CN102296063A - 一种用于提取植物dna的提取液及其提取方法 - Google Patents

一种用于提取植物dna的提取液及其提取方法 Download PDF

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郭涛
罗文龙
陈志强
刘永柱
王慧
饶得花
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Abstract

本发明公开了一种用于提取植物DNA的提取液及其提取方法，包括NaAc、EDTANa2、NaCl、PVP、SDS和水。本发明所述用于提取植物DNA的提取液提取效果好，可以有效去除细胞中的蛋白质及有机杂质，不含对人体有害的酚、氯仿等化合物，使用安全方便。本发明所述提取液用于提取植物DNA时快速简便，可在一个小时内完成提取，取得的DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。

Description

一种用于提取植物DNA的提取液及其提取方法
技术领域
    本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种用于提取植物DNA的提取液及其提取方法。
背景技术
植物细胞中含有大量的多糖类物质，多糖类物质的性质与核酸的物理性质非常相似，在植物DNA提取的过程，处理不当，则极易与DNA共沉淀下来，并且难以分离，这将大大影响植物DNA的提取质量。此外，植物细胞中同样存在较多的蛋白质，蛋白质的存在同样会影响提取的植物DNA质量。
为降低或消除多糖类物质和蛋白质对植物DNA提取的影响，现有的植物DNA提取过程中，需要进行多步操作，以尽可能地去除多糖类物质和蛋白质。普遍采用的方法有：
（1）在提取液中添加低浓度乙醇，之后再通过酚/氯仿等抽提，以去除多糖和蛋白质，为保证处理效果，一般需要重复操作至少一次。多次处理有利于提高植物DNA的提取质量，但是耗时较长，DNA降解的可能性也相应地会增加，得到的DNA片段一般较短。
（2）使用CTAB，并配合使用β-巯基乙醇，适当选择其浓度，可以有效地去除多糖并使蛋白质变性，这种操作保温时间较长，同样不利于得到大片段的DNA。
CN101302509A公开了一种提取植物DNA的方法，使用乙二胺四乙酸、NaCl和水配制成提取液Ⅰ，使用乙二胺四乙酸、NaCl、CTAB、十二烷基肌氨酸钠、巯基乙醇靠等配制成提取液Ⅱ，多次浸提、离心分离，降低了多糖对植物DNA提取的影响，但是整个操作复杂，耗时长，大大增加了DNA降解的可能性，根据本领域技术人员的基本常识可知，这种操作难以得到大片段的DNA。
CN101914522A公开了红树植物DNA的提取方法，(1)、取叶片研磨，加入预热的2%CTAB提取液溶解，然后加入2％体积的PVP；(2)、温浴后加入少量RNase保温，再加入氯仿-异戊醇混合液后，常温下高速离心；(3)、取上清液转入离心管，加入预热的2%CTAB提取液，再加入氯仿-异戊醇混合液混合后，常温下高速离心；(4)、取上清液再转入离心管，加入NaCl溶液，并加入冰冷异丙醇混合后，低温条件下放置沉淀DNA；(5)、低温下高速离心，弃上清液，回收沉淀，用乙醇洗涤风干后加入TE缓冲液，置于低温下保存。该方法能有效除去DNA提取过程中产生的多糖和单宁，得到的红树植物DNA含量大、纯度高。这种方法的同样较为复杂。
发明内容
    本发明的目的在于提供一种安全快速的用于提取植物DNA的提取液。
    本发明另一目的在于提供上述提取液在提取植物DNA时的方法。
    本发明上述目的通过以下技术方案予以实现：
    一种用于提取植物DNA的提取液，包括如下组分：pH为4.8的NaAc 100~150mmol/L、EDTANa2  20~50 mmol/L、NaCl 500~1000mmol/L、1~2wt%PVP、1~1.4wt%的SDS，余量为水。
本发明上述提取液用于提取植物DNA的方法包括如下步骤：
（1）将植物组织破碎，权利要求1所述提取液混合，加入2~2.5mol/L的KAc溶液，混合均匀，得到DNA粗提液；
（2）将DNA粗提液离心，沉积其中的杂质，取上清；
（3）将上清中加入DNA絮凝剂，絮凝DNA，离心得到DNA沉淀；
（4）将DNA沉淀洗涤干净，得到植物DNA。
作为一种优选方案，上述提取方法中，步骤（1）中所述植物组织与提取液的比例为50~200mg鲜重的植物组织/100μl提取液；所述提取液与KAc溶液的体积比为100:30~50。
作为一种优选方案，上述提取方法中，步骤（2）中所述离心时的离心力为12000~14000g。
作为一种优选方案，上述提取方法中，步骤（3）中所述DNA絮凝剂为异丙醇、乙醇中的至少一种。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
（1）本发明用于植物DNA提取的提取液，提取效果好，可以效地去除细胞中的蛋白及其有机杂质；不含对人体有害的酚、氯仿等化合物，使用安全方便。
（2）本发明的提取方法，快速简便，可在一个小时内完成植物DNA的提取，取得的DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。
附图说明
    图1为利用本发明方法提取的水稻DNA浓度测定。
图2为利用本发明方法提取的玉米DNA浓度测定。
图3 为不同植物新鲜叶片提取的基因组DNA电泳图。1：番薯，2：水稻，3：花生，4：玉米，5：甘蔗，M：DNA marker。
具体实施方式
    以下结合实施例来进一步解释本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。
以下实施例中，如无特别说明，百分比均指质量百分比。
实施例1
用于植物DNA提取的提取液，含有120mmol/L的pH 4.8 NaAc、30mmol/L的EDTANa2、800mmol/L的NaCl、1.5%PVP、1.2%的SDS，余量为水。
实施例2
用于植物DNA提取的提取液，含有150mmol/L的pH 4.8 NaAc、20mmol/L的EDTANa2、1000mmol/L的NaCl、1%PVP、1.4%的SDS，余量为水。
实施例3
用于植物DNA提取的提取液，含有100mmol/L的pH 4.8 NaAc、50mmol/L的EDTANa2、500mmol/L的NaCl、2%PVP、1%的SDS，余量为水。
实施例4
用于植物DNA提取的提取液，含有100mmol/L的pH 4.8 NaAc、25mmol/L的EDTANa2、500mmol/L的NaCl、1.5%PVP、1%的SDS，余量为水。
实施例5
用于植物DNA提取的提取液，含有150mmol/L的pH 4.8 NaAc、50mmol/L的EDTANa2、1000mmol/L的NaCl、2%PVP、1.4%的SDS，余量为水。
实施例6
取番薯叶片新鲜组织800mg，与400μl实施例1的提取液混合，加入200μl浓度为2.5 mol/L的KAc溶液，混合均匀，得到DNA粗提液；
将DNA粗提液于13000g离心，沉积其中的杂质，取上清；
在上清中加入0.7倍体积的DNA絮凝剂乙醇，将DNA絮凝，13000g离心5min得到DNA沉淀；
加入700ul 70%的乙醇，振荡均匀，13000g离心2min，弃上清，重复操作1次，将DNA沉淀洗涤干净，得到植物DNA。
实施例7
取水稻叶片新鲜组织200mg，与400μl实施例2的提取液混合，加入160μl浓度为2.5 mol/L的KAc溶液，混合均匀，得到DNA粗提液；
将DNA粗提液于12000g离心，沉积其中的杂质，取上清；
在上清中加入0.7倍体积的DNA絮凝剂乙醇，将DNA絮凝，12000g离心5min得到DNA沉淀；
加入700ul 70%的乙醇，振荡均匀，12000g离心2min，弃上清，重复操作1次，将DNA沉淀洗涤干净，得到植物DNA。
实施例8
取花生叶片新鲜组织200mg，与400μl实施例3的提取液混合，加入130μl浓度为2 mol/L的KAc溶液，混合均匀，得到DNA粗提液；
将DNA粗提液于13000g离心，沉积其中的杂质，取上清；
在上清中加入0.7倍体积的DNA絮凝剂异丙醇，将DNA絮凝，13000g离心5min得到DNA沉淀；
加入700ul 70%的乙醇，振荡均匀，13000g离心2min，弃上清，重复操作1次，将DNA沉淀洗涤干净，得到植物DNA。
实施例9
取玉米叶片新鲜组织400mg，与400μl实施例4的提取液混合，加入200μl浓度为2.5 mol/L的KAc溶液，混合均匀，得到DNA粗提液；
将DNA粗提液于14000g离心，沉积其中的杂质，取上清；
在上清中加入0.7倍体积的DNA絮凝剂乙醇，将DNA絮凝，14000g离心5min得到DNA沉淀；
加入700ul 70%的乙醇，振荡均匀，14000g离心2min，弃上清，重复操作1次，将DNA沉淀洗涤干净，得到植物DNA。
实施例10
取甘蔗叶片新鲜组织200mg，与400μl实施例5的提取液混合，加入120μl浓度为2 mol/L的KAc溶液，混合均匀，得到DNA粗提液；
将DNA粗提液于13000g离心，沉积其中的杂质，取上清；
在上清中加入0.7倍体积的DNA絮凝剂乙醇，将DNA絮凝，13000g离心5min得到DNA沉淀；
加入700ul 70%的乙醇，振荡均匀，13000g离心2min，弃上清，重复操作1次，将DNA沉淀洗涤干净，得到植物DNA。

