CN102311467A

CN102311467A - 一种从结香中提取分离高纯度银椴苷的新方法

Info

Publication number: CN102311467A
Application number: CN201110187430A
Authority: CN
Inventors: 苏刘花
Original assignee: Nanjing Zelang Agricultural Development Co Ltd
Current assignee: Nanjing Zelang Agricultural Development Co Ltd
Priority date: 2011-07-06
Filing date: 2011-07-06
Publication date: 2012-01-11

Abstract

本发明涉及一种从结香中提取分离高纯度银椴苷的新方法，包括提取、超滤、脱色、大孔树脂柱层析、高速逆流色谱分离纯化、浓缩和干燥等步骤进行分离制备高纯度的银椴苷。本发明工艺稳定，产品中银椴苷含量高，采用高效液相色谱法测定银椴苷的含量达97%以上。

Description

一种从结香中提取分离高纯度银椴苷的新方法

技术领域

本发明属于中药有效成分的提取纯化方法，具体而言，涉及一种从结香中提取分离高纯度银椴苷的新方法。

背景技术

结香系瑞香科（Thymelaeaceae ）结香属( Edgeworthia ) 植物结香Edgeworthia chrysantha，产于河南、陕西及长江流域以南诸省区，茎皮纤维可做高级纸及人造棉原料。民间常以结香的根与花入药，花常作密蒙花的代用品，具有养阴安神，明目，祛障翳之功效，用于治疗青盲、翳障、多泪、梦遗、虚淋、失音。有文献从结香花中分离出香豆素、黄酮、有机酸、氮杂环等多类化合物。

银椴苷（Tiliroside），为黄色针晶，mp.215-217℃，分子式C₃₀H₂₆O₁₃ ，分子量 594.52。银椴苷具有较强的抗氧化活性、清除自由基活性和抗炎活性，对补体系统的传统途径显示出非常有潜力的抗补体活性（IC50=5.4×10-5M），其活性甚至比公认的补体系统抑制剂迷迭香酸活性还强。另有文献报道银椴苷及全乙酰化衍生物均具有一定的对白血病癌细胞的毒性作用。银椴苷还具有强的护肝作用。筱雅研究发现银椴苷和鼠尾草黄素能够抑制人低密度脂蛋白氧化。现常采用醇提、非极性溶剂萃取、反复柱层析等从结香等植物中分离得到银椴苷。陈钢在硕士论文“结香和温郁金化学成分的研究”中采用10倍量工业酒精冷浸一周，滤液回收至无醇味，补加水过滤，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇梯度萃取，再通过硅胶柱粗分、Sephadex LH-20柱层析、高速逆流色谱纯化等步骤分离得到各成分，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水（3:7:4:6）溶剂系统分离得到银椴苷，该方法经过多次柱层析，样品损失较大。中国专利（公开号CN1733788A）“一种从结香花中提取分离银椴苷的方法”，采用60-100%甲醇或乙醇溶液浸提或回流提取，提取液水洗后用脂溶性溶剂回流萃取，得到的滤饼重结晶得到产品，用到毒害性有机溶剂，造成溶剂残留，产品质量差。本发明克服了现有技术中的不足，提供给了一种从结香中提取分离高纯度银椴苷的新方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种从结香中提取分离高纯度银椴苷的新方法，成品中银椴苷含量高，采用高效液相色谱法测定银椴苷为98%以上。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种从结香中提取分离高纯度银椴苷的新方法，其特征在于包括下述步骤：（1）提取液的制备：将粉碎的结香花采用60-100%的甲醇或乙醇溶液超声提取，提取2-3次，合并提取液备用；（2）膜滤：将上述提取液先用振动式过滤器滤除泥沙等杂质，再通过超滤膜装置除去大分子多糖、鞣质等，得到透过液；（3）大孔树脂柱层析：透过液加活性炭脱色，脱色液减压浓缩至无醇，加水分散，加入大孔树脂柱吸附，用3-5倍柱体积的30%-80%乙醇水溶液洗脱，收集目标成分，减压浓缩，离心，将清液干燥，得粗提物；（4）高速逆流色谱纯化：以乙酸乙酯-正丁醇-水或正己烷-正丁醇-甲醇-水或正己烷-甲酸乙酯-乙腈-水为溶剂系统，以上相为固定相，下相为流动相，将上述得到的粗提物应用高速逆流色谱法进行分离纯化，即得到高纯度的银椴苷。

步骤（2）中超滤膜为中空超滤膜，材质可选聚偏氟乙烯（PVDF）、聚丙烯（PP）或聚醚砜（PES）中的一种。

步骤（4）中的溶剂系统乙酸乙酯-正丁醇-水体积比为（3-10）:（1-4）:（3-10），优选体积比为（4-6）：（1-2）：（4-6）。

步骤（4）中的溶剂系统正己烷-正丁醇-甲醇-水体积比为（1-5）:（3-6）:（1-4）:（4-8），优先体积比为（1-2）：（3-4）：（1-2）：（5-6）。

