CN102475749A - 治疗奶牛隐性乳房炎的中药透皮剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗奶牛隐性乳房炎的中药透皮剂及其制备方法,所述透皮剂为水包油型乳膏剂,组成为蒲公英、金银花、瓜蒌、连翘、芙蓉花、黄芪、大黄、当归;用量重量比1:1:1:0.6:0.5:0.3:0.3:0.2。制备方法包括以下过程:第一步为中药液提取,将所述的中药原料浸泡,超声,回流提取,过滤,滤液旋转蒸发至无醇味,加入石油醚萃取,水相浓缩,蒸汽灭菌获得中药提取液保存备用;第二步为水包油型乳膏剂制取,硬脂酸12g、单硬脂酸甘油酯3.5g、羊毛脂5g、凡士林2g、石蜡6mL;三乙醇胺0.3ml、中药提取液28.5ml,加热,混合,搅拌,加入促透剂搅拌至冷凝,即得中药透皮剂。
Description
技术领域
本发明涉及一种治疗奶牛隐性乳房炎的中药透皮剂及其制备方法。
背景技术
奶牛乳房炎(mastitis)是由病原微生物感染、机械性刺激或化学物理性损伤所致的奶牛乳房实质、间质炎症的疾病,是奶牛常见且多发的一种疾病,其发病率高,危害性大,是造成奶牛业损失最大的疾病之一。奶牛乳房炎根据有无临床症状,可分为临床型乳房炎(Clinical Mastitis)和隐性乳房炎(Subclinical Mastitis)两类。奶牛隐性乳房炎主要是由病原微生物感染引起,主要包括金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌、大肠杆菌、乳房链球菌、肺炎克雷伯氏菌等。贵州省隐性型乳房炎感染率为58.39%,乳区阳性率为30.99%(程振涛.奶牛隐性乳房炎的诊断方法与细菌学研究[D].贵阳:贵州大学,2006),2008贵阳地区奶牛隐性乳房炎的感染率为40%(寨鸿瑞,田甜,王开功,周碧君,文明.贵阳市奶牛隐性乳房炎的调查与病原鉴定[J].贵州农业科学,2009,37(9):145-147.)。而隐性乳房炎往往因为不表现临床症状而忽略治疗转而发展为临床型乳房炎。
目前,临床上主要是应用抗生素治疗奶牛乳房炎,如果使用抗生素治疗隐性乳房炎,用药期间和停药5天内的牛奶不得销售,这将影响其经济效益。养殖户往往担心经济效益或饲养管理不当没有及时诊治奶牛隐性乳房炎,进而转为临床型乳房炎,造成更大的损失。
近年来,中草药治疗奶牛乳房炎越来越引起国内外学者的重视,高纯一等(高纯一,祁永锋,丁营兵.公英散加味治疗奶牛乳房炎[J].中国兽药科学,2001,2(6)101-103.)用“公英散”加味拌料治疗奶牛乳房炎,有效率达92%;张彬等(张彬,薛明,崔颖,罗永红,周宗田,史彦斌,夏文江,张科仁.新兽药消炎醒对乳牛乳房炎临床治疗试验[J].中国兽医科技,2000,30 (8) :28-29. )用消炎醒乳池灌注治疗乳牛乳腺炎125例,治愈率达84%;许瑾等(许瑾,孙彦河,杨春波,裴树森,孙少印.乳安注射液治疗奶牛乳房炎的效果试验[J].黑龙江畜牧兽医,2004,(7):56.)采用乳安注射液(含绿原酸、黄芪多糖)治疗奶牛乳房炎,治愈率为86.7%(13/15),有效率为100%(15/15),明显优于青链霉素类药物。
