CN103191300B - 具有免疫功能的治疗奶牛乳腺炎的中药组合物外用制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种具有免疫功能的用于治疗奶牛乳腺炎的中药组合物,其原料药包括路路通、黄精、黄连、首乌藤、白芍、黄芪、山药、当归、一枝黄花、人参叶、儿茶、三白草、大血藤、大枣、山茱萸、川木通、杜仲、核桃仁、五加皮和熟地黄。该中药组合物在清热解毒,抗菌消炎的同时,能够提高奶牛的免疫能力,从而提高奶牛的抗应激,抗疾病能力,在治疗奶牛乳腺炎方面具有疗效好,防复发,无耐药性,无残留,无毒副作用的优势。
Description
技术领域
本发明涉及中药免疫技术领域,尤其涉及一种具有免疫功能的治疗奶牛乳腺炎的中药组合物外用制剂。
背景技术
奶牛的乳腺是机体内一个复杂生物反应器,在乳腺内部,众多的保护因子包括细胞因子、抗体、激素、酶和神经递质等一起构建了多条错综复杂的信号通路,这些因子之间的动态平衡是维持乳腺健康的基本条件。当奶牛乳腺发生炎症时,机体抵抗力下降,体内细胞因子及其受体的表达就会发生异常。
奶牛乳腺炎( mastitis) 是指奶牛的乳腺组织内发生了某种类型的炎症,并伴有不同程度乳汁物理、化学及微生物学变化,它是反刍动物发病率最高、最常见的疾病之一,是由于机体代谢和生理状态改变、乳房损伤以及感染或环境病原微生物等引起的乳腺炎症反应。它通常是由病原微生物感染、饲养管理、环境、奶牛自身及遗传等因素综合作用引起的。乳腺炎的发生不仅使发情配种的时间延长和胎间距拉长,降低了奶牛的生产性能,导致产奶量下降,甚至乳房坏死,丧失泌乳能力。每年因奶牛乳腺炎造成的经济损失,美国约20 亿美元,英国约 3 亿英镑,我国每年也在数亿人民币,而且还严重地影响了牛奶制品的品质,并间接地危及人类健康。
目前,国内外对奶牛乳腺炎的治疗药物主要是抗生素,抗生素是目前乳腺炎治疗的基本药物,但此类药物的治疗效果常并不令人满意,而其引起的药物残留问题却越来越受到众多的非议。近年来,畜禽产品质量安全问题已成为我国畜牧业发展的一个主要矛盾。奶牛场的大量使用抗生素将对乳品质量安全产生负面影响。我国奶牛业乳腺炎发病率较高,抗生素使用频繁,药物残留量超标现象较严重,严重损害了奶牛业产品的市场竞争力,如何在保障奶牛健康的前提下减少抗生素的使用是奶牛业面临的重要课题。
采用抗生素治疗选择的是单纯抗菌的思路,只重视了对微生物的杀灭,而未重视作为乳腺炎过程中矛盾的另一方面,即奶牛本身的炎症反应和炎症引起的免疫力下降的问题。病理学认为,炎症是机体对不良刺激的一种防御反应,是一个病理过程。当然,微生物感染常是引起炎症的主要刺激因素,但炎症并不单纯地等于感染。乳腺炎是乳腺的炎症,微生物感染和乳腺组织的反应是其矛盾的两个主要方面。由此可见,目前的乳腺炎研究多只重视了微生物感染的问题,而忽视了矛盾的另一个主要方面。适度的炎症反应有利于感染原的清除,但炎症反应强度过大时可造成较重的微循环损伤和障碍,使炎区局部水肿加剧、物质交换受阻、有害代谢产物难于排出。此时,即使感染原已完全或基本清除,局部大量有害产物和炎症介质的蓄积仍导致乳腺组织仍维持炎症状态。同时,组织水肿也阻碍药物进入炎区,降低各种药物的使用效果。可判断发病初期,以微生物感染为主要矛盾,而随着疾病的发展,乳腺内炎症反应加强、感染受到控制,主要矛盾很快转变为炎症引发的免疫力低下,抗病力减弱。在人医临床上,同样,过去一直认为感染性炎症是细菌或病毒引起,只要消除细菌或病毒,炎症自会消退。90 年代以来,各种感染和非感染性疾病中,机体炎性反应过激及其造成的免疫力低下,抗病力减弱己得到较多的重视。
综上所述,乳腺免疫系统对临床型乳腺炎的进程有重要影响。而提高免疫系统对炎区组织修复也有着根本意义,组织的修复又直接关系到病后泌乳能力的保持。所以,对那些临床症状明显的病例,应改变原有的单纯抗菌的思路,把控制炎症反应本身、改善免疫系统作为治疗的要点之一。
中药属于天然药物,具有抗菌、消炎、不易使致病菌产生耐药性和免疫增强的作用,具有安全、高效、低毒、低残留的特点,能克服大量使用抗生素带来的弊端。
中草药具有增强机体免疫机能,提高动物抗应激、抗疾病能力,改善动物生产性能等多种功效,而且无耐药性、无残留、毒副作用小,在畜禽养殖方面显示出独特的优势。
中药具有标本兼治的作用,它可直接抑制或杀灭乳腺炎的病原菌,或通过提高机体的免疫力而抑制或杀灭病原菌,在治疗奶牛乳腺炎方面具有巨大的潜力。因此,开展中草药防治奶牛乳腺炎不但是可持续畜牧业发展的要求,也是人们提高生活质量和对绿色食品消费的要求。
