CN102605029A - 一种短乳杆菌细菌素及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种短乳杆菌细菌素及其制备方法。本发明提供了一种制备短乳杆菌细菌素的方法，是将CGMCC编号为1.558的短乳杆菌(Lactobacillus brevis)进行发酵，收集发酵上清，得到短乳杆菌细菌素。本发明通过对培养基和发酵条件的优化，提供了一种短乳杆菌细菌素的制备工艺，可以得到产量较高且性能优良的短乳杆菌细菌素。本发明提供的短乳杆菌细菌素除了对革兰氏阳性菌有抑制作用外，还能有效抑制革兰氏阴性菌，具有较高的抑制活性。本发明对于饲料领域具有重大价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种短乳杆菌细菌素及其制备方法。
背景技术
细菌素是某些细菌产生的具有抗菌活性的物质，主要成为为多肽、蛋白质或蛋白质复合物，最早由Jacob于1953年提出的。而作为细菌素代表之一的乳酸菌素(Lacidophilin)是指由乳酸菌代谢合成的一类对多数革兰氏阳性菌和腐败菌具有抑制作用的蛋白或多肽类物质，其中还有少数乳酸菌素对革兰氏阴性菌有抑制作用。近年来，广谱抗生素的普及甚至滥用所带来的负面效应日益突出，新型抗生素替代品的研究迫在眉睫。作为蛋白质类物质，乳酸菌素可以被蛋白酶降解，安全性很高，故受到越来越多的关注。自然界中乳酸菌的种类繁多，但是到目前为止，只有主要针对革兰氏阳性菌的Nisin得到了深入的研究和广泛的应用。究其原因，其它乳酸菌素产量过低、生产菌株不稳定以及抑菌谱较窄是主要的限制问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种短乳杆菌细菌素及其制备方法。
本发明提供了一种制备短乳杆菌细菌素(短乳杆菌培养物)的方法，是将CGMCC编号为1.558的短乳杆菌(Lactobacillus brevis)进行发酵，收集发酵上清，得到短乳杆菌细菌素。
所述发酵可包括如下步骤：将所述短乳杆菌接种至发酵培养基，30-50℃(如30-37℃或37-50℃)静置培养30-60h(30-48h或48-60h)。
所述发酵培养基的制备方法如下：取10-200g碳源、5-300g氮源、0.1-10.0g(如0.1-5g或5-10g)KH2PO4、0.1-4.0g(如0.1-2g或2-4g)MgSO4·7H2O、0.1-4.0g(如0.1-2g或2-4g)MnSO4·H2O、0.1-4.0g(如0.1-2g或2-4g)CaCl2、0.1-4.0g(如0.1-2g或2-4g)CuSO4·5H2O、0.1-4.0g(如0.1-2g或2-4g)ZnSO4·7H2O、0.1-4.0g(如0.1-2g或2-4g)FeSO4·4H2O、1-10g(如1-5g或5-10g)无水乙酸钠、1-10g(如1-5g或5-10g)柠檬酸二铵和0.5-6ml(如0.5-3ml或3-6ml)Tween80，用水(如蒸馏水)溶解并定容至1L。
所述10-200g碳源具体可由5-100g葡萄糖(如5-50g或50-100g)和5-100g(如5-50g或50-100g)含有蔗糖的糖类组成。所述10-200g碳源具体可为10-200g(如10-100g或100-200g)葡萄糖或10-200g(如10-100g或100-200g)含有蔗糖的糖类。所述含有蔗糖的糖类具体为蔗糖或糖蜜。
所述5-300g氮源具体可由2-100g(如2-50g或50-100g)酵母膏、2-100g(如2-50g或50-100g)蛋白胨和1-100g(如1-50g或50-100g)硫酸铵组成，也可由2.5-150g(如2.5-70g或70-150g)酵母膏和2.5-150g(如2.5-70g或70-150g)蛋白胨组成，也可由2.5-150g(如2.5-70g或70-150g)酵母膏和2.5-150g(如2.5-70g或70-150g)硫酸铵组成，也可由2.5-150g(如2.5-70g或70-150g)蛋白胨和2.5-150g(如2.5-70g或70-150g)硫酸铵组成。所述5-300g氮源具体可为5-300g酵母膏或5-300g蛋白胨或5-300g硫酸铵。
所述发酵培养基的pH值可为4.0-7.0(如4.0-6.0或6.0-7.0)。
所述短乳杆菌接种至所述发酵培养基的初始时刻，所述短乳杆菌的浓度为5×106-1×108cfu/ml(如5×106-5×107cfu/ml或5×107-1×108cfu/ml)。