以上中药复方主要是散剂、汤剂、注射剂,其中散剂和汤剂用药量大,由于其味道特别,有的动物很难灌服,而注射剂对动物刺激很大,对动物产生一定的应激,增加了其在临床推广的难度。而使用透皮给药系统(Transdermal therapeutic system,TTS)目前在临床治疗奶牛乳房炎的报道较少,TTS是指药物以一定的速率通过皮肤,经毛细血管吸收进入循环而产生药效的控释制剂。而用中药透皮剂治疗奶牛乳房炎既避免了肝脏首过效应,又降低了胃肠道的毒副反应和机体的应激反应,使其在治疗奶牛乳房炎上具有广阔的应用前景。
发明内容
本发明要解决的技术问题是:提供一种治疗奶牛隐性乳房炎的中药透皮剂及其制备方法,以克服现有技术存在的散剂、汤剂很难灌服,注射剂对动物刺激很大,临床推广难度大等不足。
本发明采取以下技术方案:本发明所述治疗奶牛隐性乳房炎的中药透皮剂为水包油(O/W)型乳膏剂,中药复方组成为蒲公英、金银花、瓜蒌、连翘、芙蓉花、黄芪、大黄、当归;其用量重量份配比为1:1:1:0.6:0.5:0.3:0.3:0.2。
本发明所述的治疗奶牛隐性乳房炎的中药透皮剂的制备方法,包括以下过程:第一步为中药液提取,即先取蒲公英、金银花、瓜蒌、连翘、芙蓉花、黄芪、大黄、当归,将所述的中药原料用50%乙醇浸泡30 min,其中原料与乙醇的料液重量比1:10;然后超声15 min,回流提取2 h,多层纱布过滤(使用纱布的层数要从过滤效果考虑,一般为4-6层,甚至更多层数。下同),药渣再加50%乙醇,其中料液重量比1:8,回流提取1 h,多层纱布过滤,合并滤液,旋转蒸发至无醇味,加入石油醚萃取,水相浓缩至2 g/mL,121 ℃流通蒸汽灭菌15 min,灭菌后获得的中药提取液4 ℃保存备用;第二步为水包油型乳膏剂制取,透皮剂基质中油相组成及重量配比为:硬脂酸12 g、单硬脂酸甘油酯3.5 g、羊毛脂5 g、凡士林2 g、石蜡6 mL;水相组成及重量配比:三乙醇胺0.3 ml、中药提取液28.5 ml,将上述所列量取的油相共置同一容器中,水浴80℃加热;将水相放入另一容器中,水浴80℃加热,然后在等温条件下将两相混合,搅拌10 min,加入促透剂5%氮酮(重量比)和10%丙二醇(重量比),再于室温条件下搅拌至冷凝,即得中药透皮剂。
本发明中涉及的瓜蒌、连翘、大黄为中药饮片,由于体积较大或质地较硬,所以混合前先粉碎为粗粉,其用量为粉碎后的重量。
本发明所述的治疗奶牛隐性乳房炎的中药透皮剂的使用方法如下:经CMT检测患有隐性乳房炎的奶牛每次挤乳后,先用热毛巾擦拭乳房,然后每个患病乳区涂抹中药透皮剂乳膏剂20~25 g,2次/d,连续用药5 d后,采取乳样经CMT检测,评价中药治疗效果,治愈:强阳性( + + + )或阳性( + + )转为阴性( - )或可疑(±);有效:强阳性( + + + )或阳性( + + )转为弱阳性( + ) ;无效:治疗后无明显效果。
中药复方的急性毒性试验如下:
中药复方提取液浓缩至生药含量为2 g/mL(若继续浓缩,中药无法进行灌胃给药)。取体重20±2 g的健康昆明小白鼠24只,雌雄各半,随机分成试验组和对照组,每组12只。试验组灌胃给中药0.5 mL/只(相当于生药1 g),对照组口服给生理盐水0.5 mL/只,给药一次,常规饲养7 d。观察小鼠的临床表现和死亡情况,以死亡为主要观察指标。如有一只死亡,则以刚不出现死亡组为准,此时的用药量即为小鼠的耐药量,然后按公式计算出耐受量倍数。以耐受用量口服100倍以上为安全,计算公式如下所示。试验结果表明小鼠口服给药量达55.6 g/kg体重,7天内未见小鼠死亡,临床推荐用量为0.2 g/Kg,其耐药倍数为278倍,符合安全无毒的。
