CN102397273A - 穿心莲内酯的医药新用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药技术领域，涉及穿心莲内酯的医药新用途，具体涉及穿心莲内酯在制备用于治疗恶性胶质瘤药物中的新用途。穿心莲内酯体内及体外可抑制人恶性胶质瘤细胞的生长，其机制涉及下调PI3K/Akt信号活性，进而诱导人恶性胶质瘤细胞周期阻滞于G2/M期。穿心莲内酯可制备肠道及非肠道给药剂型，用于人恶性胶质瘤的的治疗。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及穿心莲内酯的医药新用途，具体涉及其在制备治疗胶质瘤药物中的新用途。
背景技术
恶性胶质瘤是颅内最常见的恶性肿瘤，手术治疗以及放射治疗效果都不理想。目前化学治疗是临床治疗恶性胶质瘤的主要手段。恶性胶质瘤发病涉及多种原癌基因和抑癌基因结构与功能的异常,本质上是一种多基因异常性疾病。表现为正常生长调控异常, 出现无限增殖和凋亡抑制, 从而导致细胞异常蓄积, 乃至肿瘤形成，有文献表明，PI3K/Akt信号通路在恶性胶质瘤细胞中过度激活。
PI3K/Akt信号通路一直以来被广泛关注，目前我国PI3K/Akt信号活性抑制剂专利有14项。PI3K/Akt信号可以调节细胞的许多生理功能：细胞周期、细胞迁移和侵袭、细胞生存，据报道70%的胶质瘤中存在PI3K/Akt信号的超常激活，因此PI3K/Akt信号抑制剂可以成为治疗胶质瘤的一个突破口。2006年礼来公司的Enzastaurin获准在欧美等地作为治疗胶质瘤的孤儿药开展三期临床试验。这种名为“Enzastaurin”的新药是一种口服PI3K/Akt信号抑制剂，它通过降低细胞增殖能力、加速肿瘤细胞凋亡以及抑制肿瘤诱发的血管生成等多种机制抑制肿瘤生长。
穿心莲是爵床科植物的地上部分，它是一种常用中药，味苦性寒，归心肺大肠膀胱经。《泉州本草》 记载其能“清热解毒、消炎退肿、治咽喉炎症、痢疾、高热”，属清热解毒药。穿心莲内酯是穿心莲的主要成分之一，它分子量是350.44，呈方菱形或片状结晶。穿心莲内酯有广泛的药理作用，它不仅具有解热抗炎、抗病毒和调节免疫的作用，而且具有抗肿瘤作用，在体内、体外均有抑制多种肿瘤增殖和诱导分化的作用。作用机理涉及①诱导肿瘤细胞凋亡；②阻滞细胞周期于G0/G1期；③抑制肿瘤血管生成等。然而目前对于穿心莲内酯在恶性胶质瘤治疗中的应用及作用机制均未见报道。
发明内容
本发明首次发现穿心莲内酯可通过全新的机制产生抗恶性胶质瘤作用，从而可制备用于治疗人恶性胶质瘤的药物。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
穿心莲内酯可诱导恶性胶质瘤U251、U87细胞周期阻滞于G2/M期从而抑制细胞生长；能够在体外对恶性胶质瘤U251、U87细胞生长具有抑制作用；穿心莲内酯体内对荷胶质瘤动物模型肿瘤生长具有抑制作用；穿心莲内酯诱导G2/M周期阻滞与下调Cdk1和Cdc25C蛋白表达有关；还可以作为PI3K/Akt信号抑制剂通过抑制PI3K/Akt信号产生周期阻滞及增殖抑制作用。
穿心莲内酯可与临床上接受的赋形剂混合制成组合物，用于制备治疗恶性肿瘤的药物。
附图说明
图1为穿心莲内酯体外对恶性胶质瘤U251、U87细胞生长的抑制作用；
图2为穿心莲内酯对荷胶质瘤动物模型肿瘤生长的抑制作用；
图3为穿心莲内酯可诱导恶性胶质瘤U251、U87细胞周期阻滞于G2/M期；
图4为穿心莲内酯对恶性胶质瘤细胞G2/M周期调控蛋白表达的影响；
图5为穿心莲内酯可抑制恶性胶质瘤细胞PI3K/Akt信号活性；
图6为PI3K/Akt信号抑制剂LY294002可增强穿心莲内酯诱导的增殖抑制、G2/M周期阻滞以及Cdk1和Cdc25C蛋白下调作用。
具体实施方式
实施例 1、穿心莲内酯体外对恶性胶质瘤U251、U87细胞生长的抑制作用
1实验方法
U251、U87细胞贴壁生长于含10％胎牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素、0.2%NaHCO3 的RPMI-1640培养液中，置于含5％CO2、饱和湿度、37℃培养箱里培养，隔天换培养液传代培养。
取对数生长期的贴壁肿瘤细胞配制成6×104个/mL 浓度，每孔100μl接种于96孔板中培养过夜，待细胞充分贴壁后，除去原有的培养液，加入不同浓度穿心莲内酯（沈阳药科大学天然药物研究室提供）、PI3K/Akt信号特异抑制剂LY294002（5μM、10μM、20μM，阳性对照）或DMSO（终浓度0.1%，阴性对照），每孔100μl。37 ℃分别培养48小时、72小时，培养结束后每孔加入5mg/ml MTT 15μl继续37℃培养4小时后小心弃去上清液，加DMSO 150μl /well，振荡10分钟以充分溶解结晶物。在酶标仪下测定OD值，按公式计算药物对肿瘤细胞体外增殖的抑制率（Inhibition Rate，IR）。
