CN101849975B - 阴地蕨提取物在制备抗肿瘤转移药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从阴地蕨中提取的木犀草素、阴地蕨素等提取物在抗肿瘤药物中的新用途,该提取物具有抗肿瘤转移作用,具体表现为抑制自发性肿瘤转移和实验性肿瘤转移,可用于制备抗肿瘤转移药物。
Description
技术领域
本发明属于中药提取物的新用途,具体涉及阴地蕨提取物在制备抗肿瘤转移药物中的应用。
背景技术
国际癌症研究中心(IARC)最新报告,全球癌症病人数以年均3%-5%的速度递增,癌症已成为全球最大的公共卫生问题。世界卫生组织(WHO)预计2007年到2030年期间,癌症新发病例数将增加37%(由1130万例增至1550万例),死亡人数增加45%(由790万人增至1150万人)。由此可见,恶性肿瘤是目前威胁人类健康的重要疾病,其侵袭和转移的特性是导致临床上大多数肿瘤患者死亡的主要因素。因此,研究出安全、有效的抗肿瘤转移新药具有重要的实践意义。癌症严重威胁人类健康,是世界各国面临的重要社会问题之一。近年来,中药或天然药物抗肿瘤作用的研究已成为新热点。
王光凤等采用多种肿瘤模型,研究橘皮中提取的黄酮化合物川陈皮素的抗肿瘤作用。结果显示,川陈皮素8~32mg/kg小鼠黑色素瘤B16的抑瘤率为42.24%~65.95%,对小鼠Lewis肺癌的抑瘤率为38.84%~59.09%;对小鼠S180肉瘤的抑瘤率为36.02%~45.98%。川陈皮素与小剂量的紫杉醇、丝裂霉素、52氟尿嘧啶、顺铂和阿霉素联用时,表现明显的协同效应。川陈皮素对小鼠Lewis肺癌腋皮下接种肺转移的抑制率为33.63%~38.94%;对小鼠Colon26结肠癌腹腔接种腹膜转移的抑制率为37.74%~43.40%。(王光凤,王小晨,肖璘,等.柑橘黄酮川陈皮素的抗肿瘤作用研究,中草药,2007,38(11):1694-1697),但以上研究都只能对某种肿瘤细胞发挥作用,研究还不够深入。
发明内容
发明目的:本发明的目的在于提供阴地蕨提取物的新用途,即在制药领域中的新用途。
技术方案:
本发明涉及阴地蕨提取物在制备抗肿瘤转移药物中的应用。
为了更好地理解本发明的实质,下面将阴地蕨提取物的药理试验及实验结果来说明其在制药领域中的新用途。
以下是阴地蕨提取物抗肿瘤转移作用的研究,实验方法及结果如下:
一、阴地蕨提取物的制备:
取处方量的阴地蕨药材,加入8倍药材重量的体积浓度为70%乙醇进行加热回流,回流0.5小时,重复一次,合并乙醇提取液,浓缩至相对密度1.10~1.25(90~95℃),的浸膏,干燥,粉碎成干浸膏粉。
二、阴地蕨提取物对自发性B16F10黑色素瘤转移模型的影响
1.实验材料
1.1实验动物与细胞
清洁级C57BL/6小鼠(雌性,6-8周龄,16-20g),上海斯莱克实验动物有限责任公司,许可证号:SCXK(沪)2007-0005;B16F10黑色素瘤细胞株。
1.2实验药物
阴地蕨提取物,福建省立医院,批号:090602。
1.3实验试剂
DMEM(美国GIBCO公司批号:1340114),PBS(实验室自制),小牛血清(天津市洋生物制品科技有限公司批号:QWTC0701),Trypsin(AMRESCO公司批号:2009/08)EDTA(AMRESCO公司批号:0105),甲醛(上海久亿化学试剂有限公司批号:20070610),生理盐水(上海华源长富药业有限公司批号:070405045),NaHCO3(南京化学试剂有限公司批号:050480039),液体石蜡(上海久亿化学试剂有限公司批号:20040701)。
