CN102421439A - 以来自鸟皮的鞘磷脂含有物为有效成分的抗高血糖和/或抗高血脂症剂 - Google Patents

以来自鸟皮的鞘磷脂含有物为有效成分的抗高血糖和/或抗高血脂症剂 Download PDF

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Abstract

本发明的课题在于大量且廉价地得到鞘磷脂含有物,以及发现鞘磷脂含有物的有用用途。通过本发明,提供以来自鸟皮的鞘磷脂含有物为有效成分的抗高血糖和/或抗高血脂症剂。

Description

以来自鸟皮的鞘磷脂含有物为有效成分的抗高血糖和/或抗高血脂症剂
技术领域
本发明涉及以来自鸟皮的鞘磷脂含有物为有效成分的抗高血糖和/或抗高血脂症剂。
背景技术
鞘磷脂,作为细胞膜上脂微域的筏(raft)的主要构成成分,还作为脂质信号传导的起点,在现代的生物科学中是备受关注的磷脂质之一。特别是筏,作为以免疫反应为代表的各种各样信号传导的场所,还作为特定的物质运输的场所发挥功能,因此也可以认为鞘磷脂有可能是与维持生物膜结构并且在细胞内信号传导系统中的参与等细胞功能表达很大相关的物质。
例如,如专利文献1所述,报告了近年来随着高血脂症-动脉硬化的机理解析进展,被认为与这些的发病密切相关的低密度脂蛋白LDL中含有许多鞘磷脂,高血脂症患者的血浆中的鞘磷脂量显著增加,另外,在LDL变性中有鞘磷脂分解酶的参与等,并指出了鞘磷脂的增加与高血脂症发病相关的可能性。
另外,如专利文献2所述,也表明鞘磷脂具有唾液黏蛋白分泌促进作用、预防醉酒效果、抗过敏症效果、抗氧化效果、防感染效果、养发作用、脱髓鞘疾病治疗效果、抗色素沉淀效果或抗炎症效果。
进一步,如上所述,随着认识到鞘磷脂的重要性,对大量且廉价地制造鞘磷脂的方法的关心也在高涨。
通常,鞘磷脂以牛奶(也包含乳清和黄油等来自牛奶的制品)和蛋黄为原材料制造。在专利文献2中,在实验中所使用的鞘磷脂也是从乳清蛋白质中提取的。
但是,牛奶和蛋黄本身具有商品价值,在作为原材料使用上有关系到成本的问题。关于该问题也作了研究,例如,在专利文献3中,记载着在加工食品制造过程中,以通常被废弃的鸡表皮为原材料,制造纯度约70质量%以上的鞘磷脂的方法。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本特开2006-214731号公报
专利文献2:日本特开2007-112793号公报
专利文献3:日本特开2008-179588号公报
发明内容
发明所要解决的课题
本发明的课题在于大量且廉价地得到鞘磷脂含有物和发现鞘磷脂含有物的有用用途。用于解决课题的方法
本发明的发明者们意外地发现了制造含有90质量%以上的鞘磷脂的鸟皮提取物的方法(提取方法),另外,也发现该提取物和该提取物的粗提取物及原材料(特别是脱油鸟皮)具有优异的抗高血糖作用和抗高血脂症作用,进一步反复改良,从而完成了本发明。
例如,本发明包含在以下项目中记载的制剂和方法等。
项A-1.
以来自鸟皮的鞘磷脂含有物为有效成分的抗高血糖和/或抗高血脂症剂。
项A-2.
以脱油鸟皮为有效成分的项A-1中记载的抗高血糖和/或抗高血脂症剂。
项A-3.
以干燥质量换算计,以每100g包含80~400mg鞘磷脂的脱油鸟皮为有效成分的项A-2中记载的抗高血糖和/或抗高血脂症剂。
项A-4.
以在内部压力为0.05~0.3MPa、内部温度为105±10℃、内部氧浓度为0.2%以下的容器内,经过在鸟皮上喷120~135℃水蒸汽的工序而脱油得到的脱油鸟皮为有效成分的项A-2或A-3中记载的抗高血糖和/或抗高血脂症剂。
项A-5.
如项A-1~A-4中任一项记载的抗高血糖和/或抗高血脂症剂,其中,来自鸟皮的鞘磷脂含有物的中性脂肪含量为30质量%以下。
项A-6.
以含有90质量%以上的鞘磷脂的鸟皮提取物为有效成分的项A-1中记载的抗高血糖和/或抗高血脂症剂。
项A-7.
如项A-1~A-6中任一项记载的抗高血糖和/或抗高血脂症剂,其中,鸟皮为鸡皮。
项B-1.
通过口服投与预防或治疗有效量的来自鸟皮的鞘磷脂含有物,预防或治疗高血糖和/或高血脂症的方法。
项B-2.
如项B-1中记载的方法,其中,来自鸟皮的鞘磷脂含有物为脱油鸟皮。
项B-3.
如项B-1中记载的方法,其中,来自鸟皮的鞘磷脂含有物,以干燥质量换算计,为每100g包含80~400mg鞘磷脂的脱油鸟皮。
项B-4.
如项B-1中记载的方法,其中,来自鸟皮的鞘磷脂含有物是含有90质量%以上的鞘磷脂的鸟皮提取物。
项C-1.
用于在高血糖和/或高血脂症的预防或治疗中使用的来自鸟皮的鞘磷脂含有物。
项C-2.
如项C-1中记载的来自鸟皮的鞘磷脂含有物,其是脱油鸟皮。
项C-3.
如项C-1中记载的来自鸟皮的鞘磷脂含有物,以干燥质量换算计,其是每100g包含80~400mg鞘磷脂的脱油鸟皮。
项C-4.
如项C-1中记载的来自鸟皮的鞘磷脂含有物,其是含有90质量%以上的鞘磷脂的鸟皮提取物。
项D-1.
在用于高血糖和/或高血脂症的治疗或预防的医药制造中的来自鸟皮的鞘磷脂含有物的使用。
项D-2.
来自鸟皮的鞘磷脂含有物为脱油鸟皮的项D-1中记载的使用。
项D-3.
