CN102276670A - 从铁篱巴果中提取制备枸橘苷的工艺 - Google Patents
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Abstract
从铁篱巴果中提取制备枸橘苷的工艺，化合物纯度高于98%。其提取制备工艺是：取铁篱巴果经粉碎，脱脂、提取、膜滤、酸沉、萃取、高速逆流色谱纯化、浓缩干燥等步骤分离制备枸橘苷。本发明操作简单、工艺稳定、产品纯度高，且易于规模化生产。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及从铁篱巴果中提取制备枸橘苷的工艺，尤其是一种采用高速逆流色谱技术分离纯化枸橘苷的方法。
背景技术
铁篱巴果为鼠李科植物马架子Paliurus ramosissimus(Lour.)Poir.的果实，具有化瘀止血、活血止痛的功效，该属植物化学成分主要有黄酮、生物碱、五环三萜类。于磊等通过硅胶、ODS、Sephadex LH-20和大孔吸附树脂柱色谱等方法，分离出枸橘苷等9个化合物。
枸橘苷（poncirin）为黄酮类化合物，分子式：C28H34O14，分子量：594.56，在柑橘属植物中也有分离得到。药理研究表明，枸橘苷与其他黄酮按一定比例组合具有抗氧化作用。
现有文献对枸橘苷的药理研究及提取工艺等方面的研究较少，因此提供一种简单、稳定、易于工业化生产的枸橘苷的提取方法，对铁篱巴果及抗氧化药物的研究开发具有非常重要的意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是将铁篱巴果提取物用高速逆流色谱法分离纯化，制得高纯度的枸橘苷。
本发明的技术方案为：将铁篱巴果用石油醚脱脂，脱脂药渣用甲醇提取，提取液浓缩后超滤膜过滤，酸沉、溶剂萃取，所得萃取物采用乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统，经制备型高速逆流色谱纯化得到高纯度枸橘苷。本发明的技术方案包括以下步骤：
（1）脱脂：取铁篱巴果药材粉碎，用6-10倍重量的石油醚进行脱脂处理2-3次；
（2）将脱脂后的药渣用相当于5-10倍药材重量的20%-90%甲醇加热回流提取2-3次，提取液合并，经超滤膜过滤，滤出液回收甲醇，得浓缩液；
（3）将浓缩液调pH至2.0-3.4，静置24h，过滤，弃滤液，沉淀以去离子水洗至洗出液呈中性；
（4）将步骤（3）所得沉淀物加水饱和乙酸乙酯萃取，萃取至上层萃取液色变淡，合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩成浸膏；
（5）采用高速逆流色谱进行分离纯化，配制溶剂系统，使逆流色谱柱中充满固定相，然后使主机转动，再将流动相泵入柱内，由进样阀进入制备好的样品溶液，根据检测器图谱收集枸橘苷流分，浓缩干燥得枸橘苷。
步骤（2）中所述超滤膜截留分子量为1000-10000。
步骤（5）中所述高速逆流色谱两相溶剂系统为乙酸乙酯-甲醇-水，两相溶剂系统配比为（4-10）：（1-2）：（2-6），以上相为固定相，下相为流动相。
步骤（5）中所述高速逆流色谱主机转速为800-900rpm，流动相流速为1-4ml/min。
本发明的优点在于：本发明采用高速逆流色谱法从铁篱巴果中分离得到高纯度枸橘苷，制备工艺简单、纯化效率高，为铁篱巴果中有效成分的提取利用奠定了坚实的基础。
下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。
具体实施方式
实施例1：
将铁篱巴果药材粉碎成粗粉，取2kg，加6倍量石油醚进行脱脂处理3次，脱脂药渣用8倍量60%甲醇加热回流提取2次，提取液合并后再进行超滤（超滤膜孔径截留分子量为5000），滤液回收甲醇后，得浓缩液，用5%盐酸水溶液调pH至2.5，静置24h，过滤弃滤液，沉淀以去离子水洗至洗出液呈中性，再以沉淀物3倍量的水分散，用水饱和乙酸乙酯萃取分散液，至上层萃取液颜色变淡，合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩成乙酸乙酯浸膏，备用。