所述短乳杆菌具体可以以种子液的方式接种至所述发酵培养基。
所述种子液的制备方法具体如下：将所述短乳杆菌接种至种子培养基，30-40℃(如30-37℃或37-40℃)、静置培养10-30h(如10-20h或20-30h)，获得种子液。
所述种子培养基的制备方法具体如下：取1-20g(如1-10g或10-20g)蛋白胨、1-20g(如1-10g或10-20g)牛肉膏、1-10g(如1-5g或5-10g)酵母膏、1-30g(如1-20g或20-30g)葡萄糖、1-10g(如1-5g或5-10g)无水乙酸钠、1-5g(如1-2g或2-5g)柠檬酸二铵、0.1-5g(如0.1-2g或2-5g)K2HPO4、0.1-5g(如0.1-2g或2-5g)MgSO4·7H2O、0.1-5g(如0.1-2g或2-5g)MnSO4·4H2O和0.1-10ml(如0.1-5ml或5-10ml)Tween80，用水(如蒸馏水)溶解并定容至1L。
所述种子培养基的pH值具体可为2.0-7.0(如2.0-5.0或5.0-7.0)。
所述种子液的接种量为1％-20％(如1％-10％或10％-20％)。本专利中的接种量特制种子液与发酵培养基的体积比。
所述收集发酵上清的方法具体可为：将完成发酵的总体系4000rpm离心10min，收集上清液。
所述方法还包括将所述发酵上清用细菌过滤器(0.22μm)过滤的步骤。
以上任一所述方法制备得到的短乳杆菌细菌素均属于本发明的保护范围。
所述短乳杆菌细菌素可用于抑制细菌增殖。所述细菌为革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌。所述革兰氏阴性菌具体可为大肠杆菌。所述革兰氏阳性菌具体可为金黄色葡萄球菌。
所述短乳杆菌细菌素可用于制备抑制细菌增殖的产品。所述细菌为革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌。所述革兰氏阴性菌具体可为大肠杆菌。所述革兰氏阳性菌具体可为金黄色葡萄球菌
本发明通过对培养基和发酵条件的优化，提供了一种短乳杆菌细菌素的制备工艺，可以得到产量较高且性能优良的短乳杆菌细菌素。本发明提供的短乳杆菌细菌素除了对革兰氏阳性菌有抑制作用外，还能有效抑制革兰氏阴性菌，具有较高的抑制活性。本发明对于饲料领域具有重大价值。
附图说明
图1为实施例1中无细胞滤液对大肠杆菌的抑制效果图。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。实施例中均采用HCl或NaOH调节培养基的pH值。
实施例中所用的菌株如下：
短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CGMCC 1.558。
大肠杆菌(Escherichia coli)：CGMCC 1.907。
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus subsp.aureus)：CGMCC 1.1477。
实施例1、短乳杆菌细菌素的制备和应用
一、培养基的制备
种子培养基(pH2.0)：取1g蛋白胨、1g牛肉膏、1g酵母膏、1g葡萄糖、1g无水乙酸钠、1g柠檬酸二铵、0.1g K2HPO4、0.1g MgSO4·7H2O、0.1g MnSO4·4H2O和0.1mlTween80，用蒸馏水溶解并定容至1L。
发酵培养基(pH4.0)：取碳源(5g葡萄糖和5g蔗糖)、氮源(2g酵母膏、2g蛋白胨和1g硫酸铵)、10g KH2PO4、4.0g MgSO4·7H2O、4.0g MnSO4·H2O、4.0g CaCl2、4.0g CuSO4·5H2O、4.0g ZnSO4·7H2O、4.0g FeSO4·4H2O、10g无水乙酸钠、10g柠檬酸二铵和6ml Tween80，用蒸馏水溶解并定容至1L。
二、短乳杆菌细菌素的制备
1、将活化后的短乳杆菌接种至种子培养基中，37℃静置培养20h，获得种子液。
2、在250ml三角瓶中，将2ml种子液接种至200ml发酵培养基(接种量为1％)，得到发酵初始体系，发酵初始体系中短乳杆菌的浓度为5×106cfu/ml；将发酵初始体系37℃静置发酵48h，得到发酵终止体系。
3、将发酵终止体系4000rpm离心10min(离心半径为13.5cm)，收集上清液，将上清液用细菌过滤器(0.22μm)过滤，得到无细胞滤液(经平板检验无菌长出)，又称短乳杆菌发酵液或短乳杆菌细菌素粗液。
