CN105535701A - 一种防治癌症的中药组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种防治癌症的中药组合物，它是由下述重量配比的原料药制备而成的制剂：白花蛇舌草10份～20份、半枝莲10份～20份、炙黄芪10份～20份、炒麦芽10份～20份。药效实验证明，本发明中药组合物对大肠癌HCT-8/5-Fu耐药细胞活力具有明显的抑制作用，其抑制作用甚至比目前临床治疗癌症的一线用药5-Fu的效果更加显著。当本发明中药组合物联合5-Fu使用时，抑制率可达53.04％，说明其对5-Fu有增效作用。进一步的抑瘤实验表明，该组合物可显著抑制瘤体的体积和重量，尤其与5-Fu联合使用时抑制瘤体生长作用最显著。

Description

一种防治癌症的中药组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种防治癌症的中药组合物及其制备方法，属于医药领域。

背景技术

癌症是一种严重威胁人类健康的常见病和多发病，人类因癌症而引起的死亡率是所有疾病死亡率的第二位，仅次于心脑血管疾病。目前，手术切除及化疗是其主要的治疗方法。其中，抗瘤谱广的5-氟尿嘧啶对绒毛膜上皮癌及恶性葡萄胎有显著疗效，对结肠癌、直肠癌、胃癌和乳腺癌、头颈部癌等有效，是临床治疗癌症的一线用药。然而，长期运用5-氟尿嘧啶易产生耐药性，易导致癌症发生转移，影响癌症治疗的疗效，最终导致患者死亡。据统计，90％以上接受化疗的肿瘤患者的死亡与耐药有关。因此，提高化疗药物的敏感性、逆转耐药性成为目前癌症临床治疗的难点。

我国有着丰富的中草药资源，中药对癌症有良好的治疗作用，且毒副作用小。尤其作为癌症耐药性逆转剂，化学逆转剂往往只能针对耐药性中的一种机制进行逆转，因而逆转效率不高；而中药由于其具有的多靶点性，可针对多种机制进行逆转，能显著提高化疗药物对癌细胞的细胞毒作用，具有显著的优越性，在联合化疗药物治疗癌症时往往具有更好的效果。

白花蛇舌草(HedyotisdiffusaWilld.)为茜草科耳草属植物，以全草入药，具有清热解毒、消痈散结、活血止痛的功效。半枝莲为唇形科黄芩属植物半枝莲(ScutellariabarbataD.Don.)的干燥全草，具有清热解毒、活血祛瘀、消肿止痛的功效。黄芪为多年生草本植物黄芪(Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bunge)和内蒙黄芪(A.mongholicusBge.)的根，有补气升阳，益卫固表，托毒生肌，利水退肿之功效。麦芽为禾本科植物大麦(HordeumvulgareL.)的成熟果实经发芽干燥而成。临床功效行气消食,健脾开胃,退乳消肿。

迄今，尚未见将白花蛇舌草、半枝莲、黄芪、麦芽组合用于防治癌症的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种防治癌症的中药组合物及其制备方法，以解决现有抗癌药物疗效不佳，尤其是对产生耐药性的癌症无有效治疗药物的问题。

本发明提供了一种防治癌症的中药组合物，它是由下述重量配比的原料药制备而成的制剂：白花蛇舌草10份～20份、半枝莲10份～20份、炙黄芪10份～20份、炒麦芽10份～20份。

