CN105998385A - 一种具有保肝作用的药物及其应用 - Google Patents

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李敏
南彩云
朱继孝
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Abstract

本发明公开了一种具有保肝作用的药物及其应用，该药物的有效成分为滇结香花30%乙醇提取部位或60%乙醇提取部位，将滇结香花用体积浓度为50%‑80%乙醇超声提取2次，将制得的提取液浓缩得醇提物，加水，经石油醚2‑3次萃取分离，分为石油醚部位与水部位。取水部位上大孔树脂柱，分别用体积浓度为30%乙醇、60%乙醇洗脱，分别用旋转蒸发仪旋干即得。中药滇结香花30%乙醇提取部位、60%乙醇提取部位显著降低血清中ALT、AST、TBIL、TAB水平（P<0.05、0.01）；肝组织匀浆中测定各项指标，MDA水平明显降低，提高肝组织中GSH、SOD的水平（P<0.01～0.05）；其具有保肝护肝作用，具有保护肝细胞膜稳定性作用，可以用来制备保肝药物，无毒副作用。

Description

一种具有保肝作用的药物及其应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体是一种具有保肝作用的药物及其应用。
背景技术
肝损伤是由多种病因引起且有多种因素参与的复杂过程。肝损伤引发的肝脏疾病已成为常见病、多发病，更为严重的是其引发的肝功能衰竭和肝性脑病等，发病率和死亡率高，极大地威胁着人类的健康。腹腔注射四氯化碳植物油溶液是目前常用的肝炎模型，该模型在肝细胞受损时，胞质膜破裂，细胞溶解，ALT、AST进入血液，使血液中水平明显升高；肝细胞受损，TBA、TBIL代谢受阻，从而血清中TBA、TBIL含量升高；血清中ALT、AST、TBA、TBIL的含量高低在一定程度上反映出肝细胞损伤程度，是反映肝细胞损伤常用指标；SOD是机体内天然存在的超氧自由基清除因子，而GSH是机体内重要的抗氧化剂和自由清除剂，MDA可作为四氯化碳在肝内代谢引起脂质过氧化反应得最终产物，其可作为机体内氧化反应程度的指标。通过检测肝匀浆中SOD、GSH活力及MDA含量可反应药物对肝脏的保护作用。因此本申请以血清中ALT、AST、TBA、TBIL的含量及肝组织匀浆中SOD、GSH活力及MDA含量为指标探讨滇结香花不同提取部位对肝脏的保护作用。
滇结香花是藏药瑞香科结香属植物滇结香（Edgeworthia gardneri Meissn)的干燥花蕾部分。滇结香又名沟皮树，长梗结香，为桃金娘目瑞香科结香属小乔木，花蕾、根和茎皮均可入药，一种藏族地区常用于预防和治疗糖尿病、高血压、高血脂、冠心病、血管炎、脉管炎等的特色保健药。现代有研究表明，滇结香提取物具有抗炎和抗氧化作用，然未有关于滇结香花不同提取部位具有保护肝损伤作用的研究。
发明内容
本发明的目的在于提供一种无毒副作用、制备工艺简便、提取率高的具有保肝作用的药物及其应用，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种具有保肝作用的药物，其有效成分为滇结香花30%乙醇提取部位或滇结香花60%乙醇提取部位。
作为本发明进一步的方案：滇结香花30%乙醇提取部位、滇结香花60%乙醇提取部位的制备过程为：将滇结香花用体积浓度为50%-80%乙醇超声提取2次，每次用水量与滇结香花的体积质量比为25-30:3ml/g，超声提取时间为2h，将制得的提取液浓缩得醇提物，加1-1.5倍水，经石油醚2-3次萃取分离，分为石油醚部位与水部位。取水部位上大孔树脂柱，分别用体积浓度为30%乙醇、60%乙醇洗脱，分别用旋转蒸发仪旋干，得到滇结香花30%乙醇提取部位、滇结香花60%乙醇提取部位。
滇结香花30%乙醇提取部位或滇结香花60%乙醇提取部位在制备保护肝药物中的应用。
作为本发明进一步的方案：保肝药物为保护肝损伤药物。
作为本发明进一步的方案：保肝药物为保护急性肝损伤药物。
作为本发明进一步的方案：滇结香花30%乙醇提取部位、滇结香花60%乙醇提取部位的制备过程为：将滇结香花用体积浓度为50%-80%乙醇超声提取2次，每次用水量与滇结香花的体积质量比为25-30:3ml/g，超声提取时间为2h，将制得的提取液浓缩得醇提物，加1-1.5倍水，经石油醚2-3次萃取分离，分为石油醚部位与水部位。取水部位上大孔树脂柱，分别用体积浓度为30%乙醇、60%乙醇洗脱，分别用旋转蒸发仪旋干，得到滇结香花30%乙醇提取部位、滇结香花60%乙醇提取部位。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1、该发明中药滇结香花为藏药瑞香科结香属植物滇结香（Edgeworthia gardneriMeissn）的干燥花蕾部分，是藏族地区常用于预防和治疗糖尿病、高血压、高血脂、冠心病、血管炎、脉管炎等的特色保健药，具有很好的用药基础，其特点在于应用了植物的花蕾部位。经试验，其具有抗四氯化碳致肝损伤作用，具有保肝护肝疗效。
2、该发明药物滇结香花有效提取部位无毒副作用。
3、该发明药物滇结香花有效提取部位，制备工艺简便，提取率高，为该药物的工业化生产，提供了很好的基础。
4、该发明药物滇结香花，为民族药资源，民族药事业的发展，有利于少数民族的经济发展。
附图说明
图1是本发明小鼠肝组织结构变化示意图（A-G）；
其中，（A）：空白对照组小鼠肝脏组织结构（HE，×200下同）；肝小叶结构清楚，细胞排列整齐；
（B）：模型组小鼠肝脏组织结构；较多肝细胞坏死，呈片状或灶状，肝血窦扩张，有大量炎性细胞浸润；
（C）：阳性对照组肝脏组织结构；肝小叶结构较清楚，肝细胞排列较整齐；
（D）：滇结香花30%乙醇提取部位低剂量组肝脏组织结构；肝索排列紊乱，肝血窦扩张，有炎性细胞浸润；
（E）：滇结香花30%乙醇提取部位高剂量组肝脏组织结构；肝小叶结构较清楚，肝血窦稍扩张，肝细胞排列较整齐；
（F）：滇结香花60%乙醇提取部位低剂量组肝脏组织结构；肝小叶结构较清楚，肝细胞排列较整齐，少量肝细胞可见水样变性，或者灶状坏死；
（G）：滇结香花60%乙醇提取部位高剂量组肝脏组织结构；肝细胞排列较整齐，肝血窦稍扩张，少量肝细胞可见水样变性，或者灶状坏死。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
