CN105769889A - 人参皂苷Ro在制备抗肿瘤药物中的应用 - Google Patents

人参皂苷Ro在制备抗肿瘤药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明主要涉及人参皂苷Ro在制备抗肿瘤药物中的应用,本发明通过研究注射人参皂苷Ro的小鼠肿块大小的变化实验，注射人参皂苷Ro在早期对小鼠体内的肿块生长的抑制率基本不变，与模型组动物的肿块体积同步增长；进入对数生长期后人参皂苷Ro对肿块体积增长的抑制作用增强，抑制率显著大于缓慢生长期对肿瘤增长的抑制作用；证明人参皂苷Ro小鼠黑色素瘤有很好的抑制作用。本发明通过研究注射人参皂苷Ro的小鼠肿瘤重量的变化实验发现，人参皂苷Ro对黑色素瘤有很好的抑制作用，可制备成新的抗肿瘤药物。

Description

人参皂苷Ro在制备抗肿瘤药物中的应用
技术领域
本发明涉及人参皂苷Ro的应用，尤其是涉及人参皂苷Ro在制备抗黑色素瘤药物中的应用。
背景技术
恶性肿瘤，即癌症，是由内源性细胞的无限增殖引起的一类严重威胁着人类健康的一种常见病和多发病，是人类死亡的三大疾病之一，目前，癌症的治疗方法主要有外科手术、放射疗法和化学疗法等。化学疗法是利用化学药物阻断细胞分裂的机制从而抑制癌细胞的生长繁殖和促进癌细胞分化的一种治疗方式，也是恶性肿瘤治疗的主要手段。然而传统的化疗药物在治疗癌症的时候的一系列的局限性。如常见的化疗药物如顺铂、阿霉素、丝裂霉素和羟基喜树碱等的疗效及预后均较差。因此，寻找安全有效的肿瘤治疗药物不仅可以减轻患者的病痛，同时可以减轻家庭和社会的负担。因此，人们一直在积极的寻找新的治疗癌症的方法或者药物。
随着现代医学对癌症研究的逐步深入，中医药抗癌与协助抗癌取得了较大的进展。发现一些中药单体或有效成分在体外能增强化疗药物对肿瘤细胞增殖的抑制作用，在体内能提高实验动物对化疗药物的敏感性，减轻瘤重实验研究和临床观察均提示中药对化疗药物有协同增效作用。中药在抑制肿瘤细胞增殖、稳定瘤体生长、改善症状体征、减毒增效、预防复发、提高生存质量、延长生存期等方面具有独特的优势。通过增强免疫、直接杀伤肿瘤细胞、诱导肿瘤细胞凋亡及调节细胞周期！逆转化疗耐药等多种方式提高化疗药物的疗效，从传统中药中寻找高效低毒的有效部位或成分治疗癌症已成为研究热点。
人参是著名的补益中药，有大补元气、固脱、生津、安神和益智等功效。皂苷类成分是人参中重要的有效成分，目前从中药材中已分离鉴定出几十种人参皂苷类化合物，大多数都是达玛烷型(包括二醇型和三醇型)皂苷。人参皂苷Ro(ginsenosideRo)，又名竹节人参皂苷V(chikusetsusaponinV),是在人参中为数不多的以齐墩果酸为苷元的五环三萜皂苷，其结构式为:
人参(PanaxginsengC.A.Meyor)中的高含量皂苷之一，还分布于竹节参(PanaxjaponicusC.A.Meyor)、珠子参(PanaxjaponicusC.A.Meyor.var.major(Burk.)C.Y.WuetK.M.Feng)等植物中，五加科中药三七、西洋参则不含有齐墩果酸型皂苷，与人参有着明显的区别。已经发现人参皂苷Ro具有抗炎、调节免疫、保护心血管系统、抗病毒、保肝、护胃、减肥、美容等多种药理作用[秦思,etal.,人参皂苷Ro的药理作用研究进展，天然产物研究与开发,2014.26(A02):346-348；Nag,S.A.,etal.,Ginsenosidesasanticanceragents:invitroandinvivoactivities,structure–activityrelationships,andmolecularmechanismsofaction.Frontiersinpharmacology,2012.3，article25.；Leung,K.W.andA.S.Wong,Pharmacologyofginsenosides:aliteraturereview.ChinMed,2010.5:article20]，而且大多数皂苷具有溶血性。