CN102356865A - 一种甜味剂及其制备方法 - Google Patents

一种甜味剂及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN102356865A
CN102356865A CN2011102775449A CN201110277544A CN102356865A CN 102356865 A CN102356865 A CN 102356865A CN 2011102775449 A CN2011102775449 A CN 2011102775449A CN 201110277544 A CN201110277544 A CN 201110277544A CN 102356865 A CN102356865 A CN 102356865A
Authority
CN
China
Prior art keywords
sweetener
momordica grosvenori
dry weight
preparation
sugariness
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2011102775449A
Other languages
English (en)
Inventor
孙步祥
汤凌志
陆玮
吴柏峰
易永基
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
GUILIN LAIYIN BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Original Assignee
GUILIN LAIYIN BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by GUILIN LAIYIN BIOTECHNOLOGY CO Ltd filed Critical GUILIN LAIYIN BIOTECHNOLOGY CO Ltd
Priority to CN2011102775449A priority Critical patent/CN102356865A/zh
Publication of CN102356865A publication Critical patent/CN102356865A/zh
Priority to PCT/CN2012/079518 priority patent/WO2013040953A1/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/42Cucurbitaceae (Cucumber family)
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L27/00Spices; Flavouring agents or condiments; Artificial sweetening agents; Table salts; Dietetic salt substitutes; Preparation or treatment thereof
    • A23L27/30Artificial sweetening agents
    • A23L27/33Artificial sweetening agents containing sugars or derivatives
    • A23L27/36Terpene glycosides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Seasonings (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明公开了一种甜味剂及其制备方法。所述甜味剂基于干重含有来源于罗汉果的罗汉果总甙20~98%,其中包括基于干重5~80%的罗汉果甙V;当所述的甜味剂完全溶解于水中并且具有的甜度与同等条件下5%(w/w)蔗糖水溶液的甜度一致时,该甜味剂水溶液在210nm的吸光度为1.2~1.4。所述甜味剂的制备方法为:取罗汉果加水及果胶酶进行提取,提取注液浓缩,上大孔树脂柱,收集乙醇洗脱液;洗脱液过中性氧化铝柱,收集流出液,回收乙醇,浓缩,干燥,即得。与现有技术相比,在上述限定范围内的甜味剂呈淡黄色或白色,没有罗汉果本身的中药味及苦味,且可达到较好的甜味效果;而且其制备方法简单、生产成本低,易于工业化生产。