将体积比为4:1:3的乙酸乙酯、甲醇和水置于分液漏斗中，剧烈振荡摇匀，使两相达到平衡，静置分层后分离，下相为流动相，上相为固定相，分别对其进行超声脱气30min，自然冷却备用；准确称量100mg乙酸乙酯浸膏溶解于等体积的上相和下相溶剂（各10ml）中，过滤，得样品溶液；将配置好的固定相充满高速逆流色谱分离柱中，然后启动高速逆流色谱主机，调节分离柱转速为850rpm，将流动相以3ml/min的流速泵入，待柱内溶剂体系建立动态平衡后，取样品溶液由进样阀进样，然后根据紫外检测谱图收集流分，低温浓缩干燥得到枸橘苷，其纯度为98.3%。
实施例2：
将铁篱巴果药材粉碎成粗粉，取2kg，加10倍量石油醚进行脱脂处理2次，脱脂药渣用6倍量50%甲醇加热回流提取3次，提取液合并后再进行超滤（超滤膜孔径截留分子量为10000），滤液回收甲醇后，得浓缩液，用5%盐酸水溶液调pH至2.0，静置24h，过滤弃滤液，沉淀以去离子水洗至洗出液呈中性，再以沉淀物3倍量的水分散，用水饱和乙酸乙酯萃取分散液，至上层萃取液颜色变淡，合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩成乙酸乙酯浸膏，备用。
将体积比为5:1:2的乙酸乙酯、甲醇和水置于分液漏斗中，剧烈振荡摇匀，使两相达到平衡，静置分层后分离，下相为流动相，上相为固定相，分别对其进行超声脱气30min，自然冷却备用；准确称量100mg乙酸乙酯浸膏溶解于等体积的上相和下相溶剂（各12ml）中，过滤，得样品溶液；将配置好的固定相充满高速逆流色谱分离柱中，然后启动高速逆流色谱主机，调节分离柱转速为800rpm，将流动相以2ml/min的流速泵入，待柱内溶剂体系建立动态平衡后，取样品溶液由进样阀进样，然后根据紫外检测谱图收集流分，低温浓缩干燥得到枸橘苷，其纯度为98.7%。
实施例3：
将铁篱巴果药材粉碎成粗粉，取2kg，加8倍量石油醚进行脱脂处理3次，脱脂药渣用7倍量20%甲醇加热回流提取2次，提取液合并后再进行超滤（超滤膜孔径截留分子量为8000），滤液回收甲醇后，得浓缩液，用5%盐酸水溶液调pH至2.8，静置24h，过滤弃滤液，沉淀以去离子水洗至洗出液呈中性，再以沉淀物3倍量的水分散，用水饱和乙酸乙酯萃取分散液，至上层萃取液颜色变淡，合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩成乙酸乙酯浸膏，备用。
将体积比为8:2:4的乙酸乙酯、甲醇和水置于分液漏斗中，剧烈振荡摇匀，使两相达到平衡，静置分层后分离，下相为流动相，上相为固定相，分别对其进行超声脱气30min，自然冷却备用；准确称量100mg乙酸乙酯浸膏溶解于等体积的上相和下相溶剂（各10ml）中，过滤，得样品溶液；将配置好的固定相充满高速逆流色谱分离柱中，然后启动高速逆流色谱主机，调节分离柱转速为800rpm，将流动相以4ml/min的流速泵入，待柱内溶剂体系建立动态平衡后，取样品溶液由进样阀进样，然后根据紫外检测谱图收集流分，低温浓缩干燥得到枸橘苷，其纯度为98.2%。
实施例4：
将铁篱巴果药材粉碎成粗粉，取2kg，加7倍量石油醚进行脱脂处理3次，脱脂药渣用5倍量90%甲醇加热回流提取2次，提取液合并后再进行超滤（超滤膜孔径截留分子量为6000），滤液回收甲醇后，得浓缩液，用5%盐酸水溶液调pH至3.0，静置24h，过滤弃滤液，沉淀以去离子水洗至洗出液呈中性，再以沉淀物3倍量的水分散，用水饱和乙酸乙酯萃取分散液，至上层萃取液颜色变淡，合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩成乙酸乙酯浸膏，备用。