如项D-1中记载的使用,其中,来自鸟皮的鞘磷脂含有物以干燥质量换算计,为每100g包含80~400mg鞘磷脂的脱油鸟皮。
项D-4.
如项D-1中记载的使用,其中,来自鸟皮的鞘磷脂含有物为含有90质量%以上的鞘磷脂的鸟皮提取物。
发明的效果
通过本发明,提供以来自鸟皮的鞘磷脂含有物为有效成分的抗高血糖组合物和/或抗高血脂症剂。另外提供通过口服投与来自鸟皮的鞘磷脂含有物,预防或治疗高血糖和/或高血脂症的方法。
因为鸟皮一直以来作为食物而被摄取,所以可以凭经验确认其安全性高。因此,通过本发明,能够几乎没有副作用的担忧而进行高血糖和/或高血脂症的预防和治疗。
另外,还因为鸟皮是可以非常廉价地获得的原料,所以相比于使用医药等的情况,通过本发明能够显著抑制成本而进行高血糖和/或高血脂症的预防和治疗。
附图说明
图1a表示由HPLC解析(检测:ELSD蒸发光散射检测器)在实施例1中得到的来自鸡皮的高纯度鞘磷脂含有物时的色谱图。
图1b表示由HPLC解析(检测:ELSD蒸发光散射检测器)在实施例1中得到的来自鸡皮的高纯度鞘磷脂含有物时的色谱图。图1b是放大图1a中表示的色谱图中最大的3个峰部分的图。该3个峰分别位于保留时间约19.8分钟、约20.4分钟和约20.8分钟的位置。对于图1a表示的色谱图的各个峰的面积占全部峰面积合计的比例,保留时间约19.8分钟的位置的峰为42%左右,约20.4分钟的位置的峰为10%左右,约20.8分钟的位置的峰为39%左右。
图2表示在摄取了来自鸡皮的高纯度鞘磷脂组合物的被检验群(鼠)和没有摄取高纯度鞘磷脂组合物的对照群(鼠)中,研究总胆固醇值变化程度的结果。单位是mg/dL。可知相比于对照群,被检验群的总胆固醇值显著下降。
图3表示在摄取了来自鸡皮的高纯度鞘磷脂组合物的被检验群(鼠)和没有摄取高纯度鞘磷脂组合物的对照群(鼠)中,研究LDL胆固醇值变化程度的结果。单位是mg/dL。可知相比于对照群,被检验群的LDL胆固醇值显著下降。
图4表示在摄取了来自鸡皮的高纯度鞘磷脂组合物的被检验群(鼠)和没有摄取高纯度鞘磷脂组合物的对照群(鼠)中,研究HDL胆固醇值变化程度的结果。单位是mg/dL。可知被检验群和对照群在HDL胆固醇值上几乎没有差异。
图5表示在摄取了来自鸡皮的高纯度鞘磷脂组合物的被检验群(鼠)和没有摄取高纯度鞘磷脂组合物的对照群(鼠)中,研究红血球变形能力(RCF(%))变化程度的结果。可知相比于对照群,被检验群的红血球变形能力高(优异)。
图6表示在摄取了脱油干燥鸡皮的被检验群(鼠)和没有摄取脱油干燥鸡皮的对照群(鼠)中,研究LDL胆固醇变化程度的结果。单位是mg/dL。可知相比于对照群,被检验群的LDL胆固醇值显著下降。
图7表示在摄取了脱油干燥鸡皮的被检验群(鼠)和没有摄取脱油干燥鸡皮的对照群(鼠)中,研究红血球变形能力(RCF(%))变化程度的结果。可知相比于对照群,被检验群的红血球变形能力高(优异)。
图8表示在摄取了脱油干燥鸡皮的被检验群(鼠)和没有摄取脱油干燥鸡皮的对照群(鼠)中,研究血糖值变化程度的结果。单位是mg/dL。可知相比于对照群,被检验群的血糖值低。
图9表示在摄取了脱油干燥鸡皮的被检验群(鼠)和没有摄取脱油干燥鸡皮的对照群(鼠)中,研究肌酸酐值变化程度的结果。单位是mg/dL。可知相比于对照群,被检验群的肌酸酐值显著降低。
图10表示在摄取了脱油干燥鸡皮的被检验群(鼠)和没有摄取脱油干燥鸡皮的对照群(鼠)中,研究尿酸值变化程度的结果。单位是mg/dL。可知相比于对照群,被检验群的尿酸值低。
具体实施方式
以下,进一步详细地说明本发明。
本发明涉及以来自鸟皮的鞘磷脂含有物为有效成分的抗高血糖和/或抗高血脂症剂。
在本发明中,所谓来自鸟皮的鞘磷脂含有物,是含有从鸟皮得到的鞘磷脂的组合物,是指从鸟皮制造的。但不意味从鸟皮得到的鞘磷脂本身。例如,含有鞘磷脂的鸟皮提取物和在鸟皮上施加了脱油处理的脱油鸟皮等的鸟皮分离组份包含在本发明的来自鸟皮的鞘磷脂含有物中。
在本发明中,鸟皮提取物是从鸟皮中提取的组合物,指的是含有鞘磷脂的组合物。该组合物在鞘磷脂以外,包含来自鸟皮的成分(例如缩醛磷脂等)。提取方法没有特别限制,但如下详述,优选进行通过水或有机溶剂(例如,甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、异丙醇等)的提取。另外,在提取中供给的鸟皮,优选是被脱油处理过的脱油鸟皮(包含干燥脱油鸟皮)。
使用的鸟皮可以是任意鸟的皮,但优选是通常被食用的鸟的皮(食用鸟)。例如,能够例示鸡、鸭、鹌鹑、野鸭、野鸡、鸵鸟、珍珠鸡或火鸡等的皮,但不限定于这些。在日本,作为食用鸟最普遍的是鸡,所以从获得容易和成本方面考虑,特别优选鸡皮。另外,也可以将多种鸟的皮组合使用2种以上。
在鸟皮提取物中的鞘磷脂含量,没有特别限制,优选50质量%以上,更优选60质量%以上,更加优选70质量%以上,进一步更加优选80质量%以上,特别优选90质量%以上。另外,鞘磷脂含量,能够在由高效液相色谱(在检出中使用ELSD蒸发光散射检测器)解析得到的色谱图中,通过算出表示鞘磷脂的峰面积占全部峰的合计面积的多少%来求出。
