CN102283839A

CN102283839A - 血根碱在制备提高顺铂抗肿瘤疗效的增敏药物中的应用

Info

Publication number: CN102283839A
Application number: CN2011102696112A
Authority: CN
Inventors: 徐加英; 樊赛军
Original assignee: Suzhou University
Current assignee: Suzhou University
Priority date: 2011-09-13
Filing date: 2011-09-13
Publication date: 2011-12-21

Abstract

本发明属于肿瘤化疗的增敏药物领域，涉及血根碱的新用途，即在制备提高顺铂化学治疗疗效的增敏药物中的应用。本发明所述血根碱可以用于制备提高顺铂化学治疗疗效的增敏药物，可以在无毒副作用的低浓度下，提高肿瘤细胞的顺铂化学治疗的疗效。无毒副作用浓度的血根碱处理后，联合顺铂化学治疗时，与单独的顺铂化学治疗相比，细胞死亡率提高了100%，几乎增长了1倍。

Description

血根碱在制备提高顺铂抗肿瘤疗效的增敏药物中的应用

技术领域

本发明属于肿瘤化疗增敏药物领域，涉及血根碱的新用途，即在制备提高抗肿瘤药物顺铂疗效的增敏药物中的应用。

背景技术

化疗是利用化学药物杀死肿瘤细胞、抑制肿瘤细胞的生长繁殖和促进肿瘤细胞的分化的一种治疗方式，它是一种全身性治疗手段对原发灶、转移灶和亚临床转移灶均有治疗作用，但是化疗治疗肿瘤在杀伤肿瘤细胞的同时，也将正常细胞和免疫(抵抗)细胞一同杀灭。化疗后常常会出现免疫功能下降，白细胞和血小板下降，甚者红细胞、血色素下降等骨髓抑制表现，有食欲下降、饮食量减少、恶心、呕吐、腹胀、腹痛、腹泻或便秘等消化道症状，以及一系列的肾脏毒性和肝脏毒性。因此特别是中晚期肿瘤或身体虚弱的病人，盲目使用化疗，不仅会导致病情迅速恶化，更会加速病人的死亡。

在临床上常用的抗肿瘤化学治疗药物有70多种。而且，新药还在不断地发展。因此，放射治疗是恶性肿瘤的主要治疗手段和辅助治疗方法，是目前恶性肿瘤治疗中不可缺少的治疗方法。然而由于化学治疗药物的非特异性以及给药途径的限制，化学治疗药物也将产生正常组织和器官的损伤，从而带来的副作用也限制了化学治疗药物在恶性肿瘤治疗中的广泛应用。为了减轻肿瘤治疗中化学治疗药物对正常组织人体的危害，研究能提高化学治疗药物疗效，降低治疗中化学治疗药物的用药剂量，从而降低正常组织和细胞的损伤的增敏药物是化学治疗药物肿瘤治疗中重要的研究方向。

我国有几千味传统天然药物历经数千年临床，为寻找有效预防药物提供了丰富的药源，因此从天然传统药物中筛选治疗或辅助治疗肿瘤的药物，不仅可行，而且非常经济。

血根碱主要存在于白屈菜的全草、紫堇的块、根博落回的全草、血水草的地上部分。它具有非常广泛的药理作用，早期的研究发现它具有抗炎、抗菌、抗氧化并对中枢神经有麻醉作用，另外还有抑制胆碱酯酶活性，加强心脏活动、刺激唾液分泌，并具有利尿、外周抗肾上腺素解交感作用。被中医和北美的传统医学使用已经有几个世纪。近年来研究发现，血根碱还具有很好的抗肿瘤作用而且有广谱的抗肿瘤活性，而且对正常细胞没有毒性作用。但未见血根碱与常规化疗药联合作用是否可以增加其疗效降低其毒副作用的研究报道。

所述血根碱的化学名称为3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltetrazolium bromide)，分子式为C₂₀H₁₄ClNO₄·xH₂O，其结构式如下所示：

所述血根碱易溶在二甲亚砜、丙酮、乙醇、甲醇、乙醚及水等。其熔点为278-279℃。现有技术中未见任何有关所述血根碱具有提高顺铂肿瘤治疗疗效的增敏作用方面的报道。

发明内容

本发明的发明目的是提供血根碱的新用途，即在制备提高顺铂肿瘤治疗疗效的增敏药物的应用。

为达到上述发明目的，本发明采用的技术方案是：血根碱在制备提高顺铂肿瘤治疗疗效的增敏药物中的应用。

上述技术方案中，将无毒副作用浓度的血根碱直接加到正常细胞和肿瘤细胞培养液中，所述无毒副作用浓度的血根碱的浓度小于等于0.5μmol/L，处理24小时后采用MTT细胞染色法检测细胞生长和存活率，结果发现：小于0.5μmol/L的血根碱对正常细胞和肿瘤细胞的生长都不产生任何的影响。采用无毒副作用浓度的0.5μmol/L的血根碱处理肺癌H446细胞24小时后，再在细胞培养液中加入不同剂量(0，3μg/ml和6μg/ml)顺铂，并继续培养24小时，最后采用台盼蓝染色法检测细胞存活率。研究结果表明：无毒副作用浓度的血根碱(0.5μmol/L)处理可以明显提高肺癌H446细胞对顺铂的敏感性。

