CN105168817B - 一种用于防治鸭黄病毒病的中药组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种用于防治鸭黄病毒病的中药组合物，包括柴胡、知母、石膏、黄连、贯叶连翘、栀子、黄芪、板蓝根、甘草、黄芩、白花蛇舌草、忍冬藤、叶下珠、败酱草、鸡屎藤、淫羊藿、菟丝子和肉苁蓉。配方配伍科学，同时具有退烧解热、清热解毒、抗菌抗毒、疏肝利胆、增强免疫、修复卵巢等多重显著功效，可有效防治鸭黄病毒病，加速蛋鸭生产性能的恢复，减少疫病导致的经济损失。

Description

一种用于防治鸭黄病毒病的中药组合物

【技术领域】

本发明涉及一种中药组合物，尤其涉及一种用于防治鸭黄病毒病的中药组合物，属于动物医药领域。

【背景技术】

鸭黄病毒是首次发现的对水禽致病的新型黄病毒。鸭黄病毒病自2010年4月以来，首先在福建、浙江等地出现并引起蛋鸭产蛋下降，之后本病迅速传播到江苏、山东、河北、河南、安徽、广西和广东等我国主要养鸭地区。感染鸭群表现的主要症状为：高热，蛋鸭产蛋率严重下降，部分鸭拉绿色稀便并出现神经症状。本病近几年在华南地区，尤其在广东养鸭地区持续频繁发病，仅截止到2012年就已造成至少超过1.2亿只蛋鸭和1500万只肉鸭感染发病，经济损失达数十亿元。随着病原学研究的深入，据国内多位兽医专家的研究结果，最终证实引起本病的病原为一种新的黄病毒，2011年中国畜牧兽医学会第一届水禽疫病防控研讨会将其名称统一为“鸭坦布苏病毒病”，俗称鸭黄病毒病。鉴于黄病毒病对养鸭地区造成的重大经济损失，以及多数黄病毒能感染人且感染后缺乏特征性的症状及病变的情况，针对性地研发出能够有效防治鸭黄病毒病的药物，不仅对于鸭黄病毒病的防控有重要意义，而且具有重大的公共卫生意义。

中药因其安全无害，毒副作用小，极少残留，无抗药性，尤其具有调理机体健康及防病治病的优良功效，日益受到重视，并得到广泛的实验及使用，因此，在“回归自然”的世界潮流影响下，中药正逐渐在国内外被越来越多的人所接受。尤其是中药及其提取物在慢性病、肿瘤、癌症和病毒性疾病等的防治中，有着化学合成类药物无法比拟的效果，而且使中草药走向国际化获得了新的机遇。几千年来中药为中国人民乃至于世界人民的健康做出了重大贡献，在现代预防和控制细菌性感染疾病方面也发挥了积极作用。鉴于中药的天然性，具有对环境安全、相对费用低廉、在动物上应用特别是食用动物应用上更为安全等特点，中药在家禽健康养殖中疫病防控方面有非常广阔的前景。

因此，针对鸭养殖中存在的黄病毒这一重要疫病，提供一种能够用于防治鸭黄病毒病的中药组合物，以达到有效防治鸭黄病毒病，减少发病率，加速病鸭的康复和蛋鸭恢复生产性能的效果。

【发明内容】

本发明的目的是提供一种能够用于防治鸭黄病毒病的高效、安全的中药组合物，提高鸭群抵抗力，减少黄病毒病鸭的发病率和死亡率，有效加速病鸭的康复以及生殖系统的修复，达到快速恢复蛋鸭生产性能的功效。

为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：

一种用于防治鸭黄病毒病的中药组合物，包括以下组分：柴胡、知母、石膏、黄连、贯叶连翘、栀子、黄芪、板蓝根、甘草、黄芩、白花蛇舌草、忍冬藤、叶下珠、败酱草、鸡屎藤、淫羊藿、菟丝子和肉苁蓉。