本发明就是在中兽医理论的基础上,提供一种具有免疫功能的用于治疗奶牛乳腺炎的中药组合物,其在抗菌消炎、清热解毒的同时能够提高奶牛的免疫力,从而实现从根本上对奶牛乳腺炎的治疗。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种具有免疫功能的用于治疗奶牛乳腺炎的中药组合物外用制剂,其在清热解毒,抗菌消炎的同时,能够提高奶牛的免疫能力,从而提高奶牛的抗应激,抗疾病能力,在治疗奶牛乳腺炎方面具有疗效好,防复发,无耐药性,无残留,无毒副作用的优势。
为了解决上述技术问题,本发明提供了一种具有免疫功能的用于治疗奶牛乳腺炎的中药组合物,其原料药包括路路通、黄精、黄连、首乌藤、白芍、黄芪、山药、当归、一枝黄花、人参叶、儿茶、三白草、大血藤、大枣、山茱萸、川木通、杜仲、核桃仁、五加皮和熟地黄。
其中,所述中药组合物的各原料药的重量份分别为:路路通20重量份~30重量份、黄精35重量份~45重量份、黄连60重量份~70重量份、首乌藤30重量份~40重量份、白芍30重量份~40重量份、黄芪75重量份~85重量份、山药40重量份~50重量份、当归25重量份~35重量份、一枝黄花30重量份~40重量份、人参叶50重量份~60重量份、儿茶25重量份~35重量份、三白草20重量份~30重量份、大血藤30重量份~40重量份、大枣40重量份~50重量份、山茱萸35重量份~45重量份、川木通20重量份~30重量份、杜仲50重量份~60重量份、核桃仁25重量份~35重量份、五加皮40重量份~50重量份和熟地黄30重量份~40重量份。
其中,所述中药组合物的各原料药的重量份分别为:路路通25重量份、黄精40重量份、黄连65重量份、首乌藤35重量份、白芍35重量份、黄芪80重量份、山药45重量份、当归30重量份、一枝黄花35重量份、人参叶55重量份、儿茶30重量份、三白草25重量份、大血藤35重量份、大枣45重量份、山茱萸40重量份、川木通25重量份、杜仲55重量份、核桃仁30重量份、五加皮45重量份和熟地黄35重量份。
其中,所述中药组合物的剂型为软膏、硬膏、搽剂、微乳剂、霜剂、涂膜剂、巴布剂。
本发明还提供了一种具有免疫功能的用于治疗奶牛乳腺炎的中药组合物涂膜剂,其原料药包括路路通、黄精、黄连、首乌藤、白芍、黄芪、山药、当归、一枝黄花、人参叶、儿茶、三白草、大血藤、大枣、山茱萸、川木通、杜仲、核桃仁、五加皮和熟地黄。
本发明还提供了一种具有免疫功能的用于治疗奶牛乳腺炎的中药组合物巴布剂,其原料药包括路路通、黄精、黄连、首乌藤、白芍、黄芪、山药、当归、一枝黄花、人参叶、儿茶、三白草、大血藤、大枣、山茱萸、川木通、杜仲、核桃仁、五加皮和熟地黄。
本发明还提供了上述中药组合物的制备方法,当所述中药组合物的剂型为涂膜剂时,其具体步骤为:
第一步,将所述组分按比例混合,搅拌均匀,获得混合物,加入相对于其质量5~8倍的醇浓度为60%~80%的乙醇,加热回流2~4小时,过滤,滤渣再次加入相对于混合物质量2~4倍的醇浓度为60%~80%的乙醇,加热回流2~4小时,过滤,将滤液合并,加热浓缩至无乙醇味,添加水至生药浓度为1g/ml~2g/ml,获得药液;
第二步,取聚乙烯醇10g用蒸馏水80ml密封浸泡24小时使其充分溶胀,然后于90℃密封水浴加热使其较快溶于水中,过滤,得均匀无块状物,待其冷却,缓缓加入第一步获得的药液50ml,添加醇浓度为80%的乙醇溶液30ml,丙酮20ml,甘油3ml,再加入占涂膜剂质量3%的氮酮,边加边搅拌,加完继续搅拌1h~2h,最后装入灭菌的玻璃瓶中密封保存。
本发明还提供了上述中药组合物的制备方法,当所述中药组合物的剂型为巴布剂时,其具体步骤为:
第一步,将所述组分按比例混合,搅拌均匀,获得混合物,加入相对于其质量5~8倍的醇浓度为60%~80%的乙醇,加热回流2~4小时,过滤,滤渣再次加入相对于混合物质量2~4倍的醇浓度为60%~80%的乙醇,加热回流2~4小时,过滤,将滤液合并,加热浓缩除去溶剂,获得干膏;
第二步,将0.2g~0.4g氢氧化铝加入盛有20g~40g甘油的容器中,充分混合,加入NP-700或NP-600再继续混和,得第一溶液;将0.1g~0.3g酒石酸置于容器中,加入50ml~70ml蒸馏水溶解,获得酒石酸溶液,将酒石酸溶液按5ml每份等分,取等体积份酒石酸溶液,加入上述第一溶液中,每次加入充分混匀,所有等份酒石酸溶液加完后,充分搅拌20分钟~30分钟,获得基质;
第三步,在获得的基质中加入500g第一步获得的干膏,充分混匀后,涂布于无纺布上,盖上隔离膜制成巴布剂。
本发明的有益效果:
本发明提供的中药组合物外用制剂在清热解毒,抗菌消炎的同时,能够提高奶牛的免疫能力,从而提高奶牛的抗应激,抗疾病能力,在治疗奶牛乳腺炎方面具有疗效好,防复发,无耐药性,无残留,无毒副作用的优势。
具体实施方式
中兽医传统理论认为,乳腺炎即乳痈,是痰、湿、气、血瘀结不散化而为炎。因饲养管理不善,久卧湿热之地,湿热毒气上蒸,侵害乳房;或因胃热雍盛,肝郁气滞,乳络失畅以致乳房气血凝滞,瘀结而生痈肿;或因牛犊吸奶,使乳汁停滞,乳房胀满等原因而导致本病,基于该理论,本发明提出以清热解毒、痛经活血、消肿止痛为原则,治疗奶牛乳腺炎。