因此，本发明要求保护血根碱在制备提高顺铂抗肿瘤疗效的增敏药物中的应用，所述提高顺铂抗肿瘤疗效的增敏药物可在对肿瘤细胞生长无任何明显作用的用药浓度条件下，提高顺铂抗肿瘤的疗效。优选的技术方案中，所述肿瘤为肺癌。

本发明所述的增敏包括能够增加肿瘤细胞对于化疗药物敏感性的作用。

本发明同时要求保护一种能提高顺铂抗肿瘤疗效的增敏药物，其主要活性成分为血根碱。

由于上述技术方案运用，本发明与现有技术相比具有下列优点：

1.本发明首次发现血根碱可以在无毒副作用下提高顺铂抗肿瘤的疗效，因此，血根碱可以用于制备提高顺铂抗肿瘤疗效的增敏药物，在无毒副作用的低浓度下，显著性地提高肿瘤细胞对顺铂治疗的敏感性。

附图说明

图1是不同浓度血根碱处理对肺癌细胞生长的影响；

图2是实施例一中血根碱预处理联合顺铂对肿瘤细胞存活率的影响。

具体实施方式

下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述：

(1)材料：人类肺癌H446细胞购于美国ATCC公司。血根碱(≥98.0％，型号：84480)、胰酶、活细胞代谢物还原剂噻唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMS O)购于美国Sigma公司，D-MEM培养基和血清购于Gibcol公司。倒置CKX41显微镜和C-7070数码相机购于OLYMPUS公司。

血根碱由DMSO溶解制备成2mmol/L的储备液，-20℃保存备用。用前用完全培养基配置成所需浓度。

(2)细胞培养：取对数生长期的肺癌细胞接种并培养于37℃、含5％CO₂饱和湿度条件下24小时。直接采用培养液稀释血根碱到实验所需浓度。对照组则仅加DMSO，其浓度与最高血根碱药物浓度组一致，但所有实验中DMSO含量均低于＜1/10⁴。

(3)血根碱无毒剂量的检查：用0.25％的胰酶消化对数生长期的肺癌H446细胞制备单细胞悬液，将5×10⁴/ml的肺癌细胞分别接种于96孔培养板，每孔接种200μl。在37℃、含5％CO₂和饱和湿度条件培养24小时后，加入浓度分别为0、0.25、0.5、0.75、1、1.25和1.5μmol/L的血根碱，每一浓度设6个复孔。然后在细胞继续培养20小时后，加入20μL浓度为5mg/ml的MTT，继续培养4小时后轻轻吸掉培养基。加入150μL的DMSO振荡溶解10分钟。在酶标仪上选取570nm主波长和630nm参考波长测定吸光值，对照组细胞存活率设为100％，其余各组细胞存活率＝(各浓度组吸光值/对照组吸光值)×100％。独立实验重复3次以上，实验数据均采用SP S S统计软件计算IC₁₀值，有90％以上的细胞存活的药物浓度为无毒或低毒剂量，为后续实验确定药物的使用浓度。结果见图1。

(4)血根碱与顺铂联合用协同抗肿瘤作用：将处于对数生长期的人肺癌细胞系H446(5×10⁴/mL)接种至6孔板中，培养24小时后加入无毒浓度(0.5μmol/L)的血根碱处理24小时，每一浓度设3个复孔。然后加入不同剂量(0，3μg/ml和6μg/ml)的顺铂。细胞继续培养24小时后，采用台盼蓝染色法，计算细胞存活率及细胞死亡率。对照组细胞存活率设为100％，其余各组细胞存活率＝(各浓度组活细胞数/对照组活细胞数)×100％。所得结果如图2所示，图2为无毒副作用浓度血根碱预处理对顺铂处理后肺癌细胞H446细胞存活率及细胞死亡率的影响图，其中，sanguinarine为血根碱，cisplatin为顺铂。数据为来自三个独立实验结果的平均值±标准差。a与对照组比较p＜0.05；b与对照组比较p＜0.01；c血根碱+顺铂3μg/ml与顺铂3μg/ml比较p＜0.01；d血根碱+顺铂6μg/ml与顺铂6μg/ml比较p＜0.01。从图2可以看出，无毒副作用浓度0.5μmol/L的血根碱处理后，联合顺铂化学治疗时，3μg/ml和6μg/ml顺铂组的细胞死亡率分别从(14.88±1.62)％增加至(30.64±1.88)％，(p＝0.0002)和从(36.90±2.23)％增加至(69.51±7.41)％，(p＝0.0009)细胞死亡率几乎都增长了1倍。因此，采用无毒副作用浓度0.5μmol/L的血根碱预处理可以明显提高肿瘤细胞的顺铂化学治疗的疗效。

Claims

1.血根碱在制备提高顺铂抗肿瘤疗效的增敏药物中的应用。

2. 一种提高顺铂抗肿瘤疗效的增敏药物，其特征在于，所述提高顺铂抗肿瘤疗效的增敏药物的主要活性成分为血根碱。