CN102233021A - 一种由青蒿、金银花、栀子制成的中成药的含量测定方法 - Google Patents
一种由青蒿、金银花、栀子制成的中成药的含量测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102233021A CN102233021A CN 201010173578 CN201010173578A CN102233021A CN 102233021 A CN102233021 A CN 102233021A CN 201010173578 CN201010173578 CN 201010173578 CN 201010173578 A CN201010173578 A CN 201010173578A CN 102233021 A CN102233021 A CN 102233021A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- acid
- mobile phase
- percent concentration
- isochlorogenic
- linearity
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明属于中药分析领域，具体涉及一种由青蒿、金银花、栀子制成的中成药的含量测定方法。该方法采用反相高效液相色谱法对该中成药中的新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、secoxyloganin、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C九种成分进行含量测定，色谱条件为：色谱柱为C18柱，以甲醇或乙腈为流动相A，以0.05％～1.0％磷酸或0.05％～1.0％醋酸为流动相B，A+B＝100％，进行梯度洗脱。该含量测定方法重现性良好，该方法分别从定性定量的角度全面的反映药物主要成分及其含量变化情况，提高了对药物的质量控制水平。
Description
技术领域：
本发明属于中药分析领域，涉及一种中成药的含量测定方法，具体涉及对一种由青蒿、金银花、栀子制成的中成药进行含量测定的方法。
背景技术：
本发明涉及的中成药的原药材组成为：青蒿6～25重量份、金银花3～15重量份、栀子3～12重量份。本中成药功能主治为清热，疏风，解毒，用于上呼吸道感染(外感风热证)所致的高热、微恶风寒、头身痛、咳嗽、痰黄等症。该中成药已获得中国国家食品药品监督管理局批准上市销售，药品的通用名称为热毒宁注射液，药品批准文号为国药准字Z20050217。由于该药物抗病毒、抗菌退热疗效显著，作用迅速，在临床上已逐渐得到了广大医生和患者的欢迎。
现有技术中，在公开号为CN 1517124A，申请号为200410000134.X的中国专利中，公开了一种对本中成药(在本发明中被命名为“热毒宁注射液”)中栀子苷和绿原酸进行含量测定的方法，但该方法对热毒宁注射液中主要成分含量的检测不够全面，本发明提供技术方案是在热毒宁注射液基础成分研究和现有含量测定方法的基础上，按照《中药注射液基本技术要求》及中药注射液再评价的相关规定，对其高效液相色谱指纹图谱及含量测定方法进行进一步优化，将高效液相色谱指纹图谱和已明确的9个成分含量测定相结合，建立更为全面的质量控制方法，以更为有效快捷的控制热毒宁注射液的产品内在质量，提高质量控制水平。
发明内容：
本发明的目的是提供一种对由青蒿、金银花、栀子制成的中成药(在本发明中被命名为“热毒宁注射液”)进行含量测定的方法。
本发明是通过以下技术方案来实现本发明目的的：
采用反相高效液相色谱法对热毒宁注射液中的新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、secoxyloganin(断氧化马钱子苷)、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C九种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定，测定的色谱条件为：色谱柱为C18色谱柱，以甲醇或乙腈为流动相A，以0.05％～1.0％磷酸或0.05％～1.0％醋酸为流动相B，A+B＝100％，进行梯度洗脱，洗脱程序为以下三种程序中的任意一种：
(1)起始时，流动相A的百分比浓度为8～20％，流动相B的百分比浓度为92～80％，0至20min内，流动相A的百分比浓度线性上升至25～35％，流动相B的百分比浓度线性下降至75～65％，21至60min内，流动相A的百分比浓度线性上升至45～55％，流动相B的百分比浓度线性下降至55～45％；
即：
(2)起始时，流动相A的百分比浓度为15～25％，流动相B的百分比浓度为85～75％，0至50min内，流动相A的百分比浓度线性上升至45～55％，流动相B的百分比浓度线性下降至55～45％，51至60min内，流动相A的百分比浓度线性上升至56～65％，流动相B的百分比浓度线性下降至44～35％；
即：
(3)起始时，流动相A的百分比浓度为10～22％，流动相B的百分比浓度为90～78％，0至30min内，流动相A的百分比浓度线性上升至23～30％，流动相B的百分比浓度线性下降至70～77％，31至60min内，流动相A的百分比浓度线性上升至55～65％，流动相B的百分比浓度线性下降至45～35％，61至70min内，流动相A的百分比浓度保持在55～65％，流动相B的百分比浓度保持在45～35％。
即：
上述的洗脱程序，优选以下三种程序中的任意一种：
(1)起始时，流动相A的百分比浓度为12％，流动相B的百分比浓度为88％，0至20min内，流动相A的百分比浓度线性上升至30％，流动相B的百分比浓度线性下降至70％，21至60min内，流动相A的百分比浓度从30％线性上升至50％，流动相B的百分比浓度从70％线性下降至50％；
即：
程序1：
(2)起始时，流动相A的百分比浓度为20％，流动相B的百分比浓度为80％，0至50min内，流动相A的百分比浓度线性上升至50％，流动相B的百分比浓度线性下降至50％，51至60min内，流动相A的百分比浓度从50％线性上升至60％，流动相B的百分比浓度从50％线性下降至40％；
即：
程序2：
(3)起始时，流动相A的百分比浓度为20％，流动相B的百分比浓度为80％，0至30min内，流动相A的百分比浓度线性上升至25％，流动相B的百分比浓度线性下降至75％，31至60min内，流动相A的百分比浓度从25％线性上升至60％，流动相B的百分比浓度从75％线性下降至40％，61至70min内，流动相A的百分比浓度保持在60％，流动相B的百分比浓度保持在40％。
即：
程序3：
在对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C七种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定时，测定波长为320～330nm。
上述测定波长的优选为324nm。
在对栀子苷、secoxyloganin两种成分中的任意一种或两种成分进行含量测定时，检测波长为230～240nm。
上述测定波长的优选为237nm。
本发明所述的含量测定方法，其对照品溶液的制备方法为：精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、secoxyloganin、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C对照品适量，加入40％～60％甲醇溶解并稀释制成混合对照品储备溶液。
上述混合对照品储备溶液制备方法的优选技术方案为：精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin对照品适量，精密称定，加50％甲醇溶解并稀释制成每1ml中含新绿原酸0.1～0.4mg、绿原酸0.5～1.2mg、隐绿原酸0.2～0.7mg、栀子苷0.5～1.5mg、咖啡酸0.1～0.4mg、异绿原酸B 0.2～0.8mg、异绿原酸A 0.1～0.6mg、异绿原酸C 0.2～0.9mg、secoxyloganin 0.1～0.4mg的混合对照品储备溶液。
本发明所述的含量测定方法，在对咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin五种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定时，其供试品溶液的制备方法为：精密吸取待测药物置量瓶中，加40％～60％甲醇稀释，摇匀，即得。
上述供试品溶液制备方法的优选技术方案为：精密吸取待测药物1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
本发明所述的含量测定方法，在对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷四种成分中的任意一种或几种进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液置量瓶中，加40％～60％甲醇稀释，摇匀，即得。
上述供试品溶液制备方法的优选技术方案为：精密吸取待测药物1ml，置100ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
本发明所述的含量测定方法，其标准曲线的制作方法为：精密吸取3～8份不同剂量的混合对照品储备溶液，分别置容量瓶中，加40％～60％甲醇稀释，制成不同浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
上述标准曲线制作方法的优选技术方案为：精密吸取6份不同剂量的混合对照品储备溶液，分别为0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、10.0ml，分别置10ml容量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，制成六个浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
对本发明的含量测定方法的研究与说明：
发明人对本发明的提供的技术方案进行了实验研究，用来证明本发明的技术效果，下述实验用于进一步说明本发明的技术效果，但不限制本发明。
1 仪器和试剂
Agilent 1100高效液相色谱仪；MWD紫外检测器；热毒宁注射液(国药准字Z20050217)；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
绿原酸、栀子苷、咖啡酸对照品由中国药品生物制品检定所提供。
异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、隐绿原酸、新绿原酸、secoxyloganin(断氧化马钱子苷)对照品为自制，经色谱法检测纯度在98％以上。