三、无细胞滤液对致病菌的抑制作用
将指示菌(大肠杆菌和金黄色葡萄球菌)分别进行如下实验：
实验组：吸取100μl指示菌菌悬液(浓度为107cfu/ml)于15ml 45℃的无菌LB固体培养基中，充分混匀后倒平板。在凝固的平板上放滤纸片(直径为6mm)，在滤纸片上加入20μl无细胞滤液，30℃静置培养过夜，观察是否有抑菌圈产生并测量抑菌圈直径的大小。
对照组：将无菌水代替实验组中的无细胞滤液，其它同实验组。
无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达12.62mm，而对照组抑菌圈直径仅为7.10mm，见图1。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达9.26mm，而对照组抑菌圈直径仅为6.50mm。
实施例2、短乳杆菌细菌素的制备和应用
一、培养基的制备
种子培养基(pH7.0)：取20g蛋白胨、20g牛肉膏、10g酵母膏、30g葡萄糖、10g无水乙酸钠、5g柠檬酸二铵、5g K2HPO4、5g MgSO4·7H2O、5g MnSO4·4H2O和10mlTween80，用蒸馏水溶解并定容至1L。
发酵培养基(pH7.0)：取碳源(100g葡萄糖和100g蔗糖)、氮源(100g酵母膏、100g蛋白胨和100g硫酸铵)、0.1g KH2PO4、0.1g MgSO4·7H2O、0.1g MnSO4·H2O、0.1gCaCl2、0.1g CuSO4·5H2O、O.1g ZnSO4·7H2O、0.1g FeSO4·4H2O、1g 无水乙酸钠、1g柠檬酸二铵和0.5ml Tween80，用蒸馏水溶解并定容至1L。
二、短乳杆菌细菌素的制备
1、将活化后的短乳杆菌接种至种子培养基中，30℃静置培养10h，获得种子液。
2、在250ml三角瓶中，将40ml种子液接种至200ml发酵培养基(接种量为20％)，得到发酵初始体系，发酵初始体系中短乳杆菌的浓度为1×108cfu/ml；将发酵初始体系30℃静置发酵30h，得到发酵终止体系。
3、将发酵终止体系4000rpm离心10min(离心半径为13.5cm)，收集上清液，将上清液用细菌过滤器(0.22μm)过滤，得到无细胞滤液(经平板检验无菌长出)，又称短乳杆菌发酵液或短乳杆菌细菌素粗液。
三、无细胞滤液对致病菌的抑制作用
同实施例1的步骤三。
无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达18.26mm，而对照组抑菌圈直径仅为7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达13.50mm，而对照组抑菌圈直径仅为6.50mm。
实施例3、短乳杆菌细菌素的制备和应用
一、培养基的制备
种子培养基(pH5.0)：取10g蛋白胨、10g牛肉膏、5g酵母膏、20g葡萄糖、5g无水乙酸钠、2g柠檬酸二铵、2g K2HPO4、2g MgSO4·7H2O、2g MnSO4·4H2O和5ml Tween80，用蒸馏水溶解并定容至1L。
发酵培养基(pH6.0)：取碳源(50g葡萄糖和50g蔗糖)、氮源(50g酵母膏、50g蛋白胨和50g硫酸铵)、5g KH2PO4、2g MgSO4·7H2O、2g MnSO4·H2O、2g CaCl2、2gCuSO4·5H2O、2g ZnSO4·7H2O、2g FeSO4·4H2O、5g无水乙酸钠、5g柠檬酸二铵和3mlTween80，用蒸馏水溶解并定容至1L。
二、短乳杆菌细菌素的制备
1、将活化后的短乳杆菌接种至种子培养基中，40℃静置培养30h，获得种子液。
2、在250ml三角瓶中，将20ml种子液接种至200ml发酵培养基(接种量为10％)，得到发酵初始体系，发酵初始体系中短乳杆菌的浓度为5×107cfu/ml；50℃静置发酵60h，得到发酵终止体系。
3、将发酵终止体系4000rpm离心10min(离心半径为13.5cm)，收集上清液，将上清液用细菌过滤器(0.22μm)过滤，得到无细胞滤液(经平板检验无菌长出)，又称短乳杆菌发酵液或短乳杆菌细菌素粗液。
三、短小乳酸菌素产量
同实施例1的步骤三。