对人参皂苷Ro体外实验表明，人参皂苷Ro不具有溶血性[Hase,J.,etal.,Thestructure-hemolysisrelationshipofoleanolicacidderivativesandinhibitionofthesaponin-inducedhemolysiswithsapogenins.JPharmacobiodyn,1981.4(11):p.833-837]，对多种肿瘤细胞基本没有细胞毒性[Baek,N.-I.,etal.,Cytotoxicitiesofginsengsaponinsandtheirdegradationproductsagainstsomecancercelllines.ArchivesofPharmacalResearch,1995.18(3):164-168]，促进小鼠淋巴细胞增殖[Yu,J.L.,etal.,Ginsenoside-RoenhancescellproliferationandmodulatesTh1/Th2cytokinesproductioninmurinesplenocytes.YaoXueXueBao,2005.40(4):332-336]，保护神经元细胞免受氧化应激伤害[Jiang,Z.,etal.,ProtectiveEffectofGinsenosideR0onAnoxicandOxidativeDamageInvitro.BiomolTher(Seoul),2012.20(6):p.544-549]。传统观点认为人参皂苷Ro没有抗肿瘤活性[Nag,S.A.,etal.,Ginsenosidesasanticanceragents:invitroandinvivoactivities,structure–activityrelationships,andmolecularmechanismsofaction.Frontiersinpharmacology,2012.3，article25.；Leung,K.W.andA.S.Wong,Pharmacologyofginsenosides:aliteraturereview.ChinMed,2010.5:article20。Shibata,S.,Chemistryandcancerpreventingactivitiesofginsengsaponinsandsomerelatedtriterpenoidcompounds.JKoreanMedSci,2001.16Suppl:S28-37]，因此，并未见以人参皂苷Ro为主要组分的药物在制备抗肿瘤药物中的应用方面的报道。
发明内容
本发明的目的是在于避免现有技术的不足之处而提供一种以人参皂苷Ro为主要组分的药物在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明的一方面提供了人参皂苷Ro在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明所述的人参皂苷Ro(ginsenosideRo)，又名竹节人参皂苷V(chikusetsusaponinV),是在人参中为数不多的以齐墩果酸为苷元的五环三萜皂苷，其结构式为:
其中，所述人参皂苷Ro在制备抗肿瘤药物中单独使用或与化疗药物联合使用。
其中，所述抗肿瘤药物的剂型为口服药剂或注射药剂。
优选地，所述口服药剂为胶囊、微囊、脂质体、颗粒剂、片剂、口服液、滴丸或冻干粉剂。
优选地，所述注射药剂为注射用乳剂。
优选地，所述注射用乳剂为静脉注射用乳剂、肌肉注射用乳剂、腹腔注射用乳剂或皮下注射用乳剂。
本发明的有益效果是：本发明通过研究注射人参皂苷Ro的小鼠肿块大小的变化实验，注射人参皂苷Ro在早期对小鼠体内的肿块生长的抑制率基本不变，与模型组动物的肿块体积同步增长；进入对数生长期后人参皂苷Ro对肿块体积增长的抑制作用增强，抑制率显著大于缓慢生长期对肿瘤增长的抑制作用；证明人参皂苷Ro小鼠黑色素瘤有很好的抑制作用。本发明通过研究注射人参皂苷Ro的小鼠肿瘤重量的变化实验发现，人参皂苷Ro对黑色素瘤有很好的抑制作用。