另外,在本发明中,鸟皮提取物,其它复合脂质(例如磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺等)的含量通常是50质量%以下,优选是40质量%以下,更优选是30质量%以下,更加优选是20质量%以下,特别优选是10质量%以下。
另外,鸟皮提取物也可以是从鸟皮提取和精制鞘磷脂的工序途中得到的物质(粗提取物)。
另外,在本发明中,脱油鸟皮能够对鸟(例如,在先前例示的各种鸟)的皮进行脱油处理而得到。用于得到脱油鸟皮的脱油处理方法没有特别限制,能够使用在通常食品业界中将食用肉脱油时使用的方法。例如,能够采用压榨方法、机械方法、温水浸渍加热方法、直接加热方法、通过脂肪族烃溶剂的方法等。
特别是通过能够以高温热水喷射方式低温过热蒸汽处理鸟皮的高温热水喷射方式低温过热水蒸汽装置,可以有效且非侵袭地脱油,故而优选。另外,在该脱油工序中,几乎不发生鸟皮的水分减少。因此,可以不使鸟皮干燥地脱油,并能够防止鸟皮含有物被氧化流失。作为这样的脱油方法,例如,能够通过如下操作进行,将进行脱油的加热容器的内部压力控制在0.05~0.3MPa,将内部温度控制在105±10℃,将内部氧浓度控制在0.2%以下,在容器内的鸟皮碎末上,从喷嘴高速喷射120~135℃的水蒸汽进行喷雾。另外,喷嘴的内部压力优选设为0.15~0.3MPa。通过在这样特定的条件下高速喷射水蒸汽,结果成为在鸟皮上喷100±5℃(微细热水滴)、饱和蒸汽和117±5℃水蒸汽(过热蒸汽)的混合介质,从而产生上述效果(几乎不引起鸟皮水分减少、防止鸟皮含有物被氧化流失的效果)。只用饱和蒸汽,不能有效进行干燥,只用过热蒸汽,干燥进行却有鸟皮含有物被氧化流失的担忧,而如果根据该脱油方法,就能够得到鸟皮含有物非氧化的非干燥脱油鸟皮。该脱油方法,例如,能够使用hi-LOHS-R连续制造装置(株式会社TAIYO制作所生产)进行。
另外,脱油也可以将这些方法组合2种以上进行。
在本申请中所谓的“脱油”,具体而言是除去中性脂肪(即,也可以称为“脱中性脂肪”),更具体而言是除去甘油三酯、甘油二酯、游离脂肪酸。用上述例示的任意方法都能够有效除去中性脂肪,另外,鞘脂和缩醛磷脂几乎没有流出。例如,生鸡皮中的全部脂质含量为约30~50质量%,由高温热水喷射方式低温过热蒸汽产生的脱油鸡皮的总脂质含量通常为约30质量%以下,优选为20质量%以下,更优选为15质量%以下,更加优选为10质量%以下,该减少部分的大部分是中性脂肪。
另外,如上所述,脱油鸟皮是从生鸟皮除去中性脂肪得到的,鞘磷脂含量相对不太多。例如,脱油鸡皮的鞘磷脂含量通常是0.08质量%以上,优选是0.1质量%以上,更优选是0.15质量%以上,更加优选是0.2质量%以上。
另外,虽然没有特别限制,但脱油鸟皮的中性脂肪含量优选是30质量%以下,更优选是20质量%以下,更加优选是15质量%以下,进一步更加优选是10质量%以下。
脱油鸟皮,也可以使其干燥、使水分蒸发后使用。即,可以使用干燥脱油鸟皮。干燥方法没有特别限制,能够选择适当的方法使用。
另外,脱油鸟皮也可以在干燥前或干燥后,按照常用方法粉碎化、粉末化。
本发明的来自鸟皮的鞘磷脂含有物的制造方法,只要是可以得到含有鞘磷脂的组成物(中性脂肪含量是30质量%以下,优选是20质量%以下,更优选是15质量%以下,更加优选是10质量%以下)的方法,就没有特别限制。如上所述,能够将经过了脱油工序的脱油鸟皮作为来自鸟皮的鞘磷脂含有物使用。另外,例如可以将鸟皮(可以是脱油鸟皮)供给有机溶剂提取工序,将提高了鞘磷脂含量的鸟皮提取物作为来自鸟皮的鞘磷脂含有物。
使用鸟皮(优选脱油鸟皮),为了提高鞘磷脂含量,例如,能够进行水或有机溶剂提取和精制。在进行有机溶剂提取和精制时,没有特别限制,例如,能够例示包含以下工序(1)的方法、包含工序(1)和(2)的方法或包含工序(1)~(3)的方法。
(1)将脱油鸟皮的醇提取物浓缩干燥固体化,得到浓缩干燥固体化提取物的工序;
(2)用丙酮-水混合溶剂和/或丙酮清洗上述浓缩干燥固体化提取物后,再用己烷-丙酮混合溶剂清洗,得到含有鞘脂的沉淀的工序;
(3)将溶解了含有上述鞘脂沉淀的NaOH水溶液离心得到的沉淀,用丙酮-水混合溶剂和/或丙酮清洗,得到含有高纯度鞘脂沉淀的工序。
为得到在工序(1)中的醇提取物而使用的醇没有特别限制,例如,能够例示甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、异丁醇、异丙醇等碳原子数1~5的醇,其中优选乙醇。另外,也能够使用含水醇。使用含水醇时,水分含量例如为0.1~40质量%,优选为1~20质量%。
在该醇提取中,以干燥质量换算计,每1kg脱油鸟皮,例如能够使用1~10L、优选使用1~6L、更优选使用2~4L的醇或含水醇。
作为该醇提取的条件,没有特别限制,但能够通过冷浸、温浸等浸渍法、渗滤法等进行。作为一个适合例子,能够例示在脱油鸟皮中加醇,在常温下进行5小时以上、优选在常温下进行5~48小时静置或搅拌的方法。