1.4实验器材
莱卡倒置荧光显微镜(德国莱卡公司型号:DM1L),精密移液器(法国吉尔森公司型号:P2),全自动高压灭菌锅(日本SANYO公司型号:MLS-3020),超净工作台(苏净集团安泰公司制造型号:SW-CJ-ZFD),超低温冰箱(美国纽艾尔公司型号:Nu-6511),CO2培养箱(FORMA型号:3111),纯水仪(美国Spring公司型号:S/N 020579),电子天平(德国赛多利斯有限公司型号:BT323S),台式电热鼓风干燥箱(上海精密实验设备公司型号:DHG9123A),冰箱(西门子公司型号:KG18V21TI),液氮罐(CBS型号:2001),离心机(上海安亭科学仪器厂型号:KA-1000),PH计(HANNA公司型号:HI-221),注射器。
2.实验方法
2.1制备B16F10细胞悬液
常规培养B16F10肿瘤细胞,实验前4-5天,按1∶10细胞传代于细胞培养瓶中,以免细胞生长过度而出现不完全融合。每个培养瓶大约含6-8×106细胞,取对数生长期的细胞,弃去培养液,用PBS洗净,加入1mL 0.25%胰酶+0.02%EDTA消化液,放入细胞培养箱中,1-3min后,轻敲培养瓶使细胞脱落。加10mL DMEM,用移液管吹打细胞,获得单细胞悬液,转入50mL聚丙烯离心管。离心细胞(1200rpm×10min),然后用PBS洗两遍。用苔盼蓝计数细胞,调整细胞浓度为1×107/mL。
2.3复制B16F10自发性肿瘤转移模型
每只C57BL/6小鼠左后肢足垫皮下注射含5×105个B16F10细胞的悬液0.05mL,这些小鼠每五天称一次体重。于接种后第八天按照左足垫上原发瘤的大小将小鼠随机分为四组:模型组对照组(生理盐水组)、阴地蕨提取物低剂量组(2g/kg小鼠体重)、阴地蕨提取物中剂量组(4mg/kg小鼠体重)、阴地蕨提取物高剂量组(6g/kg小鼠体重),每组动物数为10只。从接种的第九天开始各组灌胃给予相应剂量的药物,模型组给予相应的生理盐水,每日一次,直至处死动物,采集标本。在接种后第23天,麻醉小鼠,截除荷瘤下肢,10%PBS-福尔马林固定原发瘤组织,称取原发肿瘤重量以及用直尺测量原发瘤的长轴(L1)和纵轴(L2),按照以下公式计算原发瘤的体积:0.5236×L1×(L2)2。切除原发灶后22天处死小鼠,取出肺,避免镊子触及脏器表面损伤组织,用PBS洗净组织。10%PBS-福尔马林固定肺组织,称取肺重,拍照并且在解剖显微镜下计算肺肿瘤结节数。
3.实验结果
3.1阴地蕨提取物对B16F10黑色素瘤自发性转移模型肺转移的影响
实验结果采用Excel统计软件学生t检验进行检验,由实验数据可以看出,阴地蕨提取物各剂量组与对照组相比对黑色素瘤自发性转移模型的肺转移结节数均有抑制作用,且呈现剂量相关性:阴地蕨提取物2g/kg剂量组(P<0.05)、阴地蕨提取物4g/kg剂量组(P<0.01)、阴地蕨提取物6g/kg剂量组(P<0.01)。对于肺重的影响,阴地蕨提取物6g/kg剂量组的肿瘤重量明显低于对照组的肺重(P<0.01),其他两组无明显作用。
3.2阴地蕨提取物对B16F10黑色素瘤原发位肿瘤体积和重量的影响
从表1-2可以看出,与生理盐水组相比,阴地蕨提取物对于接种B16F10黑色素瘤细胞后的小鼠足垫部的原发位肿瘤无论是体积以及重量都没有明显的影响作用。