2 色谱条件
色谱柱：Phenomenex C18色谱柱(4.6×250mm，5μm)；
流动相：以甲醇或乙腈为流动相A，以0.05％～1.0％磷酸或0.05％～1.0％醋酸流动相B；
分别以甲醇-0.1％磷酸水溶液系统、甲醇-0.1％醋酸水溶液系统、乙腈-0.1％磷酸水溶液系统、乙腈-0.1％醋酸水溶液系统为流动相进行色谱分析，调整流动相比例及梯度洗脱程序，按以下三种梯度程序中的任意一种进行洗脱，试验结果表明，均可使新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、secoxyloganin、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C九个成分均呈现良好的分离度，分离度均在1.5以上，且各色谱峰的对称因子均在0.95～1.05之间，见附图1～12。
程序1：
程序2：
程序3：
测定波长：根据紫外光谱可见其中七种有机酸：新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A和异绿原酸C的最大吸收波长为324nm，经试验验证，样品中该七种有机酸的峰在324nm下响应较高，与其他杂质峰分离度符合要求，经阴性试验，无干扰，所以确定新绿原酸等七种有机酸含量测定波长为324nm。而栀子苷和secoxyloganin的紫外光谱显示其最大吸收波长为237nm，故确定栀子苷和secoxyloganin的含量测定波长为237nm。
3 对照品溶液和供试品溶液的制备
3.1 对照品溶液的制备
精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin对照品适量，精密称定，加50％甲醇溶解并稀释制成每1ml中含新绿原酸0.2981mg、绿原酸0.8364mg、隐绿原酸0.4096mg、栀子苷1.0152mg、咖啡酸0.2156mg、异绿原酸B0.5920mg、异绿原酸A 0.3404mg、异绿原酸C 0.6080mg、secoxyloganin0.2032mg的混合对照品储备溶液。
3.2 供试品溶液的制备
供试品溶液(1)：精密吸取热毒宁注射液1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。供咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A和异绿原酸C、secoxyloganin含量测定用。
供试品溶液(2)：精密吸取热毒宁注射液1ml，置100ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。供新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷含量测定用。
4 多成分含量测定的方法学考察
4.1 标准曲线及线性范围
精密吸取上述6份不同剂量的混合对照品储备溶液，分别为0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、10.0ml，分别置10ml容量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，依次稀释制成六个浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。结果见表1～9，表明九种成分的线性关系均很好。
表1 新绿原酸的线性关系
表2 绿原酸的线性关系
表3 隐绿原酸的线性关系
表4 咖啡酸的线性关系
表5 栀子苷的线性关系
表6 异绿原酸B的线性关系
表7 异绿原酸A的线性关系
表8 异绿原酸C的线性关系
表9 secoxyloganin的线性关系
4.2 精密度试验
取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、异绿原酸B、异绿原酸A和异绿原酸C、secoxyloganin的混合对照品溶液。连续进样6针，测定其峰面积值，计算它们的相对标准偏差。结果见表10，表明各成分进样精密度良好。
表10 精密度考察试验结果
4.3 稳定性试验
同一供试品溶液，分别在0h、2h、4h、8h、10h、12h分别进样测定，9种成分的测定结果见表11。结果表明，供试品溶液中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸等9个成分均在12小时内稳定。
表11 稳定性考察试验结果
4.4 重复性试验
平行制备试品溶液6份，测定，9种成分的测定结果见表12，表明重复性良好。
表12 重复性考察试验结果
4.5 加样回收试验
取已知含量的热毒宁注射液(新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、secoxyloganin、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A和异绿原酸C的含量分别为：3.024mg/ml、7.471mg/ml、3.549mg/ml、13.166mg/ml、1.0568mg/ml、0.130mg/ml、0.652mg/ml、0.324mg/ml和0.569mg/ml)，进行加样回收率试验。实验方法如下：
新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸和栀子苷：精密量取本品0.5ml 9份，置100ml量瓶中，分别加入混合对照品储备溶液4ml、4ml、4ml、5ml、5ml、5ml、6ml、6ml、6ml，加50％甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，测定。
咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A和异绿原酸C：精密量取本品0.5ml9份，置10ml量瓶中，分别加入混合对照品储备溶液0.4ml、0.4ml、0.4ml、0.5ml、0.5ml、0.5ml、0.6ml、0.6ml、0.6ml，加50％甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，依法测定。
secoxyloganin：精密量取本品0.5ml 9份，置10ml量瓶中，分别加入浓度为0.5416mg/ml的secoxyloganin对照品溶液0.6ml、0.6ml、0.6ml、1.0ml、1.0ml、1.0ml、1.4ml、1.4ml、1.4ml，加50％甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，依法测定。结果见表13～21，表明回收率结果很好。
表13 新绿原酸加样回收试验结果
表14 绿原酸加样回收试验结果
表15 隐绿原酸加样回收试验结果
表16 栀子苷加样回收试验结果
17 咖啡酸加样回收试验结果
表18 异绿原酸B加样回收试验结果
表19 异绿原酸A加样回收试验结果
表20 异绿原酸C加样回收试验结果
表21 secoxyloganin加样回收试验结果
以上对热毒宁注射液含量测定的方法学考察结果表明：该方法精密度、重复性、回收率结果均较好，能够准确、快捷地同时测定成品中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、异绿原酸B、异绿原酸A和异绿原酸C、secoxyloganin九种成分的含量。
本发明的有益效果：
1.本发明提供的含量测定方法重现性良好，该方法分别从定性定量的角度全面的反映热毒宁注射液中的主要成分及其含量变化情况，提高了热毒宁注射液质量控制水平。
2.对组分复杂的中药制剂进行多成分的含量测定，工作量和检验成本均较大。本发明提供的检测方法，可以采用同一色谱条件同时测定热毒宁注射液种9个成分的含量，大大节省了检测时间及实验成本。
附图说明：
附图1：以甲醇-0.1％磷酸水系统为流动相按程序1进行色谱分析试验所得色谱图
附图2：以甲醇-0.1％磷酸水系统为流动相按程序2进行色谱分析试验所得色谱图
附图3：以甲醇-0.1％磷酸水系统为流动相按程序3进行色谱分析试验所得色谱图
附图4：以甲醇-0.1％醋酸水系统为流动相按程序1进行色谱分析试验所得色谱图
附图5：以甲醇-0.1％醋酸水系统为流动相按程序2进行色谱分析试验所得色谱图
附图6：以甲醇-0.1％醋酸水系统为流动相按程序3进行色谱分析试验所得色谱图
附图7：以乙腈-0.1％磷酸水系统为流动相按程序1进行色谱分析试验所得色谱图
附图8：以乙腈-0.1％磷酸水系统为流动相按程序2进行色谱分析试验所得色谱图
附图9：以乙腈-0.1％磷酸水系统为流动相按程序3进行色谱分析试验所得色谱图
附图10：以乙腈-0.1％醋酸水系统为流动相按程序1进行色谱分析试验所得色谱图
附图11：以乙腈-0.1％醋酸水系统为流动相按程序2进行色谱分析试验所得色谱图
附图12：以乙腈-0.1％醋酸水系统为流动相按程序3进行色谱分析试验所得色谱图
具体实施方式：
实施例1：
(1)色谱条件为：Phenomenex C18色谱柱(4.6×250mm，5μm)；流动相A：甲醇；流动相B：0.1％磷酸水溶液，系统梯度洗脱程序如下：
(2)测定波长：
①绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C含量测定波长为324nm。
②栀子苷、secoxyloganin含量测定波长为237nm；
(3)对照品溶液的制备：精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin对照品适量，精密称定，加50％甲醇溶解并稀释制成每1ml中含新绿原酸0.2831mg、绿原酸0.7528mg、隐绿原酸0.3926mg、栀子苷1.1210mg、咖啡酸0.2256mg、异绿原酸B 0.4987mg、异绿原酸A 0.3205mg、异绿原酸C0.5782mg、secoxyloganin 0.2157mg的混合对照品储备溶液。
(4)供试品溶液的制备：
①对咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin五种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
②对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷四种成分中的任意一种或几种进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置100ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