将如这样操作得到的醇提取物浓缩干燥固体化。浓缩干燥固体化的方法没有特别限制,能够例示减压干燥法。由此,可以得到浓缩干燥固体化提取物。
在工序(2)中,清洗在工序(1)中得到的浓缩干燥固体化提取物。详细而言,用丙酮-水混合溶剂和/或丙酮清洗该浓缩干燥固体化提取物后,再用己烷-丙酮混合溶剂清洗。另外,例如“清洗”能够通过在沉淀中加入溶剂搅拌后离心,使其再次沉淀而回收该沉淀来进行。在该清洗中的清洗溶剂的体积、离心温度-离心速度等能够适当设定。
具体而言,例如,可以列举(i)以丙酮/水(2∶1)的混合溶剂清洗该浓缩干燥固体化提取物;(ii)再以丙酮/水(1∶1)的混合溶剂清洗;(iii)再以丙酮清洗;(iv)再以己烷/丙酮(7∶3)的混合溶剂清洗的方法。此时,(iv)清洗后的沉淀是含有鞘脂的沉淀。该(i)~(iv)的清洗也可以在室温进行,但优选在4℃进行。
另外,在(i)~(iii)的工序中,可以省略1个或2个以上工序,因为期待通过(i)的清洗除去油脂,通过(ii)的清洗除去非脂质成分,通过(iii)的清洗除去中性脂质,所以更优选经过全部这些工序。
在工序(3)中,使在工序(2)中得到的含有鞘脂的沉淀溶解在NaOH中,分解残留的PC(磷脂酰胆碱)后,以丙酮-水混合溶剂和/或丙酮清洗,除去碱。
具体而言,例如,可以列举(I)使含有鞘脂的沉淀分散在0.1~0.4M(优选0.2M)NaOH水溶液中,在15~45℃(优选37℃)静置或搅拌0.5~6小时(优选2小时);(II)再以NaOH水溶液的2~4倍(优选2倍)体积的丙酮清洗;(III)再以丙酮清洗的方法。(II)也能够省略。在(III)得到的沉淀是含有具有90质量%以上鞘磷脂的高纯度鞘脂的沉淀,例如使该沉淀干燥固体化等能够作为鸟皮提取物使用。该沉淀的鞘磷脂以外的大部分,由葡糖神经酰胺和游离神经酰胺等鞘脂组成。
另外,不仅是在工序(3)中得到的含有高纯度鞘脂的沉淀,而且在工序(1)中得到的浓缩干燥固体化提取物,在工序(2)中得到的含有鞘脂的沉淀(即,粗提取物)也能够作为鸟皮提取物使用。在工序(1)、(2)或(3)途中得到的沉淀也能够作为鸟皮提取物使用。例如,既能够将工序(1)的醇提取物和在上述(i)、(ii)、(iii)或(iv)中得到的各沉淀作为鸟皮提取物使用,也能够将在(II)或(III)中得到的沉淀作为鸟皮提取物使用。在这些工序(1)~(3)途中得到的各沉淀,经过的工序越多,通常鞘磷脂含有率越增加。
例如,如上述操作得到的来自鸟皮的鞘磷脂含有物(脱油鸟皮和鸟皮提取物),能够优选作为本发明的抗高血糖和/或抗高血脂症剂的有效成分使用。
另外,本发明的来自鸟皮的鞘磷脂含有物,例如也可以是将如上述操作从鸟皮提取或粗提取得到的含有鞘磷脂的沉淀、将其干燥固体化的物质或脱油鸟皮等2种以上混合的混合物。
本发明的抗高血糖和/或抗高血脂症剂,具有使高血糖值下降的效果,还具有使血中的高胆固醇值(特别是使高LDL胆固醇值)下降的效果。
作为投与该抗高血糖和/或抗高血脂症剂的对象,高血糖患者和高血脂症患者是当然的,也包含血糖值较高的人和胆固醇值(特别是LDL胆固醇值)较高的人、在血糖值检查中被诊断为糖尿病型或边界型的人、为代谢综合征的人等、将来患高血糖或高血脂症可能性大的人。另外,不仅是人,呈现这些疾病或症状的动物(特别是宠物和家畜)也包含在对象中,例如,能够例示狗、猫、牛、马、猪、羊等。
另外,所谓高血糖中的糖尿病型,指的是早晨空腹时血糖值是126mg/dL以上或在75gOGTT(口服葡萄糖负荷试验)中,葡萄糖负荷2小时后的血糖值是200mg/dL以上或任意血糖值是200mg/dL以上。所谓边界型(血糖值较高的人),指的是早晨空腹时血糖值是110mg/dL以上且低于126mg/dL,或在75gOGTT中,葡萄糖负荷2小时后的血糖值是140mg/dL以上且低于200mg/dL(日本糖尿病学会编,糖尿病治疗ガイド(指南)2006-2007)。
另外,所谓高血脂症,指的是作为高胆固醇血症,总胆固醇为220mg/dL以上,或作为高LDL胆固醇血症,LDL胆固醇为140mg/dL以上,或作为低HDL胆固醇血症,HDL胆固醇低于40mg/dL,或作为高甘油三酯血症,甘油三酯为150mg/dL以上(日本动脉硬化学会,动脉硬化性疾病诊疗ガイドライン(指南),2002年度版)。
另外,在本说明书中,将LDL胆固醇值为120mg/dL以上且小于140mg/dL的人作为胆固醇较高的人。
另外,这些胆固醇值是血中浓度。
本发明的抗高血糖和/或抗高血脂症剂的投与时间没有特别限定,可以按照作为对象的疾病的治疗方法,选择适当投与时间。另外,投与形态优选根据制剂形态、患者年龄、性别、其它条件、患者症状程度等决定,但特别优选是口服。