优选的，它是由下述重量配比的原料药制备而成的制剂：白花蛇舌草1份、半枝莲1份、炙黄芪1份、炒麦芽1份。

进一步的，所述的中药组合物是由各重量配比原料药的原生药粉、水或有机溶剂提取物，加上药学上可接受的辅料或辅助性成份制备而成的制剂。

进一步的，所述的制剂为口服制剂或注射制剂。

本发明提供了一种所述中药组合物的制备方法，包括如下步骤：取各重量配比的原料药，水提，过滤，收集滤液，浓缩，即得。

本发明提供了所述中药组合物在制备治疗和/或预防癌症的药物中的用途。

进一步的，所述的药物是治疗和/或预防耐药癌症的药物。

更进一步的，所述的药物是治疗和/或预防对5-氟尿嘧啶耐药癌症的药物。

优选的，所述的药物是治疗和/或预防大肠癌的药物。

本发明提供了一种防治癌症的联合用药物，它含有相同或不同规格单位制剂的用于同时或者分别给药的所述中药组合物和5-氟尿嘧啶，以及药学上可接受的载体。

优选的，所述中药组合物中各原料药和5-氟尿嘧啶的重量配比为：白花蛇舌草1份、半枝莲1份、炙黄芪1份、炒麦芽1份、5-氟尿嘧啶1份。

本发明提供了一种防治癌症的中药组合物及其制备方法。药效实验证明，本发明中药组合物对大肠癌HCT-8/5-Fu耐药细胞活力具有明显的抑制作用，其抑制作用甚至比目前临床治疗癌症的一线用药5-Fu的效果更加显著。当本发明中药组合物联合5-Fu使用时，抑制率可达53.04％，说明其对5-Fu有增效作用。进一步的抑瘤实验表明，该组合物可显著抑制瘤体的体积和重量，尤其与5-Fu联合使用时抑制瘤体生长作用最显著。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

附图说明

图1为本发明中药组合物对HCT-8/5-Fu耐药细胞活力的影响；

图2为本发明中药组合物联合5-Fu对HCT-8/5-Fu耐药细胞活力的影响；

图3为本发明中药组合物对HCT-8/5-Fu耐药细胞ABCG2mRNA表达的影响；

图4为本发明中药组合物联合5-Fu对瘤体体积的影响；

图5为本发明中药组合物联合5-Fu对瘤体重量的影响。

具体实施方式

本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。

实施例1本发明中药组合物的制备

按下述配比称取原料：

白花蛇舌草15g、半枝莲15g、炙黄芪15g、炒麦芽15g。

制备方法如下：

原料加入8倍水浸泡1小时，120℃加热回流提取1h，提取2次，过滤，合并滤液，减压浓缩至稠膏，减压干燥10小时，粉碎，即得提取物13.7g。

实施例2本发明中药组合物的制备

按下述配比称取原料：

白花蛇舌草10g、半枝莲10g、炙黄芪10g、炒麦芽10g。

制备方法如下：

原料加入8倍水浸泡1小时，120℃加热回流提取1h，提取2次，过滤，合并滤液，减压浓缩至稠膏，减压干燥10小时，粉碎，即得提取物10.0g。

实施例3本发明中药组合物的制备

按下述配比称取原料：

白花蛇舌草20g、半枝莲20g、炙黄芪20g、炒麦芽20g。

制备方法如下：

原料加入8倍水浸泡1小时，120℃加热回流提取1h，提取2次，过滤，合并滤液，减压浓缩至稠膏，减压干燥10小时，粉碎，即得提取物15.2g。

以下通过药效实验证明本发明的有益效果。

1.材料：

1.1细胞株大肠癌HCT-8/5-Fu耐药细胞株购自南京凯基生物科技发展有限公司。

1.2试剂与材料RPMI-1640培养基、胰蛋白酶、胎牛血清，Hyclone；四氮甲唑蓝(MTT)、5-Fu(5-氟尿嘧啶)，Sigma；逆转录试剂盒，Fermentas；PCR试剂盒，TaKaRa；引物由上海生工合成。

1.3主要仪器RE-2000旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；DLSB-5/20低温冷却循环泵，郑州长城科工贸有限公司；B-290型实验室小型喷雾干燥机，瑞士Buchi公司；CO2培养箱，美国Thermo公司；ELX800酶标仪，美国BioTek公司；PCR仪、凝胶成像分析系统，美国Bio-Rad。