Description

一种甜味剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种添加剂,尤其涉及从罗汉果中提取出的甜味成分为主要成分的甜味剂及其制备方法。
背景技术
甜味剂是现代社会食品加工行业及日常生活中常用的产品。早前常用的甜味剂有合成甜味剂、糖醇甜味剂和氨基酸衍生物甜味剂等,但它们都或多或少的影响着食用者的健康。相较之下,从天然植物中提取的甜味剂由于具有甜度高、热量低的特点正被越来越多铁消费者所需求。
现有天然甜味剂中的主要甜味成分大多从罗汉果中提取,罗汉果(Siraitia grosvenorii)为葫芦科罗汉果属多年生宿根茎性藤本植物,是我国特有的经济、药用植物,为广西桂北地区传统特产。罗汉果中所含甜度极高的甜味物质是一种低卡路里的理想天然甜味剂,特别适用于冠心病、高血压、糖尿病及肥胖患者食用。罗汉果中含有多种甜甙,它们具有共同的甙元mogrol,其中罗汉果甜甙V(mogrosideV)是罗汉果中主要甜味成分。但罗汉果中所含的甜味物质具有罗汉果本身特有的中药味、苦味,因而影响甜味剂的口感。另外,从罗汉果中提取出来的甜味物质一般呈较深的黄褐色,会因此导致其在食品行业中的应用受到限制。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种以罗汉果中提取的甜味物质为主要甜味成分的甜味剂及其制备方法。该所述的甜味剂呈淡黄色或白色,且没有罗汉果本身的中药味及苦味,其制备方法简单易操作。
为解决上述技术问题,本发明采用以下技术方案:
本发明所述的甜味剂,基于干重含有来源于罗汉果的罗汉果总甙20~98%,其中包括基于干重5~80%的罗汉果甙V;当所述的甜味剂完全溶解于水中并且具有的甜度与同等条件下5%(w/w)蔗糖水溶液的甜度一致时,该甜味剂水溶液在210nm的吸光度为1.2~1.4。
优选地,上述甜味剂基于干重含有来源于罗汉果的罗汉果总甙30~90%,其中包括基于干重15~75%的罗汉果甙V。进一步优选地,上述甜味剂基于干重含有来源于罗汉果的罗汉果总甙40~85%,其中包括基于干重25~70%的罗汉果甙V。更为优先地,上述甜味剂基于干重含有来源于罗汉果的罗汉果总甙50~80%,其中包括基于干重35~65%的罗汉果甙V。
在上述甜味剂中,当所述的甜味剂完全溶解于水中并且具有的甜度与同等条件下5%(w/w)蔗糖水溶液的甜度一致时,该甜味剂水溶液在210nm的吸光度优选为1.25~1.35;更优选为1.3。
上述提到的同等条件下,是指在压力、温度和湿度均相同的条件下。上述技术方案中,用于溶解甜味剂的水一般选用蒸馏水或去离子水。
本发明所述甜味剂除含有具备上述特点的组分外,还可包括一种或一种以上的其它甜味组分或辅料,如甜菊糖甙、苷草甙、水溶性膳食纤维、植脂末、糊精、菊粉等。
本发明还包括上述甜味剂的制备方法,它包括以下步骤:
1)取新鲜罗汉果,洗净,破碎,加水后再加入罗汉果重量0.1~0.3%的果胶酶于30~40℃保温提取1~2次,每次30~120min,过滤,合并提取液;
2)提取液浓缩,上大孔树脂柱,先用水洗柱,再用乙醇洗脱,收集洗脱液;
3)洗脱液过中性氧化铝柱,收集流出液;
4)流出液回收乙醇,浓缩,干燥,即得甜味剂。
其中:
步骤1)中,水的加入量为新鲜罗汉果重量的6~10倍。
步骤2)中,所述大孔树脂柱的型号通常选用为D101、D102或F-8。乙醇的体积浓度为70~85%。该步骤中,上样及洗脱时的流速均为1~2BV/h。提取液最好是浓缩至其原体积的1/3~1/2时再上大孔树脂柱,浓缩的温度为80~100℃。
步骤3)中,上样的流速为0.5~1BV/h。
步骤4)中,所述浓缩优选采用真空浓缩,其真空度为0.02~0.04MPa,温度为40~60℃;所述干燥优选采用喷雾干燥。
与现有技术相比,在上述限定范围内的甜味剂呈淡黄色或白色,没有罗汉果本身的中药味及苦味,且可达到较好的甜味效果;而且其制备方法简单、生产成本低,易于工业化生产。
具体实施方式
下面以实施例对本发明进行进一步说明,但本发明并不局限于这些实施例。
以下实施例中的罗汉果均采摘于广西桂林市永福县龙江乡驿马村。
实施例1
甜味剂为从罗汉果中提取得到的罗汉果提取物,基于该提取物的干重,该提取物中罗汉果总甙的含量为91%,其中罗汉果甙V的含量为60%。
制备方法:
1)取新鲜罗汉果,洗净,破碎,加入相当于新鲜罗汉果重量6倍的水,以及相当于新鲜罗汉果重量的0.2%的果胶酶,于35℃保温提取60min,过滤,再加入相当于新鲜罗汉果重量6倍的水,以及相当于新鲜罗汉果重量的0.2%的果胶酶,于35℃保温提取30min,过滤,合并提取液;