另外,当机体受到细菌、霉菌、病毒等病原微生物感染或寄生虫的侵袭,如埃希氏大肠杆菌、肺炎球菌、结核杆菌等,病菌在宿主体内能分泌一种具有抑制嗜中性白细胞吞噬作用的因子,溶血性巴氏杆菌可分泌一种能杀死机体内巨细胞的物质,如此等等病菌的干扰 ,从而使机体降低和丧失抗感染的能力。
在整个乳房组织中,乳头管是乳腺组织的第一道天然屏障,其角质层可阻挡病原体的入侵;其上皮细胞可分泌具有杀菌作用的角蛋白,而且导管近端可以产生局部抗体和细胞因子。病原微生物只有突破这道防线后,才能感染乳腺组织。当乳房局部血液循环障碍时,乳腺黏膜系统受损免疫能力降低 ,乳腺上皮细胞产生铁离子结合蛋白、细胞因子化学增活素、宿主防卫肽、精氨基琥珀酸代谢产物等炎性介质能力降低;自分泌和旁分泌减少,诱导中性粒细胞和淋巴细胞向感染部位移行作用减弱;效应 T 淋巴细胞分泌效应因子减少,细胞毒作用减弱。乳腺抵抗外源微生物感染的化学屏障作用降低。与此同时,固有层中含有的大量淋巴样细胞,例如肥大细胞、B 淋巴细胞、T 淋巴细胞等数量减少;辅助型 T淋巴细胞对B 细胞分泌的调节作用减弱,导致 IgA分泌量不足,无法阻止金黄色葡萄球菌和链球菌等病原菌与乳腺上皮细胞的结合;IgG2 对中性粒细胞的吞噬能力的增强作用减弱 ,吞噬细胞数减少,无法抑制细菌与腺体上皮细胞的结合激活补体。而血液循环障碍又使免疫活性细胞难以进入乳腺组织,血清溶菌酶活性降低。最终,激素-细胞因子-免疫平衡遭到破坏,乳腺的免疫机能降低,造成致病菌大量入侵、增殖引发炎症,因此,本发明提供的中药组合物还要起到提高免疫功能的作用。
综上所述,本发明提供的中药组合物以清热解毒、通经活血、消肿止痛、免疫增强为原则,所述中药组合物的原料药包括路路通、黄精、黄连、首乌藤、白芍、黄芪、山药、当归、一枝黄花、人参叶、儿茶、三白草、大血藤、大枣、山茱萸、川木通、杜仲、核桃仁、五加皮和熟地黄。
优选,该中药组合物仅由上述原料药构成。
所述中药组合物的各原料药的重量份分别为:
路路通20重量份~30重量份、黄精35重量份~45重量份、黄连60重量份~70重量份、首乌藤30重量份~40重量份、白芍30重量份~40重量份、黄芪75重量份~85重量份、山药40重量份~50重量份、当归25重量份~35重量份、一枝黄花30重量份~40重量份、人参叶50重量份~60重量份、儿茶25重量份~35重量份、三白草20重量份~30重量份、大血藤30重量份~40重量份、大枣40重量份~50重量份、山茱萸35重量份~45重量份、川木通20重量份~30重量份、杜仲50重量份~60重量份、核桃仁25重量份~35重量份、五加皮40重量份~50重量份和熟地黄30重量份~40重量份。
所述中药组合物的各原料药的重量份优选分别为:
路路通23重量份~27重量份、黄精38重量份~42重量份、黄连63重量份~67重量份、首乌藤33重量份~37重量份、白芍33重量份~37重量份、黄芪78重量份~82重量份、山药43重量份~47重量份、当归28重量份~32重量份、一枝黄花33重量份~37重量份、人参叶53重量份~57重量份、儿茶28重量份~32重量份、三白草23重量份~27重量份、大血藤33重量份~37重量份、大枣43重量份~47重量份、山茱萸38重量份~42重量份、川木通23重量份~27重量份、杜仲53重量份~57重量份、核桃仁28重量份~32重量份、五加皮43重量份~47重量份和熟地黄33重量份~37重量份。
所述中药组合物的各原料药的重量份进一步优选分别为:
路路通25重量份、黄精40重量份、黄连65重量份、首乌藤35重量份、白芍35重量份、黄芪80重量份、山药45重量份、当归30重量份、一枝黄花35重量份、人参叶55重量份、儿茶30重量份、三白草25重量份、大血藤35重量份、大枣45重量份、山茱萸40重量份、川木通25重量份、杜仲55重量份、核桃仁30重量份、五加皮45重量份和熟地黄35重量份。
方中,各原料药药理如下:
路路通:味苦,性平,归肝,肾经,具有祛风活络,利水通经的功效,用于关节痹痛,麻木拘挛,水肿胀满,乳少经闭等证。
黄精:味甘,性平,入肺、脾、肾经,具有滋肾润肺,补脾益气的作用,用于阴虚肺燥,干咳痰少,消渴多饮,脾胃虚弱,脾气虚或脾阴不足,肾虚精亏,腰膝酸软,须发早白等证。
黄连:味苦,性寒,入心、肺、胆、胃、大肠经,有清热燥湿,泻火解毒,凉血明目的作用,常用于治疗泻心经之火,心火旺之心烦不眠,及温热病之壮热神昏、心烦、口渴等症状。
首乌藤:味甘、微苦,性平;归心、肝经,具有能养心安神、祛风通络的功效,主治失眠多梦,血虚身痛,肌肤麻木,风湿痹痛,风疮疥癣等证。
