CN113730386A - 一种羊毛脂烷型三萜类化合物的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及药物领域，公开了一种羊毛脂烷型三萜类化合物在制备用于预防和/或治疗风湿、类风湿性关节炎的药物中的应用，所述羊毛脂烷型三萜化合物的结构式为式(I)和/或式(II)所示。本发明提供的羊毛脂烷型三萜类化合物能够有效抑制类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(RA‑FLS)的增殖，使得其具有良好的预防和治疗风湿、类风湿性关节炎的效果。

Description

一种羊毛脂烷型三萜类化合物的应用

技术领域

本发明涉及药物领域，具体地，涉及一种羊毛脂烷型三萜类化合物在制备用于预防和/或治疗风湿、类风湿性关节炎的药物中的应用。

背景技术

随着年龄的增长，骨关节炎疾病变得越来越普遍。类风湿关节炎(rheumatoidarthritis，RA)是一种以关节滑膜炎、进行性软骨及骨破坏为特征的慢性自身免疫性疾病，属世界范围的常见病。RA致残率高，某些患者发病两年内即可出现不可逆性骨关节破坏，严重影响患者的生存质量，其病因和发病机制尚不明了，是难治性疾病之一。

类风湿关节炎治疗尚没有满意的治疗方案，目前占市场份额较大的主要为传统药物和生物制剂。传统的药物治疗主要是甾体、非甾体抗炎药和抗风湿药，缺乏特异性，只能缓解部分症状，而且会产生相应的毒副作用，有不少患者因治疗效果欠佳和不良反应而停药；细胞因子拮抗剂等生物制剂效果虽然比传统药物理想，但不能口服，必须皮下或静脉注射，长期用药操作繁琐又增加病人的痛苦；此外，生物制剂的价格昂贵，而其体内半衰期又短，需要很高的药物剂量；再者，循环中高浓度的生物制剂会产生一些严重的负作用，如增加感染机会等。在现有抗炎药物存在种种缺陷的情况下，提供一种新的治疗关节炎的药物显得尤为迫切。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术存在的问题，提供一种羊毛脂烷型三萜类化合物在制备用于预防和/或治疗风湿、类风湿性关节炎的药物中的应用，以提供一种新颖且高度有利的预防和治疗风湿、类风湿性关节炎的方式。

为了实现上述目的，本发明第一方面提供一种羊毛脂烷型三萜类化合物、其药学上可接受的衍生物或其前药在制备用于预防和/或治疗风湿、类风湿性关节炎的药物中的应用，所述羊毛脂烷型三萜化合物的结构式为式(I)和/或式(II)所示：

优选地，所述药物为抑制类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的药物。

优选地，所述药物为口服剂型或者外用剂型。

优选地，所述药物为外用透皮吸收制剂。

优选地，所述药物含有活性成分及药学上可接受的辅剂，所述活性成分为所述羊毛脂烷型三萜类化合物、其药学上可接受的衍生物或其前药。

本发明第二方面提供一种用于预防和/或治疗风湿、类风湿性关节炎的药物，含有活性成分及药学上可接受的辅剂，所述活性成分为羊毛脂烷型三萜类化合物、其药学上可接受的衍生物或其前药；其中，所述羊毛脂烷型三萜化合物的结构式为式(I)和/或式(II)所示：

优选地，所述药物为抑制类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的药物。

优选地，所述药物为口服剂型或者外用剂型。

优选地，所述药物为外用透皮吸收制剂。

通过上述技术方案，本发明的有益效果为：

本发明提供的羊毛脂烷型三萜类化合物能够有效抑制类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)的增殖，使得其具有良好的预防和治疗风湿、类风湿性关节炎的效果，从而提供一种新颖且高度有利的预防和治疗风湿、类风湿性关节炎的方式。

有关本发明的其它技术特征和技术效果，将在下文的具体实施方式中进一步说明。

具体实施方式

在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。

本发明在第一方面提供一种羊毛脂烷型三萜类化合物、其药学上可接受的衍生物或其前药在制备用于预防和/或治疗风湿、类风湿性关节炎的药物中的应用，所述羊毛脂烷型三萜化合物的结构式为式(I)和/或式(II)所示：

本发明中所述的应用即提供了一种治疗预防和/或治疗风湿、类风湿性关节炎的方法，该方法包括向对象施用有效量的羊毛脂烷型三萜类化合物、其药学上可接受的衍生物或其前药的步骤。