附图说明
图1是接种黑色素瘤细胞后小鼠皮下肿块大小的变化趋势示意图；
图2是给药15天后从小鼠皮下分离的黑色素瘤肿块的体积大小示意图；
图3是给药第15天后从小鼠皮下分离的黑色素瘤肿块的重量大小。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面结合具体实施方式并参照附图，对本发明进一步详细说明。应该理解，这些描述只是示例性的，而并非要限制本发明的范围。此外，在以下说明中，省略了对公知结构和技术的描述，以避免不必要地混淆本发明的概念。
本发明的一方面提供了人参皂苷Ro在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明所述的人参皂苷Ro,是在人参中为数不多的以齐墩果酸为苷元的五环三萜皂苷，其结构式为:
六大类常见的肿瘤包括：
一、头颈部肿瘤：鼻腔及鼻窦恶性肿瘤、鼻咽癌、口腔癌、喉癌、涎腺肿瘤、颅内肿瘤、甲状腺癌、舌癌；
二、胸部肿瘤：肺癌、食管癌、贲门癌、乳腺癌、纵膈肿瘤；
三、消化系统肿瘤：胃癌、大肠癌及乙状结肠和直肠癌、肝癌、胰腺癌与壶腹周围癌、胆道、小肠恶性肿瘤；
四、泌尿生殖系统肿瘤：肾癌、前列腺癌、膀胱癌、睾丸恶性肿瘤、阴茎癌、子宫颈癌、子宫内膜癌、卵巢癌；
五、骨及软组织肿瘤：1、软组织和皮肤肿瘤：(1)恶性纤维组织细胞瘤(2)横纹肌肉瘤(3)滑膜肉瘤(4)皮肤恶性黑色素瘤；2、骨肿瘤：(1)骨肉瘤(2)尤文氏肉瘤；
六、淋巴及血液系统肿瘤：淋巴瘤、多发性骨髓瘤、急性白血病、慢性白血病、红细胞增多症、血小板增多症、骨髓增生异常综合症、骨髓纤维化、恶性组织细胞病。
其中，所述人参皂苷Ro在制备抗肿瘤药物中单独使用或与化疗药物联合使用。
化疗药物，是对病原微生物、寄生虫、某些自身免疫性疾病、恶性肿瘤所致疾病的治疗药物。常见的化疗药物类型包括：烷化剂、抗代谢药、植物类、抗癌抗生素、激素类、其他类。
其中，所述人参皂苷Ro在制备抗肿瘤药物中的剂型为口服药剂或注射药剂。
优选的，所述口服药剂为胶囊、微囊、脂质体、颗粒剂、片剂、口服液、滴丸或冻干粉剂粉针。
优选的，所述注射药剂为注射用乳剂。
优选的，所述注射用乳剂为静脉注射用乳剂、肌肉注射用乳剂、腹腔注射用乳剂或皮下注射用乳剂。
实施例
1.试验材料
1.1药品与试剂
DMEM高糖培养基购于Gibco公司，FBS胎牛血清购自Clark公司，胰酶购自北京索莱宝生物科技有限公司。
1.2细胞和动物
小鼠黑色素瘤高转移细胞B16F10，购于中科院上海细胞库。C57BL/6小鼠，雄性，20-22g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司。
1.3动物模型
1.3.1细胞的复苏：将液氮中冻存的细胞取出，迅速置于37℃水浴中，将其融化成液态，消毒后放置于超净台内，细胞液吹打均匀后转移至10ml离心管，加入2mlDMEM高糖培养基，1000rpm，离心5min，取出后弃去上清，向离心管内加入含10％FBS(胎牛血清)的DMEM高糖培养基，吹打均匀后转移至细胞培养瓶中，37℃，5％CO2培养箱中培养。
1.3.2细胞的传代：取贴壁生长的B16F10细胞，弃去培养基，PBS清洗三遍，用0.25％的胰酶消化细胞，加入含10％FBS的DMEM高糖培养基终止消化，将细胞液转移至离心管，离心1000rpm，5min，弃上清，加入含10％FBS的DMEM高糖培养基，吹打均匀，分装于3个细胞培养瓶，完成一次传代。
1.3.3细胞悬液制备：B16F10细胞经多次稳定传代，造模前收集B16F10细胞，加入生理盐水，细胞计数，调整细胞浓度，使其细胞密度为2×107个/ml。
1.3.4细胞接种：小鼠右肩臂处皮下注射肿瘤细胞悬液0.1ml，即每只小鼠皮下注射B16F10肿瘤细胞2×106个。
1.4给药
人参皂苷Ro和阳性药环磷酰胺溶解于生理盐水(含2％DMSO和2％吐温-80)。从小鼠接种肿瘤后第2天起,连续给药15天，空白对照组及模型对照组给药生理盐水(含2％DMSO和2％吐温-80)，环磷酰胺剂量为20mg/kg，人参皂苷Ro剂量为25mg/kg，给药方式均为腹腔注射。