白芍:味苦、酸,性凉,归肝、脾经,具有养血柔肝,缓中止痛,敛阴收汗的功效,主治胸腹胁肋疼痛,泻痢腹痛,自汗盗汗,阴虚发热,月经不调,崩漏,带下等证。
黄芪:味甘,性温,入脾、肺经,有补益脾土,升举阳气、固表止汗,托疮生肌的功效,主治脾肺气虚所致之乏力食少便溏,心悸气短,中气下陷之脏器下垂,气不摄血之崩漏便血,久泻脱肛;表虚不固之自汗盗汗,气血不足等证。黄芪使心脏收缩能力增强,能改善全身的血液循环,能扩张冠状动脉、肾血管及拳参末梢血管、使皮肤血液循环旺盛;能提高机体的非特异免疫力,有保肝和降低血糖的作用,对葡萄球菌、血溶性链球菌、肺炎双球菌、痢疾杆菌等有抑制作用,黄芪可显著影响脾淋巴细胞信息传导,实现免疫调节作用。
山药:味甘、性平,入肺、脾、胃经,有补脾养胃,益肺固肾,养阴生津的作用,主治脾胃虚弱,脾失健运之食少纳差,脘闷腹泻等证。
当归:味甘、辛、苦,性温,入肝、心、脾经,具有补血活血,调经止痛、润汤通便的作用,用于血虚萎黄、眩晕心悸、月经不调、经闭痛经、虚寒腹痛、肠燥便秘、风湿痹痛、跌扑损伤、痈疽疮疡等证。
一枝黄花:味辛、苦,性凉,归肺、肝经,具有清热解毒、疏散风热的功效,主治喉痹、咽喉肿痛、风热感冒等证。
人参叶:味苦、甘、性寒,归肺、胃经,具有补气,益肺,祛暑,生津的功效,主治气虚咳嗽,暑热烦躁,津伤口渴,头目不清,四肢倦乏等证。
儿茶:味苦、涩,性微寒,归肺经,具有收湿生肌敛疮的功效,用于溃疡不敛,湿疹,口疮,跌扑伤痛,外伤出血等证。
三白草:味甘、辛,性寒,归肺、膀胱经,具有清热利水;解毒消肿的功效,主治热淋;血淋;水肿;脚气;黄疸;痢疾;带下;痈肿疮毒;湿疹;蛇咬伤等证。
大血藤:味苦,性平,归肝、大肠经,具有败毒消痈,活血通络,祛风杀虫的作用,主治急、慢性阑尾炎,风湿痹痛,赤痢,血淋,月经不调,疳积,虫痛,跌扑损伤等证。
大枣:味甘,性温,入脾、胃经,具有补气健脾、养血安神、调和营卫、缓和药性的作用,用于脾胃虚弱,体倦乏力,食少便溏,气血不足,头痛发热,汗出热风等证,大枣具有增强肌力的作用,具有增加血清总蛋白和白蛋白的功能。
山茱萸:味酸、涩,性微温,入肝、肾经,有补益肝肾、涩精止遗、敛汗固脱的作用,主要用于肝肾阴虚、肝阳上亢之腰膝酸软、头晕耳鸣,阳痿,精关不固之遗精、滑精、崩漏下血等证。
川木通:味苦,性寒,归心、小肠、膀胱经,具有利尿通淋,清心除烦,通经下乳的功效,主治淋证,水肿,心烦尿赤,口舌生疮,经闭乳少,湿热痹痛等证。
杜仲:味甘、微辛,性温,入肝、肾经,具有降血压、补肝肾,强筋骨,安胎气的作用,用于肝肾亏虚、证见眩晕、腰膝酸痛、筋骨痿弱;肾气不固、尿频或尿有余沥、阴下湿痒、阳痿、孕妇体弱、胎动不安或腰坠痛;慢性关节疾病、骨结核、痛经、功能失调性子宫出血、慢性盆腔炎等证,杜仲的叶和皮含有蛋白质、脂肪、维生素和矿物质等营养成分。
核桃仁:味甘,性温,入肾、肺、大肠经,具有补肾益精,温肺定喘,润肠通便的作用,用于肾气亏虚之腰痛腿软,头晕乏力,尿频遗精,消渴,肺肾两虚之咳喘,老年人气虚及产后血亏津少而致的肠燥便秘,跌打损伤,疮疡痈肿等证。
五加皮:味辛、苦,性温,归肝、肾,具有祛风湿;补肝肾;强筋骨;活血脉的功效,主治风寒湿痹;腰膝疼痛;筋骨痿软;小儿行迟;体虚赢弱;跌打损伤;骨折;水肿;脚气;阴下湿痒等证。
熟地黄:又名熟地,味甘,性微温,入肝、肾经,具有补血滋阴,益精填髓的作用,用于血虚萎黄;眩晕,心悸,失眠,月经不调,崩不止;肝肾阴亏,盗汗,足膝疼痛,腰膝酸软,耳鸣耳聋,头目昏花;遗精阳痿;不育不孕;月经不调;崩漏下血;须发早白;消渴;便秘;肾虚喘促等证。
这些中药原料药组分中含有多糖类、苷类、生物碱、有机酸、挥发性油脂、植物色素等多种功效成分,具有增强机体免疫功能、提高动物抗病力、促进动物生长及改善动物生产性能等作用。
本发明提供的中药组合物以清热解毒、通经活血、消肿止痛、免疫增强为原则,既能抗菌消炎、活血止痛,又能提高患病奶牛的免疫机能,从而达到标本兼治、祛邪固本的效果,该药物为内用药物。
通常采用中药灌服汤剂灌服治疗奶牛乳腺炎,虽有较好的治愈效果,但对奶牛的刺激较大,而且因为口服给药的肝脏首过效应和胃肠道的代谢,还降低了药物的有效成分,因而用药剂量大,治疗成本较高;而拌料喂食,因药物气味影响,常常引起奶牛采食量下降,从而影响治疗效果。
经皮给药系统是指皮肤贴敷方式用药,药物以一定的速率通过皮肤经毛细血管吸收进入体循环产生药效的一种给药方式。广义上讲,经皮给药系统包括应用于皮肤上产生吸收作用的各种剂型,如软膏、硬膏、搽剂、微乳剂、霜剂、涂膜剂、巴布剂等。药物透皮给药系统是近十几年来医药领域中研究的一个热点,是药剂学中的一个新兴的领域,被认为是第四代制剂研究的重点。经皮给药系统研究和开发的迅速发展,是由于经皮给药具有独特的优点:(1)可延长半衰期较短药物的治疗效果,具有能长期维持稳定的给药速率等特点,可以保持血药水平稳定在治疗有效浓度范围内。(2)不经过口服,避免了肝脏的“首过效应”和胃肠道环境对药效的干扰和作用(如胃肠道酶、消化液、PH值等因素的影响),对某些药物来说,透皮给药比口服给药能更稳定地进入血液,提高生物利用度。(3)减少给药次数,对不适宜口服给药以及不愿打针与服药的儿童可方便地通过经皮给药途径给药。(4)能提高用药的安全性,降低药物毒性和副作用。