本发明的抗高血糖和/或抗高血脂症剂的投与或摄取量,通过患者年龄、性别、疾病程度(血糖值和胆固醇值(特别是LDL胆固醇值)的程度)、其它条件等适当选择。该制剂的摄取量可以设为如下大致标准:通常摄取的该制剂中的鞘磷脂量,优选成人每1日为0.1~50mg范围的量,更优选为1~30mg范围的量。另外,能够1日1次或分为多次(优选2~3次)投与。另外,在该制剂1个中所包含的鞘磷脂量也没有特别限制,能够将摄取量作为大致标准适当设定。例如,该制剂中,可以配合0.001~99.99质量%、优选配合0.01~98质量%鞘磷脂。
作为该制剂有效成分的来自鸟皮的鞘磷脂含有物中所包含的鞘磷脂量,能够由常用方法测定。例如,从来自鸟皮的鞘磷脂含有物中提取脂质,再将其分离为单纯脂质组份和复合脂质组份,通过由HPLC分析该复合脂质组份,能够将鞘磷脂量定量。另外,来自鸟皮的鞘磷脂含有物为脱油鸟皮时,将由上述工序(1)得到的含有鞘脂的沉淀(乙醇提取物)分离为单纯脂质组份和复合脂质组份,将该复合脂质组份进行HPLC分析,能够作为脱油鸟皮中的鞘磷脂量。例如,从由工序(1)得到的乙醇提取物中分离复合脂质组份并用HPLC测定时,脱油鸟皮中的鞘磷脂量,以干燥质量换算计,每100g脱油鸟皮优选为80~400mg,更优选为100~400mg。另外,复合脂质组份的分离能够如下进行:在氯仿/甲醇溶液(2∶1,v/v)中溶解分离对象物,将其供给硅酸柱色谱,用氯仿洗脱单纯脂质组份,用甲醇洗脱复合脂质组份。
中性脂肪量30质量%以下(优选20质量%以下,更优选15质量%以下,更加优选10质量%以下)的来自鸟皮的鞘磷脂含有物(例如上述的脱油鸟皮和鸟皮提取物),因为不仅中性脂肪含量低,而且含有鞘磷脂并且含有缩醛磷脂等来自鸟皮的多种功能性物质,并且因为比单独投与或摄取相当于来自在该鸟皮的鞘磷脂含有物中包含的鞘磷脂量的鞘磷脂显示更加优异的抗高血糖和/或抗高血脂症作用(具体而言,例如高血糖值下降作用和/或高胆固醇值(特别是高LDL值)下降作用),故而优选。
另外,鞘磷脂是神经酰胺的伯醇性羟基和磷酰胆碱以磷酸二酯键结合的脂质。神经酰胺由鞘氨醇类碱基和脂肪酸以酰胺键结合而构成。鞘氨醇类碱基通常是碳原子数16~20的长链氨基醇。因此,在鞘磷脂中,根据构成神经酰胺的鞘氨醇类碱基的碳原子数、甲基侧链的有无、双键数及其位置与羟基数,以及脂肪酸的碳原子数、双键数及其位置与羟基数的不同而存在各种类似物。故将这些不同的类似物总称为鞘磷脂。鞘磷脂的这些类似物的组成,随着鞘磷脂由来的原料而不同。即,如果精制鞘磷脂的原材料不同,则得到的鞘磷脂类似物的组成也不同。这样的在起因于原材料不同的鞘磷脂含有物中包含的鞘磷脂类似物组成的不同,例如,能够由高效液相色谱(HPLC)分析确认。具体而言,通过由HPLC分析得到的色谱的峰位置(保留时间)、大小和根数等的不同,原材料如果不同,就能够确认鞘磷脂含有物的鞘磷脂类似物组成不同。
在来自鸟皮的鞘磷脂中也包含多种类似物。相比于来自其它原料(例如牛奶和蛋黄等)的鞘磷脂,来自鸟皮的鞘磷脂显示优异的抗高血糖和/或抗高血脂症作用(具体而言,例如高血糖值下降作用和/或高胆固醇值(特别是高LDL胆固醇值)下降作用)。并不希望是限定性的解释,但可以认为在来自鸟皮的鞘磷脂中包含的类似物组成,在显示抗高血糖和/或抗高血脂症作用中特别适合。
另外,并不希望是限定性的解释,但在脱油鸟皮中,在优选来自鸟皮的鞘磷脂的类似物组成以外,可以认为所含有的鞘磷脂以外的成分(例如缩醛磷脂等)也有助于抗高血糖和/或抗高血脂症作用,可以认为这些成分和来自鸟皮的鞘磷脂相互作用,发挥更优异的抗高血糖和/或抗高血脂症作用。
本发明的抗高血糖和/或抗高血脂症剂,可以优选在医药领域和食品领域使用。即,本发明包含由以来自鸟皮的鞘磷脂含有物为有效成分的医药剂、以来自鸟皮的鞘磷脂含有物为有效成分的食品添加剂和添加了来自鸟皮的鞘磷脂含有物的饮料食品所构成的抗高血糖和/或抗高血脂症剂。
可以在医药领域中使用的本发明的抗高血糖和/或抗高血脂症剂(以下,有时记为“本发明涉及的医药剂”),既可以是来自鸟皮的鞘磷脂含有物本身,也可以是根据需要配合来自鸟皮的鞘磷脂含有物和其它药理活性成分、药学上所允许的基剂、载体、添加剂(例如,溶剂、分散剂、乳化剂、缓冲剂、稳定剂、赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等)等而配制成锭剂、丸剂、散剂、液剂、悬浊剂、乳剂、颗粒剂、胶囊剂等的医药制剂。
这样的本发明涉及的医药剂,如上所述能够特别优选用于通过口服而改善高血糖和改善高血脂症剂的用途。另外,本发明涉及的医药剂摄取量、摄取对象等,与上面关于抗高血糖和/或抗高血脂症剂所叙述的相同。
可以作为食品添加剂使用的本发明的抗高血糖和/或抗高血脂症剂(以下,有时记为“本发明涉及的食品添加剂”),既可以是来自鸟皮的鞘磷脂含有物本身,也可以适当配合这些和食品卫生学上所允许的基剂、载体、添加剂、或可以作为其它食品添加剂利用的成分-材料。另外,作为这样的食品添加剂的形态,例如,可以列举液态、粉末状、薄片状、颗粒状、糊状的形态,但不限定于这些。具体而言,能够例示调味料(酱油、酱汁、番茄酱、调味汁等)、薄片(调味料)、烤肉佐料、调味品、勾芡酱(咖喱勾芡酱等)等。这样的食品添加剂能够按照常用方法适当配制。
