CN102210450A - 益生菌微胶囊及其制备方法 - Google Patents

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刘文辉
吕伟民
顾利文
刘文玉
杨大毅
赵珊珊
李娜
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Abstract

本发明提供了益生菌微胶囊及其制备方法。首先制备乳酸乳球菌乳脂亚种、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌4株益生菌发酵液，然后在5000转/分钟后弃掉上清液，分别取每种益生菌菌泥10克，添加细度为200目的香菇粉末4克，与含有3％海藻酸钠与1％果胶的混合胶体50g混合，200r/min进行第一次搅拌20min，将混合物倒入盛有1.5倍体积食用油的三角瓶中，400r/min进行第二次搅拌20min，加入1.5％CaCl2溶液钙化3h，用灭菌生理盐水洗涤凝胶球三次，将胶球置于0.6％，pH＝5.5的壳聚糖溶液中成膜反应15min后取出，用灭菌生理盐水冲洗后置于55mM的柠檬酸溶液中液化30min，灭菌生理盐水冲洗后得湿的微胶囊，150r/min离心10min收集微胶囊，预冷，最后冷冻干燥获得微胶囊。

Description

益生菌微胶囊及其制备方法
(一)技术领域
本发明涉及一种益生菌微胶囊及其制备方法，属生物工程领域。
(二)背景技术
人类食用益生菌后，首先经过胃液的消化，然后才能进入肠道中。在胃液的消化过程中大部分益生菌的活性被胃酸抑制甚至杀灭，导致益生菌无法在肠道中繁殖，从而失去了益生菌在肠道中定植的可能。微胶囊技术早已广泛应用于医药、化工、食品等领域，随着益生菌微胶囊化技术的不断发展与完善，益生菌微胶囊的耐酸性、耐胆盐性、耐储性和肠溶性均有所增强。
本发明以食用菌粉作为益生素成分被添加到微胶囊中，果胶作为壁材应用到益生菌包埋技术当中，使食用菌中的多糖成分充分作用于益生菌，使益生菌快速在肠道中定植下来，同时食用菌被粉碎至200目，增大反应表面积，以求达到增加合生元微生态制剂的营养性、功能性及益生菌与益生素的协同作用等目的。
(三)发明内容
本发明目的在于提供益生菌微胶囊及其制备方法。
本发明的目的是这样实现的：本发明中所涉及的百分比除另有注明之外为质量比，本发明的产品采用这样的方法来制备的：
1.益生菌的选择及培养基的制备
A菌——乳酸乳球菌乳脂亚种CICC20408(Lactobacillus lactis subsp.cremoris)，培养基为：酵母浸膏7.5克，蛋白胨7.5克，葡萄糖10克，磷酸二氢钾2克，番茄汁100毫升，吐温800.5毫升，水900毫升，pH7.0。
B菌——植物乳杆菌CICC 22211(Lactobacillus plantarum)酪蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母粉5.0g，葡萄糖5.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸二胺2.0g，Tween 801.0g，K2HPO42.0g，MgSO4.7H2O 0.2g，MnSO4.H2O 0.05g，CaCO320.0g，蒸馏水1.0L，pH6.8。
C菌——嗜酸乳杆菌CICC 21723(Lactobacillus acidophilus)蛋白胨5.0g，牛肉膏5.0g，胰蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，葡萄糖10.0g，吐温801.0g，K2HPO42.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，ZnSO4？7H2O 0.25g，MgSO4·7H2O 0.1g，蒸馏水定容至1L，pH 6.2-6.4。
D菌——嗜热链球菌CICC 21729(Strep tococcus thermophilus)酪蛋白胨20g，酵母浸出粉5.0g，葡萄糖5g，蔗糖5g，乳糖5g，吐温801.0ml，NaCl 4.0g，乙酸钠1.5g，抗坏血酸0.5g，加蒸馏水至1.0L，调酸度至pH6.8，0.1MPa灭菌20min。
2.益生菌的制备过程
2.1冻干菌粉末的活化
分别量取0.9％的生理盐水10ml于4只试管内，经121℃灭菌20分钟冷却至30℃，将4株乳酸菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0.9％的生理盐水中，震荡使其溶解，在30℃恒温箱中静止活化30分钟，备用。
2.2益生菌扩大培养
2.2.1母发酵剂的制备
分别量取4株乳酸菌培养基各200ml于5只500ml三角瓶内，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，按培养基体积的10％接种2.1步骤中已经活化的菌种，在30℃厌氧箱内静止培养24小时，作为母发酵剂。
2.2.2益生菌扩培