术语“有效量”和“有效剂量”通常指足以产生预防/治疗上的理想结果的剂量，其中所述结果的性质取决于所预防/治疗的具体病症而变化。当这种疾病是类风湿性关节炎，其结果通常是指抑制类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)的增殖、减少类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞或改善与类风湿性关节炎有关的症状。本发明的羊毛脂烷型三萜类化合物的有效量取决于对象的种类、体重、年龄和个体情况，以及可由如实验程序如细胞培养或动物实验确定。

根据本发明，术语“类风湿性关节炎”(RA)主要指在关节处造成慢性炎症的自身免疫性疾病，在一些情况下也在其他身体部位造成慢性炎症。患有类风湿性关节炎的对象通常有肿胀和疼痛的关节、感觉僵硬和关节功能丧失等症状。

本发明中所述的羊毛脂烷型三萜类化合物可以是合成的或从各自植物的提取物获得的，具体是从五味子科(Schisandraceae)，具体地从五味子属(Schisandra Michx.)或者南五味子属(KadsuraKaempf.ex Juss.)的植物，更优选来自五味子属的植物。术语羊毛脂烷型三萜类化合物通常是指C-3位主要被羟基或羰基取代，环内双键多在C-8(9)、C-9(11)，C-12位多为OH或OAc取代，侧链主要为24(Z)-烯-26-酸或22，26内酯环。本发明的羊毛脂烷型三萜类化合物具有式(I)或式(II)表示的结构，包括其药学上可接受的衍生物或其前药。

根据本发明，上述羊毛脂烷型三萜类化合物的药学上可接受的衍生物或前药包括其任何药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物、无水物以及对映体和以上的混合物，立体异构形式、外消旋体、非对映异构体及其混合物。如本文所用，术语“溶剂”是指由溶质形成的各种化学计量的复合物，即由溶质(即羊毛脂烷型三萜类化合物)和溶剂形成。如果溶剂是水，形成的溶剂化物是水合物。适当的药学上可接受的盐是适合给予对象的盐，对象具体为哺乳动物如人，并且药学上可接受的盐可以是用足够的纯度制备并用于制备药物组合物。

优选地，所述药物为抑制类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的药物。

根据本发明，所述药物为口服剂型或者外用剂型。所述外用剂型选自：膏药、巴布剂、软膏剂、乳膏剂、酊剂、凝胶剂、气雾剂、喷雾剂；所述口服剂型选自：片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、溶液剂。优选情况下，所述药物为外用透皮吸收制剂。

优选地，所述药物含有活性成分及药学上可接受的辅剂，所述活性成分为所述羊毛脂烷型三萜类化合物、其药学上可接受的衍生物或其前药。

根据本发明，抑制类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)增殖的方法，过程包括将一群类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞接触如上所述的羊毛脂烷型三萜类化合物、其药学上可接受的衍生物或其前药。本领域中MTT分析或流式细胞术分析可以用于测量对RA-FLS细胞死亡和细胞活力的影响。

本发明中，用于接触RA-FLS细胞的羊毛脂烷型三萜类化合物的浓度可以为0.1μM至20μM，优选5μM至10μM，具体是5μM、6μM、7μM、8μM、9μM或10μM。

本发明第二方面提供一种用于预防和/或治疗风湿、类风湿性关节炎的药物，含有活性成分及药学上可接受的辅剂，所述活性成分为羊毛脂烷型三萜类化合物、其药学上可接受的衍生物或其前药；其中，所述羊毛脂烷型三萜化合物的结构式为式(I)和/或式(II)所示：

优选地，所述药物为抑制类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的药物。

优选地，所述药物为口服剂型或者外用剂型。

优选地，所述药物为外用透皮吸收制剂。

以下将通过实施例对本发明进行详细描述。

以下实施例中，酶标仪采用微孔板检测器(北京恒奥德HAD496/HAD)，类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)购于丰晖生物公司，其它化学试剂均为分析纯或色谱纯。

实施例1

取细胞培养瓶，将RA-FLS细胞使用浓度为100U/mL的青霉素溶液、浓度为100μg/mL的链霉素溶液作为双抗，接种至含有10wt.％胎牛血清(FBS)的DMEM/F-12培养基中(接种量为10³CFU/孔)，在温度为37℃、CO₂浓度为5％的条件下培养，待RA-FLS细胞贴壁，呈对数生长趋势，2-3天传代一次，准备进一步实验；