中药透皮剂的安全性试验如下:
1)、中药透皮剂的刺激性试验
6只,体重2.5~3.0 Kg,雌雄各半,给药前24 h将家兔背部两侧去毛,去毛面积约为体表面积的10%(家兔每侧约为70 cm2),去毛后应检查去毛皮肤是否因去毛而受损伤,有损伤的皮肤不宜用于此项试验。将一定量中药透皮剂均匀涂于家兔右侧区(一般膏剂为1~2 g),左侧涂赋形剂(最佳配方中不含中药的其他试剂)做对照。4~6 h(可根据供试品的性状、使用情况而定)后,除去残留的供试品(用水或适宜的溶剂,但不应该改变试验造成皮肤反应的实际情况或表皮的完整性)后1、12、24、48、72 h检查供试品对家兔皮肤的刺激反应。对红斑及焦痂、水肿分别进行评分,评分标准为每只动物如无红斑、无水肿,评分为0,轻微红斑、轻微水肿(勉强可见)评分为1,轻度红斑、轻微水肿(隆起轮廓清楚),评分为2,中度红斑、中度水肿(隆起约1cm),评分为3,重度红斑至轻度焦痂形成、严重水肿(隆起超过1cm,并超出敷药面积),评分为4。计算出每个时间点的平均分值。取各时间点中最高平均分值,并进行刺激强度的评价。分值≤0.5,为无刺激性、>0.5≤2.0,为轻度刺激性、>2.0≤6.0,为中度刺激性、>6.0,为重度刺激性。结果表明该中药透皮剂各时间点刺激平均分值小于0.5,对家兔完整皮肤未出现明显红斑和水肿反应。
(2)、中药透皮剂的过敏性试验
取健康的新西兰大耳白兔6只,体重2.5~3.0 Kg,雌雄各半,于给药前24 h将家兔背部两侧去毛。去毛面积约3×3 cm,去毛后应检查去毛皮肤是否因去毛而受损伤,有损伤的皮肤不宜用于此项试验。家兔右侧涂1 g中药透皮剂,左侧涂赋形剂做阴性对照,盖上一层硫酸纸,用无刺激性胶布固定,6 h后去除固定物。隔日致敏1次,共3次。于末次接触14 d后,再次涂抹药物1 g,6 h后去除固定物,立即观察,并分别于1、12、24、48、72 h观察皮肤过敏反应出现的红斑及焦痂、水肿等情况。通过致敏率(%)对药物致敏强度进行分级,致敏率为0~8,为Ⅰ级即弱致敏物、致敏率为9~28,为Ⅱ级即轻度致敏物、致敏率为29~64,为Ⅲ级即中度致敏物、致敏率为65~80,为Ⅳ级即强度致敏物、致敏率为81~100,为Ⅴ级即极强度致敏物。结果表明中药透皮剂各时间点的致敏率为0%,中药透皮剂对家兔完整皮肤为弱致敏物。
3)、中药透皮剂的稳定性试验
取中药透皮剂10 g,放入带刻度离心管中,3000 r/min离心30 min,观察中药透皮剂是否有分层及破乳现象。另取中药透皮剂10 g置于具塞试管内,分别置45 ℃恒温箱6 h或﹣20 ℃冰箱24 h,检查中药透皮剂是否有分层破乳以及色泽、均匀性改变等现象。再取中药透皮剂10 g装入具塞试管内,置于温度为40±2.0 ℃,相对湿度为75%的恒温培养箱中,连续放置3个月,定期检查,观察是否有分层破乳、霉败以及色泽、均匀性改变等现象。结果表明该中药透皮剂具有良好的稳定性,未发现分层、破乳、霉败及色泽、均匀性改变等现象。