2实验结果
由图1可见，穿心莲内酯（Andro）在10-100μM浓度范围内作用48或72小时对体外培养的人恶性胶质瘤细胞U251、U87的增殖有抑制作用，且其增殖抑制作用呈时间及浓度依赖性。作用72h的IC50为45μM。阳性对照药LY294002对人恶性胶质瘤细胞U251也呈现剂量依赖性的增殖抑制作用。
实施例 2、穿心莲内酯体内对荷胶质瘤动物模型肿瘤生长的抑制作用
1实验方法
六周龄雌性裸鼠15只，购于中国军事医学科学院，恒温恒湿饲养于无菌系统。分为三组，空白对照组，DMSO组和穿心莲内酯（Andro）给药组，每组8只。取U251细胞，调至细胞浓度为3×107/ml，细胞活力用台盼蓝检测，细胞存活率>90%，用注射器吸取上述悬液，右后肢外侧皮下注射100 μl单细胞悬液。三组裸鼠接种后5日后，用游标卡尺测量肿瘤长径和短径，然后每日分别灌胃给药相应剂量药物，空白对照组裸鼠不予处理，DMSO组裸鼠每日灌胃含0.2% DMSO的羧甲基纤维素钠溶液，穿心莲内酯（Andro）给药组裸鼠每日灌胃50mg/kg穿心莲内酯（溶于含0.2% DMSO的羧甲基纤维素钠溶液）。给药后每5日游标卡尺测量肿瘤长径和短径，按“肿瘤大小=肿瘤长径×短径2×0.5”计算瘤体积。取每组的平均值，绘制药物对肿瘤生长的抑制曲线。
2实验结果
由图2可见，与DMSO、空白对照组相比，50mg/kg穿心莲内酯灌胃给药可显著抑制人恶性胶质瘤模型肿瘤的生长。
实施例 3、穿心莲内酯可诱导恶性胶质瘤U251、U87细胞周期阻滞于G
2
/M期从而抑制细胞生长；
1实验方法
为了确认穿心莲内酯抑制人恶性胶质瘤U251、U87细胞增殖作用的机制，采用流式细胞术考察了不同浓度穿心莲内酯作用后细胞周期分布的变化。U251、U87细胞以1×106个/ml的密度种在培养瓶中，加入不同浓度穿心莲内酯后72小时收集细胞，1000 rpm/分离心5分钟，小心弃尽上清，分别加入500 μlPBS，混悬细胞，逐滴加入10 ml 70%的冰冷乙醇，-20℃固定过夜。检测前样品1000 rpm/分离心5分钟，小心弃尽上清，每份样品中加入10 μl的RNAase(200 μg/ml），混匀，37℃作用30分钟后，加入50 μl的PI (1 mg/ml），4℃避光作用30分钟，流式细胞仪检测。
实验结果
结果表明，穿心莲内酯作用72小时，可呈剂量依赖性的诱导人恶性胶质瘤U251、U87细胞周期阻滞于G2/M期。说明穿心莲内酯对恶性胶质瘤细胞的增殖抑制作用与诱导细胞周期阻滞于G2/M期相关。
实施例 4、穿心莲内酯诱导恶性胶质瘤细胞发生G
2
/M周期阻滞与下调Cdk1和Cdc25C蛋白表达有关；
1 实验方法
为考察穿心莲内酯诱导恶性胶质瘤细胞G2/M周期阻滞作用的机制，采用Western blotting方法检测穿心莲内酯对G2/M周期调控蛋白表达的影响。收集经穿心莲内酯处理60小时细胞1×106个，蛋白裂解液冰浴裂解30分钟后，收集样品，上样前用Bradford法测定样品蛋白浓度。按10 μg/孔上样，70V电泳后将蛋白转移至PVDF膜。一抗杂交后的膜在TBST溶液中漂洗3次，每次室温轻摇10分钟。加入二抗，室温轻摇孵育1 小时后ECL发光底物显色，暗室中放入医用X射线胶片曝光。
实验结果
如图4所示，50 μM、70 μM的穿心莲内酯作用60 h可下调恶性胶质瘤U251、U87细胞Cdk1和Cdc25C蛋白的表达，而对Cyclin A、Cyclin B1的表达没有影响。表明穿心莲内酯诱导的G2/M阻滞与下调Cdk1和Cdc25C蛋白有关。
实施例 5、穿心莲内酯可抑制恶性胶质瘤细胞PI3K/Akt信号活性
1.实验方法
Western blotting法（同实施例 4方法）
2.实验结果
由图5可见，30、50、70 μM的穿心莲内酯作用60 h，可剂量依赖性的下调U251、U87细胞PI3K/Akt信号中磷酸化Akt、磷酸化mTOR及磷酸化p70s6k蛋白的表达，磷酸化Akt、磷酸化mTOR及磷酸化p70s6k蛋白水平的下降表明应用穿心莲内酯后，恶性胶质瘤细胞中PI3K/Akt信号的活性被抑制。
实施例 6、PI3K/Akt信号抑制剂LY294002可增强穿心莲内酯诱导的增殖抑制、G2/M周期阻滞以及Cdk1和Cdc25C蛋白下调作用
1.实验方法