4.结论
阴地蕨提取物能够抑制B16F10黑色素瘤肺转移,而且也抑制转移灶的生长,但是对原发肿瘤细胞增殖没有影响,从小鼠体重变化可以看出,阴地蕨提取物的毒副作用很小,为今后体内安全用药提供基础。
三、阴地蕨提取物对B16F10黑色素瘤细胞实验性肺转移影响
1.实验材料同前
2.实验方法
2.1制备细胞悬液同前
2.2复制B16F10实验性肿瘤转移模型
取C57BL/6小鼠置于小鼠注射固定器,尾静脉注射0.2mL细胞悬液(含5×105肿瘤细胞)。接种过肿瘤细胞的小鼠随机分为4组:模型组对照组(生理盐水组)、阴地蕨提取物低剂量组(2g/kg小鼠体重)、阴地蕨提取物中剂量组(4mg/kg小鼠体重)、阴地蕨提取物高剂量组(6g/kg小鼠体重),每组动物数为10只,从接种后开始各组灌胃给予相应剂量的药物,模型组给予相应的生理盐水,每日一次,给药23天,处死小鼠,取肺脏。避免镊子触及脏器表面,防止损伤组织,用PBS洗净组织。10%PBS-福尔马林固定肺组织,称取肺重,拍照,评价阴地蕨提取物对B16F10肿瘤血行肺转移的影响。
3.实验结果
实验结果采用Excel统计软件学生t检验,从各组取出的肺组织可以看出,模型组的肺组织转移肿瘤结节数目显著多于给药组,由于肺结节太多,无法计数统计,对肺重的统计分析表明,阴地蕨提取物高剂量组(6g/kg)和阴地蕨提取物中剂量组(4g/kg)均能抑制小鼠肺组织重量,P值分别为P<0.01和P<0.05。阴地蕨提取物给药前后小鼠体重差异不大,且与对照组相比,小鼠体重未发现有大幅度减少,各组的死亡率显示,阴地蕨提取物药物对于小鼠的体内毒性较小。
4.结论
阴地蕨提取物给药组小鼠的死亡率与对照组相当,而且体重与给药前也没有明显的减少,说明阴地蕨提取物的毒副作用很小,阴地蕨提取物可以很好的抑制实验性B16F10黑色素瘤肺转移,阴地蕨提取物对于B16F10细胞直接入血之后的血行过程,黏附过程以及穿出血管过程有一定的抑制作用。
有益效果:
阴地蕨别名:一朵云、花蕨、独立金鸡、独脚蒿、冬草、郎萁细辛、背蛇生、破天云、散血叶、小春花、蛇不见、吊竹良枝、良枝草、独脚金鸡、丹桂移星草、黄连七、鸡爪莲。为阴地蕨科植物阴地蕨的全草。分布于陕西、江苏、安徽、浙江、江西、福建、台湾、湖北、湖南、广东、广西等地。主治:清热解毒;平肝熄风;止咳;止血;明目去翳。主小儿高热惊搐;肺热咳嗽;咳血;百日咳;癫狂;痫疾;疮疡肿毒;瘰疬;毒蛇咬伤;目赤火眼;目生翳障。现代药理学研究,阴地蕨提取物具有抑制肿瘤转移作用。
具体实施方式
结合具体实施方式,对本发明进一步说明如下:阴地蕨为阴地蕨科植物Septeridiumternatum(Thunb.)Lyon的带根全草,为福建民间习用草药,性味甘平,味淡。具有平肝、清热、镇咳和清火、明目、解毒祛风的功效。其主要化学成分为黄酮类:木犀草素和阴地蕨素等。
实施例1
取50克阴地蕨药材,加入8倍药材重量的体积浓度为70%乙醇进行加热回流,回流0.5小时,重复一次,合并乙醇提取液,浓缩至相对密度1.10~1.25(90~95℃),的浸膏,干燥,粉碎成干浸膏粉。
Claims (2)
1.阴地蕨黄酮提取物在制备抗肿瘤转移药物中的应用,该提取物含有木犀草素和阴地蕨素。
2.阴地蕨黄酮提取物在制备抗黑色素瘤转移药物中的应用,该提取物含有木犀草素和阴地蕨素。
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