无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达10.62mm，而对照组抑菌圈直径仅为7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达9.02mm，而对照组抑菌圈直径仅为6.50mm。
实施例4、短乳杆菌细菌素的制备和应用
一、培养基的制备
种子培养基(pH5.0)：同实施例3的种子培养基。
发酵培养基(pH6.0)：碳源为200g葡萄糖，氮源由150g酵母膏和150g蛋白胨组成，其它配方同实施例3的发酵培养基。
二、短乳杆菌细菌素的制备
同实施例3的步骤二。
三、短小乳酸菌素产量
同实施例1的步骤三。
无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达8.80mm，而对照组抑菌圈直径仅为7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达7.60mm，而对照组抑菌圈直径仅为6.50mm。
实施例5、短乳杆菌细菌素的制备和应用
一、培养基的制备
种子培养基(pH5.0)：同实施例3的种子培养基。
发酵培养基(pH6.0)：碳源为10g葡萄糖，氮源由2.5g酵母膏和2.5g蛋白胨组成，其它配方同实施例3的发酵培养基。
二、短乳杆菌细菌素的制备
同实施例3的步骤二。
三、短小乳酸菌素产量
同实施例1的步骤三。
无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达8.20mm，而对照组抑菌圈直径仅为7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达7.60mm，而对照组抑菌圈直径仅为6.50mm。
实施例6、短乳杆菌细菌素的制备和应用
一、培养基的制备
种子培养基(pH5.0)：同实施例3的种子培养基。
发酵培养基(pH6.0)：碳源为100g葡萄糖，氮源由70g酵母膏和70g蛋白胨组成，其它配方同实施例3的发酵培养基。
二、短乳杆菌细菌素的制备
同实施例3的步骤二。
三、短小乳酸菌素产量
同实施例1的步骤三。
无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达10.20mm，而对照组抑菌圈直径仅为7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达8.28mm，而对照组抑菌圈直径仅为6.50mm。
实施例7、短乳杆菌细菌素的制备和应用
一、培养基的制备
种子培养基(pH5.0)：同实施例3的种子培养基。
发酵培养基(pH6.0)：碳源为10g蔗糖，氮源由2.5g酵母膏和2.5g硫酸铵组成，其它配方同实施例3的发酵培养基。
二、短乳杆菌细菌素的制备
同实施例3的步骤二。
三、短小乳酸菌素产量
同实施例1的步骤三。
无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达12.54mm，而对照组抑菌圈直径仅为7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达10.20mm，而对照组抑菌圈直径仅为6.50mm。
实施例8、短乳杆菌细菌素的制备和应用
一、培养基的制备
种子培养基(pH5.0)：同实施例3的种子培养基。
发酵培养基(pH6.0)：碳源为200g蔗糖，氮源由150g酵母膏和150g硫酸铵组成，其它配方同实施例3的发酵培养基。
二、短乳杆菌细菌素的制备
同实施例3的步骤二。
三、短小乳酸菌素产量
同实施例1的步骤三。
无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达10.20mm，而对照组抑菌圈直径仅为7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达9.08mm，而对照组抑菌圈直径仅为6.50mm。
实施例9、短乳杆菌细菌素的制备和应用
一、培养基的制备
种子培养基(pH5.0)：同实施例3的种子培养基。
发酵培养基(pH6.0)：碳源为100g蔗糖，氮源由70g酵母膏和70g硫酸铵组成，其它配方同实施例3的发酵培养基。
二、短乳杆菌细菌素的制备
同实施例3的步骤二。
三、短小乳酸菌素产量
同实施例1的步骤三。
无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达9.20mm，而对照组抑菌圈直径仅为7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达7.88mm，而对照组抑菌圈直径仅为6.50mm。
