CN102296063A - 一种用于提取植物dna的提取液及其提取方法 - Google Patents

一种用于提取植物dna的提取液及其提取方法 Download PDF

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郭涛
罗文龙
陈志强
刘永柱
王慧
饶得花
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Abstract

本发明公开了一种用于提取植物DNA的提取液及其提取方法,包括NaAc、EDTANa2、NaCl、PVP、SDS和水。本发明所述用于提取植物DNA的提取液提取效果好,可以有效去除细胞中的蛋白质及有机杂质,不含对人体有害的酚、氯仿等化合物,使用安全方便。本发明所述提取液用于提取植物DNA时快速简便,可在一个小时内完成提取,取得的DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。

Description

一种用于提取植物DNA的提取液及其提取方法
技术领域
    本发明涉及生物技术领域,具体涉及一种用于提取植物DNA的提取液及其提取方法。
背景技术
植物细胞中含有大量的多糖类物质,多糖类物质的性质与核酸的物理性质非常相似,在植物DNA提取的过程,处理不当,则极易与DNA共沉淀下来,并且难以分离,这将大大影响植物DNA的提取质量。此外,植物细胞中同样存在较多的蛋白质,蛋白质的存在同样会影响提取的植物DNA质量。
为降低或消除多糖类物质和蛋白质对植物DNA提取的影响,现有的植物DNA提取过程中,需要进行多步操作,以尽可能地去除多糖类物质和蛋白质。普遍采用的方法有:
(1)在提取液中添加低浓度乙醇,之后再通过酚/氯仿等抽提,以去除多糖和蛋白质,为保证处理效果,一般需要重复操作至少一次。多次处理有利于提高植物DNA的提取质量,但是耗时较长,DNA降解的可能性也相应地会增加,得到的DNA片段一般较短。
(2)使用CTAB,并配合使用β-巯基乙醇,适当选择其浓度,可以有效地去除多糖并使蛋白质变性,这种操作保温时间较长,同样不利于得到大片段的DNA。
CN101302509A公开了一种提取植物DNA的方法,使用乙二胺四乙酸、NaCl和水配制成提取液Ⅰ,使用乙二胺四乙酸、NaCl、CTAB、十二烷基肌氨酸钠、巯基乙醇靠等配制成提取液Ⅱ,多次浸提、离心分离,降低了多糖对植物DNA提取的影响,但是整个操作复杂,耗时长,大大增加了DNA降解的可能性,根据本领域技术人员的基本常识可知,这种操作难以得到大片段的DNA。
CN101914522A公开了红树植物DNA的提取方法,(1)、取叶片研磨,加入预热的2%CTAB提取液溶解,然后加入2%体积的PVP;(2)、温浴后加入少量RNase保温,再加入氯仿-异戊醇混合液后,常温下高速离心;(3)、取上清液转入离心管,加入预热的2%CTAB提取液,再加入氯仿-异戊醇混合液混合后,常温下高速离心;(4)、取上清液再转入离心管,加入NaCl溶液,并加入冰冷异丙醇混合后,低温条件下放置沉淀DNA;(5)、低温下高速离心,弃上清液,回收沉淀,用乙醇洗涤风干后加入TE缓冲液,置于低温下保存。该方法能有效除去DNA提取过程中产生的多糖和单宁,得到的红树植物DNA含量大、纯度高。这种方法的同样较为复杂。
发明内容
    本发明的目的在于提供一种安全快速的用于提取植物DNA的提取液。
    本发明另一目的在于提供上述提取液在提取植物DNA时的方法。
    本发明上述目的通过以下技术方案予以实现:
    一种用于提取植物DNA的提取液,包括如下组分:pH为4.8的NaAc 100~150mmol/L、EDTANa2  20~50 mmol/L、NaCl 500~1000mmol/L、1~2wt%PVP、1~1.4wt%的SDS,余量为水。
本发明上述提取液用于提取植物DNA的方法包括如下步骤:
(1)将植物组织破碎,权利要求1所述提取液混合,加入2~2.5mol/L的KAc溶液,混合均匀,得到DNA粗提液;
(2)将DNA粗提液离心,沉积其中的杂质,取上清;
(3)将上清中加入DNA絮凝剂,絮凝DNA,离心得到DNA沉淀;
(4)将DNA沉淀洗涤干净,得到植物DNA。
作为一种优选方案,上述提取方法中,步骤(1)中所述植物组织与提取液的比例为50~200mg鲜重的植物组织/100μl提取液;所述提取液与KAc溶液的体积比为100:30~50。
作为一种优选方案,上述提取方法中,步骤(2)中所述离心时的离心力为12000~14000g。
作为一种优选方案,上述提取方法中,步骤(3)中所述DNA絮凝剂为异丙醇、乙醇中的至少一种。
与现有技术相比,本发明具有如下有益效果:
(1)本发明用于植物DNA提取的提取液,提取效果好,可以效地去除细胞中的蛋白及其有机杂质;不含对人体有害的酚、氯仿等化合物,使用安全方便。
(2)本发明的提取方法,快速简便,可在一个小时内完成植物DNA的提取,取得的DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。
附图说明
    图1为利用本发明方法提取的水稻DNA浓度测定。
图2为利用本发明方法提取的玉米DNA浓度测定。
图3 为不同植物新鲜叶片提取的基因组DNA电泳图。1:番薯,2:水稻,3:花生,4:玉米,5:甘蔗,M:DNA marker。
具体实施方式
    以下结合实施例来进一步解释本发明,但实施例并不对本发明做任何形式的限定。
以下实施例中,如无特别说明,百分比均指质量百分比。
实施例1
用于植物DNA提取的提取液,含有120mmol/L的pH 4.8 NaAc、30mmol/L的EDTANa2、800mmol/L的NaCl、1.5%PVP、1.2%的SDS,余量为水。
实施例2
用于植物DNA提取的提取液,含有150mmol/L的pH 4.8 NaAc、20mmol/L的EDTANa2、1000mmol/L的NaCl、1%PVP、1.4%的SDS,余量为水。
实施例3
用于植物DNA提取的提取液,含有100mmol/L的pH 4.8 NaAc、50mmol/L的EDTANa2、500mmol/L的NaCl、2%PVP、1%的SDS,余量为水。
实施例4
用于植物DNA提取的提取液,含有100mmol/L的pH 4.8 NaAc、25mmol/L的EDTANa2、500mmol/L的NaCl、1.5%PVP、1%的SDS,余量为水。
实施例5
用于植物DNA提取的提取液,含有150mmol/L的pH 4.8 NaAc、50mmol/L的EDTANa2、1000mmol/L的NaCl、2%PVP、1.4%的SDS,余量为水。
实施例6
取番薯叶片新鲜组织800mg,与400μl实施例1的提取液混合,加入200μl浓度为2.5 mol/L的KAc溶液,混合均匀,得到DNA粗提液;
将DNA粗提液于13000g离心,沉积其中的杂质,取上清;
在上清中加入0.7倍体积的DNA絮凝剂乙醇,将DNA絮凝,13000g离心5min得到DNA沉淀;
加入700ul 70%的乙醇,振荡均匀,13000g离心2min,弃上清,重复操作1次,将DNA沉淀洗涤干净,得到植物DNA。
实施例7
取水稻叶片新鲜组织200mg,与400μl实施例2的提取液混合,加入160μl浓度为2.5 mol/L的KAc溶液,混合均匀,得到DNA粗提液;
将DNA粗提液于12000g离心,沉积其中的杂质,取上清;
在上清中加入0.7倍体积的DNA絮凝剂乙醇,将DNA絮凝,12000g离心5min得到DNA沉淀;
加入700ul 70%的乙醇,振荡均匀,12000g离心2min,弃上清,重复操作1次,将DNA沉淀洗涤干净,得到植物DNA。
实施例8
取花生叶片新鲜组织200mg,与400μl实施例3的提取液混合,加入130μl浓度为2 mol/L的KAc溶液,混合均匀,得到DNA粗提液;
将DNA粗提液于13000g离心,沉积其中的杂质,取上清;
在上清中加入0.7倍体积的DNA絮凝剂异丙醇,将DNA絮凝,13000g离心5min得到DNA沉淀;
加入700ul 70%的乙醇,振荡均匀,13000g离心2min,弃上清,重复操作1次,将DNA沉淀洗涤干净,得到植物DNA。
实施例9
取玉米叶片新鲜组织400mg,与400μl实施例4的提取液混合,加入200μl浓度为2.5 mol/L的KAc溶液,混合均匀,得到DNA粗提液;
将DNA粗提液于14000g离心,沉积其中的杂质,取上清;
在上清中加入0.7倍体积的DNA絮凝剂乙醇,将DNA絮凝,14000g离心5min得到DNA沉淀;
加入700ul 70%的乙醇,振荡均匀,14000g离心2min,弃上清,重复操作1次,将DNA沉淀洗涤干净,得到植物DNA。
实施例10
取甘蔗叶片新鲜组织200mg,与400μl实施例5的提取液混合,加入120μl浓度为2 mol/L的KAc溶液,混合均匀,得到DNA粗提液;
将DNA粗提液于13000g离心,沉积其中的杂质,取上清;
在上清中加入0.7倍体积的DNA絮凝剂乙醇,将DNA絮凝,13000g离心5min得到DNA沉淀;
加入700ul 70%的乙醇,振荡均匀,13000g离心2min,弃上清,重复操作1次,将DNA沉淀洗涤干净,得到植物DNA。