将体积比为10:1:6的乙酸乙酯、甲醇和水置于分液漏斗中，剧烈振荡摇匀，使两相达到平衡，静置分层后分离，下相为流动相，上相为固定相，分别对其进行超声脱气30min，自然冷却备用；准确称量100mg乙酸乙酯浸膏溶解于等体积的上相和下相溶剂（各8ml）中，过滤，得样品溶液；将配置好的固定相充满高速逆流色谱分离柱中，然后启动高速逆流色谱主机，调节分离柱转速为900rpm，将流动相以2ml/min的流速泵入，待柱内溶剂体系建立动态平衡后，取样品溶液由进样阀进样，然后根据紫外检测谱图收集流分，低温浓缩干燥得到枸橘苷，其纯度为98.4%。
实施例5：
将铁篱巴果药材粉碎成粗粉，取2kg，加8倍量石油醚进行脱脂处理2次，脱脂药渣用10倍量80%甲醇加热回流提取3次，提取液合并后再进行超滤（超滤膜孔径截留分子量为1000），滤液回收甲醇后，得浓缩液，用5%盐酸水溶液调pH至3.4，静置24h，过滤弃滤液，沉淀以去离子水洗至洗出液呈中性，再以沉淀物3倍量的水分散，用水饱和乙酸乙酯萃取分散液，至上层萃取液颜色变淡，合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩成乙酸乙酯浸膏，备用。
将体积比为6:2:5的乙酸乙酯、甲醇和水置于分液漏斗中，剧烈振荡摇匀，使两相达到平衡，静置分层后分离，下相为流动相，上相为固定相，分别对其进行超声脱气30min，自然冷却备用；准确称量100mg乙酸乙酯浸膏溶解于等体积的上相和下相溶剂（各15ml）中，过滤，得样品溶液；将配置好的固定相充满高速逆流色谱分离柱中，然后启动高速逆流色谱主机，调节分离柱转速为850rpm，将流动相以1ml/min的流速泵入，待柱内溶剂体系建立动态平衡后，取样品溶液由进样阀进样，然后根据紫外检测谱图收集流分，低温浓缩干燥得到枸橘苷，其纯度为98.6%。
Claims (4)
1.从铁篱巴果中提取制备枸橘苷的工艺，其特征在于包括下列步骤：（1）脱脂：取铁篱巴果药材粉碎，用6-10倍重量的石油醚进行脱脂处理2-3次；（2）将脱脂后的药渣用相当于5-10倍药材重量的20%-90%甲醇加热回流提取2-3次，提取液合并，经超滤膜过滤，滤出液回收甲醇，得浓缩液；（3）将浓缩液调pH至2.0-3.4，静置24h，过滤，弃滤液，沉淀以去离子水洗至洗出液呈中性；（4）将步骤（3）所得沉淀物加水饱和乙酸乙酯萃取，萃取至上层萃取液色变淡，合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩成浸膏；（5）采用高速逆流色谱进行分离纯化，配制溶剂系统，使逆流色谱柱中充满固定相，然后使主机转动，再将流动相泵入柱内，由进样阀进入制备好的样品溶液，根据检测器图谱收集枸橘苷流分，浓缩干燥得枸橘苷。
2.按照权利要求1所述的从铁篱巴果中提取制备枸橘苷的工艺，其特征在于步骤（2）中所述超滤膜截留分子量为1000-10000。
3.按照权利要求1所述的从铁篱巴果中提取制备枸橘苷的工艺，其特征在于步骤（5）中所述高速逆流色谱两相溶剂系统为乙酸乙酯-甲醇-水，两相溶剂系统配比为（4-10）：（1-2）：（2-6），以上相为固定相，下相为流动相。
4.按照权利要求1所述的从铁篱巴果中提取制备枸橘苷的工艺，其特征在于步骤（5）中所述高速逆流色谱主机转速为800-900rpm，流动相流速为1-4ml/min。
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| WO2015062517A1 (zh) * | 2013-10-31 | 2015-05-07 | 四川省中医药科学院 | 马甲子提取物及其制备方法和用途 |
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| US10987395B2 (en) | 2013-10-31 | 2021-04-27 | Sichuan Academy Of Chinese Medicine Sciences | Paliurus ramosissimus (Lour.) Poir. extract and preparation methods and uses thereof |
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