步骤（4）中的溶剂系统正己烷-甲酸乙酯-乙腈-水体积比为(2-5):（2-5）:（1-4）:（2-5），优选体积比为（4-5）：（4-5）：（2-3）：（3-5）。

采用上述技术方案的有益效果是：本发明采用超滤膜技术过滤除杂，比传统加热蒸发浓缩节能；采用高速逆流色谱法进行银椴苷的分离纯化，与以往技术手段相比，具有分离能力强、分离时间短、样品损失小、产品质量高等优点：。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不限于以下实施例。

实施例1：

取2kg结香花粉碎过10目筛，加入5倍量70%乙醇超声提取1小时，提取3次，合并提取液，先用振动筛式过滤器连续滤除泥沙等物理杂质，再用中空聚丙烯超滤膜顾虑，透过液加2%活性炭搅拌脱色，脱色液减压浓缩至无醇，加水分散，加入AB-8大孔吸附树脂柱吸附，先用4BV30%乙醇洗脱，再用5BV75%乙醇洗脱有效成分，收集目标成分减压浓缩，离心，将离心液干燥，得到24g粗提物。

取乙酸乙酯、正丁醇、水按比例5:2:5混合，静置分层，两相分别超声脱气30分钟，取上相为固定相，下相为流动相。将固定相以5ml/min的流速泵入高速逆流色谱分离柱中，启动高速逆流色谱主机，调节分离柱转速为850rpm，将流动相以3ml/min的流速泵入，分离柱的温度调至25℃。将100mg银椴苷粗提物溶于5ml上相和5ml下相组成的溶剂中作为样品溶液备用，待分离柱达到平衡，将样品溶液注入进样阀中，检测波长为254nm，使用分步收集器收集流出组分，根据色谱工作站谱图将同组分收集液合并，低温真空浓缩至干，得到银椴苷，经HPLC检测、核磁共振进行结构确认，银椴苷的含量为98.6%。

实施例2：

取2kg结香花粉碎过20目筛，加入4倍量60%乙醇超声提取2小时，提取3次，合并提取液，先用振动筛式过滤器连续滤除泥沙等物理杂质，再用中空聚偏氟乙烯超滤膜顾虑，透过液加4%活性炭搅拌脱色，脱色液减压浓缩至无醇，加水分散，加入AB-8大孔吸附树脂柱吸附，先用5BV40%乙醇洗脱，再用4BV80%乙醇洗脱有效成分，收集目标成分减压浓缩，离心，将离心液干燥，得到22g粗提物。

取正己烷、正丁醇、甲醇、水按比例1:4:2:5混合，静置分层，两相分别超声脱气30分钟，取上相为固定相，下相为流动相。将固定相以5ml/min的流速泵入高速逆流色谱分离柱中，启动高速逆流色谱主机，调节分离柱转速为850rpm，将流动相以3ml/min的流速泵入，分离柱的温度调至20℃。将120mg银椴苷粗提物溶于5ml上相和5ml下相组成的溶剂中作为样品溶液备用，待分离柱达到平衡，将样品溶液注入进样阀中，检测波长为254nm，使用分步收集器收集流出组分，根据色谱工作站谱图将同组分收集液合并，低温真空浓缩至干，得到银椴苷，经HPLC检测、核磁共振进行结构确认，银椴苷的含量为98.4%。

实施例3：

取5kg结香花粉碎过20目筛，加入5倍量80%甲醇超声提取1.5小时，提取2次，合并提取液，先用振动筛式过滤器连续滤除泥沙等物理杂质，再用中空聚醚砜超滤膜顾虑，透过液加3.5%活性炭搅拌脱色，脱色液减压浓缩至无醇，加水分散，加入AB-8大孔吸附树脂柱吸附，先用3BV30%乙醇洗脱，再用5BV80%乙醇洗脱有效成分，收集目标成分减压浓缩，离心，将离心液干燥，得到56g粗提物。

取正己烷、甲酸乙酯、乙腈、水按比例5:5:2:4混合，静置分层，两相分别超声脱气30分钟，取上相为固定相，下相为流动相。将固定相以5ml/min的流速泵入高速逆流色谱分离柱中，启动高速逆流色谱主机，调节分离柱转速为800rpm，将流动相以2ml/min的流速泵入，分离柱的温度调至25℃。将150mg银椴苷粗提物溶于10ml上相和10ml下相组成的溶剂中作为样品溶液备用，待分离柱达到平衡，将样品溶液注入进样阀中，检测波长为254nm，使用分步收集器收集流出组分，根据色谱工作站谱图将同组分收集液合并，低温真空浓缩至干，得到银椴苷，经HPLC检测、核磁共振进行结构确认，银椴苷的含量为98.5%。