(5)标准曲线的制作：精密吸取混合对照品储备溶液0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、10.0ml，分别置10ml容量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，制成六个浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
(6)测定计算：取供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，得各成分含量。
(7)结果：测得热毒宁注射液9个成分的含量见下表：
热毒宁注射液9个成分含量测定结果(mg/ml)
实施例2：
(1)色谱条件为：C18色谱柱；流动相A：甲醇；流动相B：0.1％磷酸水溶液，系统梯度洗脱程序如下：
(2)测定波长：
①绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C含量测定波长为320nm。
②栀子苷、secoxyloganin含量测定波长为230nm；
(3)对照品溶液的制备：精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin对照品适量，精密称定，加50％甲醇溶解并稀释制成每1ml中含新绿原酸0.2752mg、绿原酸0.8264mg、隐绿原酸0.4281mg、栀子苷1.1346mg、咖啡酸0.2584mg、异绿原酸B 0.5215mg、异绿原酸A 0.3928mg、异绿原酸C0.6152mg、secoxyloganin 0.2542mg的混合对照品储备溶液。
(4)供试品溶液的制备：
①对咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin五种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置10ml量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
②对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷四种成分中的任意一种或几种进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置100ml量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
(5)标准曲线的制作：精密吸取混合对照品储备溶液0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、10.0ml，分别置10ml容量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，制成六个浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
(6)测定计算：取供试品溶液5μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，得各成分含量。
(7)结果：测得热毒宁注射液9个成分的含量见下表：
热毒宁注射液9个成分含量测定结果(mg/ml)
实施例3：
(1)色谱条件为：C18色谱柱；流动相A：甲醇；流动相B：0.1％磷酸水溶液，系统梯度洗脱程序如下：
(2)测定波长：
①绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C含量测定波长为330nm。
②栀子苷、secoxyloganin含量测定波长为240nm；
(3)对照品溶液的制备：精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin对照品适量，精密称定，加50％甲醇溶解并稀释制成每1ml中含新绿原酸0.2564mg、绿原酸0.8254mg、隐绿原酸0.4465mg、栀子苷1.0451mg、咖啡酸0.2985mg、异绿原酸B 0.5452mg、异绿原酸A 0.3854mg、异绿原酸C0.6458mg、secoxyloganin 0.2123mg的混合对照品储备溶液。
(4)供试品溶液的制备：
①对咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin五种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置10ml量瓶中，加60％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
②对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷四种成分中的任意一种或几种进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置100ml量瓶中，加60％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
(5)标准曲线的制作：精密吸取混合对照品储备溶液0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、10.0ml，分别置10ml容量瓶中，加60％甲醇稀释至刻度，制成六个浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
(6)测定计算：取供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，得各成分含量。
(7)结果：测得热毒宁注射液9个成分的含量见下表：
热毒宁注射液9个成分含量测定结果(mg/ml)
实施例4：
(1)色谱条件为：C18色谱柱；流动相A：甲醇；流动相B：0.2％磷酸水溶液，系统梯度洗脱程序如下：
(2)测定波长：
①绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C含量测定波长为325nm。
②栀子苷、secoxyloganin含量测定波长为235nm；
(3)对照品溶液的制备：精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin对照品适量，精密称定，加50％甲醇溶解并稀释制成每1ml中含新绿原酸0.2784mg、绿原酸0.8125mg、隐绿原酸0.4784mg、栀子苷1.1245mg、咖啡酸0.2897mg、异绿原酸B 0.5235mg、异绿原酸A 0.3458mg、异绿原酸C0.6154mg、secoxyloganin 0.2458mg的混合对照品储备溶液。
(4)供试品溶液的制备：
①对咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin五种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置10ml量瓶中，加45％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
②对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷四种成分中的任意一种或几种进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置100ml量瓶中，加45％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
(5)标准曲线的制作：精密吸取混合对照品储备溶液0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、10.0ml，分别置10ml容量瓶中，加45％甲醇稀释至刻度，制成六个浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
(6)测定计算：取供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，得各成分含量。
(7)结果：测得热毒宁注射液9个成分的含量见下表：
热毒宁注射液9个成分含量测定结果(mg/ml)
实施例5：
(1)色谱条件为：C18色谱柱；流动相A：甲醇；流动相B：0.3％磷酸水溶液，系统梯度洗脱程序如下：
(2)测定波长：
①绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C含量测定波长为322nm。
②栀子苷、secoxyloganin含量测定波长为234nm；
(3)对照品溶液的制备：精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin对照品适量，精密称定，加50％甲醇溶解并稀释制成每1ml中含新绿原酸0.2165mg、绿原酸0.8451mg、隐绿原酸0.4487mg、栀子苷1.1294mg、咖啡酸0.2752mg、异绿原酸B 0.5012mg、异绿原酸A 0.3654mg、异绿原酸C0.6354mg、secoxyloganin 0.2153mg的混合对照品储备溶液。
(4)供试品溶液的制备：
①对咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin五种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置10ml量瓶中，加55％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
②对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷四种成分中的任意一种或几种进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置100ml量瓶中，加55％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
(5)标准曲线的制作：精密吸取混合对照品储备溶液0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、10.0ml，分别置10ml容量瓶中，加55％甲醇稀释至刻度，制成六个浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
(6)测定计算：取供试品溶液2μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，得各成分含量。
(7)结果：测得热毒宁注射液9个成分的含量见下表：
热毒宁注射液9个成分含量测定结果(mg/ml)
实施例6：
(1)色谱条件为：Phenomenex C18色谱柱(4.6×250mm，5μm)；流动相A：甲醇；流动相B：0.2％磷酸水溶液，系统梯度洗脱程序如下：
(2)测定波长：
①绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C含量测定波长为324nm。
②栀子苷、secoxyloganin含量测定波长为237nm；
(3)对照品溶液的制备：精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin对照品适量，精密称定，加50％甲醇溶解并稀释制成每1ml中含新绿原酸0.2981mg、绿原酸0.8364mg、隐绿原酸0.3258mg、栀子苷1.1287mg、咖啡酸0.2568mg、异绿原酸B 0.5213mg、异绿原酸A 0.3103mg、异绿原酸C0.6251mg、secoxyloganin 0.2359mg的混合对照品储备溶液。
(4)供试品溶液的制备：
①对咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin五种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
②对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷四种成分中的任意一种或几种进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置100ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
(5)标准曲线的制作：精密吸取混合对照品储备溶液0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、10.0ml，分别置10ml容量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，制成六个浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
(6)测定计算：取供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，得各成分含量。
(7)结果：测得热毒宁注射液9个成分的含量见下表：
热毒宁注射液9个成分含量测定结果(mg/ml)
实施例7：
(1)色谱条件为：C18色谱柱；流动相A：甲醇；流动相B：0.3％磷酸水溶液，系统梯度洗脱程序如下：
(2)测定波长：
①绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C含量测定波长为320nm。
②栀子苷、secoxyloganin含量测定波长为230nm；
(3)对照品溶液的制备：精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin对照品适量，精密称定，加50％甲醇溶解并稀释制成每1ml中含新绿原酸0.2357mg、绿原酸0.8159mg、隐绿原酸0.4258mg、栀子苷1.0268mg、咖啡酸0.2248mg、异绿原酸B 0.5842mg、异绿原酸A 0.3862mg、异绿原酸C0.6167mg、secoxyloganin 0.2349mg的混合对照品储备溶液。
(4)供试品溶液的制备：
①对咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin五种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置10ml量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
②对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷四种成分中的任意一种或几种进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置100ml量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
(5)标准曲线的制作：精密吸取混合对照品储备溶液0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、10.0ml，分别置10ml容量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，制成六个浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
(6)测定计算：取供试品溶液5μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，得各成分含量。
(7)结果：测得热毒宁注射液9个成分的含量见下表：
热毒宁注射液9个成分含量测定结果(mg/ml)
实施例8：
(1)色谱条件为：C18色谱柱；流动相A：甲醇；流动相B：0.4％磷酸水溶液，系统梯度洗脱程序如下：
(2)测定波长：
①绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C含量测定波长为325nm。
②栀子苷、secoxyloganin含量测定波长为235nm；
(3)对照品溶液的制备：精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin对照品适量，精密称定，加50％甲醇溶解并稀释制成每1ml中含新绿原酸0.2842mg、绿原酸0.8862mg、隐绿原酸0.4753mg、栀子苷1.0951mg、咖啡酸0.456mg、异绿原酸B 0.5258mg、异绿原酸A 0.3147mg、异绿原酸C0.6369mg、secoxyloganin 0.2279mg的混合对照品储备溶液。
(4)供试品溶液的制备：
①对咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin五种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置10ml量瓶中，加45％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
②对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷四种成分中的任意一种或几种进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置100ml量瓶中，加45％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
(5)标准曲线的制作：精密吸取混合对照品储备溶液0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、10.0ml，分别置10ml容量瓶中，加45％甲醇稀释至刻度，制成六个浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
(6)测定计算：取供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，得各成分含量。
(7)结果：测得热毒宁注射液9个成分的含量见下表：
热毒宁注射液9个成分含量测定结果(mg/ml)
实施例9：
(1)色谱条件为：C18色谱柱；流动相A：甲醇；流动相B：0.5％磷酸水溶液，系统梯度洗脱程序如下：
(2)测定波长：
①绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C含量测定波长为323nm。
②栀子苷、secoxyloganin含量测定波长为235nm；
(3)对照品溶液的制备：精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin对照品适量，精密称定，加50％甲醇溶解并稀释制成每1ml中含新绿原酸0.2245mg、绿原酸0.8289mg、隐绿原酸0.4452mg、栀子苷1.0782mg、咖啡酸0.2257mg、异绿原酸B 0.5349mg、异绿原酸A 0.3324mg、异绿原酸C0.6859mg、secoxyloganin 0.2462mg的混合对照品储备溶液。
(4)供试品溶液的制备：
①对咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin五种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置10ml量瓶中，加55％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
②对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷四种成分中的任意一种或几种进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置100ml量瓶中，加55％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
(5)标准曲线的制作：精密吸取混合对照品储备溶液0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、10.0ml，分别置10ml容量瓶中，加55％甲醇稀释至刻度，制成六个浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
(6)测定计算：取供试品溶液5μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，得各成分含量。
(7)结果：测得热毒宁注射液9个成分的含量见下表：
热毒宁注射液9个成分含量测定结果(mg/ml)
实施例10：
(1)色谱条件为：C18色谱柱；流动相A：甲醇；流动相B：0.1％醋酸水溶液，系统梯度洗脱程序如下：
(2)测定波长：
①绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C含量测定波长为322nm。
②栀子苷、secoxyloganin含量测定波长为234nm；
(3)对照品溶液的制备：精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin对照品适量，精密称定，加50％甲醇溶解并稀释制成每1ml中含新绿原酸0.2256mg、绿原酸0.8351mg、隐绿原酸0.4754mg、栀子苷1.0658mg、咖啡酸0.2235mg、异绿原酸B 0.5245mg、异绿原酸A 0.3356mg、异绿原酸C0.6752mg、secoxyloganin 0.2561mg的混合对照品储备溶液。
(4)供试品溶液的制备：
①对咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin五种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