优选的，所述用于防治鸭黄病毒病的中药组合物，包括以下质量份数的组分：柴胡4-7份、知母2.5-5份、石膏4-10份、黄连4-8份、贯叶连翘2.5-6份、栀子4-8份、黄芪3.5-12份、板蓝根4-7份、甘草3-8份、黄芩4-10份、白花蛇舌草4-8份、忍冬藤5-8份、叶下珠2.5-5份、败酱草4-10份、鸡屎藤2.5-7份、淫羊藿4-9份、菟丝子4-6份、肉苁蓉2.5-7份。

在一个优选的实施例中，上述用于防治鸭黄病毒病的中药组合物由以下质量份数的组分组成：柴胡5份、知母3份、石膏6份、黄连6份、贯叶连翘5份、栀子6份、黄芪9份、板蓝根5份、甘草6份、黄芩8份、白花蛇舌草6份、忍冬藤6份、叶下珠3份、败酱草6份、鸡屎藤5份、淫羊藿5份、菟丝子5份、肉苁蓉5份。

优选的，上述中药组合物为散剂、注射液或口服液。

本发明的组方原理为：根据鸭的生理特点及黄病毒病发病机理和进程，本发明中柴胡、知母、石膏具有解热退烧、滋阴降火的功效，主要解决疫病早中期发烧的的表征，避免高热导致内脏机能过度损伤；本组方中黄连、贯叶连翘、栀子具有泻火解毒、清热燥湿的功效，主要用于从根本上解除血分症，防止病情进一步恶化；本组方中黄芪、板蓝根、黄芩、蛇舌草、忍冬藤具有补气固表、清热燥湿、利尿消肿等功效，主要用于增强机体抗病能力，解除或抑制病毒的增殖，抑制致病菌，防止继发感染；本组方中叶下珠、败酱草、鸡屎藤具有平肝清热、消痈排脓、活血行瘀的功效，起到解除患病鸭肝肾损伤、保肝护肾的功效，有利于病鸭的快速康复；本组方中淫羊藿、菟丝子、肉苁蓉具有滋补肝肾、益精血的功效，有利于蛋鸭被黄病毒损伤的卵巢、输卵管的修复，以及卵泡的发育；本组方中甘草调和诸药的毒性及烈性。

诸药合用，针对疫病发病机理和发展过程发挥各自药理作用，标本兼治、内外兼攻，有利于鸭黄病毒病的治疗，促进病鸭的康复，加速蛋鸭生产性能的恢复，具有优良效果。

本发明的优点及有益效果：

1、本发明中药组合物，配伍科学，同时具有退烧解热、清热解毒、抗菌抗毒、疏肝利胆、增强免疫、修复卵巢等多重显著功效，可有效防治鸭黄病毒病，加速蛋鸭生产性能的恢复，减少疫病导致的经济损失；

2、本发明由纯中药组成，使用安全、无残留及毒副作用，可用于短期治疗或长期预防保健，符合绿色健康养殖理念；

3、本发明选用的中药均为常规、易得药材，使用成本低，除了常见中草药外，还选用了南方常见、药用价值高却被忽视的中药，既开发利用了地方中药材，又减少了与人争药的尴尬情况；

4、本发明的中药组合物既是根据中药君臣佐使的组方原理，又结合鸭的特定生理生产特点，以及鸭黄病毒发病、致病机理而设计，能更好的治疗感染黄病毒病的蛋鸭，减少疫病导致的发病率和死亡率，加速病鸭的康复，加快蛋鸭生产性能的恢复。

【附图说明】

图1体内治疗鸭黄病毒病实验中鸭组织病料RT-PCR检测结果。

【具体实施方式】

以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。在未作说明的情况下，本发明采用的试剂、设备和方法均为本技术领域常规市购的试剂、设备和常规使用的方法。