首先配置10％的脱脂奶乳浊液，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，分别按2％体积比例接种母发酵剂，30℃厌氧培养3036小时，检测4株乳酸菌发酵液活菌数，每发酵液活菌数≥109个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数＜109个/ml，继续培养，直至达到109个/ml，然后在无菌状态下5000转/分钟离心20分钟，弃掉上清液，留菌泥包埋待用。
2.3食用菌微胶囊的制备
分别取每种待包埋乳酸菌菌泥10克，然后称取细度为200目的香菇粉末4克，与含有3％海藻酸钠与1％果胶的混合胶体50g混合，200r/min进行第一次搅拌20min，将混合物缓慢倾倒入盛有1.5倍体积食用油的三角瓶中，400r/min进行第二次搅拌20min，加入1.5％CaCl2溶液钙化3h，用灭菌生理盐水洗涤凝胶球三次，将胶球置于0.6％，pH＝5.5的壳聚糖溶液中进行成膜反应，15min后取出，用灭菌生理盐水冲洗后置于55mM的柠檬酸溶液中液化30min，灭菌生理盐水冲洗后得湿的微胶囊，150r/min离心10min收集微胶囊，预冷，最后冷冻干燥获得微胶囊。
2.4食用菌合生元微胶囊的复配
按各食用菌合生元微胶囊重量，取A菌微胶囊1-2份，B菌微胶囊4-5份，C菌微胶囊2-4份，D菌微胶囊2-3份，充分混匀后真空包装。
(四)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作更详细的描述：
实施例一：
本发明采用的4株益生菌均采购于中国工业微生物菌种保藏中心，分别为：乳酸乳球菌乳脂亚种CICC 20408，植物乳杆菌CICC 22211，嗜酸乳杆菌CICC 21723，嗜热链球菌CICC21729，本发明中将上述菌株简称为A菌、B菌、C菌、D菌。
1.益生菌的选择及培养基的制备
A菌——乳酸乳球菌乳脂亚种CICC 20408(Lactobacillus lactis subsp.cremoris)，培养基为：酵母浸膏7.5克，蛋白胨7.5克，葡萄糖10克，磷酸二氢钾2克，番茄汁100毫升，吐温800.5毫升，水900毫升，pH7.0。
B菌——植物乳杆菌CICC 22211(Lactobacillus plantarum)酪蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母粉5.0g，葡萄糖5.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸二胺2.0g，Tween 801.0g，K2HPO42.0g，MgSO4.7H2O 0.2g，MnSO4.H2O 0.05g，CaCO320.0g，蒸馏水1.0L，pH6.8。
C菌——嗜酸乳杆菌CICC 21723(Lactobacillus acidophilus)蛋白胨5.0g，牛肉膏5.0g，胰蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，葡萄糖10.0g，吐温801.0g，K2HPO42.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，ZnSO4？7H2O 0.25g，MgSO4·7H2O 0.1g，蒸馏水定容至1L，pH 6.2-6.4。
D菌——嗜热链球菌CICC 21729(Streptococcus thermophilus)酪蛋白胨20g，酵母浸出粉5.0g，葡萄糖5g，蔗糖5g，乳糖5g，吐温801.0ml，NaCl 4.0g，乙酸钠1.5g，抗坏血酸0.5g，加蒸馏水至1.0L，调酸度至pH6.8，0.1MPa灭菌20min。
2.益生菌的制备过程
2.1冻干菌粉末的活化
分别量取0.9％的生理盐水10ml于4只试管内，经121℃灭菌20分钟冷却至30℃，将4株乳酸菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0.9％的生理盐水中，震荡使其溶解，在30℃恒温箱中静止活化30分钟，备用。
2.2益生菌扩大培养
2.2.1母发酵剂的制备
分别量取4株乳酸菌培养基各200ml于5只500ml三角瓶内，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，按培养基体积的10％接种2.1步骤中已经活化的菌种，在30℃厌氧箱内静止培养24小时，作为母发酵剂。
2.2.2益生菌扩培
首先配置10％的脱脂奶乳浊液，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，分别按2％体积比例接种母发酵剂，30℃厌氧培养30——36小时，检测4株乳酸菌发酵液活菌数，各发酵液活菌数≥109个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数＜109个/ml，继续培养，直至达到109个/ml，然后在无菌状态下5000转/分钟离心20分钟，弃掉上清液，留菌泥包埋待用。
2.3食用菌微胶囊的制备
分别取每种待包埋乳酸菌菌泥10克，然后称取细度为200目的香菇粉末4克，与含有3％海藻酸钠与1％果胶的混合胶体50g混合，200r/min进行第一次搅拌20min，将混合物缓慢倾倒入盛有1.5倍体积食用油的三角瓶中，400r/min进行第二次搅拌20min，加入1.5％CaCl2溶液钙化3h，用灭菌生理盐水洗涤凝胶球三次，将胶球置于0.6％，pH＝5.5的壳聚糖溶液中进行成膜反应，15min后取出，用灭菌生理盐水冲洗后置于55mM的柠檬酸溶液中液化30min，灭菌生理盐水冲洗后得湿的微胶囊，150r/min离心10min收集微胶囊，预冷，最后冷冻干燥获得微胶囊。