将上述获得的RA-FLS细胞培养液移除原有培养基得到培养细胞，用1×PBS清洗2次，每个细胞培养瓶中加入含0.02wt.％乙二胺四乙酸(EDTA)的胰酶消化液500μL，将细胞培养瓶置于温度为37℃、CO₂浓度为5％的培养箱中培养2min使细胞消化，再加入500μL含有10wt.％胎牛血清(FBS)的DMEM/F-12(1：1)培养基，将细胞终止消化，充分混匀后，转移至1mL的EP管中，再以800rpm转速离心5min，弃除上清液得到消化细胞，将消化细胞与1mL含有10wt.％FBS的DMEM/F-12(1：1)培养基混合，使得消化细胞重悬得到细胞混悬液备用；

将孔板设置为5大组，两个大组为药物处理组，且分别与式(I)和式(II)所示的羊毛脂烷型三萜化合物相对应(每个药物处理组包括药物终浓度为1、2、4、6、8、16、20μM的七个小组)，其余分别为对照组、甲氨蝶呤(MTX)药物组(包括MTX终浓度分别为5、1、0.1μM的三个小组)和空白组(只加含MTT的培养液100μL/孔)；

将上述细胞混悬液用含有10wt.％FBS的DMEM/F-12(1：1)培养基稀释，以每孔密度为1×10⁴CFU/孔的细胞悬液100μL移到药物处理组、甲氨蝶呤药物组和对照组所对应的孔中，再将孔板放置在CO₂培养箱中，在温度为37℃、CO₂浓度为5％的条件下培养24h，细胞贴壁生长至孔板的85％时，将培养基移除，用1×PBS清洗2次，加入含有1wt.％FBS的DMEM/F-12(1：1)培养基；药物处理组分别加入对应的羊毛脂烷型三萜化合物，根据其分子量和质量，通过摩尔浓度计算公式，加入相应体积，使其在100μL体系中的终浓度为1、2、4、6、8、16、20μM，MTX对照组加入MTX使得MTX终浓度为5、1、0.1μM，每个小组均设置6个复孔，对照组中不添加药物；

将药物处理组、MTX药物组和对照组处理好的细胞于温度为37℃、CO₂浓度为5％的培养箱中培养48h后，弃去培养基，观察细胞生长状态，随后用含10wt.％噻唑蓝(MTT)的无血清DMEM/F-12(1：1)培养基孵育4h后，弃上清液，每孔加入100μL的DMSO，在摇床上避光震荡10min，使结晶物充分溶解，在酶标仪上于492nm处检测OD值，与对照组对比，比较不同化合物对RA-FLS细胞的抑制作用。

根据以下公式计算出细胞存活率，绘制药物浓度-细胞存活率标准曲线，计算出各药物(羊毛脂烷型三萜化合物)对RA-FLS细胞的IC₅₀值。

细胞存活率＝(药物处理组OD值-空白组OD值)/(对照组OD值-空白组OD值)×100％。

经计算得出，式(I)和式(II)所示的羊毛脂烷型三萜化合物显著抑制了RA-FLS细胞的增殖，其IC₅₀值分别为7.52μM和8.85μM；式(I)和式(II)所示的羊毛脂烷型三萜化合物对应的IC₅₀值均小于20μM，具有较好的抗RA活性。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。

Claims (9)

1.羊毛脂烷型三萜类化合物、其药学上可接受的衍生物或其前药在制备用于预防和/或治疗风湿、类风湿性关节炎的药物中的应用，所述羊毛脂烷型三萜化合物的结构式为式(I)和/或式(II)所示：

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物为抑制类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的药物。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述药物为口服剂型或者外用剂型。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述药物为外用透皮吸收制剂。

5.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述药物含有活性成分及药学上可接受的辅剂，所述活性成分为所述羊毛脂烷型三萜类化合物、其药学上可接受的衍生物或其前药。

6.一种用于预防和/或治疗风湿、类风湿性关节炎的药物，含有活性成分及药学上可接受的辅剂，其特征在于，所述活性成分为羊毛脂烷型三萜类化合物、其药学上可接受的衍生物或其前药；其中，所述羊毛脂烷型三萜化合物的结构式为式(I)和/或式(II)所示：

7.根据权利要求6所述的药物，其特征在于，所述药物为抑制类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的药物。

8.根据权利要求6或7所述的药物，其特征在于，所述药物为口服剂型或者外用剂型。

9.根据权利要求8所述的药物，其特征在于，所述药物为外用透皮吸收制剂。