中医经皮给药将药物直接施于患处或相应穴位,药力直达病所,发挥药效,达到相应的治疗目的。经皮给药系统可以不经过肝脏的“首过效应”和胃肠道的破坏,不受胃肠道酶、消化液、PH值的影响,提高生物利用度,降低药物毒性和副作用,达到一定的血药浓度,减少给药次数,提高疗效。
因此,本发明的所述中药组合物制备的剂型可以为软膏、硬膏、搽剂、微乳剂、霜剂、涂膜剂、巴布剂,优选制备成涂膜剂和巴布剂。
本发明还提供了上述中药组合物的制备方法,当所述中药组合物的剂型为涂膜剂时,具体为:
第一步,将所述组分按比例混合,搅拌均匀,获得混合物,加入相对于其质量5~8倍的醇浓度为60%~80%的乙醇,加热回流2~4小时,过滤,滤渣再次加入相对于混合物质量2~4倍的醇浓度为60%~80%的乙醇,加热回流2~4小时,过滤,将滤液合并,加热浓缩至无乙醇味,添加水至生药浓度为1g/ml~2g/ml,获得药液;
第二步,取聚乙烯醇10g用蒸馏水80ml密封浸泡24小时使其充分溶胀,然后于90℃密封水浴加热使其较快溶于水中,过滤,得均匀无块状物,待其冷却,缓缓加入第一步获得的药液50ml,添加醇浓度为80%的乙醇溶液30ml,丙酮20ml,甘油3ml,再加入占涂膜剂质量3%的氮酮,边加边搅拌,加完继续搅拌1h~2h,最后装入灭菌的玻璃瓶中密封保存。
本发明还提供了上述中药组合物的制备方法,当所述中药组合物的剂型为巴布剂时,具体为:
第一步,将所述组分按比例混合,搅拌均匀,获得混合物,加入相对于其质量5~8倍的醇浓度为60%~80%的乙醇,加热回流2~4小时,过滤,滤渣再次加入相对于混合物质量2~4倍的醇浓度为60%~80%的乙醇,加热回流2~4小时,过滤,将滤液合并,加热浓缩除去溶剂,获得干膏;
第二步,将0.2g~0.4g氢氧化铝加入盛有20g~40g甘油的容器中,充分混合,加入NP-700或NP-600再继续混和,得第一溶液;将0.1g~0.3g酒石酸置于容器中,加入50ml~70ml蒸馏水溶解,获得酒石酸溶液,将酒石酸溶液按5ml每份等分,取等体积份酒石酸溶液,加入上述第一溶液中,每次加入充分混匀,所有等份酒石酸溶液加完后,充分搅拌20分钟~30分钟,获得基质;
第三步,在获得的基质中加入500g第一步获得的干膏,充分混匀后,涂布于无纺布上,盖上隔离膜制成巴布剂。
以下采用实施例来详细说明本发明的实施方式,借此对本发明如何应用技术手段来解决技术问题,并达成技术效果的实现过程能充分理解并据以实施。
实施例1 中药涂膜剂1
将路路通25g、黄精40g、黄连65g、首乌藤35g、白芍35g、黄芪80g、山药45g、当归30g、一枝黄花35g、人参叶55g、儿茶30g、三白草25g、大血藤35g、大枣45g、山茱萸40g、川木通25g、杜仲55g、核桃仁30g、五加皮45g和熟地黄35g混合,搅拌均匀,获得混合物,加入5kg的醇浓度为70%的乙醇,加热回流4小时,过滤,滤渣再次加入2.5kg的醇浓度为70%的乙醇,加热回流4小时,过滤,将滤液合并,加热浓缩至无乙醇味,添加水至生药浓度为1g/ml,获得药液,取聚乙烯醇10g用蒸馏水80ml密封浸泡24小时使其充分溶胀,然后于90℃密封水浴加热使其较快溶于水中,过滤,得均匀无块状物,待其冷却,缓缓加入前面获得的药液50ml,添加醇浓度为80%的乙醇溶液30ml,丙酮20ml,甘油3ml,再加入占涂膜剂质量3%的氮酮,边加边搅拌,加完继续搅拌2h,最后装入灭菌的玻璃瓶中密封保存。
实施例2 中药涂膜剂1的刺激性实验
取雌雄家兔(普通级)各5只,体重(1.50±0.35)kg,将家兔背部两侧毛剪短后,用 10%硫化钠脱毛约 4cm×5cm 左右,脱毛 24h 后,选无破损皮肤家兔备用。分为完整皮肤组(I),破损皮肤组(Ⅱ),每组 5 只。两组家兔在消毒皮肤后,用灭菌 6 号针头呈“#”字形划破右侧皮肤,以刺伤表皮,不伤真皮,使皮肤出现渗血为度,破损区面积 3cm×3cm,划痕间距 0.5cm,作为破损皮肤试验区。另一侧作对照。
I、Ⅱ组家兔右侧脱毛区每天涂本发明实施例1制备的中药涂膜剂 2 次,每次涂抹 1g,盖上一层油纸,用无刺激性胶布固定。左侧涂生理盐水 2m 为阴性对照。连续用药 7d。在末次用药 4h 后取下包扎,观察皮肤有无红斑和水肿,如果皮肤反应明显,还应在 1h、12h、24h、48h、72h 观察上述变化及其恢复情况和时间,并记录。
刺激强度的判定