②对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷四种成分中的任意一种或几种进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置100ml量瓶中，加55％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
(5)标准曲线的制作：精密吸取混合对照品储备溶液0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、10.0ml，分别置10ml容量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，制成六个浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
(6)测定计算：取供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，得各成分含量。
(7)结果：测得热毒宁注射液9个成分的含量见下表：
热毒宁注射液9个成分含量测定结果(mg/ml)
实施例11：
(1)色谱条件为：C18色谱柱；流动相A：甲醇；流动相B：0.2％醋酸水溶液，系统梯度洗脱程序如下：
(2)测定波长：
①绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C含量测定波长为325nm。
②栀子苷、secoxyloganin含量测定波长为235nm；
(3)对照品溶液的制备：精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin对照品适量，精密称定，加55％甲醇溶解并稀释制成每1ml中含新绿原酸0.2278mg、绿原酸0.8319mg、隐绿原酸0.4746mg、栀子苷1.0698mg、咖啡酸0.2282mg、异绿原酸B 0.5256mg、异绿原酸A 0.3394mg、异绿原酸C0.6749mg、secoxyloganin 0.2585mg的混合对照品储备溶液。
(4)供试品溶液的制备：
①对咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin五种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置10ml量瓶中，加55％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
②对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷四种成分中的任意一种或几种进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置100ml量瓶中，加45％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
(5)标准曲线的制作：精密吸取混合对照品储备溶液0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、10.0ml，分别置10ml容量瓶中，加55％甲醇稀释至刻度，制成六个浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
(6)测定计算：取供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，得各成分含量。
(7)结果：测得热毒宁注射液9个成分的含量见下表：
热毒宁注射液9个成分含量测定结果(mg/ml)
实施例12：
(1)色谱条件为：C18色谱柱；流动相A：甲醇；流动相B：0.4％醋酸水溶液，系统梯度洗脱程序如下：
(2)测定波长：
①绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C含量测定波长为326nm。
②栀子苷、secoxyloganin含量测定波长为237nm；
(3)对照品溶液的制备：精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin对照品适量，精密称定，加55％甲醇溶解并稀释制成每1ml中含新绿原酸0.2396mg、绿原酸0.8425mg、隐绿原酸0.4651mg、栀子苷1.0513mg、咖啡酸0.2325mg、异绿原酸B 0.5346mg、异绿原酸A 0.3452mg、异绿原酸C0.6658mg、secoxyloganin 0.2649mg的混合对照品储备溶液。
(4)供试品溶液的制备：
①对咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin五种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
②对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷四种成分中的任意一种或几种进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置100ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
(5)标准曲线的制作：精密吸取混合对照品储备溶液0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、10.0ml，分别置10ml容量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，制成六个浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
(6)测定计算：取供试品溶液5μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，得各成分含量。
(7)结果：测得热毒宁注射液9个成分的含量见下表：
热毒宁注射液9个成分含量测定结果(mg/ml)
实施例13：
(1)色谱条件为：C18色谱柱；流动相A：乙腈；流动相B：0.1％磷酸水溶液，系统梯度洗脱程序如下：
(2)测定波长：
①绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C含量测定波长为327nm。
②栀子苷、secoxyloganin含量测定波长为236nm；
(3)对照品溶液的制备：精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin对照品适量，精密称定，加55％甲醇溶解并稀释制成每1ml中含新绿原酸0.2278mg、绿原酸0.8316mg、隐绿原酸0.4746mg、栀子苷1.0616mg、咖啡酸0.2268mg、异绿原酸B 0.5218mg、异绿原酸A 0.3382mg、异绿原酸C0.6761mg、secoxyloganin 0.2516mg的混合对照品储备溶液。
(4)供试品溶液的制备：
①对咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin五种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置10ml量瓶中，加55％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
②对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷四种成分中的任意一种或几种进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置100ml量瓶中，加55％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
(5)标准曲线的制作：精密吸取混合对照品储备溶液0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、10.0ml，分别置10ml容量瓶中，加55％甲醇稀释至刻度，制成六个浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
(6)测定计算：取供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，得各成分含量。
(7)结果：测得热毒宁注射液9个成分的含量见下表：
热毒宁注射液9个成分含量测定结果(mg/ml)
实施例14：
(1)色谱条件为：C18色谱柱；流动相A：乙腈；流动相B：0.2％磷酸水溶液，系统梯度洗脱程序如下：
(2)测定波长：
①绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C含量测定波长为328nm。
②栀子苷、secoxyloganin含量测定波长为237nm；
(3)对照品溶液的制备：精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin对照品适量，精密称定，加60％甲醇溶解并稀释制成每1ml中含新绿原酸0.2384mg、绿原酸0.8459mg、隐绿原酸0.4684mg、栀子苷1.0781mg、咖啡酸0.2354mg、异绿原酸B 0.5364mg、异绿原酸A 0.3452mg、异绿原酸C0.6542mg、secoxyloganin 0.2679mg的混合对照品储备溶液。
(4)供试品溶液的制备：
①对咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin五种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置10ml量瓶中，加60％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
②对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷四种成分中的任意一种或几种进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置100ml量瓶中，加60％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
(5)标准曲线的制作：精密吸取混合对照品储备溶液0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、10.0ml，分别置10ml容量瓶中，加60％甲醇稀释至刻度，制成六个浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