实施例10、短乳杆菌细菌素的制备和应用
一、培养基的制备
种子培养基(pH5.0)：同实施例3的种子培养基。
发酵培养基(pH6.0)：碳源为100g糖蜜，氮源由70g蛋白胨和70g硫酸铵组成，其它配方同实施例3的发酵培养基。
二、短乳杆菌细菌素的制备
同实施例3的步骤二。
三、短小乳酸菌素产量
同实施例1的步骤三。
无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达9.80mm，而对照组抑菌圈直径仅为7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达8.40mm，而对照组抑菌圈直径仅为6.50mm。
实施例11、短乳杆菌细菌素的制备和应用
一、培养基的制备
种子培养基(pH5.0)：同实施例3的种子培养基。
发酵培养基(pH6.0)：碳源为200g糖蜜，氮源由150g蛋白胨和150g硫酸铵组成，其它配方同实施例3的发酵培养基。
二、短乳杆菌细菌素的制备
同实施例3的步骤二。
三、短小乳酸菌素产量
同实施例1的步骤三。
无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达10.20mm，而对照组抑菌圈直径仅为7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达8.86mm，而对照组抑菌圈直径仅为6.50mm。
实施例12、短乳杆菌细菌素的制备和应用
一、培养基的制备
种子培养基(pH5.0)：同实施例3的种子培养基。
发酵培养基(pH6.0)：碳源为10g糖蜜，氮源由2.5g蛋白胨和2.5g硫酸铵组成，其它配方同实施例3的发酵培养基。
二、短乳杆菌细菌素的制备
同实施例3的步骤二。
三、短小乳酸菌素产量
同实施例1的步骤三。
无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达8.28mm，而对照组抑菌圈直径仅为7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达7.10mm，而对照组抑菌圈直径仅为6.50mm。
实施例13、短乳杆菌细菌素的制备和应用
一、培养基的制备
种子培养基(pH5.0)：同实施例3的种子培养基。
发酵培养基(pH6.0)：碳源为10g葡萄糖，氮源为5g酵母膏，其它配方同实施例3的发酵培养基。
二、短乳杆菌细菌素的制备
同实施例3的步骤二。
三、短小乳酸菌素产量
同实施例1的步骤三。
无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达8.06mm，而对照组抑菌圈直径仅为7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达6.80mm，而对照组抑菌圈直径仅为6.50mm。
实施例14、短乳杆菌细菌素的制备和应用
一、培养基的制备
种子培养基(pH5.0)：同实施例3的种子培养基。
发酵培养基(pH6.0)：碳源为200g葡萄糖，氮源为300g酵母膏，其它配方同实施例3的发酵培养基。
二、短乳杆菌细菌素的制备
同实施例3的步骤二。
三、短小乳酸菌素产量
同实施例1的步骤三。
无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达7.70mm，而对照组抑菌圈直径仅为7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达7.10mm，而对照组抑菌圈直径仅为6.50mm。
实施例15、短乳杆菌细菌素的制备和应用
一、培养基的制备
种子培养基(pH5.0)：同实施例3的种子培养基。
发酵培养基(pH6.0)：碳源为10g蔗糖，氮源为5g硫酸铵，其它配方同实施例3的发酵培养基。
二、短乳杆菌细菌素的制备
同实施例3的步骤二。
三、短小乳酸菌素产量
同实施例1的步骤三。
无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达7.50mm，而对照组抑菌圈直径仅为7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达6.94mm，而对照组抑菌圈直径仅为6.50mm。
