CN102643716A

CN102643716A - 采用亚临界萃取方法提取林蛙卵油的工艺

Info

Publication number: CN102643716A
Application number: CN2012101386109A
Authority: CN
Inventors: 穆瑛俊
Original assignee: SHENYANG LONGPU TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: SHENYANG LONGPU TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2012-05-08
Filing date: 2012-05-08
Publication date: 2012-08-22
Anticipated expiration: 2032-05-08
Also published as: CN102643716B

Abstract

采用亚临界萃取方法提取林蛙卵油的工艺属于动物或植物油、脂、脂肪物质或蜡技术领域。本发明的特点是应用亚临界萃取技术在一定压力和温度下，多次提取干燥粉碎后的林蛙卵，得到干净无污染的林蛙卵油，无溶剂残留，且生产成本低廉。本发明的技术方案为：取干燥后的林蛙卵，粉碎成10～100目的粗粉，过压胚机压制成5～10mm直径的胚片，加入到亚临界萃取成套设备的浸出罐中，通入低级烷烃类溶剂，浸润3～12小时；开始萃取，萃取压力为0.2～5Mpa，萃取温度为35～50摄氏度，萃取1～3次，每次30～100分钟；每次萃取液转移至脱溶罐中，在相应规格的不锈钢脱溶罐中收集、减压，在20～40℃下蒸发溶剂，静置后过滤，即得。

Description

采用亚临界萃取方法提取林蛙卵油的工艺

技术领域

本发明属于动物或植物油、脂、脂肪物质或蜡技术领域，具体地说，是涉及一种采用亚临界萃取方法提取林蛙卵油的工艺。

背景技术

林蛙卵油是指林蛙雌性成体取出的卵，采用提取技术得到的卵精油，为深棕色液体油。其有效成分：富含蛋白质、氨基酸、不饱和脂肪酸、维生素E，以及微量元素，基本类别同林蛙油，但雌二醇等雌性激素成分远远高于林蛙油，是其含量的1000倍以上，而年产出量可以是林蛙油的几百倍，已成为目前国内新兴的保健食品和化妆品的重要原料来源。

林蛙卵油目前报道的提取方法有溶剂提取法(00123073.5，林蛙卵油的精制方法)，超临界CO₂萃取法两种(01113910.2，林蛙卵油的超临界提取工艺；01106213.4，利用CO₂超临界萃取林蛙卵油的方法)。上述提取法均需要使用大量有机溶剂石油醚或环己烷类，生产过程对人体危害大，且产品中溶剂残留量大；虽然，超临界CO₂萃取法有效地解决了溶剂残留问题，但该生产设备昂贵，能源消耗较大，生产成本高，不适宜工业化生产，目前仍停留在实验室生产规模。

亚临界低温萃取技术是在超临界萃取技术的基础上发展而来的，具有比超临界萃取需要的压力更低，提取温度更低等特点，故生产设备成本低，提取时间短，生产消耗能源少，已实现吨级生产能力，目前有全面取代超临界萃取技术的趋势。

发明内容

本发明就是现有技术中存在的问题，弥补其不足，提供一种采用亚临界萃取方法提取林蛙卵油的工艺，其特点是应用亚临界萃取技术在一定压力和温度下，多次提取干燥粉碎后的林蛙卵，得到干净无污染的林蛙卵油，无溶剂残留，且生产成本低廉，该林蛙卵油可以广泛应用到医药、保健品、食品、精油等多个领域。

为实现本发明的上述目的，本发明采用如下技术方案。

取干燥后的林蛙卵，粉碎成10～100目的粗粉，过压胚机压制成5～10mm直径的胚片，加入到亚临界萃取成套设备的浸出罐中，通入低级烷烃类溶剂，浸润3～12小时；开始萃取，萃取压力为0.2～5Mpa，萃取温度为35～50摄氏度，萃取1～3次，每次30～100分钟；每次萃取液转移至脱溶罐中，在相应规格的不锈钢脱溶罐中收集、减压，在20～40℃下蒸发溶剂，静置后过滤，即得本发明。