每只动物按照表1进行刺激反应评分,计算出每个时间点的平均分值。取各时间点中最高平均分值按照表 2进行刺激强度评价。
表1 皮肤刺激反应评分标准
表2 皮肤刺激强度评价
刺激性试验结果
中药涂膜剂激性试验结果见表3未出现明显红斑和水肿反应,刺激平均值小于0.5,中药涂膜剂外用时,家兔完整皮肤及破损皮肤,属于无刺激物质。
表3 中药涂膜剂对皮肤的刺激性试验结果
经上述试验观察,每次涂药时以及最后去除残留受试物1h,24h,48h,72h,给药皮肤与空白对照区皮肤比较,无论是破损皮肤区还是完整皮肤区均无明显差别,无红斑形成,破损皮肤有轻微水肿出现,其刺激强度可评价为 0.1,故可认为该药家兔外用无任何刺激性反应出现。
实施例3 中药涂膜剂2
将路路通20g、黄精35g、黄连60g、首乌藤30g、白芍30g、黄芪75g、山药40g、当归25g、一枝黄花30g、人参叶50g、儿茶25g、三白草20g、大血藤30g、大枣40g、山茱萸35g、川木通20g、杜仲50g、核桃仁25g、五加皮40g和熟地黄30g混合,搅拌均匀,获得混合物,加入5kg的醇浓度为70%的乙醇,加热回流4小时,过滤,滤渣再次加入2.5kg的醇浓度为70%的乙醇,加热回流4小时,过滤,将滤液合并,加热浓缩至无乙醇味,添加水至生药浓度为1g/ml,获得药液,取聚乙烯醇10g用蒸馏水80ml密封浸泡24小时使其充分溶胀,然后于90℃密封水浴加热使其较快溶于水中,过滤,得均匀无块状物,待其冷却,缓缓加入前面获得的药液50ml,添加醇浓度为80%的乙醇溶液30ml,丙酮20ml,甘油3ml,再加入占涂膜剂质量3%的氮酮,边加边搅拌,加完继续搅拌2h,最后装入灭菌的玻璃瓶中密封保存。
实施例4 中药涂膜剂3
将路路通30g、黄精45g、黄连70g、首乌藤40g、白芍40g、黄芪85g、山药50g、当归35g、一枝黄花40g、人参叶60g、儿茶35g、三白草30g、大血藤40g、大枣50g、山茱萸45g、川木通30g、杜仲60g、核桃仁35g、五加皮50g和熟地黄40g混合,搅拌均匀,获得混合物,加入6kg的醇浓度为70%的乙醇,加热回流4小时,过滤,滤渣再次加入3kg的醇浓度为70%的乙醇,加热回流4小时,过滤,将滤液合并,加热浓缩至无乙醇味,添加水至生药浓度为1g/ml,获得药液,取聚乙烯醇10g用蒸馏水80ml密封浸泡24小时使其充分溶胀,然后于90℃密封水浴加热使其较快溶于水中,过滤,得均匀无块状物,待其冷却,缓缓加入前面获得的药液50ml,添加醇浓度为80%的乙醇溶液30ml,丙酮20ml,甘油3ml,再加入占涂膜剂质量3%的氮酮,边加边搅拌,加完继续搅拌2h,最后装入灭菌的玻璃瓶中密封保存。
实施例5 中药巴布剂
将路路通25g、黄精40g、黄连65g、首乌藤35g、白芍35g、黄芪80g、山药45g、当归30g、一枝黄花35g、人参叶55g、儿茶30g、三白草25g、大血藤35g、大枣45g、山茱萸40g、川木通25g、杜仲55g、核桃仁30g、五加皮45g和熟地黄35g混合,搅拌均匀,获得混合物,加入5kg的醇浓度为70%的乙醇,加热回流4小时,过滤,滤渣再次加入2.5kg的醇浓度为70%的乙醇,加热回流4小时,过滤,将滤液合并,加热浓缩除去溶剂,获得干膏,将0.3g氢氧化铝加入盛有30g甘油的容器中,充分混合,加入NP-700再继续混和,得第一溶液,将0.3g酒石酸置于容器中,加入70ml蒸馏水溶解,获得酒石酸溶液,将酒石酸溶液按5ml每份等分,取等体积份酒石酸溶液,加入上述第一溶液中,每次加入充分混匀,所有等份酒石酸溶液加完后,充分搅拌30分钟,获得基质,在获得的基质中加入500g前面获得的干膏,充分混匀后,涂布于无纺布上,盖上隔离膜制成巴布剂。
实施例6 动物试验研究
试验动物分组及用药
在某牛场选取126头年龄4~6岁,产后4~5个月,经CMT检测患有乳房炎的奶牛, 随机分为治疗组和对照组,治疗组奶牛66头,西药对照组奶牛50头,另10头患牛作为空白对照组,不采用任何药物治疗,西药对照组采用青、链霉素乳房注入治疗,青霉素钠80万单位,链霉素50万单位肌注,每日3次,疗程为7天,治疗组在患处涂覆本发明实施例1制备的涂膜剂50g,每日2次,早晚各一次,疗程为7天,三组均由专人饲养,统一基础日粮标准,每日饲喂3次,自由饮水、运动。
样品的采集
血样
颈静脉采集治疗组和对照组奶牛的血液( 采样前消毒取血部位) ,每头牛约取 15 ml,室温下静止。
乳样
选择实验组和治疗组的奶牛,从 6: 00 开始,每隔 5 h 采集乳汁,共取 3 次,每次20 mL( 采样前对乳区进行清洗,然后用 70% 乙醇消毒乳区,弃掉头 2 把乳汁) 。
样品的处理和测定
血样
将采集的血液置于室温下( 一般要求不超过20 ℃) 自然凝固1~2h,冰 浴30min,3 000 r/min离心 10 min 分离血清,4 ℃保存,待测。