为证实本发明提取部位的保肝护肝作用，本发明以联苯双醋为阳性对照，分别考察了滇结香花不同提取部位对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠的治疗作用。小鼠体内实验结果表明，滇结香花30%乙醇提取部位、60%乙醇提取部位对四氯化碳诱导的急性肝损伤小鼠有较好的治疗作用。具体过程描述如下。
1.制备方法
1.1实施例1
称取300g滇结香花，50%乙醇超声提取2次，每次用水量2500ml，时间2h，提取液浓缩得醇提物，加1倍水，经石油醚3次萃取分离，分为石油醚部位与水部位。取水部位上大孔树脂柱，分别用30%、60%乙醇洗脱，分别用旋转蒸发仪旋干，得到滇结香花30%、60%乙醇提取部位。
1.2实施例2
称取300g滇结香花，70%乙醇超声提取2次，每次用水量3000ml，时间2h，提取液浓缩得醇提物，加1.5倍水，经石油醚2次萃取分离，分为石油醚部位与水部位。取水部位上大孔树脂柱，分别用30%、60%乙醇洗脱，分别用旋转蒸发仪旋干，得到滇结香花30%、60%乙醇提取部位。
2.材料与方法
2.1材料和试剂
滇结香花不同提取部位提取物，提取方法，见实施例1、实施例2。
谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、总胆红素（TBIL）、总胆汁酸（TBA）测定试剂盒，均购自南昌百特生物高新技术股份有限公司；还原性谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）、超氧化物岐化酶（SOD）测定试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所；苏木素-伊红染液，购自南京建隶生物工程研究所；联苯双酯滴丸，购自浙江万邦药业股份有限公司；乙醇，购自西陇化工股份有限公司。
2.1.1仪器
高速冷冻离心机，购自美国Beckman-Coulter公司；AU480生化分析仪，购自美国Beckman-Coulter公司；超低温冰箱，购自美国Thermo公司；电热恒温水温箱，购自上海博迅实业有限公司；电子分析天平，购自北京赛多利斯仪器系统有限公司；紫外分光光度计UV-1800，（苏）制（05000111）号；TKY-BMB型石蜡包埋机，购自湖北省泰康医疗设备有限公司；包埋专用冷台，购自湖北省泰康医疗设备有限公司；半自动轮转式切片机LeicaRM2245，购自北京长恒荣创科技有限公司；XI15正置显微镜，购自日本奥林巴斯有限公司。
2.1.2实验动物
70只昆明种成年雄性小鼠，等级SPF级，湖南斯莱克景达实验动物有限公司，许可证号：SCXK（湘）2013-0004，适应性饲养一周后进行实验。
2.2实验方法
将70只小鼠随机分成7组，每组10只。分别为空白对照组、模型组、联苯双酯组（阳性对照组）、30%乙醇提取部位低剂量组（3L）、30%乙醇提取部位高剂量组（3H）、60%乙醇提取部位低剂量组（6L）、60%乙醇提取部位高剂量组（6H）。将滇结香花各个部位提取物混悬在0.5%的羧甲基纤维素钠溶液中，滇结香花各个部位低、高剂量分别为0.1g/kg、0.3g/kg，联苯双酯混悬在0.5%的羧甲基纤维素钠溶液中，联苯双酯组的剂量为0.15g/kg。空白对照组和模型组给予相应体积的生理盐水。连续给药7天，第6天给药1h后，腹腔注射0.2%四氯化碳花生油溶液，剂量为10ml/kg。空白对照组给予相应体积的花生油。造模后，禁食不禁水，16h后给药1次，1h后眼眶取血，全血5000r/min，离心5min，取血清，应用全自动生化分析仪按照说明测定ALT、AST、TBIL、TBA各项指标。断颈脱臼致死，并于冰台快速分离相同部位肝脏组织2份，其中一份10%甲醛固定，制备病理切片；另一份肝脏组织称取0.1g左右，制备成10%的肝组织匀浆，5000r/min离心5min取上清液，按照各个测试盒说明书进行测定SOD、MDA、GSH、蛋白的含量。
3.实验结果
表1
注：*与空白对照组比较，*P＜0.05, ** P＜0.01；△与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。
从表1可以看出，模型组与空白组对照，血清中ALT、AST、TBIL、TBA含量明显增高，具有统计学意义（P＜0.01），说明造模成功。滇结香花不同提取部位低、高剂量组与模型组比较，ALT、AST、TBIL、TBA含量明显降低（P＜0.01-0.05），说明滇结香花30%乙醇提取部位、60%乙醇提取部位具有较强的保肝作用。
表2
组别 剂量（g/kg） SOD（U/mg） MDA（nmol/mg） GSH（mg/g）
空白对照组 - 91.97±6.04 1.01±0.22 35.84±7.25
模型组 - 74.95±4.49** 1.72±0.42** 17.47±3.46**
联苯双酯组 0.15 78.78±4.72 1.07±0.26△△ 20.96±4.28
3L 0.1 75.50±5.66 1.28±0.34△ 59.09±10.03△△
3H 0.3 81.89±8.38△ 0.44±0.14△△ 57.80±13.84△△
6L 0.1 99.70±9.91△△ 0.30±0.07△△ 37.17±8.63△△
6H 0.3 94.48±8.92△△ 0.21±0.05△△ 39.43±8.44△△
注：*与空白对照组比较，*P＜0.05, ** P＜0.01；△与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。
从表2可以看出，模型组与空白组对照比较，肝组织匀浆中SOD、GSH含量明显降低，MDA含量明显升高，亦说明造模成功。滇结香花不同提取部位低、高剂量组与模型组比较，除30%乙醇提取部位低剂量组SOD含量虽有所升高，但无统计学意义（P>0.05）；30%乙醇提取部位高剂量组、60%乙醇提取部位低、高剂量组SOD、GSH含量明显降低，MDA含量明显升高，具有统计学意义（P＜0.01-0.05）。
综上说明，滇结香花30%乙醇提取部位、滇结香花60%乙醇提取部位具有保肝护肝作用，具有保护肝细胞膜稳定性作用，可以用来制备保肝药物。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (6)

