CN106544307A - 一种降解黄曲霉毒素b1的菌剂及应用 - Google Patents

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肖志刚
李桂杰
解铁民
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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
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Abstract

本发明属于微生物功能菌剂技术领域，具体涉及一种降解黄曲霉毒素B1的菌剂及应用，由耐盐短杆菌JH8在营养肉汤中扩大培养制成，扩大培养在摇床培养箱中进行，培养条件为：转速150～170转/分钟，温度30～33℃，培养18～24h。使用本发明制备的菌剂可以将粮食中的黄曲霉毒素B1降解至试剂盒不能检出的效果；所用到的耐盐短杆菌JH8廉价易得；菌剂的制备过程简单易操作；该菌剂对粮食无污染。

Description

一种降解黄曲霉毒素B1的菌剂及应用
技术领域
本发明属于微生物功能菌剂技术领域，具体涉及一种降解黄曲霉毒素B1的菌剂及应用。
背景技术
国际癌症研究机构在2000年报道，黄曲霉毒素是由黄曲霉产生的一组能够引起人的心血管疾病的毒素，其中黄曲霉毒素B1的毒性最强，可以引起人的肝脏疾病。由于黄曲霉毒素的毒性问题，欧盟以及世界上的一些其它多家都都在危害分析和关键控制点中(HACCP)设定了粮食和食品中的黄曲霉毒素B1的最高限值，以确保人类的饮食健康。国家与国家之间的粮食和食品贸易也通过立法的方式来限定黄曲霉毒素B1的含量(欧盟Reg EC165/2010)。同时，欧洲食品和饲料谷物预警系统2010年报中指出一共有931中霉菌毒素，其中902种是由黄曲霉真菌产生的。由于粮食和食品在储藏过程中不可避免的会受到黄曲霉真菌的污染，据报道我国的粮食中有15～20％受到黄曲霉的污染，尤其是油料作物，如花生、油菜籽、棉籽等等。各种物理和化学的减少粮食及食物中的黄曲霉毒素B1的方法被证明有效性非常差，而且成本很高，没有实际的推广应用性。利用生物处理脱毒的方式因其安全有效和节约成本而越来越受到广大人群和学者的青睐。
对于用生物处理黄曲霉毒素的脱毒研究已经有了40年的历史。这些研究多数集中在对开心果等干果的研究，所使用的菌种大多数为枯草芽孢杆菌属的细菌(Bacillussubtilis spp.)。这些菌种大多数来源于各国本土，经过纯化处理而来。如，伊朗、希腊和土耳其在开心果(干果)中使用的芽孢杆菌，美国在谷物中使用的木霉真菌等等。因此研究一种易于在我国获得的能够有效降解黄曲霉毒素的生物脱毒菌剂尤为必要。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种降解黄曲霉毒素B1的菌剂及其应用，能够对黄曲霉毒素B1起到很好的降解作用。
本发明是这样实现的，提供一种降解黄曲霉毒素B1的菌剂，由耐盐短杆菌JH8(Brevibactorium halotolerans strain JH8)在营养肉汤中扩大培养制成，扩大培养在摇床培养箱中进行，培养条件为：转速150～170转/分钟，温度30～33℃，培养18～24h。
进一步地，菌剂中的菌株数量为：每毫升菌剂中含有30～50亿个活菌。
进一步地，营养菌汤为NB250。
进一步地，降解黄曲霉毒素B1的菌剂为喷雾型。
根据本发明的另外一个方面，还提供了一种上述降解黄曲霉毒素B1的菌剂在粮食保藏上的应用，菌剂的施用量为0.5升/吨，施用方法为将所述菌剂用液压喷壶均匀喷洒在粮食中。
与现有技术相比，本发明的优点在于，使用本发明制备的菌剂可以将粮食中的黄曲霉毒素B1降解至试剂盒不能检出的效果；所用到的耐盐短杆菌JH8廉价易得；菌剂的制备过程简单易操作；该菌剂对粮食无污染。
附图说明
图1为200微升制备好的菌剂中加入2.5ppm黄曲霉毒素B1每间隔两小时的600nm吸光度检测结果；
图2为200微升制备好的菌剂中加入2.5ppm黄曲霉毒素B1每间隔两小时的黄曲霉毒素B1浓度检测结果。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本发明，并不用于限定本发明。
降解黄曲霉毒素B1的菌剂的制备方法：
将从土壤中分离或者购买的耐盐短杆菌JH8(上海复祥生物科技有限公司)在营养肉汤NB520(市购)中培养，培养在摇床培养箱中进行，培养条件为转速150转/分钟，温度30℃，培养18h，制备得到喷雾型菌剂。
耐盐短杆菌JH8通过如下方法从土壤中分离:取土层表面以下12～15厘米土壤2克，溶于20毫升0.9％灭菌生理盐水中，摇匀，400转/分钟离心90分钟，取上清液100微升，涂布于灭菌的营养琼脂培养基上，30摄氏度培养72小时。挑取单个菌落，反复纯化培养，得到耐盐短杆菌JH8。
所述的营养琼脂培养基成分为：蒸馏水1000mL，蛋白胨10g，牛肉膏粉3g，氯化钠5g，琼脂15g，pH 7.3±0.2。
AFB1降解动力学测定：
在200微升制备好的菌剂中加入2.5ppm黄曲霉毒素B1(购买自美国ArcosOrangics公司)，每隔两个小时测定一次吸光度600nm和黄曲霉毒素的浓度，测定9个点，用5毫升氯仿终止试验，具体结果见图1和图2。从图1和图2中可以看出，随着时间的进行，600nm吸光度逐渐升高，而黄曲霉毒素B1的含量逐渐降低，可以知道，本发明制备的降解黄曲霉毒素B1的菌剂确实有良好的降解效果。
应用例：
将利用本方法制备的菌剂按照0.5升/吨的施用量、使用液压喷壶均匀喷洒的施用方法，喷洒在花生中，一年之后，使用ELISA试剂盒(上海快灵生物菌剂有限公司，酶联免疫E160530301)测定，并未检出黄曲霉毒素B1。可知本发明制备的降解黄曲霉毒素B1的菌剂既有抑制作用又有降解作用。

Claims (5)

1.一种降解黄曲霉毒素B1的菌剂，其特征在于，由耐盐短杆菌JH8在营养肉汤中扩大培养制成，扩大培养在摇床培养箱中进行，培养条件为：转速150～170转/分钟，温度30～33℃，培养18～24h。
2.根据权利要求1所述的降解黄曲霉毒素B1的菌剂，其特征在于，所述菌剂中的菌株数量为：每毫升菌剂中含有30～50亿个活菌。
3.根据权利要求1所述的降解黄曲霉毒素B1的菌剂，其特征在于，所述营养菌汤为NB250。
4.根据权利要求1所述的降解黄曲霉毒素B1的菌剂，其特征在于，所述降解黄曲霉毒素B1的菌剂为喷雾型。
5.一种如权利要求1-4任一所述的降解黄曲霉毒素B1的菌剂在粮食保藏上的应用，其特征在于，所述菌剂的施用量为0.5升/吨，施用方法为将所述菌剂用液压喷壶均匀喷洒在粮食中。
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