CN102276466B - 一种c3,4位裂环的新三萜化合物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及从绯红南五味子根中提取分离的一种新三萜化合物及其在制备人急性早幼粒白血病细胞株HL-60抑制剂中的应用,该化合物具有式I结构,实验研究表明,它对人急性早幼粒白血病细胞株HL-60具有生长抑制作用,且其提取分离方法简易,有利于对其进行进一步的药理和临床研究,开发其在制备抗肿瘤药物中的应用。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域,涉及从五味子科南五味子属药用植物绯红南五味子根中提取分离得到的一种C3,4位裂环的新三萜化合物及其制备方法。
背景技术
三萜是五味子科植物中的主要化学成分之一,目前已报道的从绯红南五味子根中分离得到的三萜类化合物多为羊毛脂烷型和环阿尔廷型。根据文献记载该类化合物多具抗肿瘤活性,例如从Kadsura longipedunculata中分得的五内酯E、长南酸及五内酯F对白血病P-388细胞表现出生长抑制作用;从Kadsuraheteroclita 中得到的13个三萜类成分对HL-60、Bel-7402、BGC-823及MCF-7均有细胞毒作用;Wei Wang等测试了从异型南五味子 (Kadsura heteroclita)中得到的13个三萜类成分对Bel-7402、BGC-823、MCF-7及HL-60的细胞毒作用,其中heteroclitalactone D对白血病HL-60细胞株的细胞毒活性最强,IC50为6.76 μM。
绯红南五味子是五味子科南五味子属植物,木质藤本,在我国资源丰富,在民间常用于治疗胃、十二指肠溃疡、慢性胃炎、急性胃肠炎、风湿性关节炎、跌打肿痛、痛经、产后瘀血腹痛等症。本发明所涉及的C3,4位裂环、且C3位羧基甲酯化的新三萜化合物,迄今在国内外尚未见有与此雷同的化合物及活性的相关专利或文献报道。
发明内容
本发明提供一种以五味子科南五味子属药用植物绯红南五味子根为原料提取分离的C3,4位裂环、且C3位羧基甲酯化的新羊毛脂烷型三萜类化合物。
本发明又提供所述化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明所述化合物的结构如式I所示:
Ⅰ
本发明的制备技术方案包括如下步骤:
以药用植物绯红南五味子根干燥药材10 kg为原料,经90%乙醇回流提取3次,每次2小时,浓缩得浸膏状乙醇提取物1500 g,将浓缩的乙醇提取物混悬于水中,以石油醚(4次,1000 mL/次)萃取后,将石油醚萃取部分浸膏经200-300目硅胶柱色谱分离,用石油醚-乙酸乙酯(体积配比为100:1-1:1)梯度洗脱,其中石油醚-乙酸乙酯体积配比为100:7的洗脱部分再经200-300目硅胶柱色谱分离,以石油醚-丙酮(体积配比为16:1)进行洗脱,得到式I化合物(7 mg)。其流程如(图1)所示。
所得化合物经过系统结构鉴定结果如下:主要利用包括高分辨质谱、核磁共振谱(1H NMR,13C NMR,2D-NMR)。化合物I为无色针状结晶,mp 177~178 °C,[a]25 D –35.8 (c 0.023, CHCl3),易溶于氯仿。
HRESIMS(图2)给出准分子离子峰m/z:493.3653 [M+Na]+,确定化合物分子式为C31H50O3。
1H NMR(CDCl3,600 MHz)谱(图3)中给出一个烯氢质子信号δ 5.33(1H,d,J = 5.1 Hz),一组末端双键的烯氢质子信号δ 4.71(1H,s)、4.87(1H,s),一个甲氧基信号δ 3.67(3H,s),4个甲基单峰信号δ 0.70、0.75、1.07、1.76(each 3H,s)和3个甲基双峰信号δ 0.88(3H,d,J = 6.3 Hz)、0.91(3H,d,J = 6.5 Hz)、0.92(3H,d,J = 6.5 Hz)。13C NMR (CDCl3,150 MHz)谱(图4)中给出31个碳信号,包括一个酮羰基碳信号δ 211.2,一组末端双键烯碳信号δ 147.6、113.7,一组环内双键碳信号δ 142.5、118.4、一个甲氧基碳信号δ 51.5以及一个羰基碳信号δ 174.9。分析式I化合物的NMR谱图表明,除C-3位羧基甲基化成为甲酯以外,式I化合物与已知化合物seco-coccinic acid F(Ⅱ)的A-D环上氢谱和碳谱NMR数据基本一致(表1);此外,式I化合物还表现出与已知化合物seco-coccinic acid A(Ⅲ)相同的侧链结构。由此推测式I化合物为具有3,4-seco、3-COOCH3、Δ9 (11)、23-oxo结构片段的羊毛脂烷型三萜,进一步的结构确证来自其HMBC(图6)相关谱。在HMBC谱中,烯氢质子δ 5.33与C-9(δ 142.5),C-12(δ 37.5)及C-13(δ 44.0)存在远程相关,提示环内双键位于C-9(11)位;羰基碳信号δ 211.2与H-22(δ 2.15和2.43),H-24(δ 2.25)存在远程相关,提示酮羰基取代在C-23位;甲氧基信号δ 3.67(3H,s)与C-3(δ 174.9)的相关信号证实了C-3位成酯。将式I化合物的1H NMR、13C NMR信号通过HSQC(图5)和HMBC谱进行归属(表2)。