2)提取液于80℃条件下浓缩至其原体积的1/3,上F-8大孔树脂柱,先用水洗柱直至流出液澄清,再用体积浓度为80%的乙醇洗脱,收集洗脱液;该步骤中,上样及洗脱时的流速均为1BV/h;
3)洗脱液以0.8BV/h的流速过中性氧化铝柱,收集流出液;
4)流出液回收乙醇,在真空度为0.02MPa,温度为50℃条件下浓缩,喷雾干燥,所得的罗汉果提取物即为甜味剂,呈白色。在常压、25℃、相对湿度为40%的条件下,取其中0.20克加入1000mL蒸馏水,配制得到甜度与5%(w/w)蔗糖水溶液的甜度一致的甜味剂水溶液,该甜味剂水溶液在210nm的吸光度为1.3。经HPLC检测,该甜味剂中罗汉果总甙的含量为91%,其中罗汉果甙V的含量为60%。
实施例2
甜味剂为从罗汉果中提取得到的罗汉果提取物,基于该提取物的干重,该提取物中罗汉果总甙的含量为60%,其中罗汉果甙V的含量为50%。
制备方法:
1)取新鲜罗汉果,洗净,破碎,加入相当于新鲜罗汉果重量10倍的水,以及相当于新鲜罗汉果重量的0.3%的果胶酶,于40℃保温提取120min,过滤,得到提取液;
2)提取液于100℃条件下浓缩至其原体积的1/2,上D101大孔树脂柱,先用水洗柱直至流出液澄清,再用体积浓度为70%的乙醇洗脱,收集洗脱液;该步骤中,上样及洗脱时的流速均为1.5BV/h;
3)洗脱液以0.5BV/h的流速过中性氧化铝柱,收集流出液;
4)流出液回收乙醇,在真空度为0.04MPa,温度为60℃条件下浓缩,喷雾干燥,所得的罗汉果提取物即为甜味剂,呈白色。在常压、25℃、相对湿度为40%的条件下,取其中0.25克加入1000mL蒸馏水,配制得到甜度与5%(w/w)蔗糖水溶液的甜度一致的甜味剂水溶液,该甜味剂水溶液在210nm的吸光度为1.28。经HPLC检测,该甜味剂中罗汉果总甙的含量为60%,其中罗汉果甙V的含量为50%。
实施例3
甜味剂为从罗汉果中提取得到的罗汉果提取物,基于该提取物的干重,该提取物中罗汉果总甙的含量为80%,其中罗汉果甙V的含量为35%。
制备方法:
1)取新鲜罗汉果,洗净,破碎,加入相当于新鲜罗汉果重量8倍的水,以及相当于新鲜罗汉果重量的0.2%的果胶酶,于30℃保温提取100min,过滤,再加入相当于新鲜罗汉果重量6倍的水,以及相当于新鲜罗汉果重量的0.1%的果胶酶,于30℃保温提取30min,过滤,合并提取液;
2)提取液于90℃条件下浓缩至其原体积的1/2,上D102大孔树脂柱,先用水洗柱直至流出液澄清,再用体积浓度为85%的乙醇洗脱,收集洗脱液;该步骤中,上样及洗脱时的流速均为2BV/h;
3)洗脱液以1BV/h的流速过中性氧化铝柱,收集流出液;
4)流出液回收乙醇,在真空度为0.03MPa,温度为40℃条件下浓缩,喷雾干燥,所得的罗汉果提取物即为甜味剂,呈淡黄色。在常压、25℃、相对湿度为40%的条件下,取其中0.35克加入1000mL去离子水,配制得到甜度与5%(w/w)蔗糖水溶液的甜度一致的甜味剂水溶液,该甜味剂水溶液在210nm的吸光度为1.33。经HPLC检测,该甜味剂中罗汉果总甙的含量为80%,其中罗汉果甙V的含量为35%。
实施例4
甜味剂由从罗汉果中提取得到的罗汉果提取物、水溶性膳食纤维和糊精组成,基于甜味剂干重,它们的重量比分别为:85%、14%、1%。
制备方法:
1)所述的罗汉果提取物参照实施例3的方法制备,所得提取物中经HPLC检测,罗汉果总甙的含量为75%,其中罗汉果甙V的含量为30%;
2)将步骤1)制得的罗汉果提取物和水溶性膳食纤维以及糊精混合均匀,即得到甜味剂,呈淡黄色。在常压、25℃、相对湿度为40%的条件下,取其中0.50克加入1000mL去离子水,在常压、25℃条件下配制得到甜度与5%(w/w)蔗糖水溶液的甜度一致的甜味剂水溶液,该甜味剂水溶液在210nm的吸光度为1.35。
实施例5
甜味剂由从罗汉果中提取得到的罗汉果提取物、甜叶菊甙和菊粉组成,基于甜味剂干重,它们的重量比分别为:80%、2%、18%。
制备方法:
1)所述的罗汉果提取物参照实施例1的方法制备,所得提取物中经HPLC检测,罗汉果总甙的含量为95%,其中罗汉果甙V的含量为78%;
2)将步骤1)制得的罗汉果提取物和甜叶菊甙以及菊粉混合均匀,即得到甜味剂,呈淡黄色。在常压、25℃、相对湿度为40%的条件下,取其中0.20克加入1000mL蒸馏水,配制得到甜度与5%(w/w)蔗糖水溶液的甜度一致的甜味剂水溶液,该甜味剂水溶液在210nm的吸光度为1.26。