2.方法：

2.1药物制备

使用根据实施例1制备的本发明中药组合物(下文称白莲芪芽复方提取物)。白莲芪芽复方提取物用生理盐水配制成0.4g/mL溶液(贮存液)，细胞实验根据所需浓度用完全培养液稀释，动物实验按照小鼠体重给药量用生理盐水稀释。如配成1mg/mL时，取0.4g/mL白莲芪芽复方提取物2.5μL加入997.5μL的RPMI-1640完全培养液中；动物实验按1g/kg体重给药，配制成0.1g/mL溶液，取0.4g/mL白莲芪芽复方提取物250μL加入750μL的生理盐水中。

2.2MTT法检测肿瘤耐药细胞活力

取对数生长期的HCT-8/5-Fu耐药细胞，用含EDTA-0.25％胰蛋白酶消化制成单细胞悬液，然后进行细胞计数并用不含5-Fu的RPMI-1640完全培养基调整细胞密度为1×105个/mL，种于96孔培养板，100μL/孔，置37℃含5％CO2培养箱培养，至细胞贴壁生长覆盖率达60％时，

实验①：在不同孔中分别加入0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml、3mg/ml、4mg/ml、5mg/ml浓度的白莲芪芽复方提取物100μL(相当于分别加入50μg、100μg、200μg、300μg、400μg、500μg)。对照组不加白莲芪芽复方提取物，直接加入培养基100μL。分别在干预24h和48h时吸取各孔溶液；每孔加入100μL的0.5mg/mLMTT溶液，37℃培养4h。4h后，小心吸去孔内液体。往每孔内加入100μLDMSO，振荡后，在570nm处测OD值(光密度)。

实验②：在不同孔中分别加入浓度为1mg/mL的白莲芪芽复方提取物(100μg/孔)、浓度为0.25mg/mL的5-Fu(25μg/孔)和浓度为0.25mg/mL的5-Fu(25μg/孔)+浓度为1mg/mL的白莲芪芽复方提取物(100μg/孔)的混合物。对照组不加白莲芪芽复方提取物，直接加细胞培养液。干预24h后吸取各孔溶液，每孔加入100μL的0.5mg/mLMTT溶液，37℃培养4h。4h后，吸去孔内液体。往每孔内加入100μLDMSO，振荡后，在570nm处测OD值。

计算细胞活力(％)＝(实验组OD值/对照组OD值)×100％。

2.3RT-PCR检测耐药相关基因ABCG2的mRNA表达

对数生长期的HCT-8/5-Fu耐药细胞胰酶消化后，取2×105个细胞/孔，接种于6孔板。24h后进行药物干预，在不同孔中分别加入浓度为0.5mg/ml、1mg/ml、2mg/ml的白莲芪芽复方提取物，每孔2mL(相当于分别加入0.5mg、1mg、2mg)。对照组不加白莲芪芽复方提取物，直接加细胞培养液2mL。继续培养24h后，采用Trizol法提取总RNA，逆转录为cDNA，进行PCR扩增，琼脂糖电泳及凝胶成像，观察白莲芪芽复方提取物对ABCG2表达的影响。

2.4裸小鼠移植瘤动物模型的建立

取对数生长期的HCT-8/5-Fu耐药细胞制成细胞悬液，与基质胶1:1混匀后用1ml一次性注射器吸取悬液接种于裸小鼠右皮下腋窝，每只注射0.1ml。整个操作在SPF条件下进行。待肿瘤平均体积长到100mm³时，将裸小鼠均分为4组：对照组给予生理盐水，5-Fu组给予5-氟尿嘧啶(20mg/kg)，复方组给予白莲芪芽复方提取物(1g/kg，即相当于原生药量12g/kg)，联合组同时给予5-Fu(20mg/kg)和白莲芪芽复方提取物(1g/kg)。5-氟尿嘧啶采用腹腔注射给药，生理盐水和白莲芪芽复方提取物采用口服灌胃给药。一周连续给药6天后，停药1天。给药4周后，测量瘤体大小及瘤体重量。