通过上述解析,最终确定化合物结构式如式I所示:
Ⅰ Ⅱ Ⅲ
表1 式(Ⅰ)化合物、seco-coccinic acid F(Ⅱ)A—D环部分和seco-coccinic acid A(Ⅲ)
侧链部分的13C NMR的化学位移值
表2 式I化合物1H NMR和13C NMR的化学位移值(溶剂为CDCl3)
对所得到的式I化合物进行肿瘤细胞生长抑制方面的研究。体外实验结果表明式I化合物在体外对人急性早幼粒白血病细胞株HL-60的具有生长抑制作用,其IG50为15.2 mM,因此,本发明所述的新三萜化合物具有制备临床肿瘤预防和治疗药物的前景。
本发明的优点在于,所得到的化合物结构新颖,且具有抑制肿瘤细胞生长的活性,其提取分离方法简易,便于对其进行进一步的药理和临床研究,为开发疗效好且毒副作用小的新型抗肿瘤药物创造条件。
附图说明:
图1:式I化合物的制备流程;
图2:式I化合物的高分辨ESIMS谱;
图3:式I化合物的氢谱;
图4:式I化合物的碳谱;
图5:式I化合物的HSQC谱;
图6:式I化合物的HMBC谱。
具体实施方式:
下面所列实施例有助于本领域技术人员更好地理解本发明,但不以任何方式限制本发明。
实施例1:式I化合物的制备:
以绯红南五味子根干燥药材10 kg为原料,以90%乙醇加热回流提取3次,每次2小时,浓缩得浸膏状乙醇提取物1500 g。将乙醇提取物混悬于水中,用石油醚萃取4次,1000 mL/次。将石油醚萃取部分浸膏经200-300目硅胶柱色谱分离,用石油醚-乙酸乙酯(100:1-1:1)梯度洗脱,其中石油醚-乙酸乙酯体积配比为100:7的洗脱部分再经过200-300目硅胶柱色谱分离,以体积配比为16:1的石油醚-丙酮洗脱,得到式I化合物(7 mg)。
实施例2:式I化合物在体外对人急性早幼粒白血病细胞株HL-60的生长抑制实验:
HL-60细胞培养于含有10%经加热灭活的胎牛血清、100 IU/mL青霉素、100 mg/mL链霉素及1 mmol/L L-谷氨酰胺RPMI1640培养液中,37 °C、5%CO2饱和湿度培养箱中孵育。称取台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加双蒸水稀释到4%的储存浓度,用滤纸过滤,4 °C保存。使用时,将该储存液用PBS稀释至0.4%工作浓度。取上述细胞(1′105/mL)接种于12孔板,每孔2 mL。加入不同浓度药物孵育后制备单个细胞悬液,取50 μL细胞悬液加入50 μL的0.4%台盼蓝溶液,混匀,在3分钟内,于显微镜下观察,死细胞被染成蓝色,而活细胞拒染。用血球计数板分别计数活细胞和死细胞。化合物对HL-60细胞的生长抑制作用通过细胞计数测得。取HL-60细胞(1′105/mL)接种于12孔板,每孔2 mL。加入不同浓度式I化合物孵育后制备单个细胞悬液,用血球计数板分别计数对照孔和加药孔的细胞数。利用下列公式求得细胞生长抑制率:1 – (加药孔细胞数/对照孔细胞数)′ 100%。其IG50结果如表3所示。
表3 式I化合物在体外对人急性早幼粒白血病细胞株HL-60的生长抑制作用
Compounds | IG50 ± SE (μM) |
式I化合物 | 15.2 ± 0.07 |
seco-coccinic acid F | >100 |
seco-coccinic acid A | 6.8 ± 1.36 |
体外实验结果表明式I化合物在体外具有对人急性早幼粒白血病细胞株HL-60的生长抑制作用,其IG50为15.2 mM,有望开发其在制备人急性早幼粒白血病细胞株HL-60抑制剂中的用途。
Claims (3)
1.一种C3,4位裂环的三萜化合物,其特征在于,该化合物结构式如I所示:
I 。
2.一种制备如权利要求1所述三萜化合物的方法,其特征在于,以绯红南五味子根干燥药材10 kg为原料,以90%乙醇加热回流提取3次,每次2小时,浓缩得浸膏状乙醇提取物1500 g,将浓缩后的乙醇提取物混悬于水中,以石油醚萃取4次,每次1000 mL,将石油醚萃取部分经200-300目的硅胶柱色谱分离,以体积配比为100:1-1:1的石油醚-乙酸乙酯的混合溶剂梯度洗脱,将其中石油醚-乙酸乙酯体积配比为100:7的洗脱部分再经过200-300目的硅胶柱色谱分离,以体积配比为16:1的石油醚-丙酮混合溶剂洗脱得到式I化合物。
3.权利要求1所述的三萜化合物在制备人急性早幼粒白血病细胞株HL-60抑制剂中的应用。
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王楠 等.黑老虎根化学成分的研究.《中草药》.2010,第41卷(第2期),195-197. |
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