1.5检测
给药期间检测小鼠体重及肿瘤体积增长情况。给药15天后，禁食不禁水12h，次日解剖，剥取肿瘤，称重。
1.6数据统计与分析
数据统计应用EXCEL及GraphpadPrism软件，数据分析方法为T-test和One-wayANOVA中的Dunnett'sMultipleComparisonTest。结果用mean±SEM表示，p＜0.05有显著性差异，p＜0.01有极显著差异。
2.试验结果
2.1肿瘤体积变化趋势
图1是接种黑色素瘤细胞后小鼠皮下肿块大小的变化趋势示意图。
图1中，N为模型组小鼠肿块大小的变化；Ro为注射人参皂苷Ro的小鼠肿块大小的变化；P为注射环磷酰胺的小鼠肿块大小的变化；人参皂苷Ro和环磷酰胺的剂量分别为25mg/kg体重和20mg/kg体重；横坐标为接种肿块后不同时间肿块的大小；n＝6。
从图1可以看出，接种至13天肿瘤处于一个缓慢增长期，第13天后进入对数生长期。阳性药物环磷酰胺对小鼠黑色素瘤有很好的抑制作用，但是随着肿瘤生长时间延长，肿块增大基本与模型组同步。注射人参皂苷Ro在早期对小鼠体内的肿块生长的抑制率基本不变，与模型组动物的肿块体积同步增长；进入对数生长期后人参皂苷Ro对肿块体积增长的抑制作用增强，抑制率显著大于缓慢生长期对肿瘤增长的抑制作用。
图2是给药15天后从小鼠皮下分离的黑色素瘤肿块的体积大小示意图。
图2中，ModelControl为模型组；PositiveControl为环磷酰胺组；Ro为人参皂苷Ro组；照片放大倍数为1:1。
从图2可以看出，从肿瘤体积上看，所有实验组个体差异较小，组间差异显著；人参皂苷Ro对肿块生长有明显抑制作用。
2.2小鼠肿瘤重量
图3所示为第16天从小鼠皮下分离的黑色素瘤肿块的重量。
图3中，P为阳性药物环磷酰胺；Ro为人参皂苷Ro；N为模型动物；n＝6。
从图3可以看出，结果表明，人参皂苷Ro对黑色素瘤有很好的抑制作用。
如上所述，详细介绍了本发明的人参皂苷Ro在制备抗肿瘤药物中的应用。本发明通过研究注射人参皂苷Ro的小鼠肿块大小的变化实验，注射人参皂苷Ro在早期对小鼠体内的肿块生长的抑制率基本不变，与模型组动物的肿块体积同步增长；进入对数生长期后人参皂苷Ro对肿块体积增长的抑制作用增强，抑制率显著大于缓慢生长期对肿瘤增长的抑制作用，证明人参皂苷Ro小鼠黑色素瘤有很好的抑制作用。本发明通过研究注射人参皂苷Ro的小鼠肿瘤重量的变化实验发现，人参皂苷Ro对黑色素瘤有很好的抑制作用，可制备成新的抗肿瘤药物。
应当理解的是，本发明的上述具体实施方式仅仅用于示例性说明或解释本发明的原理，而不构成对本发明的限制。因此，在不偏离本发明的精神和范围的情况下所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。此外，本发明所附权利要求旨在涵盖落入所附权利要求范围和边界、或者这种范围和边界的等同形式内的全部变化和修改例。

Claims (6)

1.人参皂苷Ro在制备抗肿瘤药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述人参皂苷Ro在制备抗肿瘤药物中单独使用或与化疗药物联合使用。
3.如权利要求1-2任一项所述的应用，其特征在于，所述抗肿瘤药物的剂型为口服药剂或注射药剂。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述口服药剂为胶囊、微囊、脂质体、颗粒剂、片剂、口服液、滴丸或冻干粉剂。
5.如权利要求3-4任一项所述的应用，其特征在于，所述注射药剂为注射用乳剂。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述注射用乳剂为静脉注射用乳剂、肌肉注射用乳剂、腹腔注射用乳剂或皮下注射用乳剂。
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