CN102320934A

CN102320934A - 一种从虎杖根茎中提取白藜芦醇的新方法

Info

Publication number: CN102320934A
Application number: CN201110266485A
Authority: CN
Inventors: 许育海; 严绍华; 李威; 李选民
Original assignee: SICHUAN TIANYU VEGETABLE PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: SICHUAN TIANYU VEGETABLE PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2011-09-09
Filing date: 2011-09-09
Publication date: 2012-01-18

Abstract

本发明所述一种从虎杖根茎中提取白藜芦醇的新方法。该方法包括粉碎、提取、浓缩、水解、析晶、过滤、干燥等步骤。该方法不需酶解、柱层析，直接用甲醇（乙醇）从虎杖中将虎杖苷及白藜芦醇提取出来，然后加酸把虎杖苷上的糖苷键进行分解，再加碱中和多余的酸，而得到含量大于50％的白藜芦醇的方法。本发明不经柱层析，溶剂消耗小，操作简单，生产周期短、成本低，收率高，适用于工业化大生产。

Description

一种从虎杖根茎中提取白藜芦醇的新方法

技术领域

本发明涉及一种从虎杖根茎中提取白藜芦醇的新方法,属于天然产物化学技术领域。

背景技术

虎杖苷（polydatin） 又名白藜芦醇苷，其结构式如下：

Figure 2011102664855100002DEST_PATH_IMAGE002

白藜芦醇（resveratrol） ，结构式如下：

Figure 2011102664855100002DEST_PATH_IMAGE004

白藜芦醇是从蓼科植物虎杖的根和根茎及葡萄科葡萄的皮中提取出来的一种黄酮类物质。白藜芦醇在虎杖药材中主要以苷的形式存在，少量以游离的白藜芦醇并存，是虎杖药材中的主要活性成分。虎杖苷及白藜芦醇具有多种生物活性。如抗氧化、抗肿瘤、改善微循环、降血脂、降血压等。

目前，从虎杖中提取白藜芦醇的方法现主要包括利用药材自身酶酶解后提取、外加酶酶解后提取或者先提取再加酶酶解等如专利CN1251361A、CN101698634A，CN101338327、CN1896255A等，提取溶剂大多为有机溶剂，这些方法都需经过酶解将虎杖苷转化为白藜芦醇。但酶解过程温度需恒定，这样才能保证酶解充分，且酶解占用生产空间较大，酶解时间长，且发酵好的药材如果不及时处理，就会导致发酵物中白藜芦醇的含量降低，这就需要耗费较大的人力物力，势必导致生产效率降低，成本增高。

专利CN1513823 A公开了一种超临界CO₂提取白藜芦醇的工艺，其采用超临界CO₂萃取工艺，并用无水乙醇和2-丙醇混合溶剂作为改性剂。此法工艺简单、生产周期短、溶剂用量减少、成本低、收率高，但是超临界CO₂萃取技术目前用于规模化生产尚有一定难度，只能停留在实验阶段。

专利CN1546503A公开了一种虎杖苷和白藜芦醇的新制备方法和专利CN101397242A公开一种从新鲜虎杖中提取、纯化白藜芦醇的工艺方法，由于虎杖中含有的白藜芦醇含量很低，绝大部分是以苷的形式存在以虎杖中。此种制备方法因没有把苷转化出来，导致收率低，损失大。且前者用聚酰胺层析分离，但聚酰胺粒度较细，柱子易堵塞。

专利CN1724495A公开一种从中草药植物虎杖中制备白藜芦醇的方法，通过乙醇溶液提取，浓缩，乙酸乙酯萃取后用纤维素作为固定相进行柱层析，由于操作过程中需用超声波来超声溶解浸膏才能进行萃取，且乙酸乙酯萃取过程乳化现象很明显，损失大。尽管首次将纤维素作为固定相，但是还是难于推广使用。

专利CN1962592A公开一种从中药虎杖中分离纯化白藜芦醇苷和白藜芦醇的方法。用乙醇提取，大孔吸附树脂柱预分离，再进行高速逆流色谱法纯化，这一方法有机溶剂用量大，耗时长，成本高。