Claims (10)

1.一种甜味剂,其特征在于:该甜味剂基于干重含有来源于罗汉果的罗汉果总甙20~98%,其中包括基于干重5~80%的罗汉果甙V;当所述的甜味剂完全溶解于水中并且具有的甜度与同等条件下5%(w/w)蔗糖水溶液的甜度一致时,该甜味剂水溶液在210nm的吸光度为1.2~1.4。
2.根据权利要求1所述的甜味剂,其特征在于:所述的甜味剂基于干重含有来源于罗汉果的罗汉果总甙30~90%,其中包括基于干重15~75%的罗汉果甙V。
3.根据权利要求2所述的甜味剂,其特征在于:所述的甜味剂基于干重含有来源于罗汉果的罗汉果总甙40~85%,其中包括基于干重25~70%的罗汉果甙V。
4.根据权利要求3所述的甜味剂,其特征在于:所述的甜味剂基于干重含有来源于罗汉果的罗汉果总甙50~80%,其中包括基于干重35~65%的罗汉果甙V。
5.根据权利要求1~4中任一项所述的甜味剂,其特征在于:当所述的甜味剂完全溶解于水中并且具有的甜度与同等条件下5%(w/w)蔗糖水溶液的甜度一致时,该甜味剂水溶液在210nm的吸光度为1.25~1.35。
6.根据权利要求5所述的甜味剂,其特征在于:当所述的甜味剂完全溶解于水中并且具有的甜度与同等条件下5%(w/w)蔗糖水溶液的甜度一致时,该甜味剂水溶液在210nm的吸光度为1.3。
7.权利要求1所述甜味剂的制备方法,其特征在于包括以下步骤:
1)取新鲜罗汉果,洗净,破碎,加水后再加入罗汉果重量0.1~0.3%的果胶酶于30~40℃保温提取1~2次,每次30~120min,过滤,合并提取液;
2)提取液浓缩,上大孔树脂柱,先用水洗柱,再用乙醇洗脱,收集洗脱液;
3)洗脱液过中性氧化铝柱,收集流出液;
4)流出液回收乙醇,浓缩,干燥,即得甜味剂。
8.根据权利要求7所述的甜味剂的制备方法,其特征在于:步骤1)中,水的加入量为新鲜罗汉果重量的6~10倍。
9.据权利要求7所述的甜味剂的制备方法,其特征在于:步骤2)中,所述大孔树脂柱的型号为D101、D102或F-8。
10.据权利要求7所述的甜味剂的制备方法,其特征在于:步骤2)中,乙醇的体积浓度为70~85%。
CN2011102775449A 2011-09-19 2011-09-19 一种甜味剂及其制备方法 Pending CN102356865A (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2011102775449A CN102356865A (zh) 2011-09-19 2011-09-19 一种甜味剂及其制备方法
PCT/CN2012/079518 WO2013040953A1 (zh) 2011-09-19 2012-08-01 含有罗汉果总甙的甜味剂及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2011102775449A CN102356865A (zh) 2011-09-19 2011-09-19 一种甜味剂及其制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN102356865A true CN102356865A (zh) 2012-02-22

Family

ID=45582290

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2011102775449A Pending CN102356865A (zh) 2011-09-19 2011-09-19 一种甜味剂及其制备方法

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN102356865A (zh)
WO (1) WO2013040953A1 (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103461951A (zh) * 2013-09-04 2013-12-25 湖南康麓生物科技有限公司 一种具有矫味功能的复合甜味剂及其制备方法
CN105255946A (zh) * 2015-11-06 2016-01-20 深圳市深宝技术中心有限公司 一种酶解-超声波协同提取罗汉果鲜果提取物的方法
CN105639587A (zh) * 2016-01-06 2016-06-08 桂林莱茵生物科技股份有限公司 一种改变罗汉果甜苷甜味时间轮廓的甜味剂及其制备方法
CN110463973A (zh) * 2016-06-21 2019-11-19 厦门华高食品科技有限公司 一种罗汉果甜苷为主的复配甜味剂、其制备方法及用途