1.一种具有保肝作用的药物，其特征在于，其有效成分为滇结香花30%乙醇提取部位或滇结香花60%乙醇提取部位。
2.根据权利要求1所述的具有保肝作用的药物，其特征在于，滇结香花30%乙醇提取部位、滇结香花60%乙醇提取部位的制备过程为：将滇结香花用体积浓度为50%-80%乙醇超声提取2次，每次用水量与滇结香花的体积质量比为25-30:3ml/g，超声提取时间为2h，将制得的提取液浓缩得醇提物，加1-1.5倍水，经石油醚2-3次萃取分离，分为石油醚部位与水部位。取水部位上大孔树脂柱，分别用体积浓度为30%乙醇、60%乙醇洗脱，分别用旋转蒸发仪旋干，得到滇结香花30%乙醇提取部位、滇结香花60%乙醇提取部位。
3.滇结香花30%乙醇提取部位或滇结香花60%乙醇提取部位在制备保护肝药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的滇结香花30%乙醇提取部位或滇结香花60%乙醇提取部位在制备保肝药物中的应用，其特征在于，保肝药物为保护肝损伤药物。
5.根据权利要求3所述的滇结香花30%乙醇提取部位或滇结香花60%乙醇提取部位在制备保肝药物中的应用，其特征在于，保肝药物为保护急性肝损伤药物。
6.根据权利要求3-5任一所述的滇结香花30%乙醇提取部位或滇结香花60%乙醇提取部位在制备保肝药物中的应用，其特征在于，滇结香花30%乙醇提取部位、滇结香花60%乙醇提取部位的制备过程为：将滇结香花用体积浓度为50%-80%乙醇超声提取2次，每次用水量与滇结香花的体积质量比为25-30:3ml/g，超声提取时间为2h，将制得的提取液浓缩得醇提物，加1-1.5倍水，经石油醚2-3次萃取分离，分为石油醚部位与水部位。取水部位上大孔树脂柱，分别用体积浓度为30%乙醇、60%乙醇洗脱，分别用旋转蒸发仪旋干，得到滇结香花30%乙醇提取部位、滇结香花60%乙醇提取部位。
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