(6)测定计算：取供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，得各成分含量。
(7)结果：测得热毒宁注射液9个成分的含量见下表：
热毒宁注射液9个成分含量测定结果(mg/ml)
实施例15：
(1)色谱条件为：C18色谱柱；流动相A：乙腈；流动相B：0.3％磷酸水溶液，系统梯度洗脱程序如下：
(2)测定波长：
①绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C含量测定波长为329nm。
②栀子苷、secoxyloganin含量测定波长为238nm；
(3)对照品溶液的制备：精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin对照品适量，精密称定，加40％甲醇溶解并稀释制成每1ml中含新绿原酸0.2452mg、绿原酸0.8581mg、隐绿原酸0.4751mg、栀子苷1.0498mg、咖啡酸0.2421mg、异绿原酸B 0.5412mg、异绿原酸A 0.3305mg、异绿原酸C0.6509mg、secoxyloganin 0.2507mg的混合对照品储备溶液。
(4)供试品溶液的制备：
①对咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin五种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置10ml量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
②对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷四种成分中的任意一种或几种进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置100ml量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
(5)标准曲线的制作：精密吸取混合对照品储备溶液0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、10.0ml，分别置10ml容量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，制成六个浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
(6)测定计算：取供试品溶液2μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，得各成分含量。
(7)结果：测得热毒宁注射液9个成分的含量见下表：
热毒宁注射液9个成分含量测定结果(mg/ml)
实施例13：
(1)色谱条件为：C18色谱柱；流动相A：乙腈；流动相B：0.1％醋酸水溶液，系统梯度洗脱程序如下：
(2)测定波长：
①绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C含量测定波长为322nm。
②栀子苷、secoxyloganin含量测定波长为233nm；
(3)对照品溶液的制备：精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin对照品适量，精密称定，加40％甲醇溶解并稀释制成每1ml中含新绿原酸0.2365mg、绿原酸0.8409mg、隐绿原酸0.4608mg、栀子苷1.0515mg、咖啡酸0.2365mg、异绿原酸B 0.5315mg、异绿原酸A 0.3452mg、异绿原酸C0.6630mg、secoxyloganin 0.2480mg的混合对照品储备溶液。
(4)供试品溶液的制备：
①对咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin五种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置10ml量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
②对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷四种成分中的任意一种或几种进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置100ml量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
(5)标准曲线的制作：精密吸取混合对照品储备溶液0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、10.0ml，分别置10ml容量瓶中，加40％甲醇稀释至刻度，制成六个浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
(6)测定计算：取供试品溶液5μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，得各成分含量。
(7)结果：测得热毒宁注射液9个成分的含量见下表：
热毒宁注射液9个成分含量测定结果(mg/ml)
实施例14：
(1)色谱条件为：C18色谱柱；流动相A：乙腈；流动相B：0.2％醋酸水溶液，系统梯度洗脱程序如下：
(2)测定波长：
①绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C含量测定波长为324nm。
②栀子苷、secoxyloganin含量测定波长为235nm；
(3)对照品溶液的制备：精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin对照品适量，精密称定，加50％甲醇溶解并稀释制成每1ml中含新绿原酸0.2298mg、绿原酸0.8356mg、隐绿原酸0.4754mg、栀子苷1.0615mg、咖啡酸0.2654mg、异绿原酸B 0.5409mg、异绿原酸A 0.3609mg、异绿原酸C0.6480mg、secoxyloganin 0.2561mg的混合对照品储备溶液。
(4)供试品溶液的制备：
①对咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin五种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
②对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷四种成分中的任意一种或几种进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置100ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
(5)标准曲线的制作：精密吸取混合对照品储备溶液0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、10.0ml，分别置10ml容量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，制成六个浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
(6)测定计算：取供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，得各成分含量。
(7)结果：测得热毒宁注射液9个成分的含量见下表：
热毒宁注射液9个成分含量测定结果(mg/ml)
实施例15：
(1)色谱条件为：C18色谱柱；流动相A：乙腈；流动相B：0.3％醋酸水溶液，系统梯度洗脱程序如下：
(2)测定波长：
①绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C含量测定波长为325nm。
②栀子苷、secoxyloganin含量测定波长为234nm；
(3)对照品溶液的制备：精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin对照品适量，精密称定，加60％甲醇溶解并稀释制成每1ml中含新绿原酸0.2360mg、绿原酸0.8409mg、隐绿原酸0.4691mg、栀子苷1.0398mg、咖啡酸0.2514mg、异绿原酸B 0.5650mg、异绿原酸A 0.3483mg、异绿原酸C0.6621mg、secoxyloganin 0.2801mg的混合对照品储备溶液。
(4)供试品溶液的制备：
①对咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin五种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置10ml量瓶中，加60％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
②对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷四种成分中的任意一种或几种进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密吸取热毒宁注射液1ml，置100ml量瓶中，加60％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
(5)标准曲线的制作：精密吸取混合对照品储备溶液0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、10.0ml，分别置10ml容量瓶中，加60％甲醇稀释至刻度，制成六个浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
(6)测定计算：取供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，得各成分含量。
(7)结果：测得热毒宁注射液9个成分的含量见下表：
热毒宁注射液9个成分含量测定结果(mg/ml)
Claims (16)
1.一种由青蒿、金银花、栀子制成的中成药的含量测定方法，其特征在于，采用反相高效液相色谱法对该药物中的新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、secoxyloganin、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C九种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定，测定的色谱条件为：色谱柱为C18柱，以甲醇或乙腈为流动相A，以0.05％～1.0％磷酸或0.05％～1.0％醋酸为流动相B，A+B＝100％，进行梯度洗脱，洗脱程序为以下三种程序中的任意一种：