实施例16、短乳杆菌细菌素的制备和应用
一、培养基的制备
种子培养基(pH5.0)：同实施例3的种子培养基。
发酵培养基(pH6.0)：碳源为200g蔗糖，氮源为300g硫酸铵，其它配方同实施例3的发酵培养基。
二、短乳杆菌细菌素的制备
同实施例3的步骤二。
三、短小乳酸菌素产量
同实施例1的步骤三。
无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达8.40mm，而对照组抑菌圈直径仅为7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达7.44mm，而对照组抑菌圈直径仅为6.50mm。
实施例17、短乳杆菌细菌素的制备和应用
一、培养基的制备
种子培养基(pH5.0)：同实施例3的种子培养基。
发酵培养基(pH6.0)：碳源为200g糖蜜，氮源为300g蛋白胨，其它配方同实施例3的发酵培养基。
二、短乳杆菌细菌素的制备
同实施例3的步骤二。
三、短小乳酸菌素产量
同实施例1的步骤三。
无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达8.22mm，而对照组抑菌圈直径仅为7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达7.20mm，而对照组抑菌圈直径仅为6.50mm。
实施例18、短乳杆菌细菌素的制备和应用
一、培养基的制备
种子培养基(pH5.0)：同实施例3的种子培养基。
发酵培养基(pH6.0)：碳源为10g糖蜜，氮源为5g蛋白胨，其它配方同实施例3的发酵培养基。
二、短乳杆菌细菌素的制备
同实施例3的步骤二。
三、短小乳酸菌素产量
同实施例1的步骤三。
无细胞滤液对大肠杆菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达7.92mm，而对照组抑菌圈直径仅为7.10mm。无细胞滤液对金黄色葡萄球菌有明显的抑制作用，抑菌圈直径可达7.88mm，而对照组抑菌圈直径仅为6.50mm。
Claims (10)
1.一种制备短乳杆菌细菌素的方法，是将CGMCC编号为1.558的短乳杆菌(Lactobacillus brevis)进行发酵，收集发酵上清，得到短乳杆菌细菌素。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述发酵包括如下步骤：将所述短乳杆菌接种至发酵培养基，30-50℃静置培养30-60h。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述发酵培养基的制备方法如下：取10-200g碳源、5-300g氮源、0.1-10.0g KH2PO4、0.1-4.0g MgSO4·7H2O、0.1-4.0gMnSO4·H2O、0.1-4.0g CaCl2、0.1-4.0g CuSO4·5H2O、0.1-4.0g ZnSO4·7H2O、0.1-4.0gFeSO4·4H2O、1-10g无水乙酸钠、1-10g柠檬酸二铵和0.5-6ml Tween80，用水溶解并定容至1L。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述发酵培养基的pH值为4.0-7.0。
5.如权利要求3或4所述的方法，其特征在于：所述碳源为葡萄糖和/或含有蔗糖的糖类；所述氮源为酵母膏和/或蛋白胨和/或硫酸铵；所述含有蔗糖的糖类具体为蔗糖或糖蜜。
6.如权利要求2至5中任一所述的方法，其特征在于：所述短乳杆菌接种至所述发酵培养基的初始时刻，所述短乳杆菌的浓度为5×106-1×108cfu/ml。
7.权利要求1至6中任一所述方法制备得到的短乳杆菌细菌素。
8.权利要求7所述短乳杆菌细菌素在如下(a)或(b)中的应用：
(a)抑制细菌增殖；
(b)制备抑制细菌增殖的产品。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于：所述细菌为革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于：所述革兰氏阴性菌为大肠杆菌；所述革兰氏阳性菌为金黄色葡萄球菌。
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