进一步地，所述的萃取所用气态溶剂可以是甲烷、乙烷、丙烷、丁烷的低级烷烃类；上述可以是单一溶剂也可以是不同比例的混合溶剂；例如，丙烷丁烷1∶1，甲烷丙烷1∶1。采用低级烷烃类溶剂的优点是生产后的成品无残留。

而所述的林蛙卵可以是长白山林蛙卵，或林蛙皮、林蛙干。

所述的亚临界萃取成套设备可采用浸出罐、暂存罐、脱溶罐、蒸发罐、冷凝器等组成，也可以只由浸出罐，脱溶罐，蒸发罐组成。

本发明的有益效果：

(1)所述的设备和分离提取过程最大的技术优势是操作简单、生产成本低，无溶剂残留。本发明萃取所用气体较常规二氧化碳气体易液化，超临界方法使用的二氧化碳低温下从气态转换到液态需要30Mpa的压力，另外，采用乙醇作为夹带剂存在溶剂残留问题；而本发明亚临界方法所使用的气体在同等温度下仅需要0.2～5Mpa，产品无溶剂残留，生产过程节约能源消耗在90％以上。

(2)对提取设备的抗压性要求也大大降低，超临界萃取的萃取罐需要耐压在40Mpa以上，罐壁厚度大，接口气密性要求非常高，而亚临界的萃取罐只需要耐压在10～15Mpa即可，设备成本也大大降低，仅为超临界萃取设备的1/3，因此利于工业化生产，而采用超临界萃取技术对林蛙卵油的工业化生产目前还未见报道。

(3)制成胚片便于溶剂进入，减少提取次数。在同等装量下，超临界萃取罐只能装一半容积的原料，为了提高萃取率往往需要提取5次以上；而本发明的亚临界萃取是先将原料制成薄胚片，罐装量可达到2/3左右，且胚片的空间缝隙可以让溶剂更容易进入萃取，只需要1～3次萃取即可，节省了生产时间。

(4)所述的林蛙卵油较之林蛙油和超临界萃取的林蛙卵油含有的有效成分雌激素更高，可达到后者的2倍以上，而且林蛙卵油颜色纯正，保留了林蛙卵特殊的香气。另外，之前的各项专利中均未提及林蛙卵油中氨基酸的含量，本发明详细测定了超临界萃取林蛙卵油和亚临界萃取林蛙卵油的氨基酸含量；结果表明：亚临界萃取的林蛙卵油中氨基酸总含量高达30％以上，远高于超临界技术的20％，有效成分含量更高。下表为林蛙油与亚临界萃取和超临界萃取林蛙卵油中雌激素含量比较。

	雌二醇(pmol/L)	孕酮(nmol/L)
			林蛙油	3.7	40.0
超临界萃取林蛙卵油	5160	103.3
			本发明林蛙卵油	10240.4	200.0

以下为林蛙油，林蛙卵油中氨基酸的含量测定：

1.样品制备

1.1衍生试剂准备：

AccQ Tag Fluor Reagent Kit(试剂盒)有5组试剂，每组包括3个试剂瓶，1#瓶为PH＝8.8硼酸盐缓冲液，2A瓶为衍生剂(AQC)粉末，2B瓶为乙腈溶液。临用前，吸1.5mL乙腈移入2A瓶中(事前将瓶振荡，使得粉末完全置于瓶底)，盖紧盖子，摇10秒，55℃恒温箱加热使粉末完全溶解(不得超过10min)。

1.2氨基酸标样与样品的衍生：

1.2.1氨基酸标样的衍生：

取氨基酸标样储备液(2.5μmoL/mL)，临用时用水(1∶10)稀释成氨基酸标样工作液250pmoL/μL(每瓶为1mL，直接稀释定容至10mL)。用微量注射器精确吸取10μL工作液，加入微量内衬管小瓶底部，用另一根微量注射器精确吸取PH 8.8的硼酸盐缓冲液70μL，加入小瓶中，在旋涡振荡器上混合后，再用一根微量注射器精确吸取AQC溶液20μL，将小瓶放在旋涡振荡器上边振荡混合边加入AQC溶液，用封口胶带将瓶口封好，放到55℃恒温箱内保温5～10分钟，取出放置至室温，待HPLC系统稳定后上机分析。