专利CN1513822A公开了一种从虎杖中提取白藜芦醇的工艺，其首先采用加入专用微生物进行生物转化提高虎杖白藜芦醇含量，利用40％乙醇与4-甲基-2-戊醇混合剂作为萃取溶剂，进行微波提取。本发明虽然简化了工艺和操作流程，缩短生产周期，降低成本，但是微波提取技术仅限于实验室操作。

专利CN101348805A公开了一种提取白藜芦醇新工艺。碱提取，提取液经过调pH值、用絮凝剂、澄清剂处理、酶解、过滤，沉淀物干燥后可得含量50％白藜芦醇；进一步将其用稀碱液洗，再用水洗至中性，然后溶于大量热水中，将水液在室温下放置，析出沉淀，过滤干燥后即得到白藜芦醇含量为98％的产品。碱提取液粘度大，过滤时间长，滤液损失大，能耗高，周期长，操作繁琐。

专利CN1621401A公开一种从虎杖中提取高纯度白藜芦醇的方法，是通过不同极性的溶剂经过多次回流提取而得，这种方法工艺复杂，溶剂量消耗大，生产周期长，溶剂回收困难。

专利CN1384088A公开了一种从虎杖植物中提取白藜芦醇的制备方法，通过有机溶剂提取出虎杖中的虎杖甙、经有机合成手段使其水解富集，将其与复合填充料按其配比、在专用的高压层析柱设备中加压后、利用高效液相色谱原理进行高压柱层析分离，用氯仿及乙酸乙酯梯度洗脱。本法操作繁琐，生产周期长，且洗脱过程使用毒性极大的氯仿。

专利CN1760166A公开一种从虎杖中提取纯化白藜芦醇的新方法，该方法采用水提取，再将提取物中白藜芦醇甙通过酸催化水解反应富集出来，而后将富集产物以一定配比上预先处理好的大孔吸附树脂柱进行分离纯化，用水和乙醇洗脱。虎杖苷微溶于水，白藜芦醇难溶于水，用水做为溶剂提取，虎杖苷提取不完全，且原料中的白藜芦醇未能提取出来。

近年来，有专利报道，用碱溶液进行提取，其缺点就是碱提取液黏度大，过滤速度很慢，易堵塞，过滤耗时长。专利CN101811939A公开一种罐组动态逆流提取白藜芦醇的工艺，采用碱提酸水解再醇沉、活性碳脱色出去部分杂质,在过树脂柱和硅胶柱。本发明由于采用罐组提取，设备占用空间大，提取溶剂为碱水，碱提液黏度较大，过滤困难，且水解后量大，后续处理设备压力大，能耗高。CN101805755A公开一种从虎杖中提取纯化白藜芦醇的工艺，其方法是利用虎杖的自身酶进行酶解后，发酵物经碱提酸沉，过柱。其工艺存在酶解时间长，酶解不充分，碱提液难于过滤的缺点。

为解决上述存在的问题，本发明提供了一种从植物虎杖根茎中提取白藜芦醇的新方法，该方法不需酶解，柱层析，直接用醇提取得到虎杖苷和白藜芦醇，然后加酸把虎杖苷上的糖苷键分解，再加碱中和多余的酸，放置析晶。此法操作简单，溶剂消耗小，生产周期短,成本低，收率高，适用于工业化大生产。

发明内容

本发明所述的方法是以植物虎杖根茎为原料，经提取、浓缩、水解、析晶、过滤、干燥而制得。操作步骤如下：

a. 将虎杖根茎粉碎。

b. 按1：8～1：20（m/v)虎杖粗粉与60～90％甲醇（乙醇）的比例对虎杖进行回流提取。

c. 浓缩至无醇味。

d. 浓缩液中加酸和稳定剂进行搅拌水解。

e. 调节水解液pH至中性。

f. 静置析晶，过滤，干燥晶体。

其中步骤a中粉碎粒度过10目筛，得粗粉。

其中步骤b中回流提取时间为1～3h、0.5～2h、0.5～1h,提取三次，提取温度控制在50℃～85℃之间。

其中步骤d所用的酸为硫酸、盐酸、乙酸、磷酸中的任一种，稳定剂为柠檬酸钠，水解温度为50℃～80℃之间，水解时间0.5～3小时。浓缩液：酸：稳定剂=100：0.5～5：1

其中步骤e中调pH所用的试剂为氢氧化钠、碳酸氢钠和碳酸钠、氧化钙、氢氧化钙的固体或溶液。

具体实施方式:

以下实施例用于进一步说明本发明，但本发明不限于下列实施例所包含的内容。

实施例一：取虎杖粗粉500g,加入65%的甲醇5000ml，在80℃～85℃回流提取3小时，过滤，收集第一次提取液。滤渣中加入65%的甲醇5000ml，在80℃～85℃回流提取2小时，过滤，收集第二次提取液。滤渣中加入65%的甲醇5000ml，在80℃～85℃回流提取1小时，过滤，收集第三次提取液。合并三次提取液，减压浓缩至无醇味。按浓缩液、盐酸与柠檬酸钠的体积比100：3：1的比例加入盐酸和柠檬酸钠，在75～80℃水浴中搅拌水解1小时，放冷，加10%氢氧化钠溶液调节pH至中性，放置过夜结晶，过滤，收集晶体进行减压干燥，得白藜芦醇8.7g。HPLC测定含量为51.18%。

实施例二：取虎杖粗粉500g,加入70%的甲醇4000ml，在80℃～85℃回流提取2小时，过滤，收集第一次提取液。滤渣中加入70%的甲醇4000ml，在80℃～85℃回流提取2小时，过滤，收集第二次提取液。滤渣中加入70%的甲醇4000ml，在80℃～85℃回流提取1小时，过滤，收集第三次提取液。合并三次提取液，减压浓缩至无醇味。按浓缩液、硫酸与柠檬酸钠的体积比100：2：1的比例加入硫酸和柠檬酸钠，在70～80℃水浴中搅拌水解2小时，放冷，加5%氢氧化钠溶液调节pH至中性，放置过夜结晶，过滤，收集晶体进行减压干燥，得白藜芦醇8.1g， HPLC测定含量为51.34%。

实施例三：取虎杖粗粉500g,加入80%的甲醇9000ml，在80℃～85℃回流提取2小时，过滤，收集第一次提取液。滤渣中加入80%的甲醇9000ml，在80℃～85℃回流提取2小时，过滤，收集第二次提取液。滤渣中加入80%的甲醇9000ml，在80℃～85℃回流提取1小时，过滤，收集第三次提取液。合并三次提取液，减压浓缩至无醇味。按浓缩液、盐酸与柠檬酸钠的体积比100：3：1的比例加入盐酸和柠檬酸钠，在70～80℃水浴中搅拌水解2小时，放冷，加氢氧化钠固体调节pH至中性，放置过夜结晶，过滤，收集晶体进行减压干燥，得白藜芦醇8.5g， HPLC测定含量为51.75%。

实施例四：虎杖粗粉500g,加入85%的甲醇7000ml，在80℃～85℃回流提取2小时，过滤，收集第一次提取液。滤渣中加入85%的甲醇7000ml，在80℃～85℃回流提取2小时，过滤，收集第二次提取液。滤渣中加入85%的甲醇7000ml，在80℃～85℃回流提取1小时，过滤，收集第三次提取液。合并三次提取液，减压浓缩至无醇味。按浓缩液、磷酸与柠檬酸钠的体积比100：3：1的比例加入磷酸和柠檬酸钠，在70～80℃水浴中搅拌水解2小时，放冷，加5%碳酸氢钠溶液调节pH至中性，放置过夜结晶，过滤，收集晶体进行减压干燥，得白藜芦醇8.7g，用HPLC测定含量为50.46%。

实施例五：虎杖粗粉5kg,加入85%的甲醇50L，在80℃～85℃回流提取2小时，过滤，收集第一次提取液。滤渣中加入85%的甲醇50L，在80℃～85℃回流提取2小时，过滤，收集第二次提取液。滤渣中加入85%的甲醇50L，在80℃～85℃回流提取1小时，过滤，收集第三次提取液。合并三次提取液，减压浓缩至无醇味。按浓缩液、盐酸与柠檬酸钠的体积比100：4：1的比例加入盐酸和柠檬酸钠，，在70～80℃搅拌水解2小时，放冷，加5%氢氧化钠溶液调节pH至中性，放置过夜结晶，过滤，收集晶体进行减压干燥，得白藜芦醇91g，用HPLC测定含量为51.27%。