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106176888A (zh) * 2016-09-27 2016-12-07 桂林益天成生物科技有限公司 无回苦味罗汉果甜甙的提取方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101177444A (zh) * 2006-11-11 2008-05-14 大闽食品(漳州)有限公司 一种从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法
CN101386636A (zh) * 2007-09-14 2009-03-18 桂林市振达生物科技有限责任公司 一种罗汉果甜甙的提取方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1683387A (zh) * 2005-03-16 2005-10-19 桂林莱茵生物科技股份有限公司 一种从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法
NZ549739A (en) * 2006-09-07 2009-01-31 Biovittoria Ltd Sweetening compositions and processes for preparing them
CN101690573B (zh) * 2009-10-16 2012-01-25 长沙绿蔓生物科技有限公司 一种罗汉果苷v含量大于60%的罗汉果提取物生产方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101177444A (zh) * 2006-11-11 2008-05-14 大闽食品(漳州)有限公司 一种从罗汉果中提取罗汉果甜甙的方法
CN101386636A (zh) * 2007-09-14 2009-03-18 桂林市振达生物科技有限责任公司 一种罗汉果甜甙的提取方法

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103461951A (zh) * 2013-09-04 2013-12-25 湖南康麓生物科技有限公司 一种具有矫味功能的复合甜味剂及其制备方法
CN103461951B (zh) * 2013-09-04 2015-05-20 湖南康麓生物科技有限公司 一种具有矫味功能的复合甜味剂及其制备方法
CN105255946A (zh) * 2015-11-06 2016-01-20 深圳市深宝技术中心有限公司 一种酶解-超声波协同提取罗汉果鲜果提取物的方法
CN105639587A (zh) * 2016-01-06 2016-06-08 桂林莱茵生物科技股份有限公司 一种改变罗汉果甜苷甜味时间轮廓的甜味剂及其制备方法
CN110463973A (zh) * 2016-06-21 2019-11-19 厦门华高食品科技有限公司 一种罗汉果甜苷为主的复配甜味剂、其制备方法及用途

Also Published As

Publication number Publication date
WO2013040953A1 (zh) 2013-03-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2020048049A1 (zh) 一种从罗汉果中制备罗汉果甜味组合物的方法及其应用
US11464250B2 (en) Natural compound sweetener and preparation method therefor
CN103053953B (zh) 一种利用药食同用中药材生产的功能型豆芽及方法
CN101283831B (zh) 一种脱色罗汉果果汁制备方法及由所述方法制备的果汁
CN107629105A (zh) 一种风味罗汉果甜苷v的提纯方法
CN102356865A (zh) 一种甜味剂及其制备方法
CN106333206B (zh) 一种蜂蜜味道罗汉果汁的制作方法
CN103005372B (zh) 一种养生牛肉味调味粉
CN109247467A (zh) 一种无蛋白罗汉果纯味浓缩汁及其生产方法
CN103393183A (zh) 一种具有清热润燥作用的中药保健饮料及其制备方法
CN105053955A (zh) 一种无后苦味降血糖的甜味剂
CN104262446B (zh) 从罗汉果中提取罗汉果甜甙ⅴ的方法
CN105754000A (zh) 羊栖菜多糖提取工艺
CN104059959A (zh) 以罗汉果苦果、落地果为原料合成甜味皂苷的方法
WO2021027055A1 (zh) 一种具有抗霾清肺功效的罗汉果蜜及其生产方法
CN103504411A (zh) 一种果味玉米须饮料
CN104782818A (zh) 含六堡茶具有降血脂功能的组合物
CN107737148A (zh) 一种朝鲜蓟提取物的制备方法
CN106924304A (zh) 甜茶有效成分的提取方法
CN104082480A (zh) 无糖桔梗茶饮料及其制备方法
CN111406820A (zh) 一种黄精低聚糖咖啡及其制备方法
CN101736051B (zh) 美洲帘蛤多糖的制备方法
CN107823450A (zh) 金线莲茶及制作工艺
CN107095305A (zh) 一种黄秋葵胶质多糖口服液的制备方法
CN100534503C (zh) 一种从青稞嫩叶中提取生理活性物质的工艺

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C12 Rejection of a patent application after its publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20120222