如检测时间较长,要将样品置于-80℃冰箱中保存,备用。采用北京华英生物技术研究所生产的 IL-8和 TNF-α 放免试剂盒测定血样。
乳样
将采集的乳汁于3 000 r /min 离心5 min; 除去上层乳脂,置于 16000 r /min 高速离心机中离心 10 min; 取上清液 4 ℃ 保存( 如检测时间较长,要将样品置于-80 ℃ 冰箱中保存) ,待测。采用北京华英生物技术研究所生产的 IL-8 和 TNF-α放免试剂盒测定乳样。
免疫功能检测
乳房炎患牛在试验前、后分别于晨饲前进行颈静脉采血,以3 000r/min离心10min后,-20℃保存待测。测定的免疫指标有IgA、IgG和IgM。
乳房炎检验
测试试剂:上海亚临床乳房炎快速诊断液(SMT原液),上海市奶牛研究所,由上海奶牛中心提供;
使用方法:弃去前几把乳汁,将乳汁挤入诊断盘;诊断盘倾斜 45℃以弃去多余乳汁,使诊断盘中存留奶样 2m1 左右;每样品加 2m1 上海亚临床乳房炎快速诊断液;持诊断盘作水平顺时针摇动;再倾斜摇动 50 秒后观察。
指标判定标准:
-:反应物均质,流动无异常,颜色呈淡黄色。相应乳中体细胞数 0-20 万/ml。
±:倾斜诊断盘,反应物流过时盘底有薄絮层出现,颜色多为黄色或稍有绿色,判为可疑,相应相应乳中体细胞数 20-50 万/ml。
+:摇动可见反应物不均质,倾斜诊断盘时化合物有明显絮状(相应乳中体细胞数50~80万/ml),或摇动时反应物中间有厚絮,停止摇动后又可分开,(相应乳中体细胞数 80~150万/ml),反应物颜色呈黄绿色,该乳区判断为隐性乳房炎。
++:摇动诊断盘时反应物呈黏稠状、挂于盘底,颜色为黄绿色,相应乳中体细胞数150~500 万/ml。
+++:摇动诊断盘,反应物呈胶冻状,边缘半透明,颜色呈浅绿或深绿色,相应乳中体细胞数 500 万/ml 以上。
疗效评价标准
治愈:临床症状消失,直观乳汁无异常,奶产量基本恢复,SMT 法检测结果低于“++”为治愈。
好转:临床症状减轻或消失,乳汁中有少量絮状物,但乳汁色泽无异常。产量未能恢复正常,SMT 法检测结果仍高于“++”。
无效:判断标准中的各临床症状未减轻或加剧。
数据分析
利用 SPSS13. 0 统计软件进行分析,数据用平均值±标准差表示。
结果
各组患牛血液和乳汁中IL-8、TNF-α含量比较,结果见表4。
表4 各组患牛血液和乳汁中IL-8、TNF-α含量比较
在乳腺炎的发病过程中,随着炎症的加剧IL-8、TNF-α均显著增加,通过本发明治疗组和对照组的比较,可以看出本发明中药组合物能够明显降低IL-8 和 TNF-α的含量差异有统计学意义(P<0.01),证明,对乳腺炎炎症的消除具有显著效果。
各组患牛血液中免疫指标的影响,结果见表5。
表5 各组患牛血液中免疫指标的影响
从表5可以看出,采用本发明的中药组合物能够明显提高免疫指标,与对照组相比,IgM、IgA、IgG差异有统计学意义(P<0.05)。
两组治疗疗效比较,结果见表6。
表6 两组治疗疗效比较
从表6可以看出,本发明在治疗奶牛乳腺炎方面的效果要好于西药对照组。
所有上述的首要实施这一知识产权,并没有设定限制其他形式的实施这种新产品和/或新方法。本领域技术人员将利用这一重要信息,上述内容修改,以实现类似的执行情况。但是,所有修改或改造基于本发明新产品属于保留的权利。
以上所述,仅是本发明的较佳实施例而已,并非是对本发明作其它形式的限制,任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容,依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型,仍属于本发明技术方案的保护范围。
Claims (7)
1.一种具有免疫功能的用于治疗奶牛乳腺炎的中药组合物,其特征在于:原料药仅由路路通、黄精、黄连、首乌藤、白芍、黄芪、山药、当归、一枝黄花、人参叶、儿茶、三白草、大血藤、大枣、山茱萸、川木通、杜仲、核桃仁、五加皮和熟地黄构成;
所述中药组合物的各原料药的重量份分别为路路通20重量份~30重量份、黄精35重量份~45重量份、黄连60重量份~70重量份、首乌藤30重量份~40重量份、白芍30重量份~40重量份、黄芪75重量份~85重量份、山药40重量份~50重量份、当归25重量份~35重量份、一枝黄花30重量份~40重量份、人参叶50重量份~60重量份、儿茶25重量份~35重量份、三白草20重量份~30重量份、大血藤30重量份~40重量份、大枣40重量份~50重量份、山茱萸35重量份~45重量份、川木通20重量份~30重量份、杜仲50重量份~60重量份、核桃仁25重量份~35重量份、五加皮40重量份~50重量份和熟地黄30重量份~40重量份。