实施例4：

取5kg结香花粉碎过10目筛，加入4倍量90%甲醇超声提取2小时，提取3次，合并提取液，先用振动筛式过滤器连续滤除泥沙等物理杂质，再用中空聚偏氟乙烯超滤膜顾虑，透过液加3%活性炭搅拌脱色，脱色液减压浓缩至无醇，加水分散，加入AB-8大孔吸附树脂柱吸附，先用3BV45%乙醇洗脱，再用5BV80%乙醇洗脱有效成分，收集目标成分减压浓缩，离心，将离心液干燥，得到53g粗提物。

取正己烷、正丁醇、甲醇、水按比例2:3:1:6混合，静置分层，两相分别超声脱气30分钟，取上相为固定相，下相为流动相。将固定相以5ml/min的流速泵入高速逆流色谱分离柱中，启动高速逆流色谱主机，调节分离柱转速为800rpm，将流动相以3ml/min的流速泵入，分离柱的温度调至30℃。将150mg银椴苷粗提物溶于10ml上相和10ml下相组成的溶剂中作为样品溶液备用，待分离柱达到平衡，将样品溶液注入进样阀中，检测波长为254nm，使用分步收集器收集流出组分，根据色谱工作站谱图将同组分收集液合并，低温真空浓缩至干，得到银椴苷，经HPLC检测、核磁共振进行结构确认，银椴苷的含量为98.8%。

实施例5：

取10kg结香花粉碎过10目筛，加入5倍量75%甲醇超声提取1小时，提取2次，合并提取液，先用振动筛式过滤器连续滤除泥沙等物理杂质，再用中空聚醚砜超滤膜顾虑，透过液加2%活性炭搅拌脱色，脱色液减压浓缩至无醇，加水分散，加入AB-8大孔吸附树脂柱吸附，先用4BV35%乙醇洗脱，再用4BV75%乙醇洗脱有效成分，收集目标成分减压浓缩，离心，将离心液干燥，得到120g粗提物。

取正己烷、甲酸乙酯、乙腈、水按比例4:4:3:5混合，静置分层，两相分别超声脱气30分钟，取上相为固定相，下相为流动相。将固定相以5ml/min的流速泵入高速逆流色谱分离柱中，启动高速逆流色谱主机，调节分离柱转速为850rpm，将流动相以2ml/min的流速泵入，分离柱的温度调至30℃。将150mg银椴苷粗提物溶于10ml上相和10ml下相组成的溶剂中作为样品溶液备用，待分离柱达到平衡，将样品溶液注入进样阀中，检测波长为254nm，使用分步收集器收集流出组分，根据色谱工作站谱图将同组分收集液合并，低温真空浓缩至干，得到银椴苷，经HPLC检测、核磁共振进行结构确认，银椴苷的含量为98.3%。

Claims

1.一种从结香中提取分离高纯度银椴苷的新方法，其特征在于包括下述步骤：（1）提取液的制备：将粉碎的结香花采用醇溶液超声提取，提取液备用；（2）膜滤：将上述提取液先用振动式过滤器滤除泥沙等杂质，再通过超滤膜装置除去大分子多糖、鞣质等，得到透过液；（3）大孔树脂柱层析：透过液加活性炭脱色，脱色液减压浓缩至无醇，加水分散，加入大孔树脂柱吸附，乙醇水溶液洗脱，收集目标成分，减压浓缩，离心，将清液干燥，得粗提物；（4）高速逆流色谱纯化：以乙酸乙酯-正丁醇-水或正己烷-正丁醇-甲醇-水或正己烷-甲酸乙酯-乙腈-水为溶剂系统，以上相为固定相，下相为流动相，将上述得到的粗提物应用高速逆流色谱法进行分离纯化，即得到高纯度的银椴苷。

2.如权利要求1所述的新方法，其特征在于步骤（2）中超滤膜为中空超滤膜，材质可选聚偏氟乙烯（PVDF）、聚丙烯（PP）或聚醚砜（PES）中的一种。

3.如权利要求1所述的新方法，其特征在于步骤（4）中的溶剂系统乙酸乙酯-正丁醇-水体积比为（3-10）:（1-4）:（3-10）。

4.如权利要求1所述的新方法，其特征在于步骤（4）中的溶剂系统正己烷-正丁醇-甲醇-水体积比为（1-5）:（3-6）:（1-4）:（4-8）。

5.如权利要求1所述的新方法，其特征在于步骤（4）中的溶剂系统正己烷-甲酸乙酯-乙腈-水体积比为(2-5):（2-5）:（1-4）:（2-5）。