实施例1

按重量份计，分别称取柴胡5份、知母3份、石膏6份、黄连6份、贯叶连翘5份、栀子6份、黄芪9份、板蓝根5份、甘草6份、黄芩8份、白花蛇舌草6份、忍冬藤6份、叶下珠3份、败酱草6份、鸡屎藤5份、淫羊藿5份、菟丝子5份、肉苁蓉5份。以5倍质量蒸馏水浸泡，文火煎煮2小时，药渣再添加3倍质量蒸馏水煎煮1.5小时，合并两次煎液后减压蒸馏浓缩，通过沉淀除杂，制成约含原药1g/mL的复合中药水煎液。

实施例2

按重量份计，分别称取柴胡4份、知母5份、石膏4份、黄连8份、贯叶连翘2.5份、栀子8份、黄芪3.5份、板蓝根7份、甘草3份、黄芩10份、白花蛇舌草4份、忍冬藤8份、叶下珠2.5份、败酱草8份、鸡屎藤2.5份、淫羊藿9份、菟丝子4份、肉苁蓉7份。以6倍质量蒸馏水浸泡，文火煎煮2小时，药渣再添加3倍质量蒸馏水煎煮1.5小时，合并两次煎液后减压蒸馏浓缩，通过沉淀除杂，制成约含原药1g/mL的复合中药水煎液。

实施例3

按重量份计，分别称取柴胡7份、知母2.5份、石膏10份、黄连4份、贯叶连翘6份、栀子4份、黄芪7份、板蓝根4份、甘草8份、黄芩4份、白花蛇舌草8份、忍冬藤5份、叶下珠5份、败酱草4份、鸡屎藤7份、淫羊藿6份、菟丝子6份、肉苁蓉2.5份。以6倍质量蒸馏水浸泡，文火煎煮2小时，药渣再添加3倍质量蒸馏水煎煮1.5小时，合并两次煎液后减压蒸馏浓缩，通过沉淀除杂，制成约含原药1g/mL的复合中药水煎液。

实施例4

按重量份计，分别称取柴胡6份、知母4份、石膏8份、黄连4份、贯叶连翘3份、栀子4份、黄芪12份、板蓝根6份、甘草4份、黄芩6份、白花蛇舌草4份、忍冬藤7份、叶下珠4份、败酱草10份、鸡屎藤5份、淫羊藿4份、菟丝子4份、肉苁蓉5份。以8倍质量蒸馏水浸泡，文火煎煮2小时，药渣再添加3倍质量蒸馏水煎煮1.5小时，合并两次煎液，低温真空浓缩至1：1(药液：药材)，加入3倍体积的95％乙醇，4℃静置24小时，高速离心，上清液过滤后回收乙醇，药液中加入0.5％活性炭、0.2％亚硫酸氢钠、0.5％EDTA.2Na混合搅拌，4℃静置24小时，高速离心，加入适量注射水，调节pH值为5.5，制得相当于原药材2.0g/mL的复合中药注射液。

下面分别通过体外实验和体内实验对本发明所述的中药组合物的有益效果进行验证：

一、体外解热实验

取50只大鼠随机分成5组，每组10只，分别记为正常对照组、模型对照组、实验组1、试验组2、试验组3，标记后称重。对正常对照组的大鼠背部皮下注射无菌生理盐水10mL/kg，模型对照组、三个实验组的大鼠背部皮下注射15％干酵母混悬液10mL/kg。致热4h后测量大鼠体温，同时分别对各组大鼠进行灌胃给药，正常对照组：生理盐水；模型对照组:生理盐水；实验组1:实施例1制得的复合中药水煎液；实验组2：实施例2制得的复合中药水煎液；实验组3:实施例3制得的复合中药水煎液，给药容量均为10mL/kg。首次给药1h、2h、3h、4h后各测量体温1次，计算与致热4h后体温之差,结果见表1。结果显示，与正常对照组比较，模型对照组升温极显著，说明造模成功；与模型对照组比较，首次给药后各个时间段，三个实验组的解热作用显著(P＜0.05)，其中，以实验组1的作用最为显著。说明本发明所述的中药组合物具有明显的解热作用。