2.5统计学处理

实验数据用SPSS22.0软件进行统计学分析，以x±s表示，P＜0.05为差异具有统计学意义。

3.结果：

3.1本发明中药组合物对细胞活力的影响

由图1可见，与未加任何药物的对照组相比，白莲芪芽复方提取物对HCT-8/5-Fu耐药细胞的活力具有显著的抑制作用，且呈现明显的剂量和时间依赖作用：白莲芪芽复方提取物5mg/mL干预24、48h后HCT-8/5-Fu耐药细胞活力分别降低至26.49％、22.48％(注：与对照相比*P＜0.05)。

由图2可见，与未加白莲芪芽复方提取物和5-Fu的对照组相比，白莲芪芽复方提取物对HCT-8/5-Fu耐药细胞抑制作用比5-Fu效果明显，白莲芪芽复方联合5-Fu时抑制作用更显著，抑制率达到53.04％，说明白莲芪芽复方提取物对5-Fu有增效作用(注：与对照组相比*P＜0.05)。

3.2本发明中药组合物对ABCG2mRNA表达的影响

癌症耐药性的产生主要是由于癌细胞高表达ABC转运蛋白，其中ABCG2是ABC转运蛋白超家族的重要成员之一。ABCG2在癌症中的高表达，能将细胞内的5-Fu泵出胞外，降低化疗药物在细胞内的蓄积而导致化疗的失败。

由图3可见，与未加任何药物的对照组比较，白莲芪芽复方提取物能明显地抑制HCT-8/5-Fu耐药细胞ABCG2的mRNA表达，且随剂量增加表达量下降。以上实验结果表明，白莲芪芽复方提取物具有明显抑制结肠癌5-Fu耐药细胞ABCG2表达的作用，通过抑制耐药基因的表达起到逆转耐药性的作用。

3.3本发明中药组合物对瘤体的影响

由图4可见，与对照组相比，其它三组瘤体体积均减小；联合组瘤体体积较5-Fu组、复方组减小明显，抑制瘤体生长作用最显著(注：与对照组相比*P＜0.05)。

由图5可见，与对照组相比，其它三组瘤体体重均减小；联合组瘤体重量较5-Fu组、复方组减小明显(注：与对照组相比*P＜0.05)。

以上结果表明，白莲芪芽复方提取物联合5-Fu能有效的增强5-Fu抑制瘤体生长的作用。

Claims (11)

1.一种防治癌症的中药组合物，其特征是：它是由下述重量配比的原料药制备而成的制剂：白花蛇舌草10份～20份、半枝莲10份～20份、炙黄芪10份～20份、炒麦芽10份～20份。

2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征是：它是由下述重量配比的原料药制备而成的制剂：白花蛇舌草1份、半枝莲1份、炙黄芪1份、炒麦芽1份。

3.如权利要求1或2所述的中药组合物，其特征是：它是由各重量配比原料药的原生药粉、水或有机溶剂提取物，加上药学上可接受的辅料或辅助性成份制备而成的制剂。

4.如权利要求3所述的中药组合物，其特征是：所述的制剂为口服制剂或注射制剂。

5.一种权利要求1～4任意一项所述中药组合物的制备方法，其特征是：包括如下步骤：取各重量配比的原料药，水提，过滤，收集滤液，浓缩，即得。

6.权利要求1～4任意一项所述中药组合物在制备治疗和/或预防癌症的药物中的用途。

7.如权利要求6所述的用途，其特征是：所述的药物是治疗和/或预防耐药癌症的药物。

8.如权利要求7所述的用途，其特征是：所述的药物是治疗和/或预防对5-氟尿嘧啶耐药癌症的药物。

9.如权利要求6～8任意一项所述的用途，其特征是：所述的药物是治疗和/或预防大肠癌的药物。

10.一种防治癌症的联合用药物，其特征是：它含有相同或不同规格单位制剂的用于同时或者分别给药的权利要求1～4任意一项所述的中药组合物和5-氟尿嘧啶，以及药学上可接受的载体。

11.如权利要求11所述的联合用药物，其特征是：所述中药组合物中各原料药和5-氟尿嘧啶的重量配比为：白花蛇舌草1份、半枝莲1份、炙黄芪1份、炒麦芽1份、5-氟尿嘧啶1份。