这样的本发明涉及的食品添加剂,通过食用添加了该食品添加剂的食品而被摄取。另外,该添加既可以在食品烹调中或制造中进行,也可以在临食用烹调完成的食品之前进行或边食用边进行。该食品添加剂通过这样操作而口服摄取,发挥高血糖改善效果和高血脂症剂的改善效果。另外,本发明涉及的食品添加剂摄取量、摄取对象等,与上面关于抗高血糖和/或抗高血脂症剂所叙述的相同。
可以在食品领域使用的本发明的抗高血糖和/或抗高血脂症剂(以下,有时记为“由添加了本发明涉及的来自鸟皮的鞘磷脂含有物的饮料食品构成的抗高血糖和/或抗高血脂症剂”),是适当配合了来自鸟皮的鞘磷脂含有物和食品卫生学上所允许的基剂、载体、添加剂或可以作为其它食品利用的成分-材料等的抗高血糖和/或抗高血脂症剂。例如,能够例示包含来自鸟皮的鞘磷脂含有物、抗高血糖和/或抗高血脂症剂用的加工食品、饮料、健康食品(营养功能食品、特定保健用食品等)、滋补品、患者用食品等。特别是因为该制剂是由添加了来自鸟皮的鞘磷脂含有物的饮料食品构成的制剂,所以优选是由汉堡包、肉丸、香肠、鸟肉松、炸鸟皮等加工肉食品和加工得到的肉食品构成的健康食品(营养功能食品、特定保健用食品等)、滋补品、患者用食品等。另外,也可以是在饮料类(果汁等)、点心类(例如口香糖、巧克力、糖果、饼干、小甜饼干、年糕、煎饼、布丁、杏仁豆腐等)、面包类、汤类(包含粉末汤料等)、加工食品等各种饮料食品中含有将来自鸟皮的鞘磷脂含有物(使其干燥)制成的粉末。这样的由添加了来自鸟皮的鞘磷脂含有物的饮料食品构成的抗高血糖和/或抗高血脂症剂,在用于高血糖改善和高血脂症改善中能够优选使用。
另外,健康食品(营养功能食品、特定保健用食品等),作为滋补品或患者用食品,配制由该饮料食品构成的抗高血糖和/或抗高血脂症剂时,为了易于进行连续摄取,例如优选以颗粒、胶囊、锭剂(包含咀嚼片剂等)、饮料(健康饮料)等形态配制,其中,从摄取的简便度出发,优选胶囊、片剂、锭剂的形态,但不限定于这些。由颗粒、胶囊、锭剂等形态的该饮料食品构成的抗高血糖和/或抗高血脂症剂,使用药学和/或食品卫生学所允许的载体等,能够按照常用方法适当配制。另外,在配制为其它形态时,也可以按照现有的方法进行。
另外,由本发明涉及的该饮料食品构成的抗高血糖和/或抗高血脂症剂的摄取量、摄取对象等,与上面关于抗高血糖和/或抗高血脂症剂所叙述的相同。
另外,虽然没有特别限制,但例如,和投与上述抗高血糖和/或抗高血脂症剂的对象同样的对象(其中,血糖值较高的人与胆固醇值(特别是LDL胆固醇值)较高的人),可以优选摄取由该饮料食品构成的抗高血糖和/或抗高血脂症剂。
本发明也提供高血糖的预防或治疗方法和高血脂症的预防或治疗方法,其特征在于,对于高血糖患者和高血脂症患者、及血糖值较高的人与胆固醇值(特别是LDL胆固醇值)较高的人,口服或摄取本发明的抗高血糖和/或抗高血脂症剂。具体而言,该方法通过投与或摄取上述本发明的抗高血糖和/或抗高血脂症剂而实施。另外,在该方法中的口服或摄取量等的各条件如上所述。
实施例
下面,具体说明本发明,但本发明不限定于下述的例子。
实施例1:来自鸟皮的鞘磷脂含有物的制造
按照常用方法采取鸡皮,冷藏冷冻保存直到供给脱油工序。将其按照常用方法加工为约8mm的碎末,供给脱油处理。
<脱油处理工序>
将如上述操作得到的约8mm碎末鸡皮,由特殊过热蒸汽脱油。具体而言,将进行脱油的加热容器内部压力控制在0.1MPa,将温度控制在105±4℃,将氧浓度控制在0.2%以下,通过在鸡皮碎末上高速喷射25分钟100℃热水(微细热水滴)、饱和蒸汽和117℃水蒸汽(过热蒸汽)的混合体系进行脱油。另外,该脱油工序使用作为高温热水喷射方式低温过热水蒸汽装置的hi-LOHS-R连续制造装置(株式会社TAIYO制作所生产)进行。再压榨所得到的脱油鸡皮,使其干燥,作为脱油干燥鸡皮。
另外,如下述工序(1)操作得到该脱油干燥鸡皮的乙醇提取物,将其溶解在氯仿/甲醇溶液(2∶1,v/v)中,供给硅酸柱色谱,用氯仿洗脱单纯脂质组份,用甲醇洗脱复合脂质组份,由HPLC测定该复合脂质组份,在每100g脱油干燥鸡皮中包含326mg鞘磷脂。
通过该脱油处理,可以有效且非侵袭地脱油,可以认为通过上述工序能够得到几乎不损失鸡皮具有的鞘磷脂的脱油干燥鸡皮。
<有机溶剂提取工序>
工序(1)
进行2次在1kg如上述操作得到的脱油干燥鸡皮中加入2L乙醇,用12小时在40℃搅拌-静置、提取的工序,用滤纸过滤得到的提取液后,减压干燥,得到浓缩干燥固体化提取物。
工序(2)
在上述浓缩干燥固体化物中加入30mL水和60mL丙酮(即67%丙酮),搅拌、离心,回收沉淀。在该沉淀中加入45mL水和45mL丙酮(即50%丙酮),搅拌、离心,回收沉淀。再在该沉淀中加入90mL丙酮,搅拌、离心,得到沉淀。再次加入90mL丙酮,搅拌、离心,回收沉淀。再在该沉淀中加入己烷/丙酮(7∶3)混合溶剂100mL,搅拌、离心,回收4g沉淀(含有鞘脂的沉淀)。另外,离心以3000rpm×10min进行,使用丙酮单一溶剂和己烷/丙酮混合溶剂的离心在4℃进行,其它在15℃进行。