1.2.2样品的衍生：

精密称定一定量的该氨基酸样品，用10mL甲醇溶解，从中精密吸取10μL，其余操作方法同氨基酸标样的衍生。

2.测定谱图

2.1对照品谱图：(见图1)

2.2供试品测定谱图：

2.2.1sample 1：亚临界萃取林蛙卵油样品1(实施例4)。见图2。

2.2.2sample 2：亚临界萃取林蛙卵油样品2(实施例1)。见图3。

2.2.3sample 3：超临界萃取林蛙卵油。见图4。

结论：按此方法测定氨基酸，氨基酸总含量sample 1为363.024mg/g，即36.3％；sample 2为304.206mg/g，即30.4％；sample 3为224.637mg/g，即22.4％，本发明亚临界萃取的两个样品含量均高于现有超临界萃取样品含量。

(5)所述的林蛙卵油，可用于制备提高免疫力、延缓衰老、美容养颜、降低血脂、补充雌激素的药物、饮料、食品、精油或保健品。

附图说明

图1为对照品谱图。

图2为sample 1的测定谱图。

图3为sample 2的测定谱图。

图4为sample 3的测定谱图。

具体实施方式

实施例1：

取林蛙卵，充分阴干，置于粉碎机打成20目粗粉，置于压胚机中压制成5mm左右胚片，称取300公斤，装入500L亚临界萃取成套设备的浸出罐中，密封，当温度达到35℃，压力达到2Mpa时，通入丁烷浸润6小时后开始萃取，萃取一次，萃取40分钟，萃取液放入脱溶罐，减压至常压，于25℃蒸发溶剂，静置，过滤，得到林蛙卵油30.3公斤。收率为10.1％，经高效液相色谱法含量测定，该林蛙卵油中氨基酸总含量在30％以上。

实施例2：

取林蛙卵，充分阴干，置于粉碎机打成40目粗粉，置于压胚机中压制成8mm左右胚片，称取15公斤，装入20L亚临界萃取成套设备的浸出罐中，密封，当温度达到40℃，压力达到0.2Mpa时，通入甲烷浸润3小时后开始萃取，萃取三次，每次萃取30分钟，每次萃取液均放入脱溶罐，将三次萃取得到的林蛙卵油合并，减压至常压，于20℃蒸发溶剂，静置，过滤，得到林蛙卵油1.37公斤。收率为9.10％，经高效液相色谱法含量测定，该林蛙卵油中氨基酸总含量在30％以上。

实施例3：

取林蛙皮，充分阴干，置于粉碎机打成100目粗粉，置于压胚机中压制成10mm左右胚片，称取10公斤，装入20L亚临界萃取成套设备的浸出罐中，密封，当温度达到45℃，压力达到1.5Mpa时，通入丙烷浸润12小时后开始萃取，萃取两次，每次萃取50分钟，每次萃取液均放入脱溶罐，将两次萃取得到的林蛙卵油合并，减压至常压，于35℃蒸发溶剂，静置，过滤，得到林蛙卵油0.75公斤。收率为7.50％，经高效液相色谱法含量测定，该林蛙卵油中氨基酸总含量在35％以上。

实施例4：

取林蛙干，除去林蛙油，低温干燥，置于粉碎机打成10目粗粉，置于压胚机中压制成10mm左右胚片，称取3.5公斤，装入5L亚临界萃取成套设备的浸出罐中，密封，当温度达到50℃，压力达到5Mpa时，通入乙烷浸润3小时后开始萃取，萃取两次，每次萃取100分钟，萃取液均放入脱溶罐，将两次萃取得到的林蛙卵油合并，减压至常压，于40℃蒸发溶剂，静置，过滤，得到林蛙卵油0.28公斤。收率为8％，经高效液相色谱法含量测定，该林蛙卵油中氨基酸总含量在35％以上。

将本发明亚临界萃取技术得到的林蛙卵油5公斤和植物油35公斤，充分混匀后，送入软胶囊包装机压丸。

将本发明亚临界萃取技术得到的林蛙卵油500g，加入2000ml水，于5000ml水蒸气蒸馏器中加热蒸馏，收集得到180ml林蛙卵精油，与葡萄籽精油1000m1充分混匀后，灌装，得到林蛙卵葡萄籽混合精油。