2.如权利要求1所述的中药组合物,其特征在于:所述中药组合物的各原料药的重量份分别为路路通25重量份、黄精40重量份、黄连65重量份、首乌藤35重量份、白芍35重量份、黄芪80重量份、山药45重量份、当归30重量份、一枝黄花35重量份、人参叶55重量份、儿茶30重量份、三白草25重量份、大血藤35重量份、大枣45重量份、山茱萸40重量份、川木通25重量份、杜仲55重量份、核桃仁30重量份、五加皮45重量份和熟地黄35重量份。
3.如权利要求1所述的中药组合物,其特征在于:所述中药组合物的剂型为软膏、硬膏、搽剂、微乳剂、霜剂、涂膜剂、巴布剂。
4.一种具有免疫功能的用于治疗奶牛乳腺炎的中药组合物涂膜剂,其特征在于:所述中药组合物涂膜剂的原料药仅由路路通、黄精、黄连、首乌藤、白芍、黄芪、山药、当归、一枝黄花、人参叶、儿茶、三白草、大血藤、大枣、山茱萸、川木通、杜仲、核桃仁、五加皮和熟地黄构成;
所述中药组合物涂膜剂的各原料药的重量份分别为路路通20重量份~30重量份、黄精35重量份~45重量份、黄连60重量份~70重量份、首乌藤30重量份~40重量份、白芍30重量份~40重量份、黄芪75重量份~85重量份、山药40重量份~50重量份、当归25重量份~35重量份、一枝黄花30重量份~40重量份、人参叶50重量份~60重量份、儿茶25重量份~35重量份、三白草20重量份~30重量份、大血藤30重量份~40重量份、大枣40重量份~50重量份、山茱萸35重量份~45重量份、川木通20重量份~30重量份、杜仲50重量份~60重量份、核桃仁25重量份~35重量份、五加皮40重量份~50重量份和熟地黄30重量份~40重量份。
5.一种具有免疫功能的用于治疗奶牛乳腺炎的中药组合物巴布剂,其特征在于:所述中药组合物巴布剂的原料药仅由路路通、黄精、黄连、首乌藤、白芍、黄芪、山药、当归、一枝黄花、人参叶、儿茶、三白草、大血藤、大枣、山茱萸、川木通、杜仲、核桃仁、五加皮和熟地黄构成;
所述中药组合物巴布剂的各原料药的重量份分别为路路通20重量份~30重量份、黄精35重量份~45重量份、黄连60重量份~70重量份、首乌藤30重量份~40重量份、白芍30重量份~40重量份、黄芪75重量份~85重量份、山药40重量份~50重量份、当归25重量份~35重量份、一枝黄花30重量份~40重量份、人参叶50重量份~60重量份、儿茶25重量份~35重量份、三白草20重量份~30重量份、大血藤30重量份~40重量份、大枣40重量份~50重量份、山茱萸35重量份~45重量份、川木通20重量份~30重量份、杜仲50重量份~60重量份、核桃仁25重量份~35重量份、五加皮40重量份~50重量份和熟地黄30重量份~40重量份。
6.权利要求1或2所述中药组合物的制备方法,其特征在于:当所述中药组合物的剂型为涂膜剂时,具体步骤为,
第一步,将所述组分按比例混合,搅拌均匀,获得混合物,加入相对于其质量5~8倍的醇浓度为60%~80%的乙醇,加热回流2~4小时,过滤,滤渣再次加入相对于混合物质量2~4倍的醇浓度为60%~80%的乙醇,加热回流2~4小时,过滤,将滤液合并,加热浓缩至无乙醇味,添加水至生药浓度为1g/ml~2g/ml,获得药液;
第二步,取聚乙烯醇10g用蒸馏水80ml密封浸泡24小时使其充分溶胀,然后于90℃密封水浴加热使其较快溶于水中,过滤,得均匀无块状物,待其冷却,缓缓加入第一步获得的药液50ml,添加醇浓度为80%的乙醇溶液30ml,丙酮20ml,甘油3ml,再加入占涂膜剂质量3%的氮酮,边加边搅拌,加完继续搅拌1h~2h,最后装入灭菌的玻璃瓶中密封保存。
7.权利要求1或2所述中药组合物的制备方法,其特征在于:当所述中药组合物的剂型为巴布剂时,具体步骤为,
第一步,将所述组分按比例混合,搅拌均匀,获得混合物,加入相对于其质量5~8倍的醇浓度为60%~80%的乙醇,加热回流2~4小时,过滤,滤渣再次加入相对于混合物质量2~4倍的醇浓度为60%~80%的乙醇,加热回流2~4小时,过滤,将滤液合并,加热浓缩除去溶剂,获得干膏;
第二步,将0.2g~0.4g氢氧化铝加入盛有20g~40g甘油的容器中,充分混合,加入NP-700或NP-600再继续混和,得第一溶液;将0.1g~0.3g酒石酸置于容器中,加入50ml~70ml蒸馏水溶解,获得酒石酸溶液,将酒石酸溶液按5ml每份等分,取等体积份酒石酸溶液,加入上述第一溶液中,每次加入充分混匀,所有等份酒石酸溶液加完后,充分搅拌20分钟~30分钟,获得基质;
第三步,在获得的基质中加入500g第一步获得的干膏,充分混匀后,涂布于无纺布上,盖上隔离膜制成巴布剂。
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