工序(3)
在40mL的0.2M NaOH水溶液中溶解如上述操作得到的4g含有鞘脂的沉淀,在37℃搅拌2小时。此后,加入2倍体积的丙酮,搅拌、离心,回收沉淀。再在该沉淀中加入丙酮/水(2∶1)混合溶剂,搅拌、离心,回收沉淀。再在该沉淀中加入30mL丙酮,搅拌、离心,回收沉淀(含有高纯度鞘脂的沉淀)。减压干燥该沉淀,得到来自鸡皮的高纯度鞘磷脂含有物。
<来自鸡皮的高纯度鞘磷脂含有物的纯度研究>
由下述条件的HPLC分析如上述操作得到的来自鸡皮的高纯度鞘磷脂含有物,从峰面积算出该含有物中的鞘磷脂含有率。
[HPLC分析条件]
仪器:Shimadzu LC-10AD
柱:LiChrospher Diol 100(250-4,Merck公司)(无前置柱)
溶剂:A液:己烷/2-丙醇/乙酸(82∶17∶1,v/v)
B液:2-丙醇/水/乙酸(85∶14∶1,v/v)+0.2%三乙胺
梯度条件:在表1中表示
[表1]
  时间(分钟)   A液   B液
  0→1   95%   5%
  1→24   95→60%   5→40%
  24→25.5   60%   40%
  25.5→28   60→100%   0%
流速:1.0ml/min
检测:ELSD蒸发光散射检测器(岛津制作所,京都,日本)
结果表示在图1a和图1b中。在图1a中表示得到的色谱图,在图1b中放大表示鞘磷脂的峰的部分的色谱图。检测出多个鞘磷脂的峰,表示来自鸡皮的鞘磷脂是由多个类似物构成的。
将检测出的全部峰面积设为100%时,表示鞘磷脂的峰所占的面积约91%。因此,可知该高纯度鞘磷脂含有物含有约91质量%鞘磷脂。另外,作为其它主要的峰,脑苷脂(葡糖神经酰胺)为约3.3%,游离神经酰胺为约1.4%,将鞘脂作为总量占到96%。
实施例2:来自鸡皮的高纯度鞘磷脂含有物的抗高血脂症作用的研
为了研究在实施例1中得到的来自鸡皮的高纯度鞘磷脂含有物(以下,有时表示为“鸡皮高SM含有物”)的抗高血脂症作用,进行以下的实验。
<试样的配制>
作为在实验中使用的ZDF(Zucker Diabetic Fatty)鼠(雄)的饲料,购入了AIN-93M(由美国国立营养研究所在1993年发表的小鼠-大鼠的营养研究用标准饲料)。另外,通过特别订货,还购入了含有0.1质量%鸡皮高SM含有物的AIN-93M(以下,有时表示为“含有SM的AIN-93M”)(均由Oriental Yeast Co.,Ltd.生产)。
<抗高血脂症作用的确认试验>
从日本Charles River株式会社购入7周龄的ZDF雄鼠(16只),使其自由摄取AIN-93M和饮水,预饲养2周。
此后,分群(被检验群:8只,对照群:8只)使平均体重相等,在被检验群中给予含有SM的AIN-93M,在对照群中给予AIN-93M,在自由饲料摄取下饲养4周,此后,施加麻醉采血。另外,采血从腹部大动脉进行,采血前使其绝食18小时。
使用得到的血液,进行血液生化检测(总胆固醇值、LDL胆固醇值、HDL胆固醇值和红血球变形能力)。该检测委托株式会社C·R·C进行。另外,红血球变形能力使用重量式Nickel Mesh Filtration法(镍网过滤法)测定(RCF是red blood cell filterability(血红细胞过滤性)的简称,表示将Buffer(缓冲液)的流动容易度作为100%时的红血球流动容易度)。结果表示在图2~图5中。
被检验群的总胆固醇值和LDL胆固醇值比对照群显著低(图2和3)。另外,所谓是有益胆固醇的HDL胆固醇值,在对照群和被检验群之间没有差别(图4)。
另外,相比于对照群,被检验群的红血球变形能力偏高(图5)。另外,血液流动性很大程度依赖于红血球变形能力,因为如果红血球变形能力下降,就有引起血流障碍的担忧,所以红血球变形能力可以给高血脂症-动脉硬化症等带来很大影响。
从以上内容能够确认,鸡皮高SM含有物具有抗高血脂症作用。
实施例3:脱油干燥鸡皮的抗高血糖作用和抗高血脂症作用的研究 1
为了研究在实施例1中得到的脱油鸡皮的抗高血糖作用和抗高血脂症作用,进行下面的实验。
<试样的配制>
作为在实验中使用的Zucker鼠(雄)的饲料,购入固体饲料MF(Oriental Yeast Co.,Ltd.)。另外,通过特别订货,也购入了含有1质量%在实施例1中得到的脱油干燥鸡皮粉末的固体饲料MF(以下,有时表示为“脱油鸡皮MF”)。
<抗高血糖作用和抗高血脂症作用的确认试验>
从日本Charles River株式会社购入9周龄的Zucker雄鼠(16只),给予MF,自由饲料饮水摄食下预饲养1周。
此后,分群(被检验群:8只,对照群:8只)使平均体重相等,在被检验群中给予脱油鸡皮MF,在对照群中给予MF,在自由饲料摄取下饲养4周,此后,施加麻醉采血。另外,采血从腹部大动脉进行,采血前使其绝食18小时。
使用得到的血液,进行血液生化检测(LDL胆固醇值、红血球变形能力、肌酸酐值、尿酸值)。该检测委托株式会社C·R·C进行。另外,红血球变形能力使用重量式Nickel Mesh Filtration法测定(RCF表示red blood cell filterability)。结果表示在图6~图10中。