本发明的透皮制剂治疗奶牛隐性乳房炎疗效显著、操作简单,对奶牛造成刺激、应激较小,经济实用。本发明围绕贵州省农业产业结构的调整,为十一五期间将要发展两万头奶牛的总体目标提供相关疾病防治措施,为生产实践提供防治奶牛乳房炎的良好中草药方剂及制药质量标准控制要求,最终解决生产实际中“抗菌奶”的重大问题。
具体实施方式
本发明的实施例1:
先将瓜蒌、连翘、大黄粉碎为粗粉,称取中药饮片蒲公英1 kg、金银花1 kg、瓜蒌粗粉1 kg、连翘粗粉0.6 kg、芙蓉花0.5 kg、黄芪0.3 kg、大黄粗粉0.3 kg、当归0.2 kg,混合。将中药复方用50%乙醇浸泡30 min(料液比1:10),然后超声15 min,回流提取2 h,多层(6层)纱布过滤。药渣再加50%乙醇(料液比1:8),回流提取1 h,多层(6层)纱布过滤,合并滤液,旋转蒸发至无醇味,加入石油醚萃取,水相浓缩至2 g/mL,121 ℃流通蒸汽灭菌15 min。灭菌后4 ℃保存备用。
称量硬脂酸12 g、单硬脂酸甘油酯3.5 g、羊毛脂5 g、凡士林2 g、石蜡6 mL共置同一容器中,80℃水浴加热;将三乙醇胺0.3 ml、中药提取液28.5 ml放入另一容器中,80℃水浴加热,然后在等温条件下将两相混合,并不断搅拌10 min,加入促透剂5%氮酮和10%丙二醇。再于室温条件下搅拌至冷凝,即得中药透皮剂。本品在常温、避光、阴凉条件下贮藏,有效期为2年。
选取胎次、年龄、泌乳月相近,身体状况良好、乳房无临床异常、乳汁无肉眼可见变化的CMT检测为阴性的健康奶牛7头(28个乳区)为阴性对照组,CMT检测阳性(患有隐性乳房炎)的奶牛20头,随机分成2组,阳性对照组8头(30个乳区,阳性乳区16个)和中药透皮剂治疗组12头(乳区45个,阳性乳区29个)。治疗组奶牛早、晚挤完奶后,用温水清洗患牛乳区,干毛巾擦干,每个乳区涂抹中药透皮剂20~25 g,每天2次,连续用药5天,对照组不治疗。用药5 d后,取乳样经CMT检测,评价中药治疗效果。治愈:强阳性(+ + +)或阳性(+ +)转为阴性(﹣)或可疑(±);有效:强阳性(+ + +)或阳性(+ +)转为弱阳性(+);无效:治疗后无明显效果。结果显示中药透皮剂临床应用的治愈率和有效率分别为69.0%和89.7%,达到良好的治疗效果。
本发明的实施例2:
将瓜蒌、连翘、大黄粉碎为粗粉,称取中药饮片蒲公英1 kg、金银花1 kg、瓜蒌粗粉1 kg、连翘粗粉0.6 kg、芙蓉花0.5 kg、黄芪0.3 kg、大黄粗粉0.3 kg、当归0.2 kg,混合。将中药复方用50%乙醇浸泡30 min(料液比1:10),然后超声15 min,回流提取2 h,多层(6层)纱布过滤。药渣再加50%乙醇(料液比1:8),回流提取1 h,多层(6层)纱布过滤,合并滤液,旋转蒸发至无醇味,加入石油醚萃取,水相浓缩至2 g/mL,121 ℃流通蒸汽灭菌15 min。灭菌后4 ℃保存备用。
透皮剂为水包油(O/W)型乳膏剂,将基质配方(A)、乳化剂(B)、温度(C)作为可变因素进行考察,每个因素各取三个水平,选用L9(34)正交表进行试验。按表1所列量取硬脂酸、单硬脂酸甘油醋、液体石蜡、凡士林、羊毛脂共置同一容器中,水浴加热;将三乙醇胺、中药液(用量与基质配方的量等同)放入另一容器中,水浴加热,然后在等温条件下将两相混合,并不断搅拌10 min,加入促透剂5%氮酮和10%丙二醇。于室温条件下搅拌至冷凝,即得中药透皮剂。根据中药透皮剂分层时间及性能两项指标,筛选最佳制备方案。