表1 复合中药水煎液对干酵母致热大鼠体温的解热作用

备注，与正常对照组比较，^**P＜0.01；与模型对照组比较，^#P＜0.05，^##P＜0.01

二、体外抑菌实验

将实施例1制备的复合中药水煎液分别稀释为1.0g/mL、0.8g/mL、0.6g/mL、0.4g/mL、0.2g/mL五个梯度，进行体外药敏试验。将保存的5株不同供试大肠杆菌菌株分别在麦康凯琼脂平板上划线接种、培养，然后挑取典型菌落至MH肉汤中培养，并调整浓度为0.5个麦氏浓度，灭菌棉签蘸取菌液均匀涂布MH琼脂，再将灭菌的牛津杯置于涂布菌液的MH琼脂上，轻压，每杯加200μL不同浓度的稀释药液，置37℃培养箱培养18-24h后计量抑菌圈直径，抑菌圈直径＞8mm(牛津杯外径)判为有效，读取数值，抑菌圈直径≤8mm判为0，本实验的结果如下表2所示。体外抑菌实验表明，本复合中药水煎液对不同大肠杆菌分离株均有明显的抑菌效果，且抑菌效果与药液浓度正相关，当药液浓度≥0.8g/mL时，有效率可达100％。说明本发明所述的中药组合物具有明显的抑菌作用。

表2 复合中药水煎液对不同大肠杆菌分离株抑菌圈直径

三、体外抗鸭黄病毒实验

用细胞维持液将实施例4制得的复合中药注射液分别稀释为1.0g/mL、0.8g/mL、0.6g/mL、0.4g/mL、0.2g/mL五个梯度，按如下两种方式分别加入到鸡胚成纤维细胞(CEF)单层细胞中：其中，A组-先加药物后接种病毒：每孔加入不同浓度的药液100μL，培养4h后再各加入100TCID₅₀鸭黄病毒100μL；B组-先接种病毒后加药物：将100TCID₅₀鸭黄病毒100μL加入到CEF单层中，培养2h后加入各浓度药液，每孔100μL。以上每种药物浓度均重复4孔，同时设立细胞对照组(只加细胞维持液)与病毒对照组(只加病毒液)，置37℃、5％CO₂培养箱继续培养68～72小时，病毒对照出现75％左右的病变时，利用四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)测定A₅₇₀值，实验测定结果见表3。测定结果显示，A组中加有不同浓度复合中药注射液(0.4～1.0g/mL)的细胞A₅₇₀值均显著大于病毒对照组(P＜0.05)，说明先加复合中药注射液后接种病毒时高浓度复合中药注射液对黄病毒感染CEF有较好的抑制作用。B组中加有不同浓度复合中药注射液(0.4～1.0g/mL)的细胞A₅₇₀值显著大于病毒对照组(P＜0.05)，说明先加病毒后加复合中药注射液时，高浓度的复合中药注射液有明显抑制鸭黄病毒感染CEF的作用。由此可见，本发明所述的中药组合物可用于防治鸭黄病毒病。

表3 不同组别的A₅₇₀值

四、体内治疗鸭黄病毒病实验

广东省惠州市沥林镇某蛋鸭养殖场，存栏220天龄蛋鸭约5000只，产蛋率为92％。由于台风导致持续下雨，产蛋率、采食量突然下降。

临床症状：鸭群表现为急性发热，减食，产蛋减少，腹泻，瘫痪。发病初期，采食减少，发病高峰时停止采食，持续7～8天后采食才逐渐增加，之后产蛋量急剧下降，5天内从92％降至22％。发病后鸭体温升高至42～43℃，精神沉郁，不愿活动，排绿色或白绿色稀粪，后期个别病鸭翅膀下垂，两脚瘫痪、向后伸展。两周内蛋鸭死亡率达到4.8％(240只)。