被检验群的LDL胆固醇值比对照群显著低(图6)。相比于对照群,被检验群的红血球变形能力偏高(图7)。
从以上内容可以确认,脱油干燥鸡皮具有抗高血脂症作用。
另外,相比于对照群,被检验群的血糖值偏低(图8)。而且相比于对照群,被检验群的肌酸酐值显著低(图9),相比于对照群,被检验群的尿酸值也偏低(图10)。此外,虽然肌酸酐值和尿酸值是肾功能的指标,但糖尿病患者作为并发症容易发生肾功能下降(糖尿病性肾病),所以肌酸酐值和尿酸值也能够作为糖尿病发展程度的指标。两个伴随糖尿病发展都可以变为高值。
从以上内容,能够确认脱油干燥鸡皮具有抗高血糖作用,并能够优选使用在糖尿病的改善中。
实施例4:脱油干燥鸡皮的抗高血糖作用和抗高血脂症作用的研究 2
为了研究在实施例1中得到的脱油鸡皮(干燥前的脱油鸡皮)的抗高血糖作用和抗高血脂症作用,进行以下试验。
<试样的配制>
制作含有相当于每1个包含5mg鞘磷脂的脱油鸡皮的鸡肉肉丸(以下有时表示为“SM肉丸”)。另外,作为对照食品,制成以麸质为主要成分的几乎不含鞘磷脂的假肉丸(以下有时表示为“对照肉丸”)。另外,所有肉丸重量都是约14g。
<抗高血脂症作用的确认试验>
将成人糖尿病患者(甘油三酯值150mg/dL以上)12人作为对照,进行双重盲检平行群之间的比较试验。在试验开始前设置4周的前观察期。
将被检验者分为被检验食品群(4人)和对照食品群(8人),使其连续4周与通常饮食一起每日摄取2个肉丸。在被检验食品群中使其摄取SM肉丸,在对照食品群中使其摄取对照肉丸。
测定在摄取期间(4周)前和结束后,各人的总胆固醇值和LDL胆固醇值,算出平均值。再算出摄取期间前平均值和摄取期间结束后平均值之差,作为变化量。结果表示在表2中。
[表2]
Figure BDA0000107234280000201
*:p<0.05(非配对t检验)
在总胆固醇值-LDL胆固醇值的任意1个值中,在被检验食品群中摄取期间结束后的值都比摄取期间前下降。另一方面,在总胆固醇值和LDL胆固醇值的任意1个值中,在对照食品群中,摄取期间结束后的值都比摄取期间前增加。
如果再比较在被检验食品群中的总胆固醇值变化量和对照食品群中的总胆固醇值变化量,就可以看到显著差异。在LDL胆固醇值变化量中也同样。
<抗高血糖作用的确认试验>
将成人糖尿病患者(HbA1c值是5.8%~8.0%)31人作为对照,进行双重盲检平行群之间的比较试验。在试验开始前设置4周前观察期。此外,将在血红蛋白A的β链N末端结合葡萄糖的血红蛋白称为HbA1c,反映过去1~2个月的平均血糖值。正常范围(基准范围)是4.3%~5.8%(平均5%)左右。
将被检验者分为被检验食品群(16人)和对照食品群(15人),使其连续4周与通常饮食一起每日摄取2个肉丸。在被检验食品群中使其摄取SM肉丸,在对照食品群中使其摄取对照肉丸。
测定在摄取期间(4周)前和结束后,各人的糖化白蛋白值(%),算出平均值。再算出摄取期间前平均值和摄取期间结束后平均值之差,作为变化量。结果表示在表3中。另外,糖化白蛋白是白蛋白和葡萄糖结合的产物,反映过去1~2周的平均血糖值。因为糖化白蛋白与其和糖接触的时间、糖的浓度成正比而其比例增加,所以可以作为糖尿病中的血糖值指标使用。
[表3]
糖化白蛋白值(%)
*:p<0.05(非配对t检验)
在被检验食品群中,摄取期间结束后比摄取期间前的糖化白蛋白值下降,但在对照食品群中,相比于摄取期间前,摄取期间结束后的值增加。如果再比较被检验食品群中的糖化白蛋白值变化量和对照食品群中的糖化白蛋白值变化量,就可以看到显著差异。
从以上结果,能够确认加入脱油鸡皮的鸡肉肉丸具有抗高血糖作用和抗高血脂症作用。

Claims (7)

1.一种抗高血糖和/或抗高血脂症剂,其特征在于:
以来自鸟皮的鞘磷脂含有物为有效成分。
2.如权利要求1所述的抗高血糖和/或抗高血脂症剂,其特征在于:
以脱油鸟皮为有效成分。
3.如权利要求2所述的抗高血糖和/或抗高血脂症剂,其特征在于:
以干燥质量换算计,以每100g包含80~400mg鞘磷脂的脱油鸟皮为有效成分。
4.如权利要求2或3所述的抗高血糖和/或抗高血脂症剂,其特征在于:以在内部压力为0.05~0.3MPa、内部温度为105±10℃、内部氧浓度为0.2%以下的容器内,经过在鸟皮上喷120~135℃的水蒸汽的工序而脱油得到的脱油鸟皮为有效成分。
5.如权利要求1~4中任一项所述的抗高血糖和/或抗高血脂症剂,其特征在于:来自鸟皮的鞘磷脂含有物的中性脂肪含量为30质量%以下。
6.如权利要求1所述的抗高血糖和/或抗高血脂症剂,其特征在于:
以含有90质量%以上的鞘磷脂的鸟皮提取物为有效成分。
7.如权利要求1~6中任一项所述的抗高血糖和/或抗高血脂症剂,其特征在于:鸟皮为鸡皮。
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