恶性胶质瘤U251、U87细胞预先用LY294002处置30分钟，再用不同浓度穿心莲内酯处置，分别考察PI3K/Akt信号抑制剂LY294002对穿心莲内酯诱导的增殖抑制、G2/M周期阻滞以及Cyclin A、Cyclin B1蛋白下调作用的影响。增殖抑制采用MTT法（同实施例 1方法），G2/M周期阻滞采用流式细胞术（同实施例 2方法，蛋白表达采用Western blotting法（同实施例 4方法）。
实验结果
如图6所示，单独使用LY294002（5 μM）能够抑制恶性胶质瘤U251细胞中Akt的活化（图6G），但不能产生明显细胞增殖抑制和G2/M周期阻滞作用（图6A-F）。当LY294002（5 μM）与穿心莲内酯（30 μM）合用后，可见PI3K/Akt信号抑制作用明显增强。同时，与各自单独应用比较，二者合用后对恶性胶质瘤细胞的增殖抑制和G2/M周期阻滞作用明显增强（P<0.01）（图6A-F），说明进一步抑制PI3K/Akt信号可增强穿心莲内酯诱导的增殖抑制和G2/M周期阻滞作用，也表明抑制PI3K/Akt信号确实参与了穿心莲内酯诱导的增殖抑制和G2/M周期阻滞作用。LY294002（5 μM）也可增强穿心莲内酯（30 μM）诱导的Cdk1和Cdc25C蛋白下调作用（图6G），说明穿心莲内酯抑制PI3K/Akt信号可直接也可间接通过下调Cdk1和Cdc25C蛋白而诱导G2/M周期阻滞作用。
Claims (3)
1.穿心莲内酯在制备治疗人恶性胶质瘤药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：穿心莲内酯作为PI3K/Akt信号抑制剂而使细胞周期阻滞于G2/M期。
3. 根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，穿心莲内酯与临床上接受的赋形剂混合制成肠道或非肠道给药制剂。
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| CN (1) | CN102397273A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103740726A (zh) * | 2014-01-24 | 2014-04-23 | 华东理工大学 | 靶向人CDKL5基因的siRNA及其应用 |
| CN113750086A (zh) * | 2021-09-22 | 2021-12-07 | 中国中医科学院广安门医院 | 去氧穿心莲内酯在制备过氧化物酶体增殖物激活受体拮抗剂中的应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101560198A (zh) * | 2008-04-19 | 2009-10-21 | 山东靶点药物研究有限公司 | 一种新的异穿心莲内酯磺化物、含有该磺化物的药物组合物及其制备方法和用途 |
| CN101590037A (zh) * | 2009-06-29 | 2009-12-02 | 暨南大学 | 一种穿心莲内酯组合物及其用途 |
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101560198A (zh) * | 2008-04-19 | 2009-10-21 | 山东靶点药物研究有限公司 | 一种新的异穿心莲内酯磺化物、含有该磺化物的药物组合物及其制备方法和用途 |
| CN101590037A (zh) * | 2009-06-29 | 2009-12-02 | 暨南大学 | 一种穿心莲内酯组合物及其用途 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 周鑫磊 等: "穿心莲内酯抗炎及抗肿瘤作用的研究进展", 《食品与药品》, vol. 10, no. 7, 31 July 2008 (2008-07-31), pages 52 - 55 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103740726A (zh) * | 2014-01-24 | 2014-04-23 | 华东理工大学 | 靶向人CDKL5基因的siRNA及其应用 |
| CN103740726B (zh) * | 2014-01-24 | 2015-11-18 | 华东理工大学 | 靶向人CDKL5基因的siRNA及其应用 |
| CN113750086A (zh) * | 2021-09-22 | 2021-12-07 | 中国中医科学院广安门医院 | 去氧穿心莲内酯在制备过氧化物酶体增殖物激活受体拮抗剂中的应用 |
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