Claims (6)

1.一种用于提取植物DNA的提取液,其特征在于包括如下组分:pH为4.8的NaAc 100~150mmol/L、EDTANa2  20~50 mmol/L、NaCl 500~1000mmol/L、1~2wt%PVP、1~1.4wt%的SDS,余量为水。
2.权利要求1所述提取液用于提取植物DNA的方法,其特征在于包括如下步骤:
(1)将植物组织破碎,权利要求1所述提取液混合,加入2~2.5mol/L的KAc溶液,混合均匀,得到DNA粗提液;
(2)将DNA粗提液离心,沉积其中的杂质,取上清;
(3)将上清中加入DNA絮凝剂,絮凝DNA,离心得到DNA沉淀;
(4)将DNA沉淀洗涤干净,得到植物DNA。
3.根据权利要求2所述提取液用于提取植物DNA的方法,其特征在于步骤(1)中所述植物组织与提取液的比例为50~200mg鲜重的植物组织/100μl提取液。
4.根据权利要求2所述提取液用于提取植物DNA的方法,其特征在于步骤(1)中所述提取液与KAc溶液的体积比为100:30~50。
5.根据权利要求2所述提取液用于提取植物DNA的方法,其特征在于步骤(2)中所述离心时的离心力为12000~14000g。
6.根据权利要求2所述提取液用于提取植物DNA的方法,其特征在于步骤(3)中所述DNA絮凝剂为异丙醇、乙醇中的至少一种。
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