2.4食用菌合生元微胶囊的复配
按各食用菌合生元微胶囊重量，取A菌微胶囊1份，B菌微胶囊4份，C菌微胶囊2份，D菌微胶囊2份，充分混匀后真空包装。
实施例二：
1.益生菌的选择及培养基的制备
A菌——乳酸乳球菌乳脂亚种CICC 20408(Lactobacillus lactis subsp.cremoris)，培养基为：酵母浸膏7.5克，蛋白胨7.5克，葡萄糖10克，磷酸二氢钾2克，番茄汁100毫升，吐温800.5毫升，水900毫升，pH7.0。
B菌——植物乳杆菌CICC 22211(Lactobacillus plantarum)酪蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母粉5.0g，葡萄糖5.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸二胺2.0g，Tween 801.0g，K2HPO42.0g，MgSO4.7H2O 0.2g，MnSO4.H2O 0.05g，CaCO320.0g，蒸馏水1.0L，pH6.8。
C菌——嗜酸乳杆菌CICC 21723(Lactobacillus acidophilus)蛋白胨5.0g，牛肉膏5.0g，胰蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，葡萄糖10.0g，吐温801.0g，K2HPO42.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，ZnSO4？7H2O 0.25g，MgSO4·7H2O 0.1g，蒸馏水定容至1L，pH 6.2-6.4。
D菌——嗜热链球菌CICC 21729(Streptococcus thermophilus)酪蛋白胨20g，酵母浸出粉5.0g，葡萄糖5g，蔗糖5g，乳糖5g，吐温801.0ml，NaCl 4.0g，乙酸钠1.5g，抗坏血酸0.5g，加蒸馏水至1.0L，调酸度至pH6.8，0.1MPa灭菌20min。
2.益生菌的制备过程
2.1冻干菌粉末的活化
分别量取0.9％的生理盐水10ml于4只试管内，经121℃灭菌20分钟冷却至30℃，将4株乳酸菌安瓶内的冻干菌粉末在无菌状态下全部倒入0.9％的生理盐水中，震荡使其溶解，在30℃恒温箱中静止活化30分钟，备用。
2.2益生菌扩大培养
2.2.1母发酵剂的制备
分别量取4株乳酸菌培养基各200ml于5只500ml三角瓶内，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，按培养基体积的10％接种2.1步骤中已经活化的菌种，在30℃厌氧箱内静止培养24小时，作为母发酵剂。
2.2.2益生菌扩培
首先配置10％的脱脂奶乳浊液，121℃灭菌20分钟冷却至30℃，分别按2％体积比例接种母发酵剂，30℃厌氧培养30——36小时，检测4株乳酸菌发酵液活菌数，各发酵液活菌数≥109个/ml，视同为发酵成熟，如果活菌数＜109个/ml，继续培养，直至达到109个/ml，然后在无菌状态下5000转/分钟离心20分钟，弃掉上清液，留菌泥包埋待用。
2.3食用菌微胶囊的制备
分别取每种待包埋乳酸菌菌泥10克，然后称取细度为200目的香菇粉末4克，与含有3％海藻酸钠与1％果胶的混合胶体50g混合，200r/min进行第一次搅拌20min，将混合物缓慢倾倒入盛有1.5倍体积食用油的三角瓶中，400r/min进行第二次搅拌20min，加入1.5％CaCl2溶液钙化3h，用灭菌生理盐水洗涤凝胶球三次，将胶球置于0.6％，pH＝5.5的壳聚糖溶液中进行成膜反应，15min后取出，用灭菌生理盐水冲洗后置于55mM的柠檬酸溶液中液化30min，灭菌生理盐水冲洗后得湿的微胶囊，150r/min离心10min收集微胶囊，预冷，最后冷冻干燥获得微胶囊。
2.4食用菌合生元微胶囊的复配
按各食用菌合生元微胶囊重量，取A菌微胶囊2份，B菌微胶囊5份，C菌微胶囊4份，D菌微胶囊3份，充分混匀后真空包装。

Claims (1)

1.益生菌微胶囊及其制备方法，其特征是：乳酸乳球菌乳脂亚种、植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌4株益生菌发酵液，然后在5000转/分钟后弃掉上清液，分别取每种益生菌菌泥10克，添加细度为200目的香菇粉末4克，与含有3％海藻酸钠与1％果胶的混合胶体50g混合，200r/min进行第一次搅拌20min，将混合物倒入盛有1.5倍体积食用油的三角瓶中，400r/min进行第二次搅拌20min，加入1.5％CaCl2溶液钙化3h，用灭菌生理盐水洗涤凝胶球三次，将胶球置于0.6％，pH＝5.5的壳聚糖溶液中成膜反应15min后取出，用灭菌生理盐水冲洗后置于55mM的柠檬酸溶液中液化30min，灭菌生理盐水冲洗后得湿的微胶囊，150r/min离心10min收集微胶囊，预冷，最后冷冻干燥获得微胶囊。
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