表1 透皮剂制备试验因素水平表
综合中药透皮剂分层时间和性能(分散度、软硬度、粘性),由方差分析表(详见表3)可见,A、B、C对试验指标的影响不显著(P>0.05)。但对其影响顺序为A>C>B,即处方基质用量>温度>乳化剂用量。综合离心分层时间、分散度、软硬度、粘性指标,得出透皮剂最佳工艺为A2B1C2,即取硬脂酸12 g、单硬脂酸甘油酯3.5 g、羊毛脂5 g、凡士林2 g、石蜡6 mL共置同一容器中,水浴80℃加热;同时将三乙醇胺0.3 ml、中药提取液28.5 ml放入另一容器中,水浴80℃加热,并在80℃时将两相混合不断搅拌10 min,加入促透剂5%氮酮和丙二醇10%,于室温条件下搅拌至冷凝,即得中药透皮剂。
表2 基质配方、乳化剂、温度对透皮剂外观和稳定性的正交试验结果表
表3 方差分析表
Claims (4)
1.一种治疗奶牛隐性乳房炎的中药透皮剂,其特征在于:所述透皮剂为水包油型乳膏剂,中药复方组成为蒲公英、金银花、瓜蒌、连翘、芙蓉花、黄芪、大黄、当归;其用量重量份配比为1:1:1:0.6:0.5:0.3:0.3:0.2。
2.一种如权利要求1所述的治疗奶牛隐性乳房炎的中药透皮剂的制备方法,其特征在于:它包括以下过程:第一步为中药液提取,即先取蒲公英、金银花、瓜蒌、连翘、芙蓉花、黄芪、大黄、当归,将所述的中药原料用50%乙醇浸泡30 min,其中原料与乙醇的料液重量比1:10;然后超声15 min,回流提取2 h,纱布过滤,药渣再加50%乙醇,其中料液重量比1:8,回流提取1 h,纱布过滤,合并滤液,旋转蒸发至无醇味,加入石油醚萃取,水相浓缩至2 g/mL,121 ℃流通蒸汽灭菌15 min,灭菌后获得的中药提取液4 ℃保存备用;第二步为水包油型乳膏剂制取,透皮剂基质中油相组成及重量配比为:硬脂酸12 g、单硬脂酸甘油酯3.5 g、羊毛脂5 g、凡士林2 g、石蜡6 mL;水相组成及重量配比:三乙醇胺0.3 ml、中药提取液28.5 ml,将上述所列量取的油相共置同一容器中,水浴80℃加热;将水相放入另一容器中,水浴80℃加热,然后在等温条件下将两相混合,搅拌10 min,加入促透剂重量比为5%氮酮和重量比为10%丙二醇,再于室温条件下搅拌至冷凝,即得中药透皮剂。
3.根据权利要求2所述的治疗奶牛隐性乳房炎的中药透皮剂的制备方法,其特征在于:瓜蒌、连翘、大黄混合前先粉碎为2mm直径最粗粉,其用量为粉碎后的重量。
4.一种如权利要求1所述的治疗奶牛隐性乳房炎的中药透皮剂的使用方法,其特征在于:经CMT检测患有隐性乳房炎的奶牛每次挤乳后,先用热毛巾擦拭乳房,然后每个患病乳区涂抹中药透皮剂乳膏剂20~25 g,2次/d,连续用药5 d后,采取乳样经CMT检测,评价中药治疗效果,治愈:强阳性( + + + )或阳性( + + )转为阴性( - )或可疑(±);有效:强阳性( + + + )或阳性( + + )转为弱阳性( + ) ;无效:治疗后无明显效果。
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