病理变化：可见典型病理变化：卵泡变性、畸形，卵泡膜充血、出血；心脏表面有大量出血点，心肌出现条索状出血和淤血斑；肝脏、脾脏显著肿大，表面有较多点状出血；小肠和泄殖腔呈弥散性点状出血，胰脏表面有出血点。

病原PCR诊断：无菌采集鸭的肝脏、出血严重的卵泡,按照组织重量1:4加入灭菌PBS，反复冻融3次后8000r/min离心5min，上清液用0.22μm的过滤器除菌,经10000r/min(4℃)离心10min去除杂质后，收集上清液参照Trizol reagent说明书操作提取病毒RNA，最后每250μL尿囊液的病毒RNA用5μL DEPC水溶解。PCR诊断反应采用一步法RT-PCR检测试剂盒进行,预期扩增DNA片段长度为750bp，RT-PCR反应体系为：2×one step buffer 25μL，PrimeScript Onestep Enzyme Mixx2μL，上、下游引物P1(5’-cggctggatgggacacta-3’,20μmol/μL)、P2(5’-atgagcagatggcgtttg-3’,20μmol/μL)各0.5μL，RNA 5μL，加双蒸水至50μL。RT-PCR反应条件为：50℃反转录30min；94℃预变性3min；94℃变性45s，56℃退火45s，72℃延伸1min，30个循环；72℃延伸10min；4℃终止反应。RT-PCR扩增产物经10g/L琼脂糖凝胶电泳，于750bp处可见特异性扩增条带，与预期大小相符，见图1，其中1为空白对照，2为鸭黄病毒阳性株，3为待检测病毒，M为DL2000Marker。

根据临床症状、病理变化、RT-PCR诊断，确诊为鸭黄病毒感染。实施对比治疗方案如下，将全场鸭群随机分为5组，实验1组1000只，实验2组1000只，实验3组1000只，阳性对照组880只，空白对照组880只。实验1、2、3组第一周每天分别用本发明实施例1、2、3制得的复合中药水煎液拌料和饮水，剂量为每500mL药液拌料100kg，同时每500mL药液兑水200L清洁饮水供昼夜自由饮用，第二周开始药液剂量减半使用，连用2周。阳性对照组使用“荆防败毒散”拌料，剂量为每500g“荆防败毒散”拌料100kg，连用2周。空白对照组不使用任何药物。

对比方案实施两周后统计结果如表4所示，表明本发明的复合中药水煎液和注射液对鸭黄病毒病有显著的治疗效果。

以上所述，仅为本发明的较佳的具体实施例，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (3)

1.一种用于防治鸭黄病毒病的中药组合物，其特征在于，由以下质量份数的组分组成：柴胡4-7份、知母2.5-5份、石膏4-10份、黄连4-8份、贯叶连翘2.5-6份、栀子4-8份、黄芪3.5-12份、板蓝根4-7份、甘草3-8份、黄芩4-10份、白花蛇舌草4-8份、忍冬藤5-8份、叶下珠2.5-5份、败酱草4-10份、鸡屎藤2.5-7份、淫羊藿4-9份、菟丝子4-6份、肉苁蓉2.5-7份。

2.根据权利要求1所述的用于防治鸭黄病毒病的中药组合物，其特征在于，所述用于防治鸭黄病毒病的中药组合物由以下质量份数的组分组成：柴胡5份、知母3份、石膏6份、黄连6份、贯叶连翘5份、栀子6份、黄芪9份、板蓝根5份、甘草6份、黄芩8份、白花蛇舌草6份、忍冬藤6份、叶下珠3份、败酱草6份、鸡屎藤5份、淫羊藿5份、菟丝子5份、肉苁蓉5份。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的用于防治鸭黄病毒病的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物为散剂、注射液或口服液。