Claims

1.采用亚临界萃取方法提取林蛙卵油的工艺，其特征在于：取干燥后的林蛙卵，粉碎成10～100目的粗粉，过压胚机压制成5～10mm直径的胚片，加入到亚临界浸出罐中，通入烷烃类溶剂，浸润3～12小时。开始萃取，萃取压力为0.2～5Mpa，萃取温度为35～50度，萃取1～3次，每次30～100分钟；每次萃取液转移至脱溶罐中，在相应规格的脱溶罐中收集、减压，在20～40℃下蒸发溶剂，静置后过滤，即得本发明。

2.根据权利要求1所述的采用亚临界萃取方法提取林蛙卵油的工艺，取林蛙卵，充分阴干，置于粉碎机打成20目粗粉，置于压胚机中压制成5mm左右胚片，称取300公斤，装入500L亚临界浸出罐中，密封，当温度达到35℃，压力达到2Mpa时，通入丁烷浸润6小时后开始萃取，优选萃取40分钟，萃取一次，萃取液放入脱溶罐，减压至常压，于25℃蒸发溶剂，静置，过滤，得到林蛙卵油30.3公斤，经高效液相色谱法含量测定，该林蛙卵油中氨基酸总含量在30％以上。

3.根据权利要求2所述的采用亚临界萃取方法提取林蛙卵油的工艺，其特征在于：取林蛙卵，充分阴干，置于粉碎机打成40目粗粉，置于压胚机中压制成8mm左右胚片，称取15公斤，装入20L亚临界萃取罐中，密封，当温度达到40℃，压力达到0.2Mpa时，通入甲烷浸润3小时后开始萃取，萃取30分钟，萃取三次，每次萃取液均放入脱溶罐，将三次萃取得到的林蛙卵油合并，减压至常压，于20℃蒸发溶剂，静置，过滤，得到林蛙卵油1.37公斤，经高效液相色谱法含量测定，该林蛙卵油中氨基酸总含量在30％以上。

4.根据权利要求3所述的采用亚临界萃取方法提取林蛙卵油的工艺，其特征在于：取林蛙皮，充分阴干，置于粉碎机打成100目粗粉，置于压胚机中压制成10mm左右胚片，称取10公斤，装入20L亚临界浸出罐中，密封，当温度达到45℃，压力达到1.5Mpa时，通入丙烷浸润12小时后开始萃取，萃取50分钟，萃取两次，每次萃取液均放入脱溶罐，将两次萃取得到的林蛙卵油合并，减压至常压，于35℃蒸发溶剂，静置，过滤，得到林蛙卵油0.75公斤，经高效液相色谱法含量测定，该林蛙卵油中氨基酸总含量在35％以上。

5.根据权利要求4所述的采用亚临界萃取方法提取林蛙卵油的工艺，其特征在于：取林蛙干，除去林蛙油，低温干燥，置于粉碎机打成10目粗粉，置于压胚机中压制成10mm左右胚片，称取3.5公斤，装入5L亚临界萃取罐中，密封，当温度达到50℃，压力达到5Mpa时，通入乙烷浸润3小时后开始萃取，萃取100分钟，萃取两次，萃取液均放入脱溶罐，将两次萃取得到的林蛙卵油合并，减压至常压，于40℃蒸发溶剂，静置，过滤，得到林蛙卵油0.28公斤，经高效液相色谱法含量测定，该林蛙卵油中氨基酸总含量在30％以上。

6.根据权利要求1所述的采用亚临界萃取方法提取林蛙卵油的工艺，其特征在于：将亚临界萃取技术得到的林蛙卵油5公斤和植物油35公斤充分混匀后，送入软胶囊包装机压丸。

7.根据权利要求1所述的采用亚临界萃取方法提取林蛙卵油的工艺，其特征在于：将亚临界萃取技术得到的林蛙卵油500g，加入2000m1水，于5000ml水蒸气蒸馏器中加热蒸馏，收集得到180ml林蛙卵精油，与葡萄籽精油1000ml充分混匀后，灌装，得到林蛙卵葡萄籽混合精油。