CN102603754B - 一种两面针喹诺酮类生物碱的制备及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种两面针喹诺酮类生物碱的制备及应用，其特征在于，其步骤为：(1)采用两面针干燥根，用95％乙醇回流提取两次，得到提取液；(2)所述提取液过滤，减压浓缩至无醇味，加水稀释；(3)稀释后的提取液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别回收溶剂，制备得到三种两面针喹诺酮类生物碱，分别是Zanthobungeanine，Zanthodioline和N-methyflindersine。本发明可制备出两面针喹诺酮类生物碱，且该两面针喹诺酮类生物碱具有抗炎效果。

Description

一种两面针喹诺酮类生物碱的制备及应用

技术领域

本发明涉及一种两面针，具体涉及一种两面针喹诺酮类生物碱的制备及应用。

背景技术

两面针(Zanthoxylum nitidum(Roxb.)DC.)为芸香科花椒属藤本植物，因其叶两面均有刺而得名，又名双面针、双背针、入地金牛、蔓椒，主要分布在东南亚，我国主要分布于浙江、福建、台湾、广西等地。味辛、苦，微温，小毒。两面针中药在消肿止痛方面疗效独特，民间用其根、根皮及茎皮入药，是我国南方地区特别是少数民族地区的常用中药。有麻醉止痛、解毒消肿、祛风活血、通经活络等功效，用于治疗牙痛、咽喉肿痛、风湿性关节痛、神经痛、毒蛇咬伤等多种病症，此外还有抗癌、抗肿瘤、洁齿等作用。

两面针的主要化学成分为生物碱和木脂素类化学物，其中生物碱含量约占0.7％，大多数生物碱具有生物活性。据文献查阅，学者们对两面针的解痉、镇痛和抗癌的药理作用研究较多，此外，两面针中药提取物在抗炎、心血管系统、抗氧化、抗菌等方面的药理作用也有报导。临床上主要用于止痛、麻醉、治龋齿牙痛、牙龈炎、慢性牙周炎等。

我国两面针植物资源丰富，并有悠久的民间用药历史，国内外学者对其研究的不多，因此把传统中药与现代技术结合起来，对该植物的化学成分和药理进行研究，阐明其药理活性作用的物质基础，为现代中药药理和天然药物化学提供研究资料，从而充分发挥其作用，达到合理用药，拓宽用药范围。

发明内容

本发明目的是提供一种两面针喹诺酮类生物碱的制备及应用，使用该方法可制备出两面针喹诺酮类生物碱，且该两面针喹诺酮类生物碱具有抗炎效果。

本发明的技术方案是：一种两面针喹诺酮类生物碱的制备及应用，其步骤为：

(1)采用两面针干燥根，用95％乙醇回流提取两次，得到提取液；

(2)所述提取液过滤，减压浓缩至无醇味，加水稀释；

(3)稀释后的提取液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别同收溶剂，制备得到三种两面针喹诺酮类生物碱，分别是Zanthobungeanine，Zanthodioline和N-methyflindersine。

进一步的技术方案，所述回流提取两次，每次时间为两小时。

进一步的技术方案，所述Zanthobungeanine结构为Zanthobungeanine。

进一步的技术方案，所述Zanthodioline结构为Zanthodioline。

进一步的技术方案，所述N-methyflindersine结构为N-methylflindersine。

上述技术方案中，两面针干燥根，用95％乙醇回流提取2次，每次2h，提取液过滤，减压浓缩至无醇味，加水稀释至适宜浓度，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别回收溶剂，最后得到各萃取部位的浸膏，对石油醚、氯仿萃取物进行了化学成分的分离及结构鉴定，确定了三个喹诺酮类生物碱的结构，并对其进行NO释放抑制活性的测定：

表1化合物对RAW264.7巨噬细胞NO代谢的影响

其中样品Zanthobungeanine在浓度30μg/ml时，抑制率是71.1％(P＜0.01)，细胞存活率是73.6％(P＜0.05，更接近于0.01)，30浓度的样品处理RAW264.7巨噬细胞后，抑制率与模型对照组相比具有显著性差异，说明药物具有NO释放抑制活性，但是细胞存活率与空白组相比具有显著性差异，说明药物具有一定的细胞毒性，减小浓度到10μg/ml细胞存活率提高，可是NO抑制率也明显降低。从表中也可以看出药效和剂量之间是有一定的依赖关系的，该样品的IC50是37.26μg/ml。样品Zanthodioline和N-methyflindersin eNO释放抑制活性不明显(阳性对照槲皮素的IC50是20-30μg/ml)。