实施例六：虎杖粗粉500kg,加入80%的甲醇5000L，在80℃～85℃回流提取2小时，过滤，收集第一次提取液。滤渣中加入80%的甲醇5000L，在80℃～85℃回流提取2小时，过滤，收集第二次提取液。滤渣中加入80%的甲醇5000L，在80℃～85℃回流提取1小时，过滤，收集第三次提取液。合并三次提取液，减压浓缩至无醇味。按100L浓缩液加入盐酸3L，加入柠檬酸钠1kg，在70～80℃搅拌水解2小时，放冷，加5%氢氧化钠溶液调节pH至中性，放置过夜结晶，过滤，收集晶体进行减压干燥，得白藜芦醇8.8kg，HPLC测定含量为52.34%。

实施例七：虎杖粗粉500kg,加入85%的甲醇4000L，在80℃～85℃回流提取3小时，过滤，收集第一次提取液。滤渣中加入85%的甲醇4000L，在80℃～85℃回流提取2小时，过滤，收集第二次提取液。滤渣中加入85%的甲醇4000L，在80℃～85℃回流提取1小时，过滤，收集第三次提取液。合并三次提取液，减压浓缩至无醇味。按浓缩液、盐酸与柠檬酸钠的体积比100：3：1的比例加入盐酸和柠檬酸钠，在70～75℃搅拌水解2小时，放冷，加氢氧化钠固体调节pH至中性，放置过夜结晶，过滤，收集晶体进行减压干燥，得白藜芦醇8.5kg，用HPLC测定含量为51.92%。

实施例七：虎杖粗粉500kg,加入85%的甲醇5500L，在80℃～85℃回流提取2小时，过滤，收集第一次提取液。滤渣中加入85%的甲醇5500L，在80℃～85℃回流提取2小时，过滤，收集第二次提取液。滤渣中加入85%的甲醇5500L，在80℃～85℃回流提取1小时，过滤，收集第三次提取液。合并三次提取液，减压浓缩至无醇味。按浓缩液、硫酸与柠檬酸钠的体积比100：3：1的比例加入硫酸和柠檬酸钠，在70～75℃水浴中搅拌水解2小时，放冷，加氢氧化钠固体调节pH至中性，放置过夜结晶，过滤，收集晶体进行减压干燥，得白藜芦醇8.7kg，用HPLC测定含量为51.51%。

Claims

1.一种从虎杖根茎中提取白藜芦醇的新方法，包括以下操作步骤：将虎杖根茎粉碎，加醇进行回流提取，提取液浓缩至无醇味，加酸和稳定剂进行加热水解，水解液调PH至中性，静置析晶，过滤，干燥晶体。

2.根据权利要求1所述从植物虎杖根茎中提取白藜芦醇的新方法，其特征在于虎杖需粉碎为粗粉，粒度过10目筛。

3.根据权利要求1所述从植物虎杖根茎中提取白藜芦醇的新方法，其特征在于虎杖不需进行酶解，直接以已粉碎的虎杖根茎为原料加醇进行提取。

4.根据权利要求1所述从植物虎杖根茎中提取白藜芦醇的新方法，其特征在于提取溶剂为60～90％甲醇或乙醇。

5.根据权利要求1所述从植物虎杖根茎中提取白藜芦醇的新方法，其特征在于虎杖原料与提取溶剂用量的比例控制在1：8～1：20（m/v)

根据权利要求1所述从植物虎杖根茎中提取白藜芦醇的新方法，其特征在于需提取三次，提取时间分别是1～3h、0.5～2h、0.5～1h，提取温度需控制在50℃～85℃之间。

6.根据权利要求1所述从植物虎杖根茎中提取白藜芦醇的新方法，其特征在于水解所用的酸为硫酸、盐酸、醋酸、磷酸中的任一种，所用稳定剂为柠檬酸钠，其水解温度应控制在50℃～80℃之间，水解时间也应控制0.5～3小时。

7.根据权利要求1所述从植物虎杖根茎中提取白藜芦醇的新方法，其特征在于浓缩液：酸：稳定剂的用量为100：0.5～5：1。

8.根据权利要求1所述从植物虎杖根茎中提取白藜芦醇的新方法，其特征在于调pH所用的试剂为氢氧化钠、碳酸氢钠和碳酸钠、氧化钙、氢氧化钙的固体或溶液。