(1)起始时，流动相A的百分比浓度为8～20％，流动相B的百分比浓度为92～80％，0至20min内，流动相A的百分比浓度线性上升至25～35％，流动相B的百分比浓度线性下降至75～65％，21至60min内，流动相A的百分比浓度线性上升至45～55％，流动相B的百分比浓度线性下降至55～45％；
(2)起始时，流动相A的百分比浓度为15～25％，流动相B的百分比浓度为85～75％，0至50min内，流动相A的百分比浓度线性上升至45～55％，流动相B的百分比浓度线性下降至55～45％，51至60min内，流动相A的百分比浓度线性上升至56～65％，流动相B的百分比浓度线性下降至44～35％；
(3)起始时，流动相A的百分比浓度为10～22％，流动相B的百分比浓度为90～78％，0至30min内，流动相A的百分比浓度线性上升至23～30％，流动相B的百分比浓度线性下降至70～77％，31至60min内，流动相A的百分比浓度线性上升至55～65％，流动相B的百分比浓度线性下降至45～35％，61至70min内，流动相A的百分比浓度保持在55～65％，流动相B的百分比浓度保持在45～35％。
2.根据权利要求1所述的洗脱程序，其特征在于，选择以下三种程序中的任意一种：
(1)起始时，流动相A的百分比浓度为12％，流动相B的百分比浓度为88％，0至20min内，流动相A的百分比浓度线性上升至30％，流动相B的百分比浓度线性下降至70％，21至60min内，流动相A的百分比浓度从30％线性上升至50％，流动相B的百分比浓度从70％线性下降至50％；
(2)起始时，流动相A的百分比浓度为20％，流动相B的百分比浓度为80％，0至50min内，流动相A的百分比浓度线性上升至50％，流动相B的百分比浓度线性下降至50％，51至60min内，流动相A的百分比浓度从50％线性上升至60％，流动相B的百分比浓度从50％线性下降至40％；
(3)起始时，流动相A的百分比浓度为20％，流动相B的百分比浓度为80％，0至30min内，流动相A的百分比浓度线性上升至25％，流动相B的百分比浓度线性下降至75％，31至60min内，流动相A的百分比浓度从25％线性上升至60％，流动相B的百分比浓度从75％线性下降至40％，61至70min内，流动相A的百分比浓度保持在60％，流动相B的百分比浓度保持在40％。
3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C七种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定时，测定波长为320～330nm。
4.根据权利要求3所述的测定波长，其特征在于，波长为324nm。
5.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，对栀子苷、secoxyloganin两种成分中的任意一种或两种成分进行含量测定时，检测波长为230～240nm。
6.根据权利要求5所述的测定波长，其特征在于，波长为237nm。
7.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，对照品溶液的制备方法为：精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、secoxyloganin、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C对照品，加入40％～60％甲醇溶解并稀释制成混合对照品储备溶液。
8.根据权利要求7所述的混合对照品储备溶液，其特征在于，制备方法为：精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin对照品适量，精密称定，加50％甲醇溶解并稀释制成每1ml中含新绿原酸0.1～0.4mg、绿原酸0.5～1.2mg、隐绿原酸0.2～0.7mg、栀子苷0.5～1.5mg、咖啡酸0.1～0.4mg、异绿原酸B 0.2～0.8mg、异绿原酸A 0.1～0.6mg、异绿原酸C 0.2～0.9mg、secoxyloganin 0.1～0.4mg的混合对照品储备溶液。
9.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，对咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、secoxyloganin五种成分中的任意一种或几种成分进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密称取待测药物置量瓶中，加40％～60％甲醇稀释，摇匀，即得。
10.根据权利要求9所述的供试品溶液的制备方法，其特征在于，精密吸取待测药物1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
11.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，对新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、栀子苷四种成分中的任意一种或几种进行含量测定时，供试品溶液的制备方法为：精密称取待测药物置量瓶中，加40％～60％甲醇稀释，摇匀，即得。
12.根据权利要求11所述的供试品溶液的制备方法，其特征在于，精密吸取待测药物1ml，置100ml量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
13.根据权利要求1、7、8所述的测定方法，其特征在于，标准曲线的制作方法为：精密吸取3～8份不同的剂量的混合对照品储备溶液，分别置容量瓶中，加40％～60％甲醇稀释，制成不同浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
14.根据权利要求13所述的标准曲线的制作方法，其特征在于，精密吸取6份不同剂量的混合对照品储备溶液，分别为0.25ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、4.0ml、10.0ml，分别置10ml容量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，制成六个浓度的混合对照品溶液，进样测定，以色谱峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
15.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，取供试品溶液1～20μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，得各成分含量。
16.根据权利要求15所述的供试品溶液的进样量，其特征在于，进样量为10μl。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201010173578 CN102233021B (zh) | 2010-04-30 | 2010-04-30 | 一种由青蒿、金银花、栀子制成的中成药的含量测定方法 |
| HK12104085.4A HK1163520A1 (en) | 2010-04-30 | 2012-04-25 | Content measurement method for chinese patent medicine prepared from sweet wormwood, honeysuckle and gardenia jasminoides fruit |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201010173578 CN102233021B (zh) | 2010-04-30 | 2010-04-30 | 一种由青蒿、金银花、栀子制成的中成药的含量测定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102233021A true CN102233021A (zh) | 2011-11-09 |
| CN102233021B CN102233021B (zh) | 2013-05-01 |
Family
ID=44884444
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 201010173578 Active CN102233021B (zh) | 2010-04-30 | 2010-04-30 | 一种由青蒿、金银花、栀子制成的中成药的含量测定方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102233021B (zh) |
| HK (1) | HK1163520A1 (zh) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102961467A (zh) * | 2012-12-06 | 2013-03-13 | 河北神威药业有限公司 | 一种清热解毒药物组合物及其原液的制备方法 |
| CN103823034A (zh) * | 2014-03-06 | 2014-05-28 | 山东省食品药品检验所 | 一种金银花对照提取物及其制备方法 |
| CN104407072A (zh) * | 2014-11-29 | 2015-03-11 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种同时测定热毒宁注射液中11种有效成分含量的方法 |
| CN104865322A (zh) * | 2015-04-15 | 2015-08-26 | 浙江大学 | 一种栀子萃取液浓缩过程快速检测方法 |
| CN107677750A (zh) * | 2017-11-01 | 2018-02-09 | 广西壮族自治区食品药品检验所 | 粗毛玉叶金花的多成分含量测定方法 |
| CN107802633A (zh) * | 2017-12-05 | 2018-03-16 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种中药复方解热抗病毒活性部位及其制备方法和应用 |
| CN110376305A (zh) * | 2019-07-26 | 2019-10-25 | 淮阴工学院 | 一种蒿茶中绿原酸类的含量测定方法 |
| CN111413429A (zh) * | 2020-04-15 | 2020-07-14 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种栀子中间体的检测方法及其指纹图谱构建方法 |