样品Zanthobungeanine，Zanthodioline和N-methyflindersine都是喹诺酮类生物碱，就其它们的结构差异而言，Za nthobun geanine具有双键和甲氧基，Zanthodioline双键被饱和具有甲氧基，N-methyflindersine具有双键无甲氧基，双键和甲氧基取代基是化合物Zanthobungeanine具有N O释放抑制活性的原因之一，从而使得化合物具有抗炎效果。

本发明的优点是：

1.本发明通过采用两面针干燥根，用乙醇回流提取2次，提取液过滤，减压浓缩至无醇味，加水稀释至适宜浓度，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别回收溶剂，得到了三个喹诺酮类生物碱的结构，并且三个喹诺酮类生物碱具有NO释放抑制活性的特点，从而具有抗炎效果。

附图说明

下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述：

图1为本发明实施例一的制备工艺流程图。

具体实施方式

实施例一：一种两面针喹诺酮类生物碱的制备及应用，其步骤为：

(1)采用两面针干燥根，用95％乙醇回流提取两次，每次时间两小时，得到提取液；

(2)所述提取液过滤，减压浓缩至无醇味，加水稀释；

(3)稀释后的提取液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别回收溶剂，制备得到三种两面针喹诺酮类生物碱，分别是Zanthobungeanine，Zanthodioline和N-methyflindersine。

两面针干燥根27.0kg，用95％乙醇回流提取2次，每次2h，提取液过滤，减压浓缩至无醇味，加水稀释至适宜浓度，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正于醇萃取，分别回收溶剂，最后得到各萃取部位的干浸膏，其中石油醚萃取物136g，氯仿萃取物52g，乙酸乙酯萃取物28g，正丁醇萃取物120g。

氯仿层浸膏50g经硅胶柱色谱分离，石油醚-乙酸乙酯(体积比100∶0～1∶1)、乙酸乙酯-甲醇(体积比100∶0～0∶100)梯度洗脱，得到24组分(Fr.1～Fr.24)：Fr.13经反复硅胶柱色谱分离、石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，反相C18色谱柱、85％甲醇制备得化合物Zanthodioline(8mg)；石油醚层浸膏130g经硅胶柱色谱分离，石油醚-乙酸乙酯(体积比100∶0～1∶1)梯度洗脱，得到20组分(Fr.1～Fr.20)：Fr.9和Fr.8分别经反相C18色谱柱、80％甲醇制备得化合物Zanthobungeanine(1.8g)和化合物N-methyflindersine(32mg)。结构的确定是通过理化性质和波谱数据分析。

对分到的Zanthobungeanine，Zanthodioline和N-methyflindersine进行NO释放抑制活性的测定，具体方法：RAW264.7细胞调整浓度到1.2×106/ml，每孔200μL接种于96孔培养板，5％CO2，37℃，培养2小时，加入LPS(10μg/ml)，INF-γ(33ng/ml)2μL，样品DMSO溶液0.4μL，培养16小时。[LPS终浓度100ng/ml，INF-γ终浓度100ng/ml，溶解样品的DMSO相对于培养基的含量为0.2％]。取上清液100μL，加入事先调好的Griess试药，用酶标仪在570nm测定吸光度。细胞生存率用MTT法进行测定。(于570nm下进行比色测定，各组实验结果以Excell进行统计分析)，每个样品浓度为1，3，10，30，100μg/ml，槲皮素做阳性对照。

Claims (1)

1.一种两面针喹诺酮类生物碱的制备方法，其特征在于，其步骤为：

(1)将两面针干燥根27.0kg，用95％乙醇回流提取2次，每次2h，得到提取液；

(2)将提取液过滤，减压浓缩至无醇味，加水稀释至适宜浓度，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正于醇萃取，分别回收溶剂，最后得到各萃取部位的干浸膏，其中石油醚萃取物干浸膏136g，氯仿萃取物干浸膏52g，乙酸乙酯萃取物干浸膏28g，正丁醇萃取物干浸膏120g；

(3)将上述步骤(2)中的氯仿萃取物干浸膏50g经硅胶柱色谱分离，采用体积比为100∶0～1∶1的石油醚-乙酸乙酯和体积比为100∶0～0∶100的乙酸乙酯-甲醇进行梯度洗脱，得到24个组分，即组分1～组分24，将其中的组分13经反复硅胶柱色谱分离、石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，反相C18色谱柱、85％甲醇制备得化合物Zanthodioline 8mg；

而将上述步骤(2)中的石油醚萃取物干浸膏130g经硅胶柱色谱分离，采用体积比为100∶0～1∶1的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，得到20个组分，即组分1～组分20，将其中的组分9和组分8分别经反相C18色谱柱、80％甲醇制备得化合物Zanthobungeanine1.8g和化合物N-methyflindersine32mg；

上述步骤(3)中，所述Zanthobungeanine结构为：

所述Zanthodioline结构为：

所述N-methyflindersine结构为