Claims (6)

1.一种用于提取植物DNA的提取液，其特征在于包括如下组分：pH为4.8的NaAc 100~150mmol/L、EDTANa2  20~50 mmol/L、NaCl 500~1000mmol/L、1~2wt%PVP、1~1.4wt%的SDS，余量为水。
2.权利要求1所述提取液用于提取植物DNA的方法，其特征在于包括如下步骤：
（1）将植物组织破碎，权利要求1所述提取液混合，加入2~2.5mol/L的KAc溶液，混合均匀，得到DNA粗提液；
（2）将DNA粗提液离心，沉积其中的杂质，取上清；
（3）将上清中加入DNA絮凝剂，絮凝DNA，离心得到DNA沉淀；
（4）将DNA沉淀洗涤干净，得到植物DNA。
3.根据权利要求2所述提取液用于提取植物DNA的方法，其特征在于步骤（1）中所述植物组织与提取液的比例为50~200mg鲜重的植物组织/100μl提取液。
4.根据权利要求2所述提取液用于提取植物DNA的方法，其特征在于步骤（1）中所述提取液与KAc溶液的体积比为100:30~50。
5.根据权利要求2所述提取液用于提取植物DNA的方法，其特征在于步骤（2）中所述离心时的离心力为12000~14000g。
6.根据权利要求2所述提取液用于提取植物DNA的方法，其特征在于步骤（3）中所述DNA絮凝剂为异丙醇、乙醇中的至少一种。
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