| CN111896637A (zh) * | 2020-06-05 | 2020-11-06 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种金青中间体的检测方法及其指纹图谱构建方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1813983A (zh) * | 2004-12-17 | 2006-08-09 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种注射剂的指纹图谱鉴别方法 |
| CN1876045A (zh) * | 2003-01-08 | 2006-12-13 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种中药组合物制剂及其制备方法和质量控制方法 |
| CN101991680A (zh) * | 2009-08-20 | 2011-03-30 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种中药组合物在制备抗流感病毒药物中的应用 |
-
2010
- 2010-04-30 CN CN 201010173578 patent/CN102233021B/zh active Active
-
2012
- 2012-04-25 HK HK12104085.4A patent/HK1163520A1/xx unknown
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1876045A (zh) * | 2003-01-08 | 2006-12-13 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种中药组合物制剂及其制备方法和质量控制方法 |
| CN1813983A (zh) * | 2004-12-17 | 2006-08-09 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种注射剂的指纹图谱鉴别方法 |
| CN101991680A (zh) * | 2009-08-20 | 2011-03-30 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种中药组合物在制备抗流感病毒药物中的应用 |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102961467A (zh) * | 2012-12-06 | 2013-03-13 | 河北神威药业有限公司 | 一种清热解毒药物组合物及其原液的制备方法 |
| CN102961467B (zh) * | 2012-12-06 | 2014-08-06 | 河北神威药业有限公司 | 一种清热解毒药物组合物及其原液的制备方法 |
| CN103823034A (zh) * | 2014-03-06 | 2014-05-28 | 山东省食品药品检验所 | 一种金银花对照提取物及其制备方法 |
| CN103823034B (zh) * | 2014-03-06 | 2016-03-09 | 山东省食品药品检验研究院 | 一种金银花对照提取物及其制备方法 |
| CN104407072A (zh) * | 2014-11-29 | 2015-03-11 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种同时测定热毒宁注射液中11种有效成分含量的方法 |
| CN104865322A (zh) * | 2015-04-15 | 2015-08-26 | 浙江大学 | 一种栀子萃取液浓缩过程快速检测方法 |
| CN107677750A (zh) * | 2017-11-01 | 2018-02-09 | 广西壮族自治区食品药品检验所 | 粗毛玉叶金花的多成分含量测定方法 |
| CN107802633A (zh) * | 2017-12-05 | 2018-03-16 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种中药复方解热抗病毒活性部位及其制备方法和应用 |
| CN110376305A (zh) * | 2019-07-26 | 2019-10-25 | 淮阴工学院 | 一种蒿茶中绿原酸类的含量测定方法 |
| CN111413429A (zh) * | 2020-04-15 | 2020-07-14 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种栀子中间体的检测方法及其指纹图谱构建方法 |
| CN111896637A (zh) * | 2020-06-05 | 2020-11-06 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种金青中间体的检测方法及其指纹图谱构建方法 |
| CN111896637B (zh) * | 2020-06-05 | 2021-07-23 | 江苏康缘药业股份有限公司 | 一种金青中间体的检测方法及其指纹图谱构建方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102233021B (zh) | 2013-05-01 |
| HK1163520A1 (en) | 2012-09-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102233021B (zh) | 一种由青蒿、金银花、栀子制成的中成药的含量测定方法 | |
| WO2021253160A1 (zh) | 一种药物制剂的指纹图谱检测方法 | |
| Tian et al. | Determination of oleanolic acid and ursolic acid contents in Ziziphora clinopodioides Lam. by HPLC method | |
| Jin et al. | Chemical fingerprint and quantitative analysis of Salvia plebeia R. Br. by high-performance liquid chromatography | |
| CN104398642A (zh) | 一种复方黄柏液的制备及质量检测方法 | |
| CN104730171B (zh) | 一种中药复方制剂中赤芍、金银花多指标成分含量测定方法 | |
| CN106770828A (zh) | 一种同时测定银杏叶提取物及其制剂中多组分含量的方法 | |
| Chang et al. | Simultaneous determination of four phenolic acids and seven alkaloids in rat plasma after oral administration of traditional Chinese medicinal preparation Jinqi Jiangtang Tablet by LC-ESI–MS/MS | |
| Ma et al. | Simultaneous quantification of polyherbal formulations containing Rhodiola rosea L. and Eleutherococcus senticosus Maxim. using rapid resolution liquid chromatography (RRLC) | |
| CN103926332B (zh) | 一种同时测定半夏提取物中尿苷、鸟苷和腺苷含量的超高效液相色谱方法 | |
| CN102114083A (zh) | 何首乌药材的指纹图谱、其建立方法和应用 | |
| CN104764820A (zh) | 测定半夏糖浆中活性成分盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱含量的方法 | |
| Chang et al. | Simultaneous determination of ten active components in traditional Chinese medicinal products containing both Gegen (Pueraria lobata) and Danshen (Salvia miltiorrhiza) by high‐performance liquid chromatography | |
| CN104897787A (zh) | 一种同时测定牛黄宁宫片中六种活性成分的方法 | |
| Chen et al. | Quality control of a herbal medicinal preparation using high-performance liquid chromatographic and capillary electrophoretic methods | |
| CN104614475A (zh) | 一种消渴清颗粒的含量检测方法 | |
| CN110007033A (zh) | 同步检测青蒿素、双氢青蒿素、青蒿琥酯含量的方法 | |
| CN105954432A (zh) | 一种银杏内酯b含量的检测方法 | |
| CN103675135B (zh) | 一种中药组合物的含量测定方法 | |
| CN113759056B (zh) | 一种半边莲及其制剂的特征图谱及其构建方法 | |
| CN105510452A (zh) | 益肝明目口服液的多指标成分含量测定、指纹图谱构建和制备方法 | |
| CN102998386A (zh) | 一种用高效液相色谱测定白芍愈伤组织中白芍双苷的方法 | |
| CN113655166A (zh) | 一种金花清感颗粒中14种成分的高效液相检测方法 | |
| CN104597168B (zh) | 桑枝精制饮片含量测定方法 | |
| CN104173280B (zh) | 一种门冬氨酸鸟氨酸注射液组合物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: DE Ref document number: 1163520 Country of ref document: HK |
|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: GR Ref document number: 1163520 Country of ref document: HK |