有限公司 | 一种无血清人用狂犬病疫苗的保护剂及其应用 |
| CN110585439A (zh) * | 2019-09-30 | 2019-12-20 | 长春生物制品研究所有限责任公司 | 一种改良型的冻干甲型肝炎减毒活疫苗稳定剂、疫苗半成品、疫苗成品及其制备方法 |
| CN110917148A (zh) * | 2019-12-20 | 2020-03-27 | 北京民海生物科技有限公司 | 一种无明胶无人血白蛋白的麻腮风联合减毒活疫苗冻干保护剂 |
| CN110917148B (zh) * | 2019-12-20 | 2022-08-23 | 北京民海生物科技有限公司 | 一种无明胶无人血白蛋白的麻腮风联合减毒活疫苗冻干保护剂 |
| CN111849926A (zh) * | 2020-09-07 | 2020-10-30 | 威世药业（如皋）有限公司 | 一种毒种冻干粉储存方法 |
| CN113670914A (zh) * | 2021-08-19 | 2021-11-19 | 青岛易邦生物工程有限公司 | 一种油乳剂灭活疫苗的细菌内毒素检测方法 |
| CN113670914B (zh) * | 2021-08-19 | 2024-03-08 | 青岛易邦生物工程有限公司 | 一种油乳剂灭活疫苗的细菌内毒素检测方法 |
| CN115300621A (zh) * | 2022-08-05 | 2022-11-08 | 上海生物制品研究所有限责任公司 | 水痘-带状疱疹减毒活疫苗制备方法和系统 |
| CN115300621B (zh) * | 2022-08-05 | 2023-12-12 | 上海生物制品研究所有限责任公司 | 水痘-带状疱疹减毒活疫苗制备方法和系统 |
| CN116510025A (zh) * | 2023-04-28 | 2023-08-01 | 长春祈健生物制品有限公司 | 提高水痘病毒疫苗滴度稳定性的冻干保护剂及制备方法 |
| CN116510025B (zh) * | 2023-04-28 | 2024-02-13 | 长春祈健生物制品有限公司 | 提高水痘病毒疫苗滴度稳定性的冻干保护剂及制备方法 |
| CN117442714A (zh) * | 2023-12-26 | 2024-01-26 | 成都柏奥特克生物科技股份有限公司 | 一种